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活体采卵时间间隔对牛克隆胚胎发育的影响

上海交通大学学报（农业科学版） 2008年第1期26卷 46-49,77页

作者：王敬军田海滨丁利军陈娟徐旭俊沙红英陈建泉成国祥同济大学生命科学与技术学院上海200092 上海转基因研究中心上海201203 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海200025

采用活体穿刺技术(ovum pick up,OPU),分别间隔3/4(1周2次)、5、7、10、14 d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以... 详细信息

采用活体穿刺技术(ovum pick up,OPU),分别间隔3/4(1周2次)、5、7、10、14 d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以间隔不同时间采卵获得的卵母细胞成熟后进行体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)制备克隆牛胚胎,重构胚体内培养7 d后,通过比较克隆囊胚的发育率判定卵母细胞质量的差异,从而确定最佳的采卵时间间隔。结果显示:①穿刺采集所有直径超过3mm的卵泡后,可起始1个新卵泡波,大约5 d后从属卵泡开始进入凋亡阶段,7 d后进入晚期凋亡阶段,第7～10 d又起始1个新的卵泡波,第14 d时第2个卵泡波中的从属卵泡起始凋亡。②间隔不同时间组克隆囊胚发育率存在差异,间隔3/4 d(1周2次)为23.1%,间隔5 d组为15.0%,间隔7 d组为10.9%,间隔10 d组为4.9%,间隔14 d组为29.0%。结果显示:间隔不同的时间采卵,卵泡所处的发育状态存在差异,并对卵母细胞质量具有显著的影响。

关键词：奶牛活体采卵体细胞核移植卵母细胞质量

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机器人辅助胰腺手术的应用与展望

中华消化外科杂志 2024年第4期23卷 566-572页

作者：邓侠兴李景峰上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科胰腺疾病诊疗中心上海市胰腺肿瘤转化研究重点实验室-瑞金医院上海交通大学医学院胰腺疾病研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海交通大学转化医学研究院上海200025

胰腺手术风险高、操作复杂,微创胰腺手术更是存在一系列挑战和限制.随着机器人技术的发展,机器人辅助胰腺手术逐渐成熟,成为胰腺手术的重要方式.笔者总结机器人辅助胰腺手术的技术特点、临床应用、手术效果及优势与局限,探讨机器人辅助... 详细信息

胰腺手术风险高、操作复杂,微创胰腺手术更是存在一系列挑战和限制.随着机器人技术的发展,机器人辅助胰腺手术逐渐成熟,成为胰腺手术的重要方式.笔者总结机器人辅助胰腺手术的技术特点、临床应用、手术效果及优势与局限,探讨机器人辅助胰腺手术在现代医学中的应用,并就其未来发展方向进行展望.

关键词：胰腺肿瘤胰腺手术微创机器人辅助手术进展

病原微生物基因组学研究:为防御传染病提供新策略

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病原微生物基因组学研究:为防御传染病提供新策略

在转录组和蛋白质组水平对维甲酸/三氧化二砷诱导早幼粒细胞性白血病细胞分化/凋亡的系统研究

纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛

作者：赵国屏国家人类基因组南方研究中心上海市疾病与健康基因组重点实验室中院上海生命科学研究院植物生理生态研究所合成生物学重点实验室

微生物(包括噬菌体/病毒)曾被用作人类基因组项目中大规模高通量DNA测序以及基因组拼接注释技术研发的模式。与此同时,鉴于微生物高度多样化的生理特征及漫长的进化历史,与人类和环境的紧密联系及相对较小的基因组和简单的功能分析系统...

微生物(包括噬菌体/病毒)曾被用作人类基因组项目中大规模高通量DNA测序以及基因组拼接注释技术研发的模式。与此同时,鉴于微生物高度多样化的生理特征及漫长的进化历史,与人类和环境的紧密联系及相对较小的基因组和简单的功能分析系统等特征,其基因组研究已成为生命科学领域发展最快的研究方向之一。在此基础上,传统的传染病病理学和流行病学研究由于利用基因组学的技术和知识,获得了一系列突破性成就;得以在分子水平上,"精确"解释病原生物的毒力和致病机制以及相关的微进化机制。与此同时,也可以获得很多潜在的分子靶标,用于开发诊断方法以及创新药物和疫苗。中国病原微生物基因组研究的艰苦起步但成功进展,已为病原微生物学研究开辟了新纪元、提供了新机遇。凭借着日新月异的检测和数据产生技术发展以及对传染病与病原生物学知识的爆发性积累,传染性疾病的实验室和临床研究的策略和战略都面临快速革新,这对于加强公共卫生体系建设既是机遇也是挑战。面对这一世纪挑战,中国科学家和临床传染病防控专家,应该加深相互了解(Communication),加强合作研究(Collaboration),通过协同努力(Corporation),达到共同发展、共享成果、造福人民的目的 (Credit)。

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在转录组和蛋白质组水平对维甲酸/三氧化二砷诱导早幼粒细胞性白...

全反式维甲酸诱导NB4细胞分化蛋白组中蛋白修饰及Isoforms变化的初步研究

中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：张群业张小伟鲁静黄秋花郑培烝张济陈赛娟陈竺医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所瑞金医院上海第二医科大学中科院上海生命科学院健康中心

肿瘤细胞对于有效的治疗药物的反应是十分复杂的,要充分理解这种反应的复杂性和动力学就必须要求有高通量、假设驱动的能够在时间和空间水平对蛋白质和基因进行定量研究的方法。在临床上,维甲酸和三氧化二砷联合应用对于治疗急性早幼粒...

肿瘤细胞对于有效的治疗药物的反应是十分复杂的,要充分理解这种反应的复杂性和动力学就必须要求有高通量、假设驱动的能够在时间和空间水平对蛋白质和基因进行定量研究的方法。在临床上,维甲酸和三氧化二砷联合应用对于治疗急性早幼粒细胞性白血病有很强的协同增效作用,可以使大多数经过常规化疗后的病人获得很高质量的无病生存。为了揭示这一现象的机制,更加深入的理解维甲酸和三氧化二砷单独和联合治疗作用所涉及的调控网络的变化,我们综合使用cDNA芯片,

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全反式维甲酸诱导NB4细胞分化蛋白组中蛋白修饰及Isoforms变化的...

血红素加氧酶-1抗人血管内皮细胞凋亡的实验研究

中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：张小伟张群业鲁静黄秋花上海第二医科大学瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室中科院上海生命科学院健康中心

蛋白质修饰是体内蛋白质功能重要的调控方式,包括蛋白质的磷酸化,糖基化,SUMO化等。细胞接受内外刺激后,可以直接通过蛋白质的修饰,使蛋白迅速活化或失活,界导生物学反应。蛋白Isoforms是基因组中同一个基因转录后的不同剪切本或转录时...

蛋白质修饰是体内蛋白质功能重要的调控方式,包括蛋白质的磷酸化,糖基化,SUMO化等。细胞接受内外刺激后,可以直接通过蛋白质的修饰,使蛋白迅速活化或失活,界导生物学反应。蛋白Isoforms是基因组中同一个基因转录后的不同剪切本或转录时应用了不同的启动子的蛋白质。研究表明40%—79%人类基因具有不同的mRNA转录。蛋白的修饰以及蛋白的Isoforms在细胞的生长、分化、增殖、调亡的过程中发生动态的时空特异的调变过程。我们应用2D凝胶电泳对全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株分化进行蛋白组研究,对差异表达蛋白进行质谱鉴定,数据

关键词：

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临床儿科杂志 2005年第8期23卷 574-576,596页

作者：齐奇周文普张雪洪徐宇虹夏振炜上海交通大学生命科学技术学院上海200030 上海第二医科大学附属瑞金医院儿内科

目的转染pcDNA3HO1入人血管内皮细胞（HUVEC）并表达，研究血红素加氧酶-1（HO-1）保护细胞凋亡的作用。方法将构建好的质粒用DOTAP包裹转入细胞中表达：用CCLR破碎细胞后，SDS-PAGE鉴定表达量，采用TNF-α诱导细胞凋亡，以流式细胞... 详细信息

目的转染pcDNA3HO1入人血管内皮细胞（HUVEC）并表达，研究血红素加氧酶-1（HO-1）保护细胞凋亡的作用。方法将构建好的质粒用DOTAP包裹转入细胞中表达：用CCLR破碎细胞后，SDS-PAGE鉴定表达量，采用TNF-α诱导细胞凋亡，以流式细胞仪测定细胞的凋亡率；采用Hemin和SnPP，分别刺激细胞，促进和抑制HO-l在细胞中的表达。结果经Hemin处理后细胞的凋亡率均在20％以下，而SnPP处理后细胞的凋亡率大幅上升，最高可达到95％以上。实验数据显示HO-1基因表达被抑制时细胞凋亡率是诱导时的5～20倍。结论细胞凋亡率与质粒转染效率和HO-l表达量均成反比，提示HO-l对细胞有保护作用，可以抑制细胞凋亡，存临床具有广泛的应用前景。

关键词：血红素加氧酶-1 肿瘤坏死因子-α 血红素锡-原卟啉细胞凋亡

缺氧诱导因子1α在缺氧造成子宫内膜容受性低下中的作用

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中华妇产科杂志 2011年第5期46卷 355-359页

作者：徐步芳孙晓溪冯云张爱军程利南上海交通大学医学院附属瑞金医院生殖医学中心 200025 复旦大学医学院附属中美合作集爱遗传与不育诊疗中心上海市计划生育科学研究所

目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）在缺氧造成子宫内膜容受性低下的作用机制.方法 CoCl2 所致低氧环境下培养RL95-2细胞,采用逆转录PCR技术及蛋白印迹法检测HIF-1α及肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导因子（TWEAK）mRNA和蛋白的表达水平... 详细信息

目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）在缺氧造成子宫内膜容受性低下的作用机制.方法 CoCl2 所致低氧环境下培养RL95-2细胞,采用逆转录PCR技术及蛋白印迹法检测HIF-1α及肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导因子（TWEAK）mRNA和蛋白的表达水平,流式细胞仪分析细胞凋亡率;并在复发性流产（RSA）妇女的子宫内膜组织中,采用免疫组化方法检测HIF-1α、TWEAK的表达,透射电镜观察炎性反应细胞及细胞凋亡的超微形态,以男方因素的不孕妇女作为对照.结果（1）低氧环境下培养不同时间（0、12、24、48 h）,RL95-2细胞中HIF-1α mRNA的表达水平依次为0.272±0.010、0.354 ±0.020、0.591±0.020、0.890±0.020,TWEAK mRNA的表达水平依次为：0.104±0.010、0.510±0.020、1.021±0.020、1.237±0.040;两个因子12、24、48 h与0 h之间分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.（2）各时间点HIF-1α、TWEAK蛋白的表达,HIF-1α的表达水平依次为0.853±0.010、0.931±0.030、1.124±0.010、1.317±0.020,TWEAK的表达水平分别为0.042±0.010、0.091±0.010、0.131±0.020、0.205±0.030;两种蛋白的表达在12、24、48 h与0 h之间分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,同时24、48 h与12 h之间比较,差异也有统计学意义（P＜0.05）.（3）随着缺氧时间的延长,细胞凋亡率明显增加,各时间点细胞凋亡率分别为（3.2±1.4）%、（16.2±3.2）%、（26.3 ±3.5）%、（31.8±3.5）%;12、24、48 h与0 h之间分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.（4）在RSA妇女的子宫内膜上皮细胞及间质细胞中,HIF-1α的阳性率分别为32.3%、8.4%.对照妇女为16.7%、7.3%;TWEAK的阳性率分别为28.3%、3.9%,对照妇女为11.6%、2.7%;两者之间两个因子分别比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.电镜观察到RSA妇女的子宫内膜上皮及间质炎性细胞浸润及细胞凋亡明显.结论 HIF-1α、TWEAK参与缺氧导致的子宫内膜上皮细胞炎性反应及凋亡,可能参与缺氧造成子宫内膜容受性低下的作用机制,HIF-1α有可能作为新的治疗靶点改善子宫内膜容受性低下.

关键词：缺氧诱导因子1,α亚基肿瘤坏死因子类子宫内膜流产习惯性

制备hHO-1突变体以降低胆红素水平实验研究

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临床儿科杂志 2005年第7期23卷 472-476页

作者：夏振炜钟文伟李云珠俞善昌崔文俊周文普张雪洪上海第二医科大学附属瑞金医院儿内科上海200025 上海交通大学生命科学技术学院

目的制备人血红素加氧酶_1(humanhemeoxygenase_1,hHO_1)突变体,探讨酶的作用机制并应用突变体降低胆红素水平,为防治新生儿期高未结合胆红素血症的发生提供新途径。方法采用PCR方法制备hHO_1His25Ala突变体(hHO_1)cDNA,构建突变体表达... 详细信息

目的制备人血红素加氧酶_1(humanhemeoxygenase_1,hHO_1)突变体,探讨酶的作用机制并应用突变体降低胆红素水平,为防治新生儿期高未结合胆红素血症的发生提供新途径。方法采用PCR方法制备hHO_1His25Ala突变体(hHO_1)cDNA,构建突变体表达载体pBHO_1(M)。野生型和突变体表达载体pBHO_1和pBHO_1(M)分别转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达目的蛋白。经30%～60%(NH4)2SO4盐析、Q_SepharoseFastFlow阴离子交换树脂分离纯化,并进行酶活性测定。结果构建的载体能分别表达产物,经30%～60%(NH4)2SO4盐析后纯度提高3.6倍,再经2次Q_SepharoseFastFlow阴离子交换树脂分离纯度提高30倍,酶活性测定显示,hHO_1较野生型hHO_1(whHO_1)活性下降了91.21%。结论hHO_1的第25位组氨酸在酶与底物血红素氧化反应中起着重要作用,制备的hHO_1能明显降低胆红素水平。

关键词：血红素加氧酶-1 定点突变活性胆红素

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表观遗传修饰在肿瘤免疫治疗中的意义

中国肿瘤生物治疗杂志 2016年第5期23卷 727-732页

作者：周游孔祥银蒋敬庭常州市第一人民医院肿瘤生物诊疗中心江苏省肿瘤免疫治疗工程技术研究中心江苏常州213003 中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所上海200031

肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一,并且我国的肿瘤死亡率呈逐年上升趋势。肿瘤免疫治疗作为手术、放疗和化疗之后第4种治疗手段被临床广泛应用。肿瘤免疫治疗通过激发或调动机体的免疫系统,增强肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力,从而控制和... 详细信息

肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一,并且我国的肿瘤死亡率呈逐年上升趋势。肿瘤免疫治疗作为手术、放疗和化疗之后第4种治疗手段被临床广泛应用。肿瘤免疫治疗通过激发或调动机体的免疫系统,增强肿瘤微环境的抗肿瘤免疫力,从而控制和杀伤肿瘤细胞,是当前肿瘤治疗领域最具前景的研究方向之一。表观遗传学是研究DNA序列未改变而基因表达发生变化的一种可遗传改变,其调节机制主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA调节等。表观遗传修饰在免疫应答及肿瘤免疫治疗中的调控作用越来越受到重视。本文综述了表观遗传修饰对机体免疫细胞的调控以及通过干预进行肿瘤免疫治疗的相关研究和应用前景。

关键词：肿瘤表观遗传免疫调节免疫治疗