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人骨髓间充质干细胞向骨骼肌定向分化的研究

复旦学报（医学版） 2004年第4期31卷 403-405,i001页

作者：沙慧芳冯久贤顾伟勇史振余上海市胸科医院胸部肿瘤研究所上海200030

目的　研究人骨髓间充质干细胞在裸鼠损伤腿部向骨骼肌定向分化。方法　在裸鼠腿部注入无水酒精造成肌肉损伤 ,取培养人骨髓间充质干细胞用荧光染料Dil标记后注入损伤处 ,术后 6d及 12d取损伤部肌肉进行形态观察和免疫荧光标记。结果　... 详细信息

目的　研究人骨髓间充质干细胞在裸鼠损伤腿部向骨骼肌定向分化。方法　在裸鼠腿部注入无水酒精造成肌肉损伤 ,取培养人骨髓间充质干细胞用荧光染料Dil标记后注入损伤处 ,术后 6d及 12d取损伤部肌肉进行形态观察和免疫荧光标记。结果　在术后 6d可见Dil标记细胞向骨骼肌分化 ,Myoglobin阳性表达。术后12d后可见新生骨骼肌出现典型横纹 ,细胞核MyoD1阳性表达。结论　在裸鼠损伤肌肉的微环境中 ,人骨髓间充质干细胞可向骨骼肌定向分化。

关键词：人骨髓间充质干细胞骨骼肌定向分化免疫荧光标记

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人骨髓间充质干细胞的体外培养及诱导分化

复旦学报（医学版） 2003年第3期30卷 232-234,F003页

作者：沙慧芳冯久贤顾伟勇谭强董强刚上海市胸科医院胸部肿瘤研究所基础研究室上海200030 上海市胸科医院胸部肿瘤研究所胸外科上海200030

目的建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC).方法利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠... 详细信息

目的建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC).方法利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠体内分化为软骨样细胞及成骨样组织,采用流式细胞仪检测细胞表面CD31、CD34、CD45、CD9、CD90、CD105和CD106.以2.5×107细胞接种于裸鼠皮下进行致瘤实验,用DY-NALREU-SSO反向杂交法检测HLA.结果细胞已连续培养超过30代仍能稳定生长,细胞表面特性为CD105、CD106阳性,而CD31、CD34、CD45、CD9、CD90为阴性.在体外能诱导成脂肪细胞、成骨细胞.无致瘤性,在裸鼠体内能形成软骨细胞及骨样组织.结论培养了一株能在体外长期培养及具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞.

关键词：人骨髓间充质干细胞体外 CDl0 裸鼠诱导分化 CD45 细胞表面长期培养连续培养贴壁法

血管内皮生长因子对非小细胞肺癌血道转移的影响

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中华肿瘤杂志 2002年第2期24卷 142-146页

作者：董强刚冯久贤黄进肃包国良沙慧芳顾伟勇上海市胸科医院上海市胸部肿瘤研究所 200030 上海市胸科医院上海市胸部肿瘤研究所肺内科 200030

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)含量对非小细胞肺癌 (NSCLC)血道转移的影响。方法　外周血中细胞角蛋白 (CK)阳性细胞经磁性细胞分选技术分离后 ,采用细胞学、免疫组化及免疫荧光染色对其中的肺癌细胞进行特性分析。外周血肺癌细胞... 详细信息

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)含量对非小细胞肺癌 (NSCLC)血道转移的影响。方法　外周血中细胞角蛋白 (CK)阳性细胞经磁性细胞分选技术分离后 ,采用细胞学、免疫组化及免疫荧光染色对其中的肺癌细胞进行特性分析。外周血肺癌细胞含量按已建立的流式细胞仪检测方法作定量分析。VEGF含量采用ELISA测定。结果　外周血肺癌细胞具有明显的核异型 ,表达端粒酶逆转录酶 (hTERT)及上皮细胞标志CK ,可被抗人NSCLC特异性单抗S5A10 2染色 ,但不表达白细胞抗原CD34及CD4 5。 15 4例NSCLC患者中 ,外周血肺癌细胞阳性 4 4例 ,阳性率为 2 8.6 %。癌细胞阳性率与病期进展相关。NSCLC患者血浆VEGF含量显著高于健康人及肺部良性疾患者。VEGF含量与肺腺癌的病期进展密切相关。在血循环癌细胞阳性NSCLC患者中 ,VEGF含量增高者 ,癌细胞数量显著高于VEGF不增高者。结论　NSCLC患者血浆VEGF明显增高 ,在血循环癌细胞阳性的患者中 ,VEGF高表达可促使癌细胞血道转移 ,表现为血循环癌细胞数量明显增加。

关键词：肺肿瘤非小细胞肺癌血管内皮生长因子肿瘤转移

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子对树突状细胞的抑制作用

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中华结核和呼吸杂志 2003年第9期26卷 539-543页

作者：范小红韩宝惠董强刚沙慧芳包国良廖美琳上海市胸科医院肺内科 200030 上海市胸科医院胸部肿瘤研究所 200030

目的　探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)中血管内皮生长因子 (VEGF)对树突状细胞 (DC)的影响。方法　用流式细胞仪对 85例NSCLC患者 (NSCLC组 )及 14名正常人 (正常人组 )外周血DC含量进行检测 ,并用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测血浆VEGF165浓... 详细信息

目的　探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)中血管内皮生长因子 (VEGF)对树突状细胞 (DC)的影响。方法　用流式细胞仪对 85例NSCLC患者 (NSCLC组 )及 14名正常人 (正常人组 )外周血DC含量进行检测 ,并用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测血浆VEGF165浓度。体外条件下由正常人 (血站献血者 )外周血CD+ 14 单个核细胞 (PBMC)培养DC。实验分 2组 ,对照组于培养第 1天和第 4天分别加入rhGM CSF 10 0 0U/ml及rhIL 4 80ng/ml;VEGF165实验组在此基础上于培养第 1天及第 4天加入rhVEGF1655 0ng/ml,以验证其对DC分化和生存的影响 ,用流式细胞仪分析培养细胞的细胞表型及凋亡率。结果　NSCLC组患者血浆VEGF165浓度明显高于正常人组 (P 0 0 5 ) ;其血浆VEGF165浓度与肿瘤的TNM分期及远处转移有密切关系 (P 0 0 5 ) ;其外周血DC含量与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移及远处转移均有密切关系 (P <0 0 5 )。体外实验显示 :与对照组相比 ,VEGF165实验组细胞中CD+ 14 细胞比例增高 ,DC表面CD40 、CD86、人类白细胞?

关键词：非小细胞肺癌血管内皮生长因子树突状细胞抑制作用流式细胞仪

槲皮素联合木犀草素对大肠癌细胞凋亡和β-catenin及其靶基因的作用

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中医药学报 2025年第1期53卷 14-19页

作者：邬世威陈锦芳师子曼胡兵上海中医药大学附属龙华医院中医肿瘤研究所肿瘤科上海200032

目的:研究槲皮素和木犀草素及其联合使用对CT26大肠癌细胞增殖和细胞凋亡的作用及机制。方法:实验分为对照组、槲皮素组(QCT)、木犀草素组(LTL)和联合组(QCT+LTL),分别给予等体积DMSO、槲皮素、木犀草素及槲皮素联合木犀草素处理CT26细... 详细信息

目的:研究槲皮素和木犀草素及其联合使用对CT26大肠癌细胞增殖和细胞凋亡的作用及机制。方法:实验分为对照组、槲皮素组(QCT)、木犀草素组(LTL)和联合组(QCT+LTL),分别给予等体积DMSO、槲皮素、木犀草素及槲皮素联合木犀草素处理CT26细胞。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖;Annexin-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡;酶底物试剂盒检测Caspases活性;Western blot法检测β-catenin及其下游c-Myc、Cyclin D1和Survivin的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,槲皮素和木犀草素治疗可抑制CT26细胞增殖,诱导细胞凋亡,伴随Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性增强,同时还可抑制β-catenin、c-Myc、Cyclin D1及Survivin蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。槲皮素和木犀草素联合可增强对CT26细胞的作用。结论:槲皮素和木犀草素可抑制CT26大肠癌生长,诱导细胞凋亡,两药联合作用显著优于单药,其机制与下调β-catenin、c-Myc、Cyclin D1及Survivin表达,活化Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9相关。

关键词：槲皮素木犀草素大肠癌细胞增殖细胞凋亡 β-catenin

血液中微转移癌细胞对非小细胞肺癌预后的影响

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中华肿瘤杂志 2004年第5期26卷 294-296页

作者：黄进肃董强刚包国良韩宝惠上海市胸科医院肺内科 200030 上海市胸部肿瘤研究所

目的　分析非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血液中微转移癌细胞对预后的影响。方法　手术过程中采集肺静脉血 ,术前或术后采集外周血 ,应用流式细胞仪进行癌细胞检测。于手术后定期随访患者 ,并与检测结果做统计学分析。结果　对 5 8例NSCLC... 详细信息

目的　分析非小细胞肺癌 (NSCLC)患者血液中微转移癌细胞对预后的影响。方法　手术过程中采集肺静脉血 ,术前或术后采集外周血 ,应用流式细胞仪进行癌细胞检测。于手术后定期随访患者 ,并与检测结果做统计学分析。结果　对 5 8例NSCLC患者血样进行了检测 ,共发现 2 0例存在癌细胞 ,阳性率为 34.5 % ,其中 5 7岁以下年龄组及Ⅲ /Ⅳ期患者的癌细胞阳性率显著高于 5 7岁以上年龄组及Ⅰ /Ⅱ期患者 (P值分别为 0 .0 0 0和 0 .0 0 6 )。随访结果显示 ,血液中癌细胞检测阳性组的2年及 3年生存率分别为 30 .0 %和 2 0 .0 % ,癌细胞检测阴性组分别为 5 2 .6 %和 5 0 .0 % ,二组间差异有显著性 (P值分别为 0 .0 2 91和 0 .0 0 92 )。结论　肺癌患者在手术前后可从血液中检测到癌细胞 ,此类患者的预后差 ,生存期短。

关键词：血液循环微转移癌癌细胞非小细胞肺癌肿瘤转移 NSCLC

Ⅰ期非小细胞肺癌中p16基因及其产物的表达

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肿瘤 1999年第1期19卷 59-60页

作者：包国良冯久贤董强刚江晓丰沙慧芳王恩忠上海市胸科医院胸部肿瘤研究所

Ｐ１６基因是一个新近发现的抑癌基因，其表达异常被认为与癌细胞的失控性增殖密切相关［１～３］。近年来，关于非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中Ｐ１６基因及其产物的异常表达，国内外均有报道［４～８］，但单独研究早期ＮＳＣＬＣ的文... 详细信息

Ｐ１６基因是一个新近发现的抑癌基因，其表达异常被认为与癌细胞的失控性增殖密切相关［１～３］。近年来，关于非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中Ｐ１６基因及其产物的异常表达，国内外均有报道［４～８］，但单独研究早期ＮＳＣＬＣ的文献报道极少。为此，作者应用免疫组织...

关键词：非小细胞肺癌 p16基因基因表达免疫组化

体外扩增的小鼠骨髓CD34^+和c-kit^+细胞具有长期造血功能

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肿瘤 1998年第2期18卷 66-70页

作者：董强刚冯久贤顾伟勇包国良江晓丰沙慧芳上海市胸科医院上海市胸部肿瘤研究所

目的应用小鼠骨髓微血管内皮细胞能够在体外大量扩增骨髓造血细胞。本文旨在进一步研究（１）内皮细胞分泌的造血细胞因子；（２）优化培养条件，提高骨髓细胞的扩增指数；（３）扩增细胞的长期造血重建功能。方法采用ＲＴ┐ＰＣＲ和生... 详细信息

目的应用小鼠骨髓微血管内皮细胞能够在体外大量扩增骨髓造血细胞。本文旨在进一步研究（１）内皮细胞分泌的造血细胞因子；（２）优化培养条件，提高骨髓细胞的扩增指数；（３）扩增细胞的长期造血重建功能。方法采用ＲＴ┐ＰＣＲ和生物活性测定技术分析内皮细胞表达的造血细胞因子；小鼠骨髓细胞经与内皮细胞共培养方法进行扩增，扩增的骨髓细胞移植给大剂量化疗后的异基因小鼠，然后检测外周血中供体细胞的比例。结果（１）内皮细胞能持续地、或经肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）刺激后表达干细胞因子（ＳＣＦ）、血小板生成因子（ＴＰＯ）和白介素┐６（ＩＬ┐６）；（２）将Ｃ５７小鼠骨髓细胞置于ＴＮＦα刺激后的内皮细胞层上４小时，粘附的骨髓细胞在０．２５μｇ／ｍｌ重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ┐ＣＳＦ）存在下培养１周，细胞数量增加了６０倍，其中ＣＤ３４＋细胞和ｃ┐ｋｉｔ＋细胞比例分别为５８．５％和６３．９％；（３）将扩增的Ｃ５７小鼠骨髓细胞移植给大剂量ＶＩＰ方案化疗（顺铂，１０ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第一天；异环磷酰胺，５００ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第２天；依托帕甙，５ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第１～２天）后的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，８周时外周血供体细胞比例达３５％。?

关键词：骨髓造血细胞体外扩增移植

大剂量化疗和体外扩增的骨髓细胞移植对小鼠Lewis肺癌的实验性治疗研究

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肿瘤 1998年第2期18卷 71-75页

作者：董强刚顾伟勇江晓丰包国良冯久贤上海市胸科医院上海市胸部肿瘤研究所

目的本文比较常规剂量和大剂量ＶＩＰ方案化疗对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的疗效，同时分析应用体外扩增的骨髓细胞进行移植治疗的可行性。方法骨髓细胞采用微血管内皮细胞共培养方法进行体外培养扩增。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠皮下接种１×１０... 详细信息

目的本文比较常规剂量和大剂量ＶＩＰ方案化疗对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的疗效，同时分析应用体外扩增的骨髓细胞进行移植治疗的可行性。方法骨髓细胞采用微血管内皮细胞共培养方法进行体外培养扩增。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠皮下接种１×１０６Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞，接种后第３天和第１４天分别进行常规剂量和大剂量ＶＩＰ方案化疗。常规剂量ＶＩＰ方案（ＶＩＰＣＤ）为顺铂（４ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第１天），异环磷酰胺（２００ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第２天）和依托帕甙（２ｍｇ／ｋｇ，腹腔注射，第１～２天）。大剂量ＶＩＰ方案（ＶＩＰＨＤ）是将上述药物的剂量分别提高２．５倍，用法同上。ＶＩＰＨＤ化疗后２４ｈ经尾静脉移植３×１０６体外扩增的骨髓细胞。采用定期测量肿瘤体积和随访小鼠生存时间进行疗效评定。结果对早期肿瘤（接种后３天，平均肿瘤直径为０．５ｃｍ），ＶＩＰＣＤ化疗明显抑制肿瘤生长；但对接种后２周的巨大肿瘤（平均肿瘤直径１．５ｃｍ），应用该方案间隔２周连续治疗３个疗程仍不能有效控制肿瘤生长。上述实验中ＶＩＰＣＤ治疗组的中位生存期与对照组相比无统计学显著差异（Ｐ＞０．０５）。与此相反，单次ＶＩＰＨＤ化疗和骨髓移植显著控制了早期肿瘤生长，使治愈率达到９?

关键词： Lewis 肺肿瘤药物疗法剂量骨髓移植体外扩增