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Hemin调控小鼠软骨细胞氧化应激的线粒体途径

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中国组织工程研究 2025年第6期29卷 1183-1191页

作者：贺光辉原杰柯燕琴丘小婷张晓玲山西医科大学第二医院骨科山西省太原市030001 上海交通大学医学院附属新华医院骨科上海市200092

背景:研究显示线粒体氧化应激在膝骨关节炎发生发展中具有重要作用,Hemin可以调控线粒体相关蛋白的表达。目的:研究Hemin对小鼠软骨细胞氧化应激的调控及其在膝骨关节炎中的干预作用及机制。方法:①体外细胞实验:提取C57BL/6小鼠的原代... 详细信息

背景:研究显示线粒体氧化应激在膝骨关节炎发生发展中具有重要作用,Hemin可以调控线粒体相关蛋白的表达。目的:研究Hemin对小鼠软骨细胞氧化应激的调控及其在膝骨关节炎中的干预作用及机制。方法:①体外细胞实验:提取C57BL/6小鼠的原代软骨细胞,采用10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎软骨细胞模型,使用CCK-8法确定Hemin(0,1,10,20,40,80,160μmol/L)干预小鼠软骨细胞的最适浓度。将软骨细胞随机分为正常组、模型组(白细胞介素1β)、Hemin组(白细胞介素1β+Hemin)。检测各组软骨细胞的活性氧、线粒体膜电位和凋亡情况。②动物体内实验:将成年C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组(骨关节炎),Hemin(骨关节炎+Hemin)组,每组8只,Hemin治疗4周后观察小动物行为学及膝关节病理组织形态学变化,检测软骨组织细胞外基质相关蛋白表达及软骨组织细胞凋亡的变化,检测软骨组织Nrf2/HO-1蛋白的表达水平。结果与结论:①体外细胞实验:Hemin作用于原代软骨细胞的最适浓度为40μmol/L,经过Hemin处理的白细胞介素1β诱导的软骨细胞相对于模型组活性氧水平明显较少,线粒体膜电位明显有改善,软骨细胞凋亡减少。②动物体内实验:Hemin治疗4周后,与模型组比较,Hemin组的小鼠下肢功能明显转好,组织病理学评分显著改善,膝关节软骨细胞凋亡明显减少。③结果表明,Hemin可以缓解白细胞介素1β诱导下的小鼠软骨细胞氧化应激,恢复线粒体功能,减少细胞凋亡。Hemin可以改善膝骨关节炎细胞外基质降解、促进软骨细胞合成代谢、降低分解代谢及减少软骨细胞凋亡,可能是通过激活炎症环境中软骨细胞Nrf2/HO-1信号通路发挥的作用。

关键词：膝骨关节炎 Hemin 氧化应激线粒体细胞凋亡软骨损伤

全仅式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As_2O_3)对APL细胞组织因子表达的影响

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Chinese Medical Journal 2001年第1期114卷 103-104页

作者：郭为民王鸿利赵维莅诸江璩斌王学锋上海第二医科大学瑞金医院上海血液学研究所上海200025

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和三氧化二砷 (As2 O3)在体内外对急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞组织因子 (TF)表达的影响。方法　利用复钙时间测定、ELISA和RT PCR等方法 ,分别检测了ATRA和As2 O3 治疗前后APL患者骨髓单个核细胞的... 详细信息

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和三氧化二砷 (As2 O3)在体内外对急性早幼粒细胞性白血病 (APL)细胞组织因子 (TF)表达的影响。方法　利用复钙时间测定、ELISA和RT PCR等方法 ,分别检测了ATRA和As2 O3 治疗前后APL患者骨髓单个核细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平 ,同时还检测了使用ATRA和As2 O3 处理APL细胞株NB4细胞和NB4 R1细胞以及转染PML RARa融合基因的U937细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平。结果　ATRA和As2 O3 在体内和体外均可以时间依赖的方式下调NB4细胞的促凝活性、TF抗原水平以及TFmRNA的转录。转染PML RARa融合基因的U937细胞与仅转染逆病毒载体的U937细胞相比 ,其TF表达水平显著升高 ;使用ATRA或As2 O3 分别处理转染PML RARa和转染逆病毒载体的U937细胞 ,其TF抗原水平均显著降低。结论　ATRA和As2 O3均可下调APL细胞TF的表达并降低其PCA ,As2 O3在诱导APL细胞凋亡的同时有可能通过下调APL细胞TF的表达而改善APL患者与DIC相关的出血症状。结果还提示APL细胞染色体易位产生的融合蛋白PML RARa可能对TF的异常表达有一定的影响 ,而ATRA和As2 O3对TF的下调作用可能不依赖于对融合蛋白PML RARa的降解。

关键词：急性早幼粒细胞性白血病全反式维甲酸三氧化二砷组织因子促凝活性弥散性血管内凝血

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线粒体跨膜电位与细胞凋亡

生物化学与生物物理进展 2001年第1期28卷 3-6页

作者：蔡循陈国强陈竺王振义上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所上海200025

细胞凋亡作为细胞固有的、受机体严密调控的细胞死亡形式 ,在多细胞生物体清除衰老细胞及无能细胞等方面发挥重要的作用 .近年来 ,细胞凋亡的研究重点已从细胞核转向线粒体 .各种死亡信号诱导线粒体膜通透性改变孔 (permeabilitytransit... 详细信息

细胞凋亡作为细胞固有的、受机体严密调控的细胞死亡形式 ,在多细胞生物体清除衰老细胞及无能细胞等方面发挥重要的作用 .近年来 ,细胞凋亡的研究重点已从细胞核转向线粒体 .各种死亡信号诱导线粒体膜通透性改变孔 (permeabilitytransitionpore ,PTpore)开放 ,引起线粒体跨膜电位下降 ,导致促凋亡物质释放 ,继而激活caspase,最终使细胞凋亡 .Bcl 2和Bcl XL 通过对线粒体作用而抑制细胞凋亡 ,而Bax、Bak与Bad通过调节线粒体而诱导细胞凋亡 .

关键词：细胞凋亡线粒体半胱氨酸蛋白酶 BCl-2 跨膜电位

Clinical significance of plasma tissue factor pathway and urokinase-type plasminogen activator system in cancer patients

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Chinese Medical Journal 2002年第5期115卷 702-704,150页

作者：赵维莅王学锋璩斌黄霞萍王鸿利上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所上海200025

OBJECTIVE: To evaluate variations in the plasma tissue factor (TF) and urokinase type plasminogen activator (u-PA) system and their relationship with clinical cancer type, pathological classification and metastatic status in cancer patients. METHODS: Plasma levels of TF and its inhibitor (TFPI), as well as u-PA and its receptor (u-PAR) were measured using ELISA in 76 patients with malignant tumors and 24 patients with benign tumors. RESULTS: Plasma levels of TF and u-PAR in the malignant tumor group were significantly higher than those of the benign tumor group and the normal control. U-PA and u-PAR increased significantly in patients with esophageal and gastric cancer. However, most of these parameters except TFPI did not vary according to pathological classification. A significant elevation was evident in patients with local infiltration, lymph node involvement and distal metastasis, while u-PAR only increased in the latter two categories. CONCLUSIONS: Both the TF and u-PA systems are activated in cancer patients. U-PA and its receptor might prove to be a clinically useful marker for disease progression.

关键词： Adult Aged Aged, 80 and over Female Humans Lipoproteins Male Middle Aged Neoplasm Metastasis Neoplasms Receptors, Cell Surface Research Support, Non-U.S. Gov't Thromboplastin Urinary Plasminogen Activator

Carrier detection and prenatal diagnosis of hemophilia A

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Chinese Medical Journal 2002年第7期115卷 991-994,144页

作者：刘元昉王学锋储海燕李志广璩斌王鸿利王振义上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所上海200025

Objective To establish an effective laboratory examination system for carrier detection and prenatal diagnosis of haemophilia A (HA) with a variety of molecular biological methods which are simple, rapid and easy to use. Methods Detection of inversion involving intron 22 in the FVIII gene was completed by long distance polymerase chain reaction ( PCR) and linkage analysis was performed by using several genetic polymorphisms including an intragenic Bcl I RFLP, 2 STRs and an extragenic St14 VNTR. Results Intron 22 inversion was observed in 10 out of the 21 (47.6%) pedigrees examined. Prenatal diagnosis was completed in 3 pedigrees. A further combination of the four intragenic and extragenic polymophic loci gave an informative rate of 94.7%. Conclusions Female relatives in HA families with inversion can be detected with direct diagnostic procedure. The application of long distance PCR makes the detection much more simple and rapid. For families without inversions, it is easier and more cost-effective to undertake linkage analysis of genetic polymorphism based on PCR.

关键词： hemophilia A inversion of intron 22 linkage analysis polymerase chain reaction

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡的体外研究

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中华血液学杂志 1997年第12期18卷 623-626页

作者：陈国强沈志祥李秀松石学耕贾培敏史桂英倪建华陈赛娟王振义陈竺上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所

目的：阐明氧化砷治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以原代ＡＰＬ细胞为模型，将不同浓度的氧化砷作用于ＡＰＬ细胞，并对其作用机制进行研究。结果：高浓度氧化砷选择性诱导ＡＰＬ细胞凋亡，低浓度氧化砷诱导新鲜ＡＰ... 详细信息

目的：阐明氧化砷治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的机制。方法：以原代ＡＰＬ细胞为模型，将不同浓度的氧化砷作用于ＡＰＬ细胞，并对其作用机制进行研究。结果：高浓度氧化砷选择性诱导ＡＰＬ细胞凋亡，低浓度氧化砷诱导新鲜ＡＰＬ细胞部分分化。进一步研究发现，不同浓度的氧化砷均能快速调变和降解ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白。结论：氧化砷对ＡＰＬ细胞存在双重效应，即诱导凋亡和部分分化。

关键词：氧化砷白血病急性细胞凋亡融合蛋白

维甲酸、砷剂及柔红霉素对NB4细胞组织因子表达的影响

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中华血液学杂志 1999年第9期20卷 453-455页

作者：郭为民诸江王鸿利赵维莅璩斌王学锋陈竺王振义上海第二医科大学瑞金医院上海血液学研究所200025

目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）、三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）及柔红霉素（ＤＮＲ）对急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞组织因子（ＴＦ）表达的影响。方法　用复钙时间检测ＮＢ４ ... 详细信息

目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）、三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）及柔红霉素（ＤＮＲ）对急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞组织因子（ＴＦ）表达的影响。方法　用复钙时间检测ＮＢ４细胞的促凝活性（ＰＣＡ）；用ＥＬＩＳＡ方法检测其ＴＦ抗原；用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）检测ＴＦｍＲＮＡ的转录水平。结果　ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３均呈时间依赖的方式下调ＮＢ４细胞的ＰＣＡ、ＴＦ抗原水平以及ＴＦｍＲＮＡ的转录；而ＤＮＲ处理ＮＢ４细胞的ＰＣＡ及ＴＦ抗原在早期上调，至２４～４８小时达到最大值。对ＰＣＲ产物测序，发现ＡＰＬ细胞ＴＦ第５个外显子缺失的转录本。结论　ＡＴＲＡ和Ａｓ２Ｏ３均可下调ＡＰＬ细胞ＴＦ的表达并降低其ＰＣＡ，改善ＡＰＬ患者的弥散性血管内凝血（ＤＩＣ）出血症状；Ａｓ２Ｏ３和ＤＮＲ对ＡＰＬ凝血障碍不同效应的作用机制至少部分与药物对ＡＰＬ细胞ＴＦ表达和ＰＣＡ的不同调节作用有关。

关键词：维甲酸砷剂柔红霉素白血病 APL 药物疗法

氧化砷对白血病细胞内 PML/PML-RARα 蛋白的影响

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中华血液学杂志 1997年第1期18卷 32-34页

作者：倪建华陈国强朱军仲豪杰唐伟李秀松熊树民沈志祥陈赛娟王振义陈竺上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病细胞的分子标志ＰＭＬ－ＲＡＲα在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡中的可能作用。方法：观察Ａｓ２Ｏ３对ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在亚细胞定位的影响。结果：①在１μｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３作用下，... 详细信息

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病细胞的分子标志ＰＭＬ－ＲＡＲα在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡中的可能作用。方法：观察Ａｓ２Ｏ３对ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在亚细胞定位的影响。结果：①在１μｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３作用下，ＨＬ－６０细胞核内ＰＭＬ抗血清染色明显减少，而在胞浆的近核膜区出现弥散分布的荧光染色；②Ａｓ２Ｏ３诱导ＮＢ４细胞内散在分布的ＰＭＬ抗血清染色颗粒明显减少；③通常情况下，少数ＮＢ４细胞的胞浆中存在ＰＭＬ抗血清染色颗粒的聚集，这类细胞在Ａｓ２Ｏ３作用后明显增多，凋亡细胞中ＰＭＬ抗血清染色聚集现象也存在；④全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）预处理２４或４８小时并不改变Ａｓ２Ｏ３对ＮＢ４细胞的凋亡诱导效应。结论：Ａｓ２Ｏ３诱导细胞凋亡的过程不依赖维甲酸信号途径，可能通过ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα及其它相关基因或蛋白的调控来实现。

关键词：氧化砷蛋白急性白血病

三氧化二砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞株的双重效应研究

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中华医学杂志 1997年第7期77卷 509-512页

作者：陈国强史桂英贾培敏熊树民朱军石学耕沈志祥陈赛娟王振义陈竺上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所

观察不同浓度的三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞的影响。方法不同浓度的三氧化二砷（０．１～２μｍｏｌ／Ｌ）与ＡＰＬ细胞株ＮＢ４细胞共同孵育一定时间后，观察ＮＢ４细胞的存活，细胞... 详细信息

观察不同浓度的三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞的影响。方法不同浓度的三氧化二砷（０．１～２μｍｏｌ／Ｌ）与ＡＰＬ细胞株ＮＢ４细胞共同孵育一定时间后，观察ＮＢ４细胞的存活，细胞形态学，免疫表型（ＣＤ１１ｂ，ＣＤ３３），细胞ＤＮＡ含量分布及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在细胞内定位的改变。结果经１～２μｍｏｌ／Ｌ氧化砷处理的ＮＢ４细胞呈现凋亡的特征性改变。在细胞形态学上表现为胞膜完整，染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示与三氧化二砷作用浓度及时间相关的亚Ｇ１期细胞。经０．１～０．２５μｍｏｌ／Ｌ三氧化二砷处理１０天的ＮＢ４细胞呈现某些与分化相关的形态学改变和分化相关抗原（ＣＤ１１ｂ和ＣＤ３３）的调变，而０．１～２μｍｏｌ／Ｌ的三氧化二砷均能快速调变和减少ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白的表达。结论氧化砷对ＮＢ４细胞具有诱导凋亡和不完全分化双重作用，并能快速调变及降解ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白的表达。

关键词：氧化砷白血病早幼粒细胞性急性细胞分化