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甲基化-微单倍型在伪造人体DNA样本鉴识中的应用研究

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中国法医学杂志 2025年第01期 40-48+55页

作者：王越文丹唐萱刘祎许如意陈司祺符肖益李雪王岳鹏王楚东曲炜锋贾洪涛李介男扎拉嘎白乙拉中南大学基础医学院法医学系

目的人工合成DNA技术的进步使得伪造人体DNA样本变得更加容易。有文献报道可以通过不同方法合成伪造的人体DNA，并将其植入现场，以混淆调查或误导审判。因此鉴别人体与人工合成DNA，并对其进行个体识别已成为重要的科学问题。方法我... 详细信息

目的人工合成DNA技术的进步使得伪造人体DNA样本变得更加容易。有文献报道可以通过不同方法合成伪造的人体DNA，并将其植入现场，以混淆调查或误导审判。因此鉴别人体与人工合成DNA，并对其进行个体识别已成为重要的科学问题。方法我们结合人体内DNA中稳定高甲基化或低甲基化的CpG位点和紧邻的微单倍型位点定义了一种新型复合遗传标记（甲基化-微单倍型）。根据筛选标准共获得了19个基因座，并利用MPS技术建立了甲基化-微单倍型的复合检测体系。提取随机志愿者的DNA样本，并基于全基因组扩增技术制备人工合成DNA样本。通过对群体DNA样本的检测了解甲基化-微单倍型的法医学参数和甲基化程度的变化情况。通过对人体DNA和人工合成DNA的检测，观察甲基化-微单倍型是否可以鉴别人体与人工合成DNA，以及是否可以从混合样本中发现人体和人工合成DNA的存在并获得其基因分型。结果 19个基因座组成的复合检测体系具有良好的个体识别能力，累积个人识别概率为0.999 999 999 996 86。在57个人体DNA样本中，12个高甲基化基因座与7个低甲基化基因座的甲基化程度相对稳定。根据等位基因甲基化率（Ram）值，该体系可以较好的鉴别人体DNA和人工合成DNA。同时，对于混合DNA样本通过Ram值可以发现人体和人工合成DNA样本的存在并获得其基因分型。结论甲基化-微单倍型遗传标记能够很好地鉴别人体与人工合成DNA，而且可以从混合样本中发现人体和人工合成DNA的存在并获得其基因分型，是一种潜在有用的法医DNA分析工具。

关键词：法医学个体识别甲基化-微单倍型人体DNA 人工合成DNA

丹皮酚对乙醇诱导的大鼠皮质原代神经元损伤的影响

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郑州大学学报(医学版) 2025年第1期60卷 38-42页

作者：王浩李东朋王恒王晨潮闫安乔晓孟郑州大学第一附属医院神经外科郑州450052 郑州大学基础医学院病理学与法医学系郑州450001

目的:研究丹皮酚对乙醇诱导的神经元损伤的影响。方法:取出生24 h内的SD乳鼠,分离培养皮质原代神经元。取第10天神经元,分为空白对照组、乙醇组和乙醇+丹皮酚组,分别用含PBS、1.5 g/L乙醇和1.5 g/L乙醇+100μmol/L丹皮酚溶液的培养基培... 详细信息

目的:研究丹皮酚对乙醇诱导的神经元损伤的影响。方法:取出生24 h内的SD乳鼠,分离培养皮质原代神经元。取第10天神经元,分为空白对照组、乙醇组和乙醇+丹皮酚组,分别用含PBS、1.5 g/L乙醇和1.5 g/L乙醇+100μmol/L丹皮酚溶液的培养基培养12 h。JC-1探针法检测线粒体膜电位,CCK-8法检测神经元活力,Annexin V/PI双染法检测神经元凋亡情况,WST-1法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)活性,TBA法测定细胞培养液中丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase 3蛋白的表达。结果:与空白对照组相比,乙醇组线粒体膜电位降低,神经元活力和SOD活性降低,MDA含量增加,凋亡神经元增多,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和cleaved-Caspase 3蛋白表达升高(P<0.05)。与乙醇组相比,乙醇+丹皮酚组线粒体膜电位升高,神经元活力和SOD活性增加,MDA含量降低,凋亡神经元减少,Bcl-2蛋白表达增加,Bax和cleaved-Caspase 3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:丹皮酚可能通过抑制氧化应激和拮抗线粒体凋亡,缓解乙醇诱导的神经元损害。

关键词：乙醇皮质神经元大鼠丹皮酚

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岩藻糖基转移酶8抑制剂2FF在多柔比星治疗肿瘤中的协同增效作用与机制

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生物化学与生物物理进展 2025年第2期52卷 478-486页

作者：谢志东章晓联武汉大学泰康医学院(基础医学院)免疫学系过敏及免疫相关疾病湖北省重点实验室武汉430071 武汉大学中南医院过敏科武汉430071

目的化疗是当前癌症治疗的重要手段之一,但化疗过程中多药耐药性的产生及副反应的发生严重限制了其应用,因此化疗常与其他药物或疗法联合应用。在已经鉴定的13个人类岩藻糖基转移酶(focosyltransferases,FUTs)中,FUT8(alpha-(1,6)-fucos... 详细信息

目的化疗是当前癌症治疗的重要手段之一,但化疗过程中多药耐药性的产生及副反应的发生严重限制了其应用,因此化疗常与其他药物或疗法联合应用。在已经鉴定的13个人类岩藻糖基转移酶(focosyltransferases,FUTs)中,FUT8(alpha-(1,6)-fucosyltransferase)是唯一负责核心岩藻糖基化的酶。核心岩藻糖基化在癌症的发生、转移及化疗耐药中有着重要作用,抑制FUT8是一种潜在逆转多药耐药的方法。本研究旨在探究FUT8的小分子抑制剂2FF(2-deoxy-2-fluoro-L-fucose)联合化疗药物多柔比星(doxorubicin,DOX)治疗恶性肿瘤的可行性。方法凝集素印迹实验检测2FF、DOX或二者联合对肿瘤细胞核心岩藻糖基化水平的影响。通过CCK-8法、Transwell侵袭实验探究2FF与DOX联合作用对人肝癌细胞HepG2及小鼠结肠癌细胞CT26细胞活性或侵袭的影响;通过流式细胞术检测2FF、DOX或二者联合对HepG2细胞表面程序性死亡受体配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达的影响;构建BABL/c小鼠结肠癌细胞皮下荷瘤模型以探究2FF与DOX联合作用对肿瘤生长的抑制作用。结果在本研究中,证实FUT8的抑制剂2FF能有效抑制HepG2及CT26细胞核心岩藻糖基化水平,而DOX可增强HepG2细胞核心岩藻糖基化水平,并且2FF可抑制这一作用。2FF能够有效增强HepG2及CT26细胞对DOX的敏感性。此外,2FF联合DOX可协同抑制HepG2细胞的侵袭能力。在体内水平,2FF联合DOX可增强对BALB/c小鼠CT26皮下荷瘤模型的疗效,但二者联合造成小鼠体重的下降。此外,DOX可引起HepG2细胞PD-L1表达上调,而2FF可削弱这一作用。结论FUT8抑制剂2FF可抑制DOX对肿瘤细胞的核心岩藻糖修饰和PD-L1表达的促进作用,并增强DOX的抗癌作用。

关键词：核心岩藻糖基化 FUT8抑制剂化疗多柔比星多药耐药

淋病奈瑟菌大观霉素耐药基因检测方法的建立与评价

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四川大学学报(医学版) 2025年第1期56卷 262-267页

作者：杨桂琴李梦欢王有为雍刚王红仁别明江四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院成都610041 四川省医学科学院·四川省人民医院临床医学检验中心成都610072 四川大学华西基础医学与法医学院病原生物学系成都610041 《四川大学学报(医学版)》编辑部成都610041

目的建立淋病奈瑟菌大观霉素耐药基因的检测方法并对其进行评价。方法设计淋病奈瑟菌特异性引物NG1/NG2以及淋病奈瑟菌rpsE基因突变(80_82 delTTA)特异性引物,通过PCR和实时荧光PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术,分别以大观霉... 详细信息

目的建立淋病奈瑟菌大观霉素耐药基因的检测方法并对其进行评价。方法设计淋病奈瑟菌特异性引物NG1/NG2以及淋病奈瑟菌rpsE基因突变(80_82 delTTA)特异性引物,通过PCR和实时荧光PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术,分别以大观霉素敏感和耐药淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和伤寒沙门菌等基因组核酸为待检样本,以评价该方法的敏感度及特异度。结果NG1/NG2引物能够有效扩增淋病奈瑟菌特异性片段,其余细菌扩增结果为阴性;E64/E175R和E-87/E95R能够有效区分待测样本的rpsE基因是否带有突变(80_82 delTTA)。利用PCR方法,NG1/NG2、E64/E175R和E87/E95R检测目的基因的最低检测限分别为414.8、414.8、4.1拷贝/μL,而qPCR检测方法的最低检测限分别为41.5、41.5、4.1×10^(-2)拷贝/μL。结论本研究成功建立了一种高特异度和高敏感度的淋病奈瑟菌大观霉素耐药性的核酸检测方法,有望为临床快速诊断淋病感染和治疗决策提供指导。

关键词：淋病奈瑟菌大观霉素耐药 rpsE基因基因检测方法

硫化氢合成酶CBS和CSE对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

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吉林大学学报(医学版) 2025年第01期51卷 34-43页

作者：赵蒙蒙王雅璐许宇翔杨凯歌曹玉文周文虎费晶王雯罗成华胡建明石河子大学医学院病理学系石河子大学第一附属医院病理科石河子大学第一附属医院肿瘤科中南大学湘雅药学院药剂学系首都医科大学基础医学院生理学与病理生理学系

目的：探讨胱硫醚-β-合酶（CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表达及其对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响，并阐明其作用机制。方法：选择15例乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常组织，采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blottin... 详细信息

目的：探讨胱硫醚-β-合酶（CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表达及其对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响，并阐明其作用机制。方法：选择15例乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常组织，采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测乳腺癌组织和癌旁正常组织以及MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞中CBS和CSE的mRNA及蛋白表达水平。将MCF-7细胞分为siNC组（转染siNC）和siCBS组（转染siCBS）,MDA-MB-231细胞分为ovNC组（转染CSE过表达空载质粒）和ovCSE组（转染CSE过表达质粒）。CCK-8法检测各组乳腺癌细胞的增殖活性，Transwell小室实验检测各组细胞的迁移和侵袭细胞数，Western blotting法检测各组乳腺癌细胞中E钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达水平。结果：与癌旁正常组织比较，乳腺癌组织中CBS和CSE mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与MDA-MB-231细胞比较，MCF-7细胞中CBS mRNA表达水平升高（P<0.05）；与MCF-7细胞比较，MDA-MB-231细胞中CSE蛋白表达水平降低（P<0.05）。与siNC组比较，siCBS组MCF-7细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、 N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）, E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与ovNC组比较，ovCSE组MDA-MB-231细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：CBS和CSE在乳腺癌组织中表达上调，高水平的CBS和CSE促进乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）。

关键词：胱硫醚-β-合酶胱硫醚-γ-裂解酶硫化氢乳腺肿瘤细胞增殖细胞迁移

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中华皮肤科杂志 2025年第2期58卷 161-166页

作者：黄晓燕粟娟陈明亮陈翔肖易沈敏学中南大学湘雅医院皮肤病医院长沙410008 中南大学湘雅医院病理科长沙410008 中南大学湘雅公共卫生学院社会医学与卫生事业管理学系长沙410008

目的明确纳洛酮改善慢性砷暴露相关瘙痒人群健康相关生活质量的效果,并研究砷代谢及内啡肽受体相关基因多态性的修饰效应。方法本研究为随机、双盲、对照试验,于2019年1-3月在湖南省常德市某砷暴露人群中招募符合条件的中重度慢性瘙痒患... 详细信息

目的明确纳洛酮改善慢性砷暴露相关瘙痒人群健康相关生活质量的效果,并研究砷代谢及内啡肽受体相关基因多态性的修饰效应。方法本研究为随机、双盲、对照试验,于2019年1-3月在湖南省常德市某砷暴露人群中招募符合条件的中重度慢性瘙痒患者,随机分配至干预组和对照组,舌下含服纳洛酮或安慰剂(0.4 mg/d),连续7 d。在给药前和给药第7天对患者进行重复测量,主要结局为皮肤病生活质量指数(DLQI),次要结局为抑郁症状、焦虑症状和睡眠质量。使用连接酶检测反应分型技术进行三价砷甲基转移酶基因和3个阿片类受体基因的分型。正态分布的连续变量采用t检验,偏态分布的连续变量采用非参数检验,计数资料采用卡方检验进行组间比较。采用线性回归分析不同药物干预对结局指标的影响,采用广义线性模型分析人口学信息及各基因型与治疗分组对DLQI变化值的交互作用。结果共纳入126例慢性砷暴露相关瘙痒患者,男73例,女53例,随机分配至对照组64例和干预组62例,年龄分别为(60.0±9.1)岁和(58.4±8.6)岁。两组患者的年龄、性别、收入、受教育程度及发砷浓度的差异无统计学意义(均P>0.05)。干预后,干预组患者DLQI下降变化值大于对照组,且差异具有统计学意义(-8.79±6.84比-5.19±8.10;P=0.008),但抑郁症状、焦虑症状及睡眠质量的变化值差异无统计学意义(均P>0.05)。线性回归分析示纳洛酮显著影响DLQI变化,粗回归系数为-3.60(95%CI:-6.25,-0.96;P=0.008)。分层分析显示κ阿片类受体基因rs1051660野生型(CC)患者的治疗应答显著优于突变型(CA),仅rs1051660基因型和药物对DLQI变化的影响有交互作用(P=?0.014)。结论纳洛酮可有效改善慢性砷暴露相关瘙痒患者健康相关生活质量,κ阿片类受体基因单核苷酸多态性与治疗应答有关。

关键词：砷中毒瘙痒症纳洛酮生活质量环境暴露临床试验砷暴露

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同种异体器官移植中免疫耐受诱导的研究进展

中华器官移植杂志 2025年第1期46卷 74-83页

作者：向芷青曾森位磊艳邹义洲长沙市望城区人民医院检验科长沙中南大学湘雅三医院神经内科长沙中南大学湘雅基础医学院免疫学系长沙

器官移植是目前较为理想的终末期器官衰竭的治疗手段, 由于移植物通常为异体来源, 因此移植后常引发受者免疫系统针对供者来源移植物的排斥反应。诱导受者对移植物的特异性免疫低反应状态即几乎免疫耐受状态, 是治疗移植排斥的理想状态... 详细信息

器官移植是目前较为理想的终末期器官衰竭的治疗手段, 由于移植物通常为异体来源, 因此移植后常引发受者免疫系统针对供者来源移植物的排斥反应。诱导受者对移植物的特异性免疫低反应状态即几乎免疫耐受状态, 是治疗移植排斥的理想状态。当前研究中有多种策略应用于诱导免疫低反应状态, 包括基于细胞的免疫诱导、诱导嵌合体生成、共刺激途径阻断、诱导细胞凋亡、靶向清除记忆T细胞、通过外泌体和纳米颗粒携带药物诱导耐受等。本文探讨了在临床医学中实现免疫耐受对同种异体移植物和受者生存的关键性, 概述了在同种异体移植中多种耐受诱导策略的研究现状及研究进展;此外, 还分析了各种策略的不足之处, 并提出了本领域的未来展望。

关键词：器官移植同种异体移植移植排斥免疫耐受

中国14省不同地区常见嗜尸性苍蝇mtDNA中COⅠ基因序列检测

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中南大学学报（医学版） 2010年第8期35卷 819-825页

作者：杨立蔡继峰文继舫郭亚东中南大学基础医学院法医学系长沙410013 中南大学基础医学院病理学系长沙410013

目的:通过检测嗜尸性苍蝇线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(COⅠ)中278 bp基因序列,鉴定嗜尸性苍蝇种类,为法医鉴别嗜尸性苍蝇种类提供可靠依据。方法:随机采集内蒙古包头、赤峰、天津、南宁、福州、山东临沂、石家庄、银川、... 详细信息

目的:通过检测嗜尸性苍蝇线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ(COⅠ)中278 bp基因序列,鉴定嗜尸性苍蝇种类,为法医鉴别嗜尸性苍蝇种类提供可靠依据。方法:随机采集内蒙古包头、赤峰、天津、南宁、福州、山东临沂、石家庄、银川、兰州、北京怀柔、河南新乡及南阳、山西大同、安徽芜湖、浙江衢州、湖南长沙及株洲、永州等14个省不同地区室外多点放置兔、狗、猪尸体上的嗜尸性苍蝇38只。利用改进的小型昆虫DNA匀浆方法提取上述苍蝇mtDNA,进行PCR扩增;7%聚丙烯酰胺非变性凝胶连续缓冲体系垂直电泳和银染显色技术进行扩增结果检测;PCR胶回收试剂盒纯化;ABI3730测序仪测序;MEGA4软件包进行序列分析和构建UPGMA系统发育树。结果:有效鉴定出上述38只嗜尸性苍蝇,3科(蝇科、丽蝇科、麻蝇科),10属(家蝇属、齿股蝇属、阿丽蝇属、带绿蝇属、裸金蝇属、原伏蝇属、金蝇属、绿蝇属、黑麻蝇属、别麻蝇属),12种(家蝇、开普齿股蝇、叉叶绿蝇、亮绿蝇、巨尾阿丽蝇、瘦叶带绿蝇、白头裸金蝇、新陆原伏蝇、大头金蝇、丝光绿蝇、黑尾黑麻蝇、棕尾别麻蝇)。结论:mtDNA上COⅠ中278 bp基因序列分析能有效地对嗜尸性苍蝇进行种类鉴定。该检测方法快速、简便和精确,可以作为法医鉴别嗜尸性苍蝇种类的依据。

关键词：法医昆虫学嗜尸性苍蝇种类鉴定线粒体DNA 细胞色素氧化酶亚单位Ⅰ

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水中尸体腐败及死后淹没时间推断研究进展

法医学杂志 2019年第4期35卷 459-466页

作者：郭娟娟符晓亮蔡继峰中南大学基础医学院法医学系

人类尸体可在各种水环境中被发现,水中尸体腐败与陆地不同,其腐败过程受众多因素影响,死后淹没时间(postmortem submersion interval,PMSI)推断困难。目前针对水中尸体的研究明显少于陆地尸体,但在实际工作中问题较多。本文总结了水中... 详细信息

人类尸体可在各种水环境中被发现,水中尸体腐败与陆地不同,其腐败过程受众多因素影响,死后淹没时间(postmortem submersion interval,PMSI)推断困难。目前针对水中尸体的研究明显少于陆地尸体,但在实际工作中问题较多。本文总结了水中尸体腐败分期及影响因素,介绍了依据腐败分期、尸体现象、水生昆虫、生物膜、理化方法推断PMSI的相关研究进展,希望能为水中尸体的研究及实践工作提供参考。

关键词：法医病理学尸体溺水死后淹没时间死亡时间推断综述