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鸡胚细胞的传代培养和麻疹病毒的增殖

微生物与感染 2022年第2期17卷 81-87页

作者：张林亚徐然周旭杨文震朱为上海生物制品研究所有限责任公司研发部第三研究室上海200051 上海生物制品研究所有限责任公司上海201400

为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测... 详细信息

为了建立原代鸡胚细胞的传代培养工艺,探究传代鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性和适应性,本研究将原代鸡胚细胞进行传代培养,分别采用原代鸡胚细胞和传代鸡胚细胞培养麻疹病毒沪-191(Shanghai-191,S-191)株毒种,并对病毒收获液进行滴度检测和基因序列测定。结果显示,原代鸡胚细胞可稳定传代培养至第10代,各代次细胞生长趋势相似;第5代鸡胚细胞染色体检查为正常染色体核型;第8代鸡胚细胞成瘤性检查未见成瘤;采用第3、5代鸡胚细胞制备的麻疹病毒滴度水平高于原代鸡胚细胞,但无显著性差异(n=3,P>0.05),编码病毒核蛋白(nucleoprotein,N)和血凝素蛋白(hemagglutinin,H)的基因序列与S-191株完全一致,未发生变异。本研究证实,原代鸡胚细胞可进行传代培养,各代次鸡胚细胞对麻疹病毒的敏感性不变,产毒水平无显著差异,可用于培养麻疹病毒。

关键词：原代鸡胚细胞传代培养麻疹减毒

脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2016年第2期29卷 124-128页

作者：吴根鹏袁萍王月红王晓毕慧黄帼英徐帆洪朱为上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室上海200051

目的构建脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重... 详细信息

目的构建脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验（serum bactericidal assay,SBA）评价抗原的免疫原性。结果经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确。重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-Por A抗血清显示出一定的交叉反应。fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128。结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景。多抗原融合策略需更多的优化考虑。

关键词：脑膜炎球菌 fHBP蛋白 PorA蛋白融合表达免疫原性

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病毒类生物制品的滴度检测方法研究进展

国际生物制品学杂志 2021年第6期44卷 333-338页

作者：毛辉(综述) 朱为(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室 200051

病毒类生物制品包括病毒性疫苗以及用于基因治疗和肿瘤治疗的各种病毒载体药物,其研发和生产过程需要建立准确而快速的检测方法,用于评价工艺效果。滴度是检测病毒类生物制品活性和效力的直接数据佐证,也是评价生物制品质量的关键指标... 详细信息

病毒类生物制品包括病毒性疫苗以及用于基因治疗和肿瘤治疗的各种病毒载体药物,其研发和生产过程需要建立准确而快速的检测方法,用于评价工艺效果。滴度是检测病毒类生物制品活性和效力的直接数据佐证,也是评价生物制品质量的关键指标之一。此文主要对噬斑法、半数感染量测定法、荧光定量PCR技术、病变灶免疫化学法、报告基因法等病毒滴度检测方法的原理、特点及研究进展进行综述。

关键词：病毒疫苗病毒载体滴定分析法检测方法

减毒活疫苗的野生株与疫苗株病毒鉴别方法研究进展

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国际生物制品学杂志 2021年第2期44卷 103-108页

作者：李明杰(综述) 朱为(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室 200051

疫苗接种是预防传染病常用的主要手段。目前常用的减毒活疫苗具有感染的可能性,故鉴别野生株和疫苗株病毒是确定病原体和进行诊断的基础。传统的鉴别方法有基因测序、PCR-限制性片段长度多态性分析等,这些鉴别方法常用且准确性较高,但... 详细信息

疫苗接种是预防传染病常用的主要手段。目前常用的减毒活疫苗具有感染的可能性,故鉴别野生株和疫苗株病毒是确定病原体和进行诊断的基础。传统的鉴别方法有基因测序、PCR-限制性片段长度多态性分析等,这些鉴别方法常用且准确性较高,但存在耗时长、要求高等缺陷。实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术是通过PCR反应体系中荧光物质与核酸片段的作用来反映扩增过程。qPCR技术除了能准确地检测、鉴别野生株和疫苗株外,还具有特异性强、灵敏度高、耗时短等优点,可以为快速鉴别和临床诊断提供帮助。

关键词：疫苗,减毒诊断,鉴别聚合酶链反应野生株疫苗株

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四价流感疫苗的临床研究进展

国际生物制品学杂志 2022年第3期45卷 163-168页

作者：王洁(综述) 陈丹丹(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第四研究室上海200051

流感是一种由流感病毒感染引起的急性呼吸道传染病,每年冬春季在全球范围内有不同程度的流行,造成了严重的社会负担,接种流感疫苗是重要的流感预防策略。长期以来使用的三价流感疫苗由WHO推荐的2个甲型疫苗株(甲型H1N1、甲型H3N2)和1个... 详细信息

流感是一种由流感病毒感染引起的急性呼吸道传染病,每年冬春季在全球范围内有不同程度的流行,造成了严重的社会负担,接种流感疫苗是重要的流感预防策略。长期以来使用的三价流感疫苗由WHO推荐的2个甲型疫苗株(甲型H1N1、甲型H3N2)和1个乙型疫苗株组成。流感乙型毒株的两种株系易发生错配或交差循环感染,从而导致乙型疫苗株的保护率下降、感染发病率和死亡率升高。鉴于以上情况,2012年2月WHO推荐使用包含2个乙型疫苗株的四价流感疫苗,随后国内外多种四价流感疫苗相继获批上市。此文就四价流感疫苗的临床研究进展进行综述。

关键词：流感疫苗临床试验免疫原性疫苗效力

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实时荧光定量PCR技术检测病毒的应用

国际生物制品学杂志 2021年第5期44卷 296-300页

作者：董钰莹(综述) 朱为(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室 200051

病毒检测在病毒感染的预防、诊断、治疗及病毒性疫苗的质量控制等方面发挥着重要的作用。实时荧光定量PCR通过荧光信号实时检测目的基因扩增数量,是目前实验室最常用的的病毒检测技术,具有灵敏度高、检测快速、污染小等优点。此文对实... 详细信息

病毒检测在病毒感染的预防、诊断、治疗及病毒性疫苗的质量控制等方面发挥着重要的作用。实时荧光定量PCR通过荧光信号实时检测目的基因扩增数量,是目前实验室最常用的的病毒检测技术,具有灵敏度高、检测快速、污染小等优点。此文对实时荧光定量PCR技术在病毒感染的快速诊断、病毒核酸定量检测和病毒型别的鉴定三个方面的应用进行阐述。

关键词：定量聚合酶链反应快速检测核酸载量基因分型

新建主细胞库对水痘减毒活疫苗质量影响的分析

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国际生物制品学杂志 2020年第4期43卷 164-170页

作者：王亮程庆谢蕾陈哲文景辉马雷钧郁佳俊富宁吴金妍吕黎朱为上海生物制品研究所有限责任公司疫苗三室 201403 上海生物制品研究所有限责任公司质量保证部 201403 上海生物制品研究所有限责任公司质量检定室 201403 上海生物制品研究所有限责任公司合作部 201403 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室 200051

目的基于细胞基质分析新建人二倍体细胞MRC-5主细胞库,并通过主细胞库变更前后所制的水痘减毒活疫苗(水痘疫苗)可比性研究,分析新建主细胞库对水痘疫苗质量和稳定性的影响。方法对新建主细胞库、工作细胞库和生产终末代细胞按照2015年... 详细信息

目的基于细胞基质分析新建人二倍体细胞MRC-5主细胞库,并通过主细胞库变更前后所制的水痘减毒活疫苗(水痘疫苗)可比性研究,分析新建主细胞库对水痘疫苗质量和稳定性的影响。方法对新建主细胞库、工作细胞库和生产终末代细胞按照2015年版中国药典和企业质量标准进行抽样检定,并传代至超高代次细胞进行传代稳定性研究,对比细胞生长与细胞计数。用新建主细胞库连续生产3批水痘疫苗并进行工艺验证,分析原液及成品的质量结果,并考察水痘病毒基因序列和产品稳定性。结果新建主细胞库、工作细胞库及其他各代次细胞在传代过程中生长良好,细胞计数正常,检定项目的结果均符合质量标准。使用新的主细胞库连续生产3批水痘疫苗,工艺合格,变更前后生产的疫苗水痘病毒基因序列无差异;病毒滴度均为4.0 lg噬斑形成单位(plaque-forming unit,PFU)/0.5 ml,热稳定性试验结果均为3.4 lgPFU/0.5 ml,水分含量均不高于1.5%,符合企业注册标准;质量稳定性趋势基本一致。结论建立的人二倍体细胞MRC-5主细胞库各项检定结果合格。可比性研究显示,用新细胞库试生产的水痘疫苗质量和稳定性与变更前的一致,为新主细胞库应用于水痘疫苗的生产提供了细胞资源和依据。

关键词：水痘疫苗质量控制对比研究细胞库人二倍体细胞MRC-5

水痘-带状疱疹病毒的潜伏与再激活机制研究进展

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国际生物制品学杂志 2020年第2期43卷 90-94页

作者：张雪纯(综述) 朱为(审校) 上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室 200051

水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)原发性感染通常会引起儿童期水痘,之后病毒可潜伏于人类外周神经节中,在数十年后重新激活造成带状疱疹,也与危及生命的脑炎、血管病变和脑膜炎等疾病有关。VZV潜伏和再激活的机制尚未得... 详细信息

水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)原发性感染通常会引起儿童期水痘,之后病毒可潜伏于人类外周神经节中,在数十年后重新激活造成带状疱疹,也与危及生命的脑炎、血管病变和脑膜炎等疾病有关。VZV潜伏和再激活的机制尚未得到很好的解释,原因之一是VZV只感染人类,无法使用大多数动物及动物来源的神经元模型。越来越多的证据表明,VZV潜伏是表观遗传学调控的,可用于信号通路分析和表观遗传调节鉴定的体外模型为探索VZV潜伏与再激活机制提供了帮助。此文综述了VZV的分子生物学和VZV潜伏与再激活机制方面的研究进展,并提出了未来的研究方向。

关键词：疱疹病毒3型,人模型,生物学表观遗传学

上海市B群脑膜炎奈瑟菌疫苗蛋白分型及fHbp和NHBA候选疫苗的覆盖率研究

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疾病监测 2021年

作者：陈明亮吴根鹏袁萍张驰张曦黄帼英陈敏朱为上海市疾病预防控制中心病原生物检定所上海生物制品研究所有限责任公司第三研究室

目的了解上海市B群脑膜炎奈瑟菌(Nm)疫苗相关蛋白特征,为我国B群流脑疫苗研发提供数据。方法收集2006—2013年上海市分离的B群Nm,同时构建和表达fHbp和NHBA重组蛋白,制备抗血清用于杀菌抗体检测。结果 2006—2013年31株B群Nm属于28种... 详细信息

目的了解上海市B群脑膜炎奈瑟菌(Nm)疫苗相关蛋白特征,为我国B群流脑疫苗研发提供数据。方法收集2006—2013年上海市分离的B群Nm,同时构建和表达fHbp和NHBA重组蛋白,制备抗血清用于杀菌抗体检测。结果 2006—2013年31株B群Nm属于28种序列型,呈现31种脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型。患者分离株以fHbp蛋白B亚家族(fHbp-B)为主(7/11,63.64%),健康者分离株以fHbp-A为主(18/20,90.00%)。除NadA蛋白以NadA-3为主,B群Nm的NHBA和PorA蛋白均未发现优势型别。ST-4821complex(CC4821)为B群菌株中的优势克隆群,以fHbp-A(v2类)的16型为主(54.55%,6/11)。杀菌试验中,fHbp-A和fHbp-B的抗血清对含同一亚家族的菌株保护率分别为60%和100%,而对不含者皆为20%;NHBA抗血清则对测试菌株的保护率为100%。结论 CC4821已成为上海市B群流脑的优势克隆群。疫苗相关蛋白在B群菌株中具有明显多态性,对开发我国B群流脑疫苗是个挑战。

关键词：流行性脑脊髓膜炎脑膜炎奈瑟菌 B群疫苗杀菌力试验