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WWP1促进小鼠成釉细胞分化和牙釉质形成的作用研究

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中华口腔医学杂志 2025年第1期60卷 33-42页

作者：林静潇牛佳欣傅晶冯豪刘琰袁国华陈智武汉大学口腔医(学)院口颌系统重建与再生全国重点实验室口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学湖北省重点实验室武汉430079

目的研究含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)在小鼠牙釉质形成中的作用。方法对出生后(P)7 d(P7)小鼠切牙和P3.5小鼠下颌第一磨牙牙胚的单细胞RNA测序数据进行可视化, 分析Wwp1在小鼠牙上皮中的整体表达情况。采用免疫组化染色观察W... 详细信息

目的研究含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)在小鼠牙釉质形成中的作用。方法对出生后(P)7 d(P7)小鼠切牙和P3.5小鼠下颌第一磨牙牙胚的单细胞RNA测序数据进行可视化, 分析Wwp1在小鼠牙上皮中的整体表达情况。采用免疫组化染色观察WWP1在不同时期小鼠切牙和下颌第一磨牙牙胚上皮中的表达。构建Wwp1基因敲除(Wwp1 KO)小鼠。分别收集P1、P7 Wwp1 KO及同窝对照小鼠各3只, P14、P28、2和3个月的Wwp1 KO及同窝对照小鼠各6只。采用显微CT分析小鼠磨牙及切牙的牙釉质形成量。采用扫描电镜观察小鼠切牙和磨牙牙釉质断面结构。能谱分析检测切牙断面釉柱表面钙磷含量。采用免疫荧光检测小鼠釉原蛋白(AMELX)表达。培养类成釉上皮细胞LS-8, 转染Wwp1 siRNA或过表达质粒, 采用蛋白质印迹法检测AMELX的表达。结果单细胞测序数据显示, Wwp1在小鼠切牙和下颌第一磨牙牙胚上皮细胞中高表达。免疫组织化学染色显示, 小鼠切牙和磨牙牙胚中WWP1高表达于分泌前期、分泌期、过渡期和成熟期的成釉细胞。不同于对照小鼠, Wwp1 KO小鼠下颌切牙呈现不透明白垩色。Wwp1 KO小鼠磨牙和切牙牙釉质体积[分别为(0.155±0.016)、(0.300±0.017)μm3]较对照小鼠[分别为(0.203±0.062)、(0.418±0.023)μm3]显著降低23.95%(P<0.001)和28.31%(P<0.001)。扫描电镜观察显示, Wwp1 KO小鼠釉柱低平、松散、结构紊乱。能谱分析结果显示, Wwp1 KO小鼠切牙牙釉质断面钙元素的质量百分比[(20.74±0.91)%]和钙磷比(1.93±0.01)均显著低于对照小鼠[分别为(30.30±3.83)%和2.02±0.01](均P<0.001)。免疫荧光结果显示, P1和P7的Wwp1 KO小鼠下颌第一磨牙牙胚成釉细胞中AMELX表达均显著低于对照小鼠(均P<0.001)。在LS-8细胞中敲低或过表达WWP1分别使AMELX蛋白表达下降或上升。结论 WWP1对小鼠牙釉质有促进成釉细胞分化和釉基质矿化的作用, 从而可以促进牙釉质的正常发育。

关键词：牙釉质含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1 泛素蛋白连接酶成釉细胞牙釉质发育缺陷釉原蛋白

高通量测序在遗传性出生缺陷精准防控中的应用

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中华医学杂志 2025年第6期105卷 416-420页

作者：刘颖迪游艳琴李卓梁德生邬玲仟中南大学生命科学学院医学遗传学研究中心儿科罕见病教育部重点实验室长沙410078 湖南家辉遗传专科医院医学遗传科长沙410078 解放军总医院第一医学中心妇产科北京100853

高通量测序技术在遗传性出生缺陷防控工作中发挥着越来越重要的作用。其中,基于二代测序(NGS)技术的无创产前检测(NIPT)、低深度全基因组测序(CNV-seq)和外显子测序(ES)等技术在临床中得到了广泛应用。近年来,三代测序(TGS)技术的研发... 详细信息

高通量测序技术在遗传性出生缺陷防控工作中发挥着越来越重要的作用。其中,基于二代测序(NGS)技术的无创产前检测(NIPT)、低深度全基因组测序(CNV-seq)和外显子测序(ES)等技术在临床中得到了广泛应用。近年来,三代测序(TGS)技术的研发和临床应用研究成果层出不穷,凭借其长读长的测序优势,解决了复杂疑难遗传病三级防控中的诸多难题,进一步完善了遗传性出生缺陷防控的技术体系。本文将介绍高通量测序技术在遗传性出生缺陷预防各环节中的应用,并深入探讨各应用领域的技术关键和应用趋势。

关键词：遗传性疾病,先天性遗传性出生缺陷防控高通量测序三代测序

基因Ⅰ型日本脑炎病毒GX毒株感染性克隆的构建

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中国兽医学报 2025年第03期 482-488页

作者：颜梦学叶静曹胜波熊俊垚华中农业大学农业微生物国家重点实验室

通过RT-PCR方法从基因Ⅰ型（GⅠ）日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）GX株中扩增覆盖全长cDNA的3段基因片段，将3个基因片段依次克隆到pBR322载体上以获得感染性克隆质粒pGX,测序正确后将该感染性克隆质粒与pCAGGS-T7聚... 详细信息

通过RT-PCR方法从基因Ⅰ型（GⅠ）日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）GX株中扩增覆盖全长cDNA的3段基因片段，将3个基因片段依次克隆到pBR322载体上以获得感染性克隆质粒pGX,测序正确后将该感染性克隆质粒与pCAGGS-T7聚合酶真核表达质粒共转染至BHK-21细胞中进行病毒的拯救。间接免疫荧光和噬斑试验结果显示，成功拯救GⅠJEV rGX;噬斑试验和小鼠感染试验结果显示，拯救的病毒rGX与野生型病毒GX具有相似的复制能力与致病性。结果表明，成功构建了GⅠJEV GX毒株感染性克隆。

关键词：基因Ⅰ型乙型脑炎病毒感染性克隆复制致病力

关中盆地咸阳市PM_(2.5)污染时空分布特征和潜在源区分析

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环境科学 2025年第1期46卷 579-590页

作者：郝永佩宋晓伟朱晓东王京伟程鹏孔媛山西财经大学资源环境学院太原030006 南京大学环境学院污染控制与资源化研究国家重点实验室南京210046

基于2014~2021年咸阳市PM_(2.5)浓度数据和GDAS全球同化气象数据,采用气流后向轨迹聚类分析法(HYSPLIT)、潜在来源贡献函数法(PSCF)、浓度权重轨迹分析法(CWT)和相关统计学方法,研究关中盆地咸阳市PM_(2.5)污染时空变化特征,厘清咸阳市P... 详细信息

基于2014~2021年咸阳市PM_(2.5)浓度数据和GDAS全球同化气象数据,采用气流后向轨迹聚类分析法(HYSPLIT)、潜在来源贡献函数法(PSCF)、浓度权重轨迹分析法(CWT)和相关统计学方法,研究关中盆地咸阳市PM_(2.5)污染时空变化特征,厘清咸阳市PM_(2.5)污染来源特征和潜在源区.结果表明,咸阳市2014~2021年PM_(2.5)浓度呈先升后降的特征,2016年浓度年均值最高,达到81.25μg·m^(-3);季节变化呈秋冬高春夏低的特征,冬季ρ(PM_(2.5))最高,达116μg·m^(-3),而夏季ρ(PM_(2.5))最低,仅为31.58μg·m^(-3);咸阳市PM_(2.5)空间分布年均值呈现南部和东南高、自东南向西北递减的污染特征.聚类分析表明咸阳市春、秋和冬季受偏西方向气流影响显著,而夏季则以短距离输送为主;PSCF和CWT分析显示,冬季潜在源贡献高值区域分布较为集中且覆盖范围最广,春秋季次之,夏季高值区域范围最小,潜在源区主要集中在咸阳市周边以及贯穿内蒙古西部、甘肃中东部、宁夏中南部到河南中部呈西北-东南方向的源区带.重污染时间段聚类分析表明咸阳市PM_(2.5)污染以偏西方向气流为主,高PM_(2.5)浓度除受咸阳市周边地区影响外,还受到与冬季潜在源高值区域类似的源区带影响.因此,针对咸阳市PM_(2.5)污染在严格控制本地及周边污染源排放的前提下,实施区域联防联控,防止外来污染源输入,才能有效防范该区域连片污染的发生.

关键词： PM_(2.5) 时空分布后向轨迹潜在源区咸阳市

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1型糖尿病教育师专职岗位的设立与实践

中华糖尿病杂志 2025年第1期17卷 169-173页

作者：雷佳玮罗碧华李娟刘芳张艳徐蓉谢雨婷李霞周智广黄金中南大学湘雅二医院护理教研室长沙410011 中南大学湘雅二医院代谢内分泌科、国家代谢性疾病临床医学研究中心、糖尿病免疫学教育部重点实验室长沙410011

该文借鉴国内外糖尿病教育与管理发展经验和先进理念,结合我国目前1型糖尿病患者自我管理教育与支持现状,设立1型糖尿病教育师专职岗位,明确1型糖尿病教育师培训学校准入条件、岗位职责、工作制度、培训形式等内容。通过全面评估、共同... 详细信息

该文借鉴国内外糖尿病教育与管理发展经验和先进理念,结合我国目前1型糖尿病患者自我管理教育与支持现状,设立1型糖尿病教育师专职岗位,明确1型糖尿病教育师培训学校准入条件、岗位职责、工作制度、培训形式等内容。通过全面评估、共同决策等方式,普及糖尿病结构化教育方法,从而提升我国1型糖尿病照护及健康教育水平。该文对1型糖尿病教育师专职岗位的设立与实践进行详细介绍,旨在为有效培养和使用1型糖尿病教育师提供参考。

关键词：糖尿病,1型教育师岗位设置实践探索

联合应用补阳还五汤有效成分对OGD/R诱导的神经元损伤影响及机制研究

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中国中药杂志 2025年第4期 1098-1110页

作者：但存燕戎梦玮楼秀夏天晴肖保国郭虹马存根宋丽娟山西中医药大学国家中医药管理局多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心复旦大学附属神经病学研究所/医学神经生物学国家重点实验室天津中医药大学省部共建组分中药国家重点实验室山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室

补阳还五汤(BYHWD)作为中医药治疗缺血性脑卒中(CIS)的经典方剂之一,其疗效早已得到临床验证,但其物质基础及作用机制尚未系统阐明。该研究运用网络药理学和分子对接技术,分析BYHWD入血入脑有效成分在CIS的病理过程,针对细胞凋亡所涉及... 详细信息

补阳还五汤(BYHWD)作为中医药治疗缺血性脑卒中(CIS)的经典方剂之一,其疗效早已得到临床验证,但其物质基础及作用机制尚未系统阐明。该研究运用网络药理学和分子对接技术,分析BYHWD入血入脑有效成分在CIS的病理过程,针对细胞凋亡所涉及的潜在作用靶点及作用机制,并进行细胞实验验证,选取羟基红花黄色素A(HSYA)、川芎嗪(TMP)、黄芪甲苷(AS-Ⅳ)、苦杏仁苷(AMY)、芍药苷(PF)5种有效成分作为BYHWD药效的研究对象。以HT22细胞为实验对象,cell counting kit-8(CCK-8)法检测药物不良反应,构建糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)细胞模型,以细胞凋亡与细胞焦亡作为主要筛选标准,检测乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)水平评估细胞膜完整性,流式细胞术检测细胞凋亡,半胱天冬酶(caspase)-3与caspase-1酶活性检测细胞凋亡与细胞焦亡,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞焦亡因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-18]水平,由此明确HSYA和AMY对细胞凋亡和细胞焦亡的显著调节作用。通过TUNEL法检测细胞凋亡率、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3]表达水平,结果 HSYA联合AMY组抗凋亡效应优于单独用药组。分子对接结果显示,HSYA和AMY与基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)蛋白靶点展现出显著结合力。引入CXCR4特异性抑制剂(AMD3100)进行干预,采用Western blot检测凋亡相关蛋白以及SDF-1α和CXCR4蛋白表达水平,证实这2种活性成分能够通过调控SDF-1α/CXCR4信号通路,影响细胞凋亡。

关键词：补阳还五汤缺血性脑卒中羟基红花黄色素A 苦杏仁苷 OGD/R 细胞凋亡细胞焦亡神经元

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胚蛋注射鼠李糖乳杆菌对黄羽肉鸡早期生长性能、肠道健康、血清生化指标和盲肠微生物区系的影响

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动物营养学报 2025年第02期 938-949页

作者：于潇姚杰苏琳洁吴亚妮马逸轩黄艳玲王茜西南民族大学畜牧兽医学院青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室动物科学国家民委重点实验室

本试验旨在研究胚蛋注射鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus,LR）对黄羽肉鸡早期生长性能、肠道健康、血清生化指标和盲肠微生物区系的影响。采用单因子完全随机区组设计，选取240枚黄羽肉鸡种蛋[（58.70±0.25) g]，随机放置于同... 详细信息

本试验旨在研究胚蛋注射鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus,LR）对黄羽肉鸡早期生长性能、肠道健康、血清生化指标和盲肠微生物区系的影响。采用单因子完全随机区组设计，选取240枚黄羽肉鸡种蛋[（58.70±0.25) g]，随机放置于同一孵化器中8层（区组），每层设置3排。在18.5胚龄时，种蛋通过羊膜腔分别接种100μL磷酸盐缓冲液（对照组）、100μL低剂量LR(10～2CFU，低LR组）和100μL高剂量LR(10～4CFU，高LR组），每组8个重复，每个重复10枚蛋。出孵后，3组仔鸡按区组顺序转入对应鸡笼，饲喂相同饲粮至21日龄。每组8个重复（笼），每个重复9～10只鸡。结果显示：1）与对照组相比，高、低剂量LR组黄羽肉鸡21日龄体重与1～21日龄平均日增重均显著升高（P0.05），但β多样性分析显示盲肠微生物群落结构发生显著变化（P<0.05）。与对照组相比，胚蛋注射高剂量LR显著升高了UCG-005属的相对丰度（P<0.05），胚蛋注射低剂量LR显著提高了蓝绿藻菌属的相对丰度（P<0.05）。综上所述，胚蛋注射LR(10～2或10～4CFU）可以通过改善肠道形态、增加肠道有益菌占比提高黄羽肉鸡早期的生长速度。

关键词：胚蛋注射鼠李糖乳杆菌黄羽肉鸡生长性能微生物区系

转录组学分析Fe_(3)O_(4)纳米颗粒胁迫下盐单胞菌XH26与四氢嘧啶代谢相关的差异表达基因

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微生物学报 2025年第1期65卷 239-255页

作者：张培霞陶宇杰乔丽娟王嵘韩睿朱德锐沈国平青海大学医学院基础医学研究中心青海西宁810016 青海大学农林科学院蔬菜遗传与生理重点实验室青海西宁810016

【目的】探究Fe_(3)O_(4)纳米颗粒(Fe_(3)O_(4)nanoparticles,Fe_(3)O_(4)NPs)与坎帕尼亚盐单胞菌(Halomonas campaniensis)XH26共培养后的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),明确Fe_(3)O_(4)NPs促进XH26胞内四氢嘧啶积聚量增长的分子机制。【方法】设置空白组(C,0 g/L)、低浓度组(L,0.01 g/L)、中浓度组(M,0.10 g/L)和高浓度组(H,0.50 g/L)的Fe_(3)O_(4)NPs与菌株XH26共培养。采用Illumina Hi Seq 300PE进行转录组测序,探究菌株不同浓度组的DEGs,并采用RT-q PCR验证关键的DEGs。【结果】与空白C组相比,M组四氢嘧啶的积累量提高了55.67%(708.87 mg/L),M组和H组的亚铁离子和抗氧化能力显著升高,而H组的羟基自由基含量高于M组。转录组学分析显示,M组中与菌株XH26胞内代谢相关的DEGs富集于精/脯氨酸代谢(13个)、氮代谢通路(11个)、硫代谢通路(10个),主要功能与四氢嘧啶合成通路(11个)、电子传递途径(7个)及抗氧化酶系(5个)相关。RT-q PCR验证了四氢嘧啶合成代谢关键基因lys C、asd和基因簇ect ABC,精氨酸(arginine,Arg)代谢通路基因ast A/B/D/E以及尿素循环基因arg E/H的表达趋势,与RNA-seq测序结果相一致。【结论】四氢嘧啶是细菌细胞和生物大分子重要的稳定保护剂。Fe_(3)O_(4)NPs胁迫下菌株XH26胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)增多,且影响胞内的氨基酸和氮代谢过程。菌株XH26通过提升抗氧化能力,增加胞内的四氢嘧啶积聚量,以应对Fe_(3)O_(4)NPs的胁迫作用。

关键词： Fe_(3)O_(4)纳米颗粒坎帕尼亚盐单胞菌转录组学四氢嘧啶氧化应激

基于高通量测序技术分析中国荷斯坦奶牛瘤胃纤毛虫的物种多样性

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河南师范大学学报(自然科学版) 2025年

作者：何金英徐勤辉王宇嘉江奕希黄一菲李曼熊杰冯金梅江汉大学医学部病原生物学教研室中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室

瘤胃纤毛虫是反刍动物瘤胃微生态系统的重要组成部分,在调控瘤胃微环境及参与其宿主动物的生理功能等方面具有重要作用.然而,家养反刍动物瘤胃中的瘤胃纤毛虫物种多样性及不同动物个体间瘤胃纤毛虫群落结构的差异仍不清楚.采用基于18S r... 详细信息

瘤胃纤毛虫是反刍动物瘤胃微生态系统的重要组成部分,在调控瘤胃微环境及参与其宿主动物的生理功能等方面具有重要作用.然而,家养反刍动物瘤胃中的瘤胃纤毛虫物种多样性及不同动物个体间瘤胃纤毛虫群落结构的差异仍不清楚.采用基于18S rRNA基因的高通量测序技术,解析了中国荷斯坦奶牛瘤胃内纤毛虫的物种多样性和宿主不同个体间的差异.选取3头成年健康中国荷斯坦奶牛共采集了9个瘤胃液样品,提取样品总DNA后,采用瘤胃纤毛虫18S rRNA基因V5～V8区特异性引物进行扩增,扩增产物使用Ion S5TMXL平台测序.去除低质量序列和嵌合体后,共获得721 250条高质量有效序列,基于97%的序列一致性聚类获得38个操作分类单元（operational taxonomic units,OTU）.不同个体样品间在α多样性Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数上,差异不显著.OTUs的物种分布属于纤毛门裂口纲毛口亚纲.在属水平分类上,它们主要分布于10个已知的瘤胃纤毛虫的属,其中内毛属是相对丰度最高的属,同时还检测到一些未被分类和鉴定的瘤胃纤毛虫.同一牧场同一饲喂条件下的不同个体之间,瘤胃纤毛虫的物种多样性没有显著差异,但不同个体之间在均匀度上存在一定的差异.研究结果将为瘤胃纤毛虫的高通量测序分析和综合分类学研究提供参考.

关键词：瘤胃纤毛虫原生生物多样性 18S rRNA基因测序分类学