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萝卜硫素预防Ⅰ型神经纤维瘤病恶性进展的作用机制研究

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天津医科大学学报 2024年第2期30卷 105-109,151页

作者：孙亚敏朱香熹陈毓锴朱泽天津医科大学基础医学院病原生物学系天津300070 遵义医科大学珠海校区临床医学系珠海519090 天津医科大学南开临床学院天津300102

目的:研究萝卜硫素(SFN)预防Ⅰ型神经纤维瘤(NF-1)进展为恶性周围神经鞘瘤(MPNST)的作用及有关机制。方法:使用CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力;尼罗红(Nile Red)染色法检测细胞内脂肪含量;CellTiter-Glo 2.0 Assay试剂盒检测细胞... 详细信息

目的:研究萝卜硫素(SFN)预防Ⅰ型神经纤维瘤(NF-1)进展为恶性周围神经鞘瘤(MPNST)的作用及有关机制。方法:使用CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力;尼罗红(Nile Red)染色法检测细胞内脂肪含量;CellTiter-Glo 2.0 Assay试剂盒检测细胞内ATP含量;采用实时荧光定量PCR检测细胞脂肪酸合酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)的mRNA水平,免疫印迹实验检测细胞β-catenin、Axin 2、C-Myc、Cyclin D1的蛋白水平。结果:SFN抑制STS26T、ST88-14细胞增殖活性(t=18.70、11.20,均P<0.05),减少细胞克隆数量(t=7.28、3.148,均P<0.05),并减少细胞内脂质积累(t=3.411、5.75,均P<0.05)和ATP的含量(t=14.75、13.53,均P<0.05);与对照组相比,SFN降低STS26T和ST88-14细胞中FASN和CPT1A的mRNA水平(均P<0.05);与对照组相比,15μmol/L SFN可下调STS26T和ST88-14细胞内β-catenin及下游靶基因Axin 2、C-Myc、Cyclin D1的蛋白表达水平(均P<0.05)。结论:SFN能够通过抑制细胞脂肪酸合成及β-氧化和抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制MPNST细胞增殖,具有预防NF-1恶性转化为MPNST的潜力。

关键词：萝卜硫素 Ⅰ型神经纤维瘤恶性周围神经鞘瘤增殖

Akkermansia muciniphila对大鼠高温运动后器官损伤的影响

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中国微生态学杂志 2024年第2期36卷 125-134,146页

作者：杨展孙学伟秦明珂崔茜张昕蕊张若男路寒张明燕朱进郑峰唐成亮东部战区疾病预防控制中心江苏南京210002 滨州医学院基础医学院陆军军医大学军事预防医学系军队劳动卫生学教研室东部战区空军医院南京中医药大学医学院整合医学学院南京医科大学病原生物学系南京医科大学第二附属医院南京中医药大学金陵临床医学院

目的探讨嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,***)通过干预肠道微生态,对大鼠高温运动后的器官损伤的影响。方法采用6~8周龄的Sprague Dawley大鼠,随机分成对照组(n=5)、常温运动组(RT组,n=8)、高温运动组(HT组,n=8)、***干预组(... 详细信息

目的探讨嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,***)通过干预肠道微生态,对大鼠高温运动后的器官损伤的影响。方法采用6~8周龄的Sprague Dawley大鼠,随机分成对照组(n=5)、常温运动组(RT组,n=8)、高温运动组(HT组,n=8)、***干预组(AKK干预组,n=8)、高温粪菌移植组(HT.R组,n=4)和***粪菌移植组(AKK.R组,n=4),在力竭运动后采集大鼠的血液、组织及粪便样本,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的变化。通过16S rRNA基因测序和GC-MS方法分析粪便中菌群和代谢产物的改变,对结肠组织和肝脏组织进行病理检测,采用免疫组化方法评估肠道屏障功能。结果HT组和AKK干预组大鼠在(35±2)℃、湿度(55±5)%的环境下平均运动时间分别为(13.76±3.454)和(19.55±1.997)min,差异有统计学意义(t=4.104,P=0.0011)。***干预后,大鼠血清的AST(U/mL)、ALT(U/mL)、BUN(mmol/L)和Cr(μmol/L)平均水平(3.953±1.877、2.622±1.086、10.040±1.088、65.800±12.010)均低于HT组(6.358±1.436、4.335±1.304、15.010±1.913、93.980±39.110),其中AST、ALT、BUN水平检测差异均有统计学意义(t=2.878、2.856、6.381,P=0.0122、0.0127、<0.0001)。肠道菌群组成结构在属水平上发生变化,粪便中代谢产物水平有不同程度的改变。病理结果显示,AKK干预组大鼠的肝脏损伤较HT组有显著缓解。AKK干预组大鼠的肠道屏障相关连接蛋白ZO-1和Occludin表达量的累积光密度值(6330±481.8、6140±281.7)较HT组(3425±257.0、3943±242.1)上调(t=9.216、10.250,P=0.0008、0.0005)。结论***能够在一定程度上通过维持肠道屏障功能,改善肠道微生态,减轻高温运动带来的肠道及肝脏损伤。

关键词：运动高温嗜黏蛋白阿克曼菌肠道菌群器官损伤

HBV^+自噬小体疫苗治疗HBV急性感染的实验研究

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东南大学学报（医学版） 2016年第5期35卷 647-653页

作者：王璐薛萌殷鹏飞樊飞曹萌王立新东南大学医学院病原生物学与免疫学系江苏南京210009

目的:探讨转染HBV基因组的Hep G2.2.15细胞自噬小体(HBV+DRibbles)诱导HBV特异性免疫应答及其对HBV急性感染的治疗作用。方法:ELISA法检测HBV+DRibbles体外再刺激HBs Ag特异性效应细胞产生IFN-γ的水平;对HBV急性感染模型小鼠实施HBV+DR... 详细信息

目的:探讨转染HBV基因组的Hep G2.2.15细胞自噬小体(HBV+DRibbles)诱导HBV特异性免疫应答及其对HBV急性感染的治疗作用。方法:ELISA法检测HBV+DRibbles体外再刺激HBs Ag特异性效应细胞产生IFN-γ的水平;对HBV急性感染模型小鼠实施HBV+DRibbles、HBV+DRibbles联合DC免疫,ELISA法检测HBV抗原及抗原肽刺激免疫小鼠淋巴细胞产生IFN-γ的含量;ELISA法、荧光定量PCR法和酶法分别检测小鼠血清HBe Ag、HBV DNA、ALT和AST的水平;免疫组织化学法检测小鼠肝组织HBc Ag表达及免疫病理损伤。结果:与培养液对照组和HBs Ag蛋白刺激组相比,HBV+DRibbles刺激HBs Ag特异性效应细胞能够产生更高水平的IFN-γ(P=0.004);与未负载抗原的DC细胞对照组和负载HBs Ag的DC刺激组相比,DC负载HBV+DRibbles再刺激HBs Ag特异性CD4+、CD8+T细胞均能产生更高水平的IFN-γ(P免疫组均能诱导HBV急性感染模型小鼠产生HBV特异性免疫应答,明显降低血清HBe Ag、HBV DNA水平,减低HBc Ag+肝细胞比例,而ALT及AST水平未见明显差异,肝组织结构基本正常;但HBV+DRibbles疫苗组与HBV+DRibbles联合DC免疫组之间差异无统计学意义。结论:HBV+DRibbles作为HBV抗原载体,能够有效诱导DC对HBV抗原的交叉递呈;HBV+DRibbles诱导的HBV特异性细胞免疫应答对HBV急性感染具有一定的治疗作用。

关键词：乙型肝炎乙型肝炎病毒自噬小体治疗性疫苗小鼠

利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术制备HLA-A＊ 0201/HBc18-27单链三分子复合体

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东南大学学报（医学版） 2016年第6期35卷 825-831页

作者：许涛李晓娥吴优 Khawar Ali Shahzad 王伟张雷沈传来东南大学医学院病原生物学与免疫学系江苏南京210009

目的：构建和表达HLA-A＊0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法：利用重叠延伸PCR将HBc18-27、（Gly4Ser）3、β2m、（Gly4Ser）4和HLA-A＊0201胞外区依次串联为单链三聚体（single-chain trimer,SCT）融合基因,通过同源重组克隆技术插... 详细信息

目的：构建和表达HLA-A＊0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法：利用重叠延伸PCR将HBc18-27、（Gly4Ser）3、β2m、（Gly4Ser）4和HLA-A＊0201胞外区依次串联为单链三聚体（single-chain trimer,SCT）融合基因,通过同源重组克隆技术插入到pET28a原核表达载体,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,采用金属螯合亲和层析法纯化目的蛋白,通过稀释复性法折叠成HLA-A＊0201/HBc18-27的复合单体,并生物素化,将单体包被到直径4.5μm的磁性微球,用构象特异性单抗（W6/32）进行荧光染色,流式细胞术分析其空间构象。结果：pET28a-HLA-A＊0201/HBc18-27基因序列和蛋白大小与预测一致;纯化后融合蛋白纯度约93%;流式细胞术分析显示pET28a-HLA-A＊0201/HBc18-27单体具有正确的空间构象。结论：利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术成功制备了HLA-A＊0201/HBc18-27的单链复合体,无需限制性内切酶和连接酶,发展了主要组织相容性单链复合体技术,有效简化了pMHCⅠ类分子的制备过程。

关键词：重叠延伸聚合酶链式反应同源重组主要组织相容性复合体

mIL-21基因治疗小鼠肿瘤及其机制的初步研究

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现代免疫学 2005年第2期25卷 126-130页

作者：陈国兵窦骏赵枫姝陈峻崧褚莉莉唐权东南大学基础医学院病原生物学和免疫学系南京210009

建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒peDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,考察mIL-21基因治疗对小鼠Sp2/0肿瘤的疗效。结果显示pcDNA3.1/mIL-21质粒治疗对小鼠皮下Sp2/0肿瘤有一定的生长抑制作用,CTL和NK细胞毒... 详细信息

建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒peDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,考察mIL-21基因治疗对小鼠Sp2/0肿瘤的疗效。结果显示pcDNA3.1/mIL-21质粒治疗对小鼠皮下Sp2/0肿瘤有一定的生长抑制作用,CTL和NK细胞毒活性明显增强,IFN-γ分泌升高显著,但抗体无明显升高。表明mIL-21基因治疗的抗肿瘤效应,可能和细胞免疫功能增强有关。

关键词：白细胞介素21 肿瘤基因治疗 CTL NK

不同基因型戊型肝炎病毒存在多种类型抗原表位

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微生物学报 2006年第1期46卷 120-126页

作者：邓蕾孟继鸿赵宇张红梅戴星东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系南京210009 东南大学医学院附属中大医院皮肤科南京210009

以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2重组蛋白p166Us为免疫原制备单克隆抗体(McAbs),采用间接ELISA和免疫印迹法,检测McAbs与不同基因型和亚型HEV重组蛋白p166Bur(Ⅰa型)、p166Pak(Ⅰb型)、p166Mor(Ⅰc型)、p166Mex(Ⅱ型)、p166Us(Ⅲ型)、p166Nz(猪HEV,Ⅲ型)和p166Chn(Ⅳ型)的反应性,采用抗原或抗体竞争ELISA分析p166蛋白与天然HEV颗粒之间抗原表位的关系。结果获得4D3、2E3、11E11、12H5、3A3和1F16株稳定分泌McAbs的杂交瘤细胞株。4D3分泌的McAb与7种p166均发生反应,其与免疫原p166Us的结合可被Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ型天然HEV颗粒或病人血清竞争抑制。2E3、11E11和12H5分泌的McAbs只与p166Us、p166Nz和p166Chn发生反应,它们与p166Us的结合仅能被Ⅲ和IV型病毒或血清所抑制。3A3分泌的McAb只与p166Us及p166Nz结合,1F1分泌的McAb只与p166Us结合,两者均能被Ⅲ型美国株竞争抑制,而Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型不能抑制它们与p166Us的结合。由此可见,不同基因型和亚型HEV ORF2编码蛋白p166上存在多种类型抗原表位,其中包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ基因型共同的,Ⅲ、Ⅳ基因型共有的和第Ⅲ基因型特异的等,这些表位与天然HEV颗粒上的抗原表位具有相同的免疫学特征。

关键词：戊型肝炎病毒抗原表位单克隆抗体重组蛋白基因型

转染IL-21的CD34~+脐血造血干细胞抗裸鼠卵巢癌作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第4期30卷 326-331页

作者：胡卫华王净窦骏何向锋赵枫姝褚莉莉蒋翠莲邹丹丹李晓丽东南大学医学院病原生物学和免疫学系东南大学附属中大医院妇产科南京儿童医院儿科研究所

目的探讨IL-21转染的脐血造血干细胞(CD34~+UBSC-IL-21)对荷卵巢癌裸鼠的治疗作用。方法从脐血分离CD34~+造血干细胞,体外培养扩增后用于重组体pIRES2-IL-21-EGFP转染。以肿瘤大小、荷瘤鼠生存期判断CD34~+UBSC-IL-21对荷瘤裸鼠的治疗... 详细信息

目的探讨IL-21转染的脐血造血干细胞(CD34~+UBSC-IL-21)对荷卵巢癌裸鼠的治疗作用。方法从脐血分离CD34~+造血干细胞,体外培养扩增后用于重组体pIRES2-IL-21-EGFP转染。以肿瘤大小、荷瘤鼠生存期判断CD34~+UBSC-IL-21对荷瘤裸鼠的治疗效应。以RT-PCR、免疫荧光、ELISA、Western blot、脾细胞增殖试验及免疫组化法分别鉴定CD34~+ UBSC和肿瘤组织中IL-21的表达及活性。裸鼠脾细胞中NK细胞含量及脾细胞的杀伤效应、血清中IFN-γ和TNF-α水平分别用FCM与ELISA检测。结果 pIRES2-IL-21-EGFP成功转染CD34~+ UBSC。CD34~+ UBSC-IL-21能抑制肿瘤生长,延长荷瘤裸鼠生存期,治疗鼠肿瘤局部能表达IL-21、血清IFN-γ和TNF-α水平升高,NK细胞含量及NK细胞杀伤活性明显增强,与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染IL-21的CD34~+ UBSC有良好的抗裸鼠卵巢癌作用,该结果为临床使用UBSC为载体的基因治疗卵巢癌研究奠定了基础。

关键词： CD34~+脐血造血干细胞白细胞介素21 卵巢癌

立足云南省情开展《医学寄生虫学》课程思政的实践

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中国血吸虫病防治杂志 2022年第5期34卷 537-541页

作者：王丽明王卫群王红淳于纬训李娟向征李翠英昆明医科大学病原生物学与免疫学系云南昆明650500

为构建知识传授、能力培养和价值引领相统一的教学模式,本文以《医学寄生虫学》课程为例,围绕新时代“五术”医学人才培养目标,立足云南省情,探索课程思政的实施路径。通过对云南省寄生虫病流行概况、我国及云南省寄生虫病防治的显著成... 详细信息

为构建知识传授、能力培养和价值引领相统一的教学模式,本文以《医学寄生虫学》课程为例,围绕新时代“五术”医学人才培养目标,立足云南省情,探索课程思政的实施路径。通过对云南省寄生虫病流行概况、我国及云南省寄生虫病防治的显著成效、寄生虫病误诊病例、寄生虫学家的无私奉献精神以及中医药在寄生虫病防治中的出色表现和云南省中医药的贡献等进行剖析,将思政教育融入教学,形成专业课教学与思政课同向同行的育人格局。

关键词：课程思政医学寄生虫学教学改革云南省

树状DNA杂交技术在戊型肝炎病毒检测中的应用

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临床检验杂志 2005年第1期23卷 16-18页

作者：单祥年施燕峰孟继鸿程险峰单云峰史庭燕郑爱玲东南大学医学院遗传中心南京210009 东南大学医学病原生物学与免疫学系南京210009

目的　研究树状DNA杂交 (DDH)技术在戊型肝炎病毒 (HEV)检测中的应用。方法　以逆转录巢式PCR法 (RT nPCR)检测筛选HEV阳性标本 ,逆转录产物进行DDH。研究DDH技术检测HEV病毒的敏感性和通用性。结果　 2 5份HEV阳性标本的逆转录产物DDH... 详细信息

目的　研究树状DNA杂交 (DDH)技术在戊型肝炎病毒 (HEV)检测中的应用。方法　以逆转录巢式PCR法 (RT nPCR)检测筛选HEV阳性标本 ,逆转录产物进行DDH。研究DDH技术检测HEV病毒的敏感性和通用性。结果　 2 5份HEV阳性标本的逆转录产物DDH检测均显阳性 ,HEV 5个不同基因型和亚型逆转录产物DDH检测也呈阳性。结论　RT

关键词： DDH HEV 戊型肝炎病毒逆转录巢式PCR 阳性标本 DNA杂交敏感性 PCR) 产物筛选