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重组人绒毛膜促性腺激素嵌合肽12的聚丙烯酰胺凝胶电泳制备

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 671-674页

作者：邹永水徐万祥何远孙志达薛小琳上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室

利用板状聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)方法 ,建立了一步分离纯化基因工程表达蛋白质的新技术。在构建的人绒毛膜促性腺激素嵌合肽 (CP1 2 )表达率约为 1 %的情况下 ,借助分析制备两用型板状PAGE装置 ,通过下行和上行两次电泳以及用透析膜... 详细信息

利用板状聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)方法 ,建立了一步分离纯化基因工程表达蛋白质的新技术。在构建的人绒毛膜促性腺激素嵌合肽 (CP1 2 )表达率约为 1 %的情况下 ,借助分析制备两用型板状PAGE装置 ,通过下行和上行两次电泳以及用透析膜隔离形成收集槽这两步改进 ,从包涵体抽提液中一步纯化了目的表达产物。结果表明 ,一次上样总蛋白质量为 3～ 4mg的PAGE ,可获得 5 0～ 1 0 0 μgCP1 2蛋白 ,其相对均一性达到 95 %。研究提示此改良的制备性PAGE新技术 ,是一种分离纯化低分子量目的蛋白质的好方法

关键词：人绒毛膜促性腺激素基因工程嵌合肽聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化

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禁欲时间对男性精液质量的影响

复旦学报（医学版） 2003年第4期30卷 391-393页

作者：李文英武俊青高尔生杨秋英陶建国陈锡宽上海市计划生育科学研究所-计划生育药具国家重点实验室上海200032

目的了解不同禁欲时间的男性精液质量状况,为临床治疗不育提供参考。方法对来自全国7个省市562名健康男性的精液质量进行分析。结果随着禁欲时间的延长,精液量、精子密度、精子总数都有所增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论精子... 详细信息

目的了解不同禁欲时间的男性精液质量状况,为临床治疗不育提供参考。方法对来自全国7个省市562名健康男性的精液质量进行分析。结果随着禁欲时间的延长,精液量、精子密度、精子总数都有所增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论精子数目过少的男性,禁欲时间可以稍长,但不宜超过7 d。精子活力差而精子数量足够的男性,则禁欲时间可以稍短,3 d左右即可。

关键词：禁欲时间男性不育症精液质量流行病学质量控制

人受精蛋白β整联蛋白配体区cDNA的克隆、表达及抗体制备

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第3期33卷 303-308页

作者：丁蓓蓓沈卫英蒋俶王健高尔生申庆祥上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室!上海200032

从人睾丸中抽提mRNA ,合成双链cDNA ,利用合成的PCR引物扩增受精蛋白 β(fertilinβ)的整联蛋白配体区cDNA(hf2 79)。序列分析表明 ,该区编码 93个氨基酸 ,与文献报道完全相同。将hf2 79插入质粒 pGEX 4T 2 ,构建 pGEX hf2 79表达质粒 ... 详细信息

从人睾丸中抽提mRNA ,合成双链cDNA ,利用合成的PCR引物扩增受精蛋白 β(fertilinβ)的整联蛋白配体区cDNA(hf2 79)。序列分析表明 ,该区编码 93个氨基酸 ,与文献报道完全相同。将hf2 79插入质粒 pGEX 4T 2 ,构建 pGEX hf2 79表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,表达菌株经IPTG诱导 ,可产生大量可溶性的表达蛋白GST HF93。SDS PAGE分析表明融合蛋白表观分子量为 38kD ,其含量占菌体可溶性蛋白的 5 0 %以上。表达产物经谷胱甘肽转硫酶 (GST)亲和层析柱纯化 ,得到 90 %以上纯度的融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切 2h可得HF93肽。再经GST亲和层析柱去除GST ,得到纯度大于 80 %的HF93肽。将其和SDS PAGE凝胶上切下的HF93多肽条带一起用于免疫BALB/c小鼠 ,经ELISA检测 ,证明获得了较高滴度的抗体

关键词：人受精蛋白β整联蛋白配体区基因克隆基因表达大肠杆菌抗体

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比格犬前列腺增生模型中输精管病理变化

中国药理学与毒理学杂志 2003年第3期17卷 221-226页

作者：吴建辉孙祖越钟恩宏朱焰刘桂明何桂林曹霖上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室

目的　探讨前列腺增生症中输精管的增生机制。方法　丙酸睾酮 (TP)诱导比格犬前列腺增生模型建立后 ,获取输精管组织 ,利用放射免疫分析法检测输精管组织中的双氢睾酮 (DHT)含量 ,组织经石蜡固定包埋切片 ,显微图像分析技术分析输精管... 详细信息

目的　探讨前列腺增生症中输精管的增生机制。方法　丙酸睾酮 (TP)诱导比格犬前列腺增生模型建立后 ,获取输精管组织 ,利用放射免疫分析法检测输精管组织中的双氢睾酮 (DHT)含量 ,组织经石蜡固定包埋切片 ,显微图像分析技术分析输精管管腔大小及上皮细胞高度 ,流式细胞术检测输精管组织凋亡率 ,免疫组织化学技术检测输精管组织中前列腺特异抗原 (PSA)、前列腺酸性磷酸酶 (PAP)、Bcl 2及P5 3蛋白表达 ,2 %的琼脂糖凝胶电泳观察输精管组织的凋亡情况。结果　输精管组织中DHT含量随TP剂量增大而增加 ,但无统计显著性差异。输精管管腔面积随TP增加增大 (P <0 .0 1 ) ,输精管上皮细胞高度也随TP增高 (P <0 .0 1 )。流式细胞术结果中 ,对照组细胞凋亡率高于 0 .8及 7.5mg·kg-1TP组(P <0 .0 1 )。免疫组化结果中 ,PSA ,PAP和Bcl 2表达没有明显差异 ,但各组P5 3表达均低于对照组 (P <0 .0 5 )。琼脂糖凝胶电泳结果中 ,对照组中可以看到 2 0 0bp整数倍的DNA片段 ,其他组则没有观察到类似现象。结论　DHT促进输精管增生。

关键词：输精管睾酮凋亡前列腺增生

小鼠着床丝氨酸蛋白酶2cDNA的克隆、表达及抗体制备

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生物化学与生物物理学报 2003年第7期35卷 649-654页

作者：黄哲平王健余浩黄萍沈维雄左嘉客杨增明申庆祥上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室东北农业大学生命科学学院上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室上海200032 哈尔滨150030

以孕 4 .5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板 ,用PCR方法扩增获得着床丝氨酸蛋白酶 2 (ISP2 )的cDNA。序列分析表明 ,该cDNA序列中的开放阅读框编码 2 79个氨基酸 ,并与文献报道完全相同 ,但在 3′非翻译区多 2 0 4bp ,已登录于GenBank(... 详细信息

以孕 4 .5天小鼠子宫着床位点总cDNA为模板 ,用PCR方法扩增获得着床丝氨酸蛋白酶 2 (ISP2 )的cDNA。序列分析表明 ,该cDNA序列中的开放阅读框编码 2 79个氨基酸 ,并与文献报道完全相同 ,但在 3′非翻译区多 2 0 4bp ,已登录于GenBank(登录号 :AF4 4 2 819)。为了获得重组ISP2 (rISP2 ) ,构建了pGEX 4T 2 ISP2表达质粒 ,进而在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达融合蛋白质GST ISP2 ,经SDS PAGE回收的融合蛋白质用牛凝血酶酶切 ,再经SDS PAGE回收获得rISP2。用rISP2作为免疫原免疫家兔获得ISP2多克隆抗血清。用该抗血清进行免疫组化研究表明 ,ISP2在妊娠早期的小鼠子宫内膜腺上皮有特异性的高表达。

关键词： ISP2 PCR 基因表达抗体制备

丙酸睾酮对去势beagle犬前列腺上皮细胞的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2003年第6期17卷 443-446页

作者：吴建辉孙祖越朱焰曹霖钟恩宏上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室

目的　探讨丙酸睾酮与犬前列腺上皮细胞生长的关系。方法　去势beagle犬经丙酸睾酮处理后 ,获取前列腺组织 ,利用放射免疫分析法 (RIA)测定前列腺组织中双氢睾酮 (DHT)含量。组织经石蜡包埋切片 ,HE染色 ,显微镜下观察前列腺的组织学变... 详细信息

目的　探讨丙酸睾酮与犬前列腺上皮细胞生长的关系。方法　去势beagle犬经丙酸睾酮处理后 ,获取前列腺组织 ,利用放射免疫分析法 (RIA)测定前列腺组织中双氢睾酮 (DHT)含量。组织经石蜡包埋切片 ,HE染色 ,显微镜下观察前列腺的组织学变化 ,并借助显微图像分析技术测定前列腺腺腔大小及腺上皮细胞高度。免疫组织化学技术检测前列腺上皮细胞前列腺特异抗原 (PSA)及酸性磷酸酶(PAP)的表达。结果　去势犬经丙酸睾酮处理后 ,前列腺中DHT水平明显升高。光镜下前列腺腺腔增大 ,腺上皮细胞增高。图像分析结果显示前列腺腺腔面积明显增大 (P <0 .0 1) ,增大后面积分别为对照组的 4 .5～ 7倍 ,腺上皮细胞高度明显增高(P <0 .0 1) ,细胞增高幅度分别为对照组的 4～ 8倍。免疫组化结果显示丙酸睾酮处理组前列腺上皮细胞PSA表达高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,PAP的表达也高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　去势犬前列腺上皮细胞生长及功能正常发挥依赖于雄激素。

关键词：睾酮前列腺上皮细胞犬 beagle

中国7省市年轻男性精液质量的灰关联综合评价

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复旦学报（医学版） 2003年第5期30卷 466-469页

作者：梁翠玲武俊青高尔生陶建国杨秋英复旦大学-上海市计划生育科学研究所流行病室-计划生育药具国家重点实验室上海200032

目的　综合评价中国 7省市的年轻男性精液质量状况。方法　灰色关联分析评定 1998年 12月至1999年 12月在上海、河南、浙江、山西、青岛、河北、贵州 7省市年轻男性的精液质量状况。结果　 7个地区年轻男性精液质量从优到差的顺序如下 ... 详细信息

目的　综合评价中国 7省市的年轻男性精液质量状况。方法　灰色关联分析评定 1998年 12月至1999年 12月在上海、河南、浙江、山西、青岛、河北、贵州 7省市年轻男性的精液质量状况。结果　 7个地区年轻男性精液质量从优到差的顺序如下 :山西 (Y4)、上海 (Y1)、河北 (Y6)、贵州 (Y7)、青岛 (Y5)、河南 (Y2 )、浙江 (Y3 )。经相似程度的聚类分析可大致评定为两个等级。结论　 7个地区年轻男性精液质量可评定为两个等级 :山西、上海地区较优 ,其他地区略差。

关键词：精液质量男性灰关联分析综合评价

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依立雄胺对大鼠、犬和人精子活力的影响

中国药理学与毒理学杂志 2002年第5期16卷 363-367页

作者：吴建辉朱焰孙祖越上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室

目的　用更敏感的指标评价依立雄胺的生殖毒性。方法　将精悬液与不同浓度的依立雄胺共育1h ,2h后 ,借助计算机辅助分析系统录像分析精子活力参数的变化。结果　大鼠精子给予终浓度为0 .6 ,6和 6 0 μmol·L- 1的依立雄胺 1h后 ,精子活... 详细信息

目的　用更敏感的指标评价依立雄胺的生殖毒性。方法　将精悬液与不同浓度的依立雄胺共育1h ,2h后 ,借助计算机辅助分析系统录像分析精子活力参数的变化。结果　大鼠精子给予终浓度为0 .6 ,6和 6 0 μmol·L- 1的依立雄胺 1h后 ,精子活率(MOT)较对照组分别下降 19.0 %,18.0 %,16 .0 %;2h后 ,中高剂量组的MOT较对照组分别下降9.0 %,10 .0 %,且高剂量组的前向性降低。Beagle犬给予终浓度 0 .6 ,6和 6 0 μmol·L- 1依立雄胺 1h后MOT较对照组呈下降趋势 ,但无显著性差异 ,2h后MOT较对照组分别下降 31.0 %,2 4 .9%,2 8.3%。人精子体外给药实验中 ,给予终浓度为0 .12 ,0 .2 4和 0 .96 μmol·L- 1的依立雄胺 2h后 ,曲线运动速度、直线运动速度较对照组呈下降趋势 ,但无显著性差异 ,而高剂量组的精子头侧摆幅度、精子尾摆动性及MOT较对照组分别下降 2 8.0 %,5 .0 %,15 .0 %。结论　依立雄胺对精子具有一定的直接毒性 ,这种毒性存在种属差异 ,且不表现为剂量反应关系。

关键词：精子活力依立雄胺前列腺增生症 BPH 毒性作用精悬液

蟾蜍泛素羧基末端水解酶(tUCH)以不依赖其UCH活性的方式参与卵母细胞成熟调控

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实验生物学报 2003年第2期36卷 105-112页

作者：孙兆贵孔维华颜山顾正左嘉客上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室

本实验室已报道中华大蟾蜍卵母细胞的p28蛋白具泛素羧基末端水解酶活性,称作tUCH,它和哺乳类中发现的UCH L1的氨基酸序列具高度同源性,二级结构同源性比较发现,二者可能具类似的功能。本文实验表明:未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的可溶... 详细信息

本实验室已报道中华大蟾蜍卵母细胞的p28蛋白具泛素羧基末端水解酶活性,称作tUCH,它和哺乳类中发现的UCH L1的氨基酸序列具高度同源性,二级结构同源性比较发现,二者可能具类似的功能。本文实验表明:未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的可溶性蛋白中均含有tUCH,约占提取物中蛋白质总量的2%。根据测定所得到的GST-tUCH和GST-UCH L1对底物Ub-AMC的酶动力学参数,说明卵母细胞中tUCH可能与小鼠UCH L1有类似的生物学功能;anti-tUCH单抗可以与原核细胞表达的tUCH和显性失活突变类型tUCH C(90)S特异结合,但不识别小鼠的UCH L1。Anti-tUCH单抗能够和tUCH结合但不能封闭它的UCH活性。当anti-tUCH单抗注入卵母细胞内,则孕酮诱导的生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)过程受到抑制,足见tUCH参与GVHD调节并不依赖其UCH活性。

关键词：泛素羧基末端水解酶卵母细胞成熟调控酶动力学参数中华大蟾蜍酶活性孕酮生发泡破裂