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偕胺肟小分子化合物铀促排作用及其代谢组学

科学技术与工程 2025年第07期 2741-2747页

作者：朱金寿黄荣清李志恒肖炳坤缪潇瑶杨芳青海大学医学院药学系军事医学研究院

采用肟化加成反应合成一种新偕胺肟小分子化合物并进行铀促排作用评价，结合代谢组学方法探讨在动物体内促排时引起的内源性代谢物的变化，寻找与之相关的差异性代谢物并探索其代谢通路及作用机制。将小鼠分为空白组（NG）、模型组（MG... 详细信息

采用肟化加成反应合成一种新偕胺肟小分子化合物并进行铀促排作用评价，结合代谢组学方法探讨在动物体内促排时引起的内源性代谢物的变化，寻找与之相关的差异性代谢物并探索其代谢通路及作用机制。将小鼠分为空白组（NG）、模型组（MG）、0.42 mmol/kg新促排灵组（ZnNa3-DTPA,YG）、0.21 mmol/kg偕胺肟组（CN）及0.42 mmol/kg偕胺肟组（EN）,尾静脉注射醋酸铀酰后立即尾静脉注射阳性药（ZnNa3-DTPA）和偕胺肟化合物，给药24 h后通过电感耦合等离子体质谱仪（inductively-coupled plasma mass spectrometer, ICP-MS）测定小鼠肾和股骨中铀含量。采用GC-MS（gas chromatograaphy-mass spectrometer）对各组小鼠血清中代谢物进行鉴定，应用正交偏最小二乘判别分析方法（orthogonal partial least squares discriminant analysis, OPLS-DA）,通过变量投影重要性值（variable importance in the projection, VIP）>1结果筛选为潜在差异性代谢物，应用质谱数据库并通过MetaboAnalyst平台分析差异性代谢产物及其相关通路。结果表明与模型组相比0.42 mmol/kg偕胺肟化合物组分别减少肾、股骨内61.70%、54.74%铀含量；同剂量的阳性组减少肾、股骨内铀含量分别为60.70%、40%。表明偕胺肟小分子化合物具有铀促排作用。代谢组学分析显示偕胺肟组代谢轮廓与模型组明显分离，与阳性组相比更接近正常组，筛选共发现14个差异性代谢物，代谢通路富集分析后显示与之相关的代谢通路主要为酪氨酸代谢；苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的生物合成及甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸代谢等。小分子偕胺肟化合物具有铀促排效果，且优于ZnNa3-DTPA,并对铀所致肾损伤具有保护作用。

关键词：偕胺肟化合物合成铀促排气相色谱-质谱联用代谢组学

不同修复措施对镉污染稻田土壤理化性质及酶活性的影响

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云南农业大学学报(自然科学) 2025年

作者：段亦鹏汤爱萍吴永明李亮李娅邓觅刘亚军南昌航空大学环境与化学工程学院江西省科学院微生物研究所

【目的】评估不同修复措施对镉污染稻田的钝化修复效果及其对土壤环境质量的影响。【方法】采用田间大棚原位钝化修复试验，分析土壤调酸(soil acidity regulation,AR)以及施用铁肥(iron fertilizer,IFe)、功能复合菌肥(functional comp... 详细信息

【目的】评估不同修复措施对镉污染稻田的钝化修复效果及其对土壤环境质量的影响。【方法】采用田间大棚原位钝化修复试验，分析土壤调酸(soil acidity regulation,AR)以及施用铁肥(iron fertilizer,IFe)、功能复合菌肥(functional composite microbial fertilizer,MF1)和商业复合菌肥(commercial composite microbial fertilizer,MF2) 4种修复措施对水稻镉吸收、土壤理化性质、微生物生物量碳以及酶活性的影响。【结果】(1)不同修复措施均可显著降低稻谷中的镉含量(降幅均大于26.01%)；与对照组相比，AR和IFe处理的土壤有效态镉含量分别降低了25.13%和15.99%;(2) AR处理对土壤理化性质的影响较大，可显著提高土壤pH以及有机碳和全磷的含量；此外，所有修复处理均可降低土壤铵态氮和硝态氮的含量；(3)与对照组相比，仅AR处理可显著降低微生物生物量碳；AR、IFe和MF2处理均可显著降低β-葡萄糖苷酶和硝酸还原酶的活性，IFe处理还可显著降低酸性磷酸酶的活性，而MF1处理可显著增强多酚氧化酶和硝酸还原酶的活性。【结论】不同镉污染修复措施对土壤环境的影响存在差异，其中，功能复合菌肥对土壤环境最为友好。

关键词：镉污染修复稻田土壤土壤理化性质土壤酶活性

新辅助治疗反应不佳的直肠癌患者预后影响因素及相关生存分析

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中华胃肠外科杂志 2025年第1期28卷 48-57页

作者：厉弘博钱益李珂璇王晨孙振孙曦羽徐徕张冠南吴斌林国乐陆君阳胡克肖毅中国医学科学院北京协和医学院、北京协和医院基本外科结直肠专业组北京100730 东南大学附属中大医院胃肠外科南京210009 中国医学科学院北京协和医学院、北京协和医院放疗科北京100730

目的比较接受新辅助治疗后治疗反应不佳的直肠癌患者选择不同治疗方案的生存结局。方法采用回顾性队列研究方法,回顾性收集2018年1月至2022年11月期间,在北京协和医院结直肠外科及放疗科直肠癌数据库登记的接受新辅助治疗后直肠核磁肿... 详细信息

目的比较接受新辅助治疗后治疗反应不佳的直肠癌患者选择不同治疗方案的生存结局。方法采用回顾性队列研究方法,回顾性收集2018年1月至2022年11月期间,在北京协和医院结直肠外科及放疗科直肠癌数据库登记的接受新辅助治疗后直肠核磁肿瘤退缩分级(mrTRG)标准评估为4、5级的106例直肠癌患者的临床及病理学资料及随访信息。根据患者新辅助治疗评估后续治疗方案的选择,将患者分为单纯放化疗组(未手术)23例、标准治疗组(直接手术)65例和巩固治疗组(巩固性全身治疗+手术)18例。分析3组的3年无远处转移生存率(DMFS)和总体生存率(OS)。结果106例患者均获随访,中位随访时间为28(21,38)个月,3年DMFS为60%,3年OS为74%。标准治疗组与巩固治疗组的3年DMFS分别为74%和72%,3年OS分别为84%和81%,差异均无统计学意义(均P>0.05),但均优于单纯放化疗组(分别为10%和39%,均P0.05)。进一步对标准治疗组与巩固治疗组患者进行组间比较发现,两组患者低位保肛率及术后并发症发生率差异均无统计学意义(均P>0.05),巩固治疗组患者放疗结束至术前等待间隔时间较标准治疗组长[80.1(50.8,109.4)d比61.8(48.8,74.8)d,P<0.001],化疗相关不良反应发生率高[10/18比26.2%(17/65),P=0.018]。结论对新辅助治疗效果不佳、术前具有明确不良预后特征(局部进展、MRF阴性或EMVI阳性)的直肠癌患者,加用以化疗为主的全身治疗,无法使该部分患者生存获益,且化疗时间的延长会增加患者化疗不良反应发生率。

关键词：直肠肿瘤新辅助治疗,反应不佳生存预后影响因素

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1促进Raw264.7细胞免疫应答及DENV-2的复制

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中国热带医学 2025年

作者：旷晓元肖秋秋吴文诗牟小会吴家红贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室贵州省安顺市人民医院生殖医学科

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）后，按实验室前期建立的表达纯化条件获取唾液蛋白并通过SDS-PAGE及WesternBlot（WB）方法鉴定；以CCK8法分析rAlb-34kDa-1蛋白对Raw264.7细胞的毒性。将0.02 、0.20和2.0μg/mL浓度rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞6、12和24 h，采用实时荧光定量逆转录PCR（Real-timequantitativereversetranscriptionPCR，qRT-PCR）检测细胞中白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、趋化因子配体2（Chemokineligand2，CCL2）、干扰素-β（Interferon-β，IFN-β）、干扰素刺激基因15（InterferonStimulatedGene15，ISG15）的表达，运用酶联免疫吸附实验（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测细胞培养上清IL-6和TNF-α的分泌；免疫荧光法观察rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞后p65进入细胞核的情况，分析rAlb-34kDa-1蛋白是否通过NF-κB信号通路实现对Raw264.7细胞的免疫调控；按分组（DENV-2作用组、唾液蛋白+DENV-2共孵育组）加不同的处理因素作用6、12和24 h后收集细胞，利用qRT-PCR检测细胞内DENV-2的mRNA表达量及运用流式细胞术（FCM）检测不同处理因素作用24h细胞内J2（dsRNA）的荧光强度。结果 SDS-PAGE及WB结果显示成功获得rAlb-34kDa-1蛋白且经CCK8法分析该蛋白对Raw264.7细胞无毒性；0.2μg/mL和2.0μg/mL的rAlb-34kDa-1均能诱导Raw264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL2、IFN-β、ISG15的表达；rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞1 h后显著增强Raw264.7细胞核内的p65的荧光强度；rAlb-34kDa-1与DENV-2作用于Raw264.7细胞12 h时，2 μg/mL的rAlb-34kDa-1显著增强细胞中DENV-2的mRNA表达量。作用24 h时，0.02μg/mL、0.2μg/mL、2μg/mL的rAlb-34kDa-1均能增强Raw264.7细胞中DENV-2的mRNA表达量，2μg/mL的rAlb-34kDa-1与DENV-2共孵育于Raw264.7细胞24h后细胞内J2的荧光信号显著增强；结论 rAlb-34kDa-1蛋白能调节小鼠Raw264.7细胞免疫应答，促进DENV-2在Raw264.7细胞中复制。

关键词：白纹伊蚊 rAlb-34kDa-1蛋白 2型登革病毒免疫调控

脂肪干细胞来源的外泌体对大鼠肌腱愈合及对局部外周神经肽表达的影响

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中华医学杂志 2025年第7期105卷 544-553页

作者：许宏涛张昊沈凯周皓宋黄鹤郭敦明顾晓园王广玲王青殷国勇南京医科大学第一附属医院骨科南京210029 东南大学生物科学与医学工程学院南京210000

目的探讨脂肪干细胞来源的外泌体对大鼠肌腱愈合的影响,并评估愈合部位外周神经肽的时空表达变化。方法首先预混10%(质量浓度,w/v)的明胶甲基丙烯酰氯(GelMA)、0.25%(w/v)的光引发剂和脂肪干细胞来源的外泌体,然后置于405 nm波长的紫外... 详细信息

目的探讨脂肪干细胞来源的外泌体对大鼠肌腱愈合的影响,并评估愈合部位外周神经肽的时空表达变化。方法首先预混10%(质量浓度,w/v)的明胶甲基丙烯酰氯(GelMA)、0.25%(w/v)的光引发剂和脂肪干细胞来源的外泌体,然后置于405 nm波长的紫外光下照射30 s以制备可注射外泌体水凝胶备用。建立SD大鼠的跟腱横断后缝合修复模型,共分为4组,包括健康对照组(C组,选用单纯缝合修复组对侧下肢)、单纯缝合修复组(S组)、缝合修复后注射单纯水凝胶组(H组)和缝合修复后注射含有脂肪来源干细胞外泌体的水凝胶组(E组),分别在术后7、14和28 d取材。通过苏木精‑伊红(HE)染色观察肌腱愈合过程的形态学改变,免疫组化染色分析肌腱形成标记物,如Tenomodulin(TNMD)和外周神经肽,包括生长关联蛋白43(GAP43)、S100钙结合蛋白B(S100B)、神经肽Y(NPY)、降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP),在肌腱愈合过程中的变化趋势。此外,物理形态测量,包括肌腱长度、肌腱横截面积、腓肠肌重量与总体重的百分比,评估形态重塑;力学测试,包括最大失效拉力、刚度、弹性模量,评估生物力学重塑。结果E组的TNMD基因表达水平为2.12±0.43,均高于H组的1.26±0.28和S组的1.21±0.39(均P组的外周神经肽GAP43表达显著增强,在术后第28天,阳性区域面积分别为11.20%±0.53%,高于H组的7.25%±0.22%和S组的8.68%±0.45%(均P组CGRP阳性区域面积为7.62%±0.50%,显著低于H组的11.16%±1.33%和S组的10.16%±0.22%(P组相比,E组跟腱长度恢复至(11.67±0.58)mm,跟腱横截面积恢复至(5.97±0.72)mm2,跟腱最大失效拉力恢复至(71.06±2.48)N,弹性模量恢复至(9.24±1.56)MPa(均P<0.01)。结论可注射外泌体水凝胶可促进SD大鼠跟腱肌腱愈合进程,同时能够有效调控外周神经肽的表达并且不会引起过度的神经敏化。

关键词：肌腱脂肪干细胞外泌体可注射水凝胶肌腱愈合外周神经肽

B7基因修饰的白血病细胞外泌体的抗白血病效应

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上海交通大学学报(医学版) 2025年第2期45卷 129-137页

作者：张涤凡王明慧赵洁万江波黄方郝思国上海交通大学医学院附属新华医院血液科上海200092

目的·探究高表达B7分子(共刺激分子CD80和CD86)的白血病细胞外泌体在荷瘤小鼠中的免疫治疗效应。方法·L1210白血病细胞株转染含有CD80和CD86基因的慢病毒载体,从而获得高表达CD80和CD86分子的白血病细胞,分离其培养上清液获得高表达C... 详细信息

目的·探究高表达B7分子(共刺激分子CD80和CD86)的白血病细胞外泌体在荷瘤小鼠中的免疫治疗效应。方法·L1210白血病细胞株转染含有CD80和CD86基因的慢病毒载体,从而获得高表达CD80和CD86分子的白血病细胞,分离其培养上清液获得高表达CD80和CD86分子的外泌体LEX-8086。应用透射电子显微镜(电镜)和Western blotting分析LEX-8086的生物学特征。建立DBA/2-白血病荷瘤小鼠模型,将荷瘤小鼠分为LEX-8086组和PBS组,LEX-8086组分别在肿瘤细胞接种后7 d和12 d尾静脉注射LEX-8086500μL(150μg/mL),PBS组同时注射等体积PBS;观察2组小鼠的体质量、肿瘤体积、肿瘤质量及生存期差异。应用流式细胞术分析2组小鼠脾脏和淋巴结免疫细胞的变化特点。应用Western blotting和实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组小鼠脾脏M1型和M2型巨噬细胞标志物的表达情况。结果·从高表达CD80和CD86分子的L1210细胞上清液中分离获得LEX-8086,透射电镜显示为直径约100 nm的盘状囊泡结构,Western blotting结果显示其表达外泌体特异性标志物。动物实验结果显示,LEX-8086组较PBS组,体质量无明显改变,肿瘤体积和肿瘤相对质量比均显著下降且生存期显著延长(均P组淋巴结、脾脏内自然杀伤细胞比例、CD4^(+)T细胞比例均显著升高(均P组小鼠脾脏中M1型巨噬细胞比例显著升高(P=0.003),M2型巨噬细胞比例无明显变化。Western blotting和qPCR同样显示,LEX-8086组小鼠脾脏中M1型巨噬细胞标志物白细胞介素-6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。结论·共刺激分子CD80和CD86高表达的白血病细胞外泌体能够诱导一定的治疗性抗白血病效应,该效应可能是通过提高NK细胞、M1型巨噬细胞、CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞的比例实现的。

关键词：白血病外泌体共刺激分子基因修饰免疫治疗

人源性抗SARS-CoV-2单链抗体文库的构建及广谱中和抗体的筛选与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第02期 154-160页

作者：尹慧敏吕海迟莹刘静娴焦永军卫平民东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室江苏省疾病预防控制中心卫生与健康委员会肠道病原微生物重点实验室

目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库，并筛选具有广谱中和活性的抗体，为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取... 详细信息

目的构建人源性抗严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)单链可变片段(scFv)抗体文库，并筛选具有广谱中和活性的抗体，为诊断和治疗制剂的开发提供候选分子。方法从新型冠状病毒感染康复者外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),提取总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板构建人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库；利用噬菌体展示技术筛选对SARS-CoV-2 S蛋白具有特异性的scFv抗体。通过序列分析和人源IgG抗体表达，合成IgG全抗体，并评估其对SARS-CoV-2的结合能力及中和活性。结果成功构建了库容量为1.56×10～7 CFU的SARS-CoV-2人源性scFv抗体文库，筛选出两种特异性scFv抗体；并将scFv抗体表达成IgG形式的全抗体(IgG-A10和IgG-G6),其中IgG-A10对SARS-CoV-2原始株(WT)和奥密克戎亚型变异毒株XBB(XBB)毒株均具有较好中和活性，对奥密克戎BA.2.86变异株的第二代亚分支JN.1(JN.1)毒株中和效果一般。结论本研究从康复者外周血中成功构建了人源性抗SARS-CoV-2 scFv抗体文库，并筛选表达出具有中和活性的抗SARS-CoV-2 IgG抗体，为SARS-CoV-2感染的预防、诊断和治疗奠定了基础。

关键词： SARS-CoV-2 单链可变片段(scFv) 噬菌体展示技术中和抗体

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丝氨酸蛋白酶抑制因子1在胃癌中的表达及其促进胃癌发展的作用机制

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上海交通大学学报(医学版) 2025年第2期45卷 150-160页

作者：陈勇羽黄益仁陈哲逸周冰倩陈诗宇郑英霞上海交通大学医学院附属新华医院检验科上海200092

目的·研究丝氨酸蛋白酶抑制因子1(serpin family E member 1,SERPINE1)在胃癌中的表达及其促进胃癌发展的潜在作用机制。方法·使用TIMER2.0在线网站对SERPINE1进行泛癌分析,通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库... 详细信息

目的·研究丝氨酸蛋白酶抑制因子1(serpin family E member 1,SERPINE1)在胃癌中的表达及其促进胃癌发展的潜在作用机制。方法·使用TIMER2.0在线网站对SERPINE1进行泛癌分析,通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的胃癌临床数据分析SERPINE1在不同胃癌肿瘤分期样本中的表达差异并绘制生存曲线。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测临床胃癌组织配对样本中SERPINE1 mRNA的表达情况。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染技术敲低MGC-803、SGC-7901胃癌细胞系中SERPINE1表达,通过Transwell和Invasion小室实验检测胃癌细胞迁移、侵袭能力;进一步通过人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)迁移实验和小管形成实验探究敲低SERPINE1对胃癌细胞血管生成能力的影响。利用基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据集,根据SERPINE1的表达水平中位值分为高表达和低表达2组进行差异基因分析,并进行京都基因与基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析和基因集富集分析(Gene Set EnrichmentAnalysis,GSEA);进一步通过qRT-PCR验证SERPINE1敲低胃癌细胞系上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、血管生成有关的关键基因表达水平。结果·生物信息学分析显示,SERPINE1在包括胃癌在内的多种原发肿瘤组织中高表达,SERPINE1基因表达随着肿瘤分期的增加而升高(P组织中明显高表达(P=0.038)。敲低SERPINE1后,胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901细胞迁移和侵袭能力下降(P组胃癌患者差异基因富集到焦点黏附、细胞外基质受体相互作用等癌症相关通路以及血管生成、血管内皮生长因子信号等血管生成相关通路。SERPINE1的表达与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)的表达呈负相关,与EMT有关的其他基因、血管生成有关基因的表达均呈正相关。利用qRT-PCR在SERPINE1敲低胃癌细胞系中验证了EMT(P组织中表达升高,可调控EMT、血管生成相关关键基因的表达水平并促进胃癌细胞迁移、侵袭与血管生成。

关键词：丝氨酸蛋白酶抑制因子1 胃癌上皮细胞-间充质转化血管生成

高敏HBV DNA检测技术在低病毒血症慢性乙型肝炎患者抗病毒疗效监测中的应用

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实用肝脏病杂志 2025年第2期28卷 178-181页

作者：陈婷婷丁蓉姬文莉吴梦秋东南大学医学院附属南京同仁医院检验科南京市211102

目的探讨采用高敏HBV DNA检测技术在低病毒血症(LLV)慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗疗效监测中的应用价值。方法2019年1月~2022年12月我院诊治的200例CHB患者,纳入患者均接受恩替卡韦(ETV)治疗48 w或以上,对获得完全病毒学应答(CVR)... 详细信息

目的探讨采用高敏HBV DNA检测技术在低病毒血症(LLV)慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗疗效监测中的应用价值。方法2019年1月~2022年12月我院诊治的200例CHB患者,纳入患者均接受恩替卡韦(ETV)治疗48 w或以上,对获得完全病毒学应答(CVR)患者继续口服ETV治疗,对未获得CVR患者,均改为富马酸丙酚替诺福韦(TAF)治疗,观察48周。分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和高荧光质量PCR(fq-PCR)法检测血清HBV DNA载量。结果在200例经ETV治疗48 w的CHB患者,经fq-PCR检测发现CVR者145例(72.5%),血清HBV DNA载量>2000 IU/mL(PR)者13例(6.5%),血清HBV DNA载量在21~2000 IU/mL(LLV)者42例(21.0%);在TAF继续治疗48 w末,经qPCR检测发现PR组获得CVR者13例(100.0%),而经fq-PCR检测发现只有5例(38.5%,P组则分别为41例(97.6%)和30例(71.4%,P组CVR比较,差异具有统计学意义(x^(2)=4.662,P组和LLV组血清AST和ALT水平均正常,无统计学差异(P>0.05),而LLV组血清HBV DNA载量为(125.6±114.2)IU/mL,显著低于PR组【(370.4±217.8)IU/mL,P<0.05】。结论采用高敏PCR检测技术可以帮助发现接受抗病毒治疗而处于LLV状态的CHB患者,以帮助临床做出治疗决策,其临床意义还有待于进一步观察。

关键词：慢性乙型肝炎恩替卡韦丙酚替诺福韦低病毒血症高荧光质量PCR法治疗