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整合药理学在中医药现代研究的若干进展

中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 270-278页

作者：李珊珊李玮婕王萍中国中医科学院中药研究所北京100700

中药方剂作为临床治疗的主要形式和手段,是中医理法方药的关键环节,是中医学理论和临床实践的桥梁,探索中药方剂的化学物质实体和机体生命活动的关系及其复杂交互规律,是中药现代研究的关键科学问题之一。然因本身组成的复杂性、生物效... 详细信息

中药方剂作为临床治疗的主要形式和手段,是中医理法方药的关键环节,是中医学理论和临床实践的桥梁,探索中药方剂的化学物质实体和机体生命活动的关系及其复杂交互规律,是中药现代研究的关键科学问题之一。然因本身组成的复杂性、生物效应表达的多样性,使其“化学成分群-体内过程-药效活性”之间缺乏“完整的证据链”,存在严重的“碎片化”现象。整合药理学的提出,是中药复杂系统分子作用解析的有效策略和方法,特别体现了以生物技术革命为代表的第四次浪潮的时代背景下,利用互联网、大数据、人工智能为代表的新技术驱动中药复杂体系发展的新趋势,为系统揭示多成分药物与机体相互作用及其整合规律和作用原理提供了一条切实可行的途径。该文试从中药整合药理学的形成和发展、研究思路、关键技术及应用等方面进行综述,为阐释中医药理论的科学内涵和中医原创思维的科学价值、总结与传承名医经验、中药质量控制、中药作用原理阐释和中药新药研发等提供强有力支持。

关键词：整合药理学中药方剂证候生物内涵安全性和有效性质量控制药效物质基础

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中医药防治糖尿病及其并发症的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第17期30卷 275-283页

作者：蔡茹霜易艳中国中医科学院中药研究所北京100700

纵览中医药防治糖尿病的研究现状,综述近年文献,梳理并总结糖尿病的中医病因病机及其常见并发症的治疗进展,以期为中医药治疗糖尿病并发症提供思路与方法。中医内治法包括单味中药、中药复方及中成药等治疗均取得满意疗效,外治法的临床... 详细信息

纵览中医药防治糖尿病的研究现状,综述近年文献,梳理并总结糖尿病的中医病因病机及其常见并发症的治疗进展,以期为中医药治疗糖尿病并发症提供思路与方法。中医内治法包括单味中药、中药复方及中成药等治疗均取得满意疗效,外治法的临床研究亦有治疗成果,在防治糖尿病肾病、糖尿病足、周围神经病变等方面均有重要进展;然而在中医理论创新、疗效评价、临床应用推广等方面仍存在不足。中医药防治糖尿病并发症具有鲜明优势,应注重内外治法相结合,统一证型分类,确立中医药疗效评价体系,促进理论创新。

关键词：糖尿病中医药糖尿病并发症微血管病变研究进展

与流感病毒NP互作的宿主靶点及栀子环烯醚萜苷抗流感病毒的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第13期30卷 60-66页

作者：杨晓微包蕾张宇刘宪耿子涵李舒冉张敬升崔晓兰郭姗姗中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:探索与流感病毒核蛋白(NP)相互作用的宿主因子,研究其对流感病毒复制的影响,以及栀子环烯醚萜苷(IGE)抑制流感病毒的作用机制。方法:利用酵母双杂交系统筛选与流感病毒NP相互作用的宿主因子;通过免疫共沉淀实验对异质核糖核蛋白(HN... 详细信息

目的:探索与流感病毒核蛋白(NP)相互作用的宿主因子,研究其对流感病毒复制的影响,以及栀子环烯醚萜苷(IGE)抑制流感病毒的作用机制。方法:利用酵母双杂交系统筛选与流感病毒NP相互作用的宿主因子;通过免疫共沉淀实验对异质核糖核蛋白(HNRNPD)、氨基葡萄糖6磷酸脱氨酶1(GNPDA1)、Poly/rC结合因子1(PCBP1)、激活信号转导和转录激活因子(STAT)蛋白1抑制因子(PIAS1)进行验证;通过双荧光素酶实验比较PIAS1和HNRNPD对流感病毒复制的影响,并检测在转染核糖核蛋白体复合物(RNP)及PIAS1敲低的情况下,给予栀子环烯醚萜苷对流感病毒复制的影响。将ICR小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组和IGE高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外各组滴鼻感染甲型流感病毒FM1株建立病毒性肺炎模型。IGE高、中、低剂量组分别给予50、25、12.5 mg∙kg^(-1)IGE灌胃,达菲组给予27.5 mg∙kg^(-1)达菲灌胃,正常组和模型组灌服等体积蒸馏水,连续4 d。实验结束后,蛋白免疫印迹法检测肺组织中PIAS1、NP、磷酸化(p)-STAT3、STAT3、p-STAT1、STAT1的蛋白表达。结果:在酵母双杂交实验中,发现了16个流感病毒NP的潜在互作宿主靶点;免疫共沉淀实验发现HNRNPD和PIAS1可以与流感病毒NP相互作用;双荧光素酶报告实验中PIAS1敲低和过表达都可明显影响IAV RNP活性(P<0.05,P<0.01),HNRNPD对IAV RNP的影响差异无统计学意义;IGE高、低剂量组均可使流感病毒复制减少(P<0.05),并可逆转PIAS1敲低导致的流感病毒复制增加(P<0.05,P<0.01)。IGE各剂量组不同程度地降低感染小鼠肺组织PIAS1、NP、p-STAT3、p-STAT1、STAT1的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论:PIAS1和流感病毒NP相互作用,并能够抑制流感病毒的复制,栀子环烯醚萜苷可能通过PIAS1/STAT1通路抑制IAV RNP的活性,从而发挥抗病毒作用。

关键词：激活信号转导和转录激活因子(STAT)蛋白1抑制因子(PIAS1) 甲型流感病毒流感病毒核蛋白(NP) 栀子环烯醚萜苷核糖核蛋白

黄体酮撤退加情志刺激诱导型经前期综合征大鼠模型的建立与评价

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中国中药杂志 2024年第13期49卷 3608-3618页

作者：陈可点高双荣刘雪婷林娜张彦琼中国中医科学院中药研究所北京100700

经前期综合征(PMS)缺乏与中西医临床诊疗标准吻合度高、可行性好且表现稳定的动物模型,导致其发病机制、药效药理的相关研究缺乏可靠的实验载体。该研究旨在从“病-证-症”关联视角,系统解析PMS的生物内涵,在此基础上建立黄体酮撤退与... 详细信息

经前期综合征(PMS)缺乏与中西医临床诊疗标准吻合度高、可行性好且表现稳定的动物模型,导致其发病机制、药效药理的相关研究缺乏可靠的实验载体。该研究旨在从“病-证-症”关联视角,系统解析PMS的生物内涵,在此基础上建立黄体酮撤退与情志刺激结合诱导型PMS动物模型,并对其进行客观评价。首先通过GeneCards、DisGeNET、MalaCards和中医证候本体及多维定量关联计算平台(SoFDA)数据库与已发表文献,收集PMS现代医学与中医诊疗标准中肝郁气滞与气滞血瘀证型相关的临床症状基因集,并依据基因间相互作用信息,建立PMS的“病-证-症”关联网络。基于数据挖掘结果,在经典黄体酮撤退模型基础上,结合慢性束缚刺激,模拟临床发病过程中由外部环境刺激引起的情绪抑郁,从生理与情志2个维度引起病理损伤,制备PMS大鼠模型,评价2种造模条件下的模型在旷场实验得分,脏器指数,卵巢病理变化,血清雌二醇(E_2)、促卵泡激素/促黄体生成素(FSH/LH)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)水平及凝血四项、血流变指标。通过计算“病-证-症”关联网络节点在网络中的度值、介度和接近度,筛选出163个具有网络拓扑重要性的核心基因。进一步的生物功能挖掘结果表明,PMS核心基因主要参与“神经-内分泌-免疫”系统与血液循环障碍相关通路的调控;临床表型症状基因集映射分析提示,PMS核心基因与抑郁症状及血瘀所致肿痛症状显著相关。与单纯的黄体酮撤退模型相比,注射与束缚双重刺激的大鼠在旷场实验水平得分与总分,卵巢组织病理变化,血清神经递质5-HT与DA水平,血清性激素E_2与FSH/LH水平的异常改变均更为显著,且注射加束缚条件加剧了模型大鼠血液流变性、凝血功能和红细胞形态的病理改变,证实了该大鼠模型能够表征PMS发生、进展中的“神经-内分泌-免疫”系统紊乱与血液循环系统障碍,与该疾病的中西医临床诊疗标准相符。黄体酮撤退与情志刺激结合诱导型PMS大鼠模型的建立能够为PMS发病机制的阐释、治疗药物的发现与药效评价提供可靠的实验载体,也为客观化反映PMS中西医临床表征与精准治疗提供参考。

关键词：经前期综合征 “病-证-症”关联黄体酮慢性束缚应激抑郁血瘀

基于转录组学探索瘀血痹片治疗类风湿关节炎滑膜炎症的作用机制

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中国中药杂志 2024年第6期49卷 1446-1454页

作者：张昕卓陶雪莹黄凤玉祝盼盼袁蓓陈沛萍孔祥英林娜苏晓慧中国中医科学院中药研究所北京100700

基于转录组学分析瘀血痹片(Yuxuebi Tablets,YXB)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜炎症的机制。运用转录组学测序技术检测正常组、胶原诱导型关节炎(collagen⁃induced arthritis,CIA)模型组、YXB组大鼠关节组织的基因表达... 详细信息

基于转录组学分析瘀血痹片(Yuxuebi Tablets,YXB)治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜炎症的机制。运用转录组学测序技术检测正常组、胶原诱导型关节炎(collagen⁃induced arthritis,CIA)模型组、YXB组大鼠关节组织的基因表达谱,共同差异表达基因进行基因功能注释(Gene Ontology,GO)、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。通过OMIM、GeneCards数据库检索RA滑膜炎症疾病的相关靶点;通过Venny 2.1平台对YXB作用靶点和RA滑膜炎症疾病靶点取交集,对交集靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析。运用免疫组化法检测大鼠关节组织中炎症因子白细胞介素⁃1β(interleukin⁃1β,IL⁃1β)、肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)蛋白表达情况,并运用Western blot法检测磷脂酰肌醇3⁃激酶(phosphatidylinositol 3⁃kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路关键蛋白的表达水平。正常组vs模型组、模型组vs YXB组差异基因取交集得到明显差异基因2058个。通过OMIM、GeneCards数据库检索RA滑膜炎症相关靶点1102个,与YXB组明显差异基因取交集后得到204个交集靶点,主要涉及免疫反应(immune response)、信号传导(signal transduction)、炎症反应(inflammatory response)等生物过程,细胞质膜(plasma membrane)、细胞外间隙(extracellular space)、胞外区(extracellular region)等细胞组分,蛋白结合(protein binding)、相同蛋白结合(identical protein binding)、受体结合(receptor binding)等分子功能,主要富集到PI3K/Akt、细胞因子受体相互作用、Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)等信号通路。Western blot验证结果显示,YXB低、中、高剂量均能不同程度抑制大鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达水平,并呈现剂量依赖性。免疫组化进一步确认,YXB不仅能抑制CIA大鼠关节滑膜组织中炎症因子IL⁃1β和TNF⁃α水平,而且也能抑制p⁃Akt蛋白的表达。综上,该研究通过转录组学挖掘YXB抑制滑膜炎症缓解RA病情进展的关键机制,并通过系列验证发现与其抑制PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：瘀血痹片类风湿关节炎滑膜炎症转录组学 PI3K/Akt信号通路

基于UPLC-Q-TOF-MS和DESI-MSI分析天元芷通方入脑成分及其脑内分布

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 166-172页

作者：程怡兰群吴冰雨王锦玉刘德文仝燕中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)、解吸电喷雾电离质谱成像(DESI-MSI)、高光谱成像技术对天元芷通方入脑成分及其脑内分布进行探究。方法:10只BALB/c小鼠随机分为空白组(n=3)和给药组(n=7),给药组灌胃生... 详细信息

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)、解吸电喷雾电离质谱成像(DESI-MSI)、高光谱成像技术对天元芷通方入脑成分及其脑内分布进行探究。方法:10只BALB/c小鼠随机分为空白组(n=3)和给药组(n=7),给药组灌胃生药质量浓度约5 g·mL-1的天元芷通方药液0.3 mL,空白组灌胃等体积生理盐水,取小鼠全脑分别制备组织匀浆及冰冻切片。组织匀浆采用UPLC-Q-TOF-MS技术分别在正、负离子模式下进行入脑成分的定性分析。冰冻切片采用DESI-MSI观察入脑成分的脑内分布。选用暗场增强显微镜对各组小鼠脑切片进行高光谱成像扫描,收集微观视场中至少1000个像素点可见-近红外(400~1000 nm)波段的散射光数据并创建平均光谱,对空白及给药小鼠脑组织中成分进行比对。结果:UPLC-Q-TOF-MS共鉴定出天元芷通方入脑成分27个,包括有机酸类10个、苷类5个、生物碱类4个、酚类1个、黄酮类4个、苯酞类2个、其他类1个,主要来源于天麻、川芎、醋延胡索、酸枣仁和制巴戟天;质谱成像分析得到14个成分,其中阿魏酸、延胡索乙素、N-甲基去氢小檗碱主要分布在大脑皮层区域,维生素B5、斑鸠菊酸、蓖麻油酸主要分布在下丘脑区域,榄香脂素、十八烯酸、十八碳酸主要分布在皮层及下丘脑区域,洋川芎内酯B、藁本内酯、亚油酸、9,12-十八碳二烯酰乙酯、斯皮诺素则在脑组织大部分区域均有分布;高光谱成像显示,在可见-近红外波段范围内,给药组小鼠脑组织平均光谱发生明显红移,表明空白组和给药组小鼠间脑内化学成分的物理性质或含量存在差异,进一步验证了质谱成像的结果。结论:通过UPLC-Q-TOF-MS技术与质谱成像、高光谱成像技术的结合,明确了天元芷通方入脑治疗头痛的药物成分及在脑组织中的分布特征,为复方质量标准研究指标成分的选择和药效作用机制研究提供参考。

关键词：天元芷通方入脑成分脑内分布解吸电喷雾电离-敞开式离子化质谱成像(DESI-MSI) 高光谱成像超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)

补骨脂肝损伤实验研究及网络毒理学预测研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 179-189页

作者：唐璇韩佳寅潘辰张宇实梁爱华中国中医科学院中药研究所北京100700

补骨脂是传统的无毒中药,但近年来出现了一些关于其造成药物性肝损伤的报道,使得其用药安全问题引起了社会的广泛关注。目前,仅根据动物实验和体外实验研究补骨脂肝损伤的毒性机制及相关作用靶点和有毒成分与临床出现的补骨脂药物性肝... 详细信息

补骨脂是传统的无毒中药,但近年来出现了一些关于其造成药物性肝损伤的报道,使得其用药安全问题引起了社会的广泛关注。目前,仅根据动物实验和体外实验研究补骨脂肝损伤的毒性机制及相关作用靶点和有毒成分与临床出现的补骨脂药物性肝损伤实际情况存在一定的差距,这说明尚有一些补骨脂的潜在肝损伤成分及毒性靶点未被发现。随着系统生物学技术的不断发展,利用网络毒理学方法构建药物性肝损伤和肝损伤预测模型,能够大大降低实验成本,有效提高毒性预测效率,为挖掘潜在毒性成分及相关毒性靶点提供新的工具。为了更系统地阐释补骨脂应用过程中出现的肝损伤的特点,挖掘补骨脂潜在肝损伤成分及相关靶点,进而阐释其毒性机制,该文首先对1962—2021年中国知网、万方、维普、PubMed数据库收录的有关补骨脂肝损伤的文献报道进行整理和统计,分析临床上补骨脂肝损伤的特点和影响因素;进而对文献中报道的补骨脂的物质成分和入血成分进行总结;并对临床前体内、体外实验发现的补骨脂肝损伤机制、靶点、相关成分进行梳理,总结目前已知的补骨脂中可能具有肝损伤的化合物;最后对目前采用网络毒理学构建的补骨脂肝损伤预测模型获取的补骨脂肝损伤成分及靶点预测结果进行总结。从临床肝损伤特点、临床前肝损伤研究、计算机网络预测3方面阐释补骨脂肝损伤发生可能的相关因素,为补骨脂肝损伤研究和风险提示提供参考。

关键词：补骨脂肝损伤毒性机制毒性靶点网络毒理学

双氢青蒿素和普瑞巴林联用对神经病理性疼痛小鼠的干预作用及炎症调控机制

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中国中药杂志 2024年第6期49卷 1570-1578页

作者：刘莹王文丽张国鑫林娜朱春燕中国中医科学院中药研究所北京100700

明确双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与普瑞巴林(pregabalin,PGB)联用对小鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的干预作用,并探索其神经炎症调控的初步机制。以脊神经结扎法建立NP小鼠模型,假手术组暴露脊神经而不结扎。随机分... 详细信息

明确双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与普瑞巴林(pregabalin,PGB)联用对小鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的干预作用,并探索其神经炎症调控的初步机制。以脊神经结扎法建立NP小鼠模型,假手术组暴露脊神经而不结扎。随机分为假手术组,模型组,PGB低、中、高剂量(PGB⁃L、PGB⁃M、PGB⁃H,22、45、91 mg·kg^(-1))组、DHA(16 mg·kg^(-1))组、DHA联合PGB低剂量、中剂量、高剂量(DHA+PGB⁃L、DHA+PGB⁃M、DHA+PGB⁃H)组。造模第1~18天灌胃给药。以Von Frey法检测小鼠机械痛阈值,冷板法检测冷痛敏,悬尾及强迫游泳实验检测抑郁行为,旷场实验检测焦虑行为,Morris水迷宫检测认知功能。液相悬浮芯片技术对免疫炎症相关因子进行定量分析,免疫荧光检测CC趋化因子配体3(CCL3)、跨膜蛋白119(TMEM119)表达。结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠机械痛及冷痛敏阈值显著降低;悬尾实验、强迫游泳停止挣扎时间显著增加;旷场实验在中心区域活动时间显著减少;Morris水迷宫在第二/四象限的停留时间显著多于其余象限,撤台后上台潜伏期显著增加,免疫荧光TMEM119阳性细胞数量显著增多,胞体面积显著增大,CCL3表达显著增加。与模型组比较,DHA+PGB⁃M组机械痛、冷痛敏阈值显著增加,悬尾、强迫游泳停止挣扎时间显著增加,旷场实验在中心区域活动时间显著减少,Morris水迷宫在第二/四象限的停留时间显著少于其余象限,撤台后上台潜伏期显著减少。与PGB⁃M组比较,DHA+PGB⁃M组D14⁃17机械痛阈值显著增加,强迫游泳停止挣扎时间显著增加,Morris水迷宫在第二/四象限的停留时间显著少于其余象限。与模型组比较,DHA+PGB⁃M组TMEM119阳性细胞数量明显减少,胞体面积明显减小,CCL3表达明显降低。该研究表明,DHA⁃PGB联用可以增强PGB对NP小鼠的镇痛效果,突破PGB耐受性的局限,弥补PGB在抗抑郁、改善认知方面的不足,相关机制可能与抑制小胶质细胞活化及CCL3表达调控神经炎症有关。

关键词：双氢青蒿素普瑞巴林联合用药神经病理性疼痛神经炎症

中成药临床实践指南制定方法(八)——基于AGREEⅡ和RIGHT的中成药临床实践指南质量评价

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中医杂志 2024年第2期65卷 185-191页

作者：张福强胡紫腾张钰菁晏利姣王居义张册函陈嘉琪王梦依刘朔名谢歆翊梁宁史楠楠王燕平中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京市100700 中国中医科学院中国医史文献研究所上海中医药大学山东中医药大学针灸推拿学院中国医科大学健康科学研究院天津中医药大学

目的基于国际公认评价指南的方法学质量工具AGREEⅡ(the appraisal of guidelines for research and evaluationⅡ)及国际实践指南报告标准(reporting items for practice guidelines in healthcare,RIGHT)清单评价中成药临床实践指南的方法学和报告质量,分析报告内容中的不足之处,以期为中成药临床应用及后续指南的制定提供参考。方法检索中国知网、重庆维普中文科技期刊数据库、万方医学网和中国生物医学数据库,补充检索医脉通、中华中医药学会和中华医学会网站并追溯纳入文献的参考文献,收集中成药临床实践指南。采用AGREEⅡ和RIGHT清单评价指南质量,使用组内相关系数进行一致性检验,采用描述性分析和卡方检验分析各领域报告率和各条目平均得分。结果最终纳入140部中成药临床实践指南,其中51部为以病为纲类,89部为以药为纲类,均为中国发布。以病为纲类在AGREEⅡ6个领域平均得分率最高为表达的清晰性73.32%,最低为应用性26.80%;以药为纲类在AGREEⅡ6个领域平均得分率最高为范围和目的55.62%,最低为制定严谨性31.32%。以病为纲类在RIGHT清单7个领域平均报告率最高为背景68.26%,最低为评审和质量保证13.73%;以药为纲类在RIGHT清单7个领域平均报告率最高为背景61.31%,最低为其他方面4.49%。统计分析结果显示,以病为纲类中成药临床实践指南在AGREEⅡ的3个领域(制定严谨性、表达的清晰性、编辑的独立性)和RIGHT清单的4个领域(基本信息、证据、资助与利益冲突声明和管理、其他方面)的平均报告率均高于以药为纲类中成药临床实践指南(P研究纳入的140部中成药临床实践指南总体方法学和报告质量均有待提高,纳入文献的推荐等级多为B级和C级,难以直接应用于临床诊疗决策过程中,建议未来指南制定团队应严格参照AGREEⅡ和RIGHT清单制定相关指南以指导中成药的临床应用。

关键词：临床实践指南中成药专家共识质量评价 AGREEⅡ RIGHT清单