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基于HPLC-QQQ-MS技术探讨炮制对肉苁蓉中5个活性成分的含量影响

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天然产物研究与开发 2024年第1期36卷 86-93页

作者：雷慧博余雅婷韩璐吴岩原永芳俞晓艳上海交通大学医学院附属第九人民医院药剂科上海200011

炮制一般会对中药材的成分及药效产生重要作用,本文为了探讨炮制加工对肉苁蓉成分的影响,建立了同时测定炮制前后肉苁蓉中肉苁蓉苷F、毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷和松果菊苷的含量的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱... 详细信息

炮制一般会对中药材的成分及药效产生重要作用,本文为了探讨炮制加工对肉苁蓉成分的影响,建立了同时测定炮制前后肉苁蓉中肉苁蓉苷F、毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷、2′-乙酰基毛蕊花糖苷和松果菊苷的含量的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法(high-performance liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometry,HPLC-QQQ-MS)的检测方法。采用50%甲醇溶液提取药物粉末,在Agilent Zorbax Eclipse Plus C 18(2.1 mm×150 mm,1.8μm)的色谱柱上,以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,选取负离子多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式,以木通苯乙醇苷为内标成分,以进样量1μL,流速0.3 mL/min,柱温35℃,样品管理器温度8℃于HPLC-QQQ-MS进行同一批次炮制前后肉苁蓉中这五种成分的含量测定。结果显示5种成分在各自范围内线性关系良好,相关系数(r)在0.9929~0.9985之间,平均加样回收率在98.15%~100.2%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)小于4.6%。所建立的研究方法简便准确,可用于肉苁蓉的质量控制,并用于评价炮制对肉苁蓉含量及药效的影响。

关键词：肉苁蓉炮制化学成分含量测定 HPLC-QQQ-MS

KHSRP通过ANK3调节前列腺癌细胞对雄激素的反应性

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上海交通大学学报（医学版） 2024年第4期44卷 417-426页

作者：蔡人杰徐明上海交通大学医学院附属第九人民医院肿瘤科上海201999

目的·研究KH型剪接调节蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)对前列腺癌细胞增殖能力的影响及其下游基因的表达调控,考察KHSRP在前列腺癌由雄激素依赖型向非依赖型转变过程中的潜在作用及机制。方法·通过重组慢病毒感染... 详细信息

目的·研究KH型剪接调节蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)对前列腺癌细胞增殖能力的影响及其下游基因的表达调控,考察KHSRP在前列腺癌由雄激素依赖型向非依赖型转变过程中的潜在作用及机制。方法·通过重组慢病毒感染雄激素依赖型前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞,分别构建KHSRP功能性缺失/获得的稳定细胞株,并比较KHSRP在2种细胞之间的功能差异。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测稳定细胞株中KHSRP、雄激素受体(androgen receptor,AR)及锚定蛋白3(ankyrin 3,ANK3)的表达量。通过细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验等检测KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响。通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)检测KHSRP影响的下游基因,并通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测KHSRP下游基因的mRNA表达量。结合癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)、癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,分析研究ANK3和KHSRP在前列腺组织样本中的表达情况以及ANK3在不同前列腺癌细胞株中的表达差异。结果·GEO数据分析结果显示KHSRP在前列腺癌组织中的表达高于良性前列腺组织,提示其与前列腺癌的发生相关。细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验结果显示KHSRP的表达与LNCaP细胞增殖能力呈负相关,提示KHSRP可以抑制前列腺癌细胞的增殖,且KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响强于对DU145细胞的影响。对LNCaP稳定细胞株的Western blotting和RT-qPCR检测显示KSHRP过表达后LNCaP细胞中AR蛋白质水平下降,但mRNA水平未产生变化,提示KHSRP可以间接调节AR的蛋白质水平。RNA-seq和RT-qPCR结果显示KHSRP与影响AR蛋白稳定性的调节因子ANK3的表达呈正相关,随后的Western blotting证明KHSRP过表达后ANK3蛋白质的表达量明显升高,TCGA数据分析结果进一步说明KHSRP与ANK3的mRNA表达的相关性。根据CCLE和GEO数据,ANK3的表达与前列腺癌的恶性程度也密切相关。结论·KHSRP可能通过ANK3间接调控AR的蛋白稳定性,影响雄激素依赖型前列腺癌细胞的增殖能力,并介导前列腺癌细胞对雄激素反应性的改变。

关键词： KH型剪接调节蛋白(KHSRP) 雄激素受体(AR) 锚定蛋白3(ANK3) 前列腺癌细胞增殖

梳子瓣技术和步序设计理念在整形美容与修复重建中的应用

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中华整形外科杂志 2024年第3期40卷 286-292页

作者：高玮林晓曦邹运仇雅璟陈辉胡丽常雷金云波华晨上海交通大学医学院附属第九人民医院激光美容科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海200011

目的探讨梳子瓣技术和步序设计理念在整形美容与修复重建手术中的应用效果及适用性。方法回顾性分析2018年1月至2022年12月上海交通大学医学院附属第九人民医院应用梳子瓣技术行整形美容与修复重建手术患者的临床资料。梳子瓣技术在应... 详细信息

目的探讨梳子瓣技术和步序设计理念在整形美容与修复重建手术中的应用效果及适用性。方法回顾性分析2018年1月至2022年12月上海交通大学医学院附属第九人民医院应用梳子瓣技术行整形美容与修复重建手术患者的临床资料。梳子瓣技术在应用过程中遵循步序设计的理念,即分步、按序进行术前、术中的设计和调整,将设计与手术步骤相结合。其主要操作包括:沿目标区域边缘设计切口并切开,在目标区域基底部广泛分离形成组织瓣,垂直于切缘方向对组织瓣按序裁切并临时缝合固定,边裁切边固定,期间可对切口张力和局部外观进行调整,整个组织瓣分割后形成梳子样外观,沿着临时固定点对整个梳子瓣进行切除,精细缝合切缘,最后拆除临时缝线。术后对患者手术切口愈合情况、并发症等进行观察,对患者面部恢复情况和手术效果进行随访。结果共纳入6例患者,男3例,女3例,年龄2~58岁。其中1例行眉下切口上睑提紧术及睑缘切口下睑成形术,1例行中下面部除皱术,1例行厚唇修薄及右面部抽脂术,1例行面部先天性黑色素痣切除术,1例行眉部先天性黑色素痣切除术,1例行面部皮瓣修整术。患者术后切口均一期愈合,未出现手术相关并发症。术后随访3~18个月,患者面部均恢复良好,对手术效果均表示满意。结论将梳子瓣技术及歩序设计理念应用于整形美容与修复重建手术中,可精细调整切缘的对合,使切口张力均匀分布,降低术后切口瘢痕形成及外观畸形的风险;其临床应用范围广泛,有较好的适用性。

关键词：外科皮瓣美容外科整形外科梳子瓣步序设计

肺癌恶性胸腔积液来源肿瘤细胞的小鼠PDX模型构建及实验验证

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上海交通大学学报（医学版） 2024年第4期44卷 435-443页

作者：王梦婷陈怡楠轩辕欣阳袁海花上海交通大学医学院附属第九人民医院肿瘤科上海201999

目的·构建肺癌患者恶性胸腔积液(malignant pleural effusion,MPE)肿瘤细胞来源的肿瘤异种移植(patientderived tumor xenograft,PDX)模型,并进行实验验证。方法·从基因表达综合数据集(Gene Expression Omnibus,GEO)下载人肺癌伴MPE单细胞转录组测序公共数据GSE131907和人肺癌实体瘤单细胞转录组测序公共数据GSE203360,对数据进行聚类、差异基因本体功能富集分析,明确应用MPE建模的可行性。同时收集肺癌患者的MPE样本,经离心、裂解红细胞等富集细胞操作后,将其植入非肥胖型糖尿病重症联合免疫缺陷(non-obese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID)小鼠皮下,待移植瘤生长至1000 mm³时进行瘤体传代及保存。对稳定传代移植瘤进行组织病理学检测,通过苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)观察细胞组织形态,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测肺癌标志物表达情况。结果·经单细胞数据分析发现MPE中肿瘤细胞的增殖功能更强,提示MPE中肿瘤细胞PDX建模或具备更佳成瘤效果;共收集35例肺癌MPE样本,成功构建13例PDX模型,成功率达37.14%;在组织病理学检测中,H-E染色可见移植瘤组织细胞异型性明显,IHC检测显示细胞角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor-1,TTF1)和天冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)等肺癌标志物均呈阳性表达。结论·通过富集肺癌患者MPE中的肿瘤细胞,成功构建了更为简便高效、可实时动态建模的PDX模型。该模型保留了肺癌患者肿瘤细胞的恶性特征及蛋白表达特性,为肺癌伴MPE患者的基础研究和临床用药指导提供了重要的实验模型工具。

关键词：肺癌恶性胸腔积液原代细胞培养患者来源的肿瘤异种移植模型

SFXN3在头颈部鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2024年第4期44卷 427-434页

作者：安俊伊陈必颖陈循睿尹姗姗边洲亮刘峰上海交通大学医学院附属第九人民医院肿瘤科上海201999

目的·分析线粒体相关基因SFXN3(sideroflexin 3)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达及其对细胞增殖的影响。方法·从公共数据库获取与线粒体相关的基因和TCGA-HNSCC数据集,使用生物信息学方法... 详细信息

目的·分析线粒体相关基因SFXN3(sideroflexin 3)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达及其对细胞增殖的影响。方法·从公共数据库获取与线粒体相关的基因和TCGA-HNSCC数据集,使用生物信息学方法筛选出目标基因SFXN3。使用UALCAN数据库分析SFXN3在HNSCC患者样本中的表达,并根据TCGAHNSCC队列和GEO队列(GSE65858、GSE41613和GSE27020)对不同SFXN3表达水平的患者进行生存分析,使用TCGA-HNSCC队列和GEO队列(GSE40020、GSE210287)在治疗有应答和无应答的患者之间比较SFXN3表达水平差异。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)在收集的HNSCC癌和癌旁组织验证SFXN3的表达情况,并检测SFXN3在人正常口腔上皮细胞和HNSCC肿瘤细胞系中的表达水平。构建稳定敲低SFXN3的HNSCC细胞株,使用Incucyte活细胞成像分析系统和平板克隆形成实验观察SFXN3对HNSCC细胞增殖能力的影响。将稳定敲低SFXN3的细胞和对照组细胞的总RNA进行转录组测序,对敲低组相比对照组差异表达下调的基因进行通路富集分析。结果·SFXN3在HNSCC患者肿瘤组织中高表达(P=0.000),SFXN3高表达组患者预后较差(均P<0.05);治疗无应答者SFXN3表达水平高于有应答者(P=0.008),提示不良预后。并且在收集的HNSCC肿瘤组织和HNSCC细胞系上验证了SFXN3的高表达(均P<0.05)。SFXN3的表达水平敲低后,HNSCC细胞的增殖能力下降,平板克隆形成数目减少(均P<0.05)。RNA测序显示,SFXN3敲低组的HNSCC细胞差异表达下调的基因在DNA复制、细胞周期、线粒体翻译、线粒体RNA代谢过程、线粒体基因表达等通路富集。结论·SFXN3在HNSCC中高表达,与患者预后负相关。HNSCC细胞敲低SFXN3后增殖能力和平板克隆形成能力受到抑制,可能通过影响线粒体功能发挥作用。

关键词： SFXN3 头颈部鳞状细胞癌线粒体细胞增殖

基于MRI多参数成像的决策树模型在腮腺肿瘤诊断中的价值

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中华放射学杂志 2024年第5期58卷 503-509页

作者：杨功鑫戴晓庆朱凌陶晓峰上海交通大学医学院附属第九人民医院放射科上海200011

目的通过基于MRI多参数成像构建与临床治疗决策密切相关的腮腺肿瘤诊断决策树模型,并验证其在腮腺肿瘤诊断中的临床价值。方法该研究为横断面研究,回顾性收集2018年6月至2022年12月间上海交通大学医学院附属第九人民医院经病理证实的46... 详细信息

目的通过基于MRI多参数成像构建与临床治疗决策密切相关的腮腺肿瘤诊断决策树模型,并验证其在腮腺肿瘤诊断中的临床价值。方法该研究为横断面研究,回顾性收集2018年6月至2022年12月间上海交通大学医学院附属第九人民医院经病理证实的461例腮腺肿瘤患者的MRI数据,包括腮腺良性肿瘤364例、恶性上皮性肿瘤82例、淋巴瘤15例。按病理结果分层随机抽样分为训练集(326例)和验证集(135例)。训练集中良性肿瘤、恶性上皮肿瘤、淋巴瘤分别为256、59、11例,验证集中分别为108、23、4例。基于MRI和临床特征,通过卡方自动交互检测(CHAID)算法建立决策树模型,通过模型分类诊断,并计算对腮腺良性肿瘤、恶性上皮性肿瘤和淋巴瘤的诊断准确度,绘制受试者操作特征曲线,评价对3种肿瘤单独的诊断效能。结果在训练集中,通过CHAID算法得到肿瘤形状、包膜、表观扩散系数和时间-信号曲线类型4个最佳诊断指标,以此建立了决策树模型。该模型对腮腺良性肿瘤、恶性上皮性肿瘤和淋巴瘤的整体诊断准确度,在训练集为90.8%(296/326),在验证集为94.1%(127/135)。对腮腺良性肿瘤、恶性上皮性肿瘤和淋巴瘤进行独立诊断时,训练集的曲线下面积分别为0.964、0.957、0.980,验证集分别为0.958、0.944、0.992。结论基于MRI多参数的决策树预测模型诊断腮腺良性肿瘤、恶性上皮性肿瘤和淋巴瘤具有较高效能。

关键词：腮腺肿瘤磁共振成像决策树

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七氟烷对原代少突胶质细胞增殖和分化的影响

上海交通大学学报（医学版） 2024年第9期44卷 1115-1123页

作者：施灵玲程燕咏张磊上海交通大学医学院附属第九人民医院麻醉科上海200011

目的·探索多次七氟烷处理对原代少突胶质细胞增殖和分化的影响。方法·提取出生当日大鼠皮层的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)并进行体外培养。细胞分为对照组和七氟烷处理组。为了模拟临床使用七氟烷的情况,... 详细信息

目的·探索多次七氟烷处理对原代少突胶质细胞增殖和分化的影响。方法·提取出生当日大鼠皮层的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)并进行体外培养。细胞分为对照组和七氟烷处理组。为了模拟临床使用七氟烷的情况,将七氟烷组细胞使用3%七氟烷连续处理3 d,每日1次,每次处理2 h。OPC分化成熟为少突胶质细胞后,使用免疫荧光染色和蛋白质印迹法(Western blotting)检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)和髓鞘关联糖蛋白(myelin-associated glycoprotein,MAG)的表达情况。采用细胞增殖实验(BrdU、Ki67染色)、细胞存活率实验(CCK8)检测七氟烷对OPC增殖能力和少突胶质细胞存活率的影响。采用Western blotting检测半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的蛋白含量。使用慢病毒转染技术,在OPC内过表达YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTH N6-methyladenosine RNA binding protein F1,YTHDF1),后采用CCK8检测细胞增殖和存活情况。结果·免疫荧光结果提示,反复暴露于七氟烷会导致表达成熟髓鞘表面标志物(MBP、MAG)的原代少突胶质细胞数量减少;Western blotting结果表明,多次七氟烷处理导致原代OPC中caspase-3表达上调;CCK8结果表明,随着七氟烷处理次数的增加,原代OPC的存活率下降;然而,BrdU、Ki67染色结果显示,原代OPC在七氟烷处理后增殖能力增强。此外,过表达YTHDF1可以部分改善多次七氟烷处理而导致的原代OPC存活率下降(均P<0.05)。结论·多次七氟烷处理损伤原代少突胶质细胞的成髓鞘能力和存活率,表现为部分原代OPC凋亡;同时七氟烷处理代偿性提高了存活的原代OPC的增殖能力。

关键词：七氟烷少突胶质细胞髓鞘细胞增殖凋亡

社区老年人日常生活活动能力与心理健康的关系及睡眠质量的中介作用

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复旦学报（医学版） 2024年第2期51卷 143-150页

作者：周恒益李静戴丹华李扬张斌杜荣吴瑞龙江佳艳魏圆满高晶蓉赵琦复旦大学公共卫生学院流行病学教研室上海200032 上海市松江区中山街道社区卫生服务中心公共卫生科上海201613 上海市闵行区七宝社区卫生服务中心公共卫生科上海201101 上海市黄浦区豫园街道社区卫生服务中心公共卫生科上海200010 上海市虹口区嘉兴路街道社区卫生服务中心管理办公室上海200086 上海市老龄事业发展促进中心老年健康服务部上海200060 上海市徐汇区虹梅街道社区卫生服服务中心公共卫生科上海200233 上海市老龄事业发展促进中心办公室上海200060

目的探讨上海市社区老年人日常生活活动能力(activities of daily living,ADL)、睡眠质量与心理健康的关系及内在作用路径。方法运用ADL量表、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI)、简易心理状态评定量表(10-item ... 详细信息

目的探讨上海市社区老年人日常生活活动能力(activities of daily living,ADL)、睡眠质量与心理健康的关系及内在作用路径。方法运用ADL量表、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh Sleep Quality Index,PSQI)、简易心理状态评定量表(10-item Kessler Psychological Distress Scale,K10),以上海市闵行区七宝街道、松江区中山街道、黄浦区豫园街道、虹口区嘉兴路街道、徐汇区虹梅街道为现场调查点,采用便利抽样对2021年9—12月到社区卫生服务站就诊的年龄≥60岁的老年人进行问卷调查。采用单因素分析、相关分析、多元线性回归描述老年人ADL、PSQI以及K10特征,采用Bootstrap中介效应检验法检验各变量间的效应关系。结果共纳入1864名社区老年人,其中ADL、PSQI以及K10得分分别为15.53±4.47、5.60±3.71和15.50±6.28,ADL受损、睡眠质量差以及心理健康状况较差和差的老年人分别占23.6%、27.3%、11.9%和4.9%。分析发现:ADL得分(r=0.321,P<0.001)、睡眠质量得分(r=0.446,P<0.001)均与心理健康得分呈正相关;ADL得分与睡眠质量得分呈正相关(r=0.294,P<0.001)。心理健康多元线性回归显示ADL(β=0.457,95%CI:0.341~0.573)、睡眠质量(β=0.667,95%CI:0.598~0.737)与心理健康呈正相关(P<0.001);睡眠质量在ADL与心理健康之间起部分中介作用(95%CI:0.078~0.124),占总效应值的33.0%。结论睡眠质量在社区老年人ADL与心理健康关联中存在中介作用,关注老年人ADL能力改善并提升睡眠质量有助于改善其心理健康状况。

关键词：日常生活活动能力(ADL) 睡眠质量心理健康老年人

甲状腺眼病球后组织不同肌群受累差异的原因初探

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中华内分泌代谢杂志 2024年第3期40卷 242-247页

作者：宋诗涵张曹旭李润钏张悦吴枫瑶宋怀东沈勤周慧芳上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院内分泌科上海200011

目的甲状腺眼病患者球后组织不同部位的眼外肌受累严重程度不同,但机制不明。本研究旨在探究不同部位眼外肌中促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)表达的差异与眼外肌受累程度不同之间的关系。方法分离大鼠的... 详细信息

目的甲状腺眼病患者球后组织不同部位的眼外肌受累严重程度不同,但机制不明。本研究旨在探究不同部位眼外肌中促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)表达的差异与眼外肌受累程度不同之间的关系。方法分离大鼠的球后组织中的内直肌、外直肌、上直肌和下直肌,通过免疫荧光和荧光定量PCR检测TSHR在4条眼外肌的表达水平。收集斜视手术患者的眼外肌组织,通过荧光检测TSHR的表达及其表达的细胞类型。结果荧光定量PCR结果显示,TSHR在大鼠球后组织内直肌中的表达明显高于外直肌、上直肌和下直肌(内直肌对外直肌,P=0.012;内直肌对上直肌,P=0.015;内直肌对下直肌,P=0.013),但胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1,IGF-1R)无差异。双色免疫荧光结果显示,TSHR与肌卫星细胞的分子标志PAX7共表达,且大鼠和人的内直肌中的表达明显高于另外三条眼外肌。结论TSHR在内直肌肌卫星细胞中特异性高表达,可能是甲状腺眼病内直肌最容易受累的原因。

关键词：甲状腺眼病促甲状腺激素受体内直肌外直肌