检索结果-南通市图书馆

生物化学与生物物理进展 1998年第2期25卷 186-187页

作者：覃文新万大方赵新泰蒋惠秋顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室

介绍一种噬菌体ＤＮＡ的快速抽提方法．用聚乙二醇沉淀噬菌体颗粒，然后经ＤＥＡＥ纤维素纯化处理和酚抽提．与传统的噬菌体ＤＮＡ纯化方法相比，改进后的方法方便、快速、经济，可获得高纯度的噬菌体ＤＮＡ．

关键词：噬菌体 DNA 抽提聚乙二醇

利用集落形成实验和成瘤实验初步研究新基因的成瘤作用

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复旦学报（医学版） 2001年第4期28卷 334-336,339页

作者：韩力薇覃文新王晨万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海200032

目的　探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法　利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果　①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤... 详细信息

目的　探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法　利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果　①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤平均瘤重大于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组 ;③HC3898全长cDNA转染SMMC 772 1细胞能显著抑制集落的形成 ;④注射转染HC3898基因的SMMC 772 1细胞组平均瘤重小于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组的瘤重 ,抑瘤率为 5 0 % ;⑤HC3898实验组瘤块切片检查可见凋亡细胞及凋亡小体 ,瘤块的组织DNA经 1.5 %琼脂糖电泳分析 ,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论　HC90可能是与肝癌恶性表型相关的新基因 ,转染SMMC 772 1肝癌细胞后能促进肝癌细胞的生长。HC3898基因可能诱导凋亡并抑制肝癌细胞的生长。集落形成实验和成瘤实验是对基因功能进行初步分析的有效方法。

关键词：集落形成成瘤凋亡新基因 HCC 肿瘤

YAC修饰和原生质体融合法转移进哺乳动物细胞

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 99-101页

作者：任功一赵新泰万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室

应用ＤＮＡ同源重组的方法对酵母人工染色体（ＹＡＣ）进行修饰，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ等方法证实ｎｅｏ基因整合于ＹＡＣ上。通过ＰＥＧ介导的原生质体融合法将一个３３０ｋｂ的ＹＡＣ导入Ｌ９２９细胞，得到Ｇ４１８抗性克隆。

关键词： YAC转移 YAC修饰原生质体融合

在大肠杆菌体内有效地表达以组蛋白为骨架的融合蛋白HNHG

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 800-803页

作者：戴菲寒陈燕龚毅杨胜利田培坤顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室中国科学院上海生物工程研究中心上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032 上海200233

研究了在大肠杆菌体内表达了以组蛋白C 末端为骨架的融合蛋白HNHG[H(HA2 0 )N(NLS)H(组蛋白H10 的C末端 97个氨基酸 )G(GE7) ],并发现质粒DNA与其形成复合体后 ,在电镜下出现与体内染色体相同的凝聚、螺旋现象。由于HNHG的这种有效地结... 详细信息

研究了在大肠杆菌体内表达了以组蛋白C 末端为骨架的融合蛋白HNHG[H(HA2 0 )N(NLS)H(组蛋白H10 的C末端 97个氨基酸 )G(GE7) ],并发现质粒DNA与其形成复合体后 ,在电镜下出现与体内染色体相同的凝聚、螺旋现象。由于HNHG的这种有效地结合质粒、并使之凝聚的特性 ,有望使之成为新兴的能将外源基因导入体内的载体系统。

关键词：基因工程组蛋白H1~0 基因导入载体

正常肝与肝癌细胞表达差异的cDNA克隆的研究

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中华医学杂志 1995年第10期75卷 606-608页

作者：万大方张学理周筏梅顾健人上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室

采用信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）差异显示技术（ｍＲＮＡＤｉｆｆｒｅｎｔｉａｌＤｉｓｐｌａｙｍＲＮＡＤＤ），寻找人正常肝与肝癌细胞表达差异的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆。人正常肝组织及人肝癌细胞株（Ｈｅｐ３Ｂ）ｍＲＮＡ... 详细信息

采用信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）差异显示技术（ｍＲＮＡＤｉｆｆｒｅｎｔｉａｌＤｉｓｐｌａｙｍＲＮＡＤＤ），寻找人正常肝与肝癌细胞表达差异的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆。人正常肝组织及人肝癌细胞株（Ｈｅｐ３Ｂ）ｍＲＮＡ用３＇端二个引物分别与五种不同５＇端引物进行逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），以３５Ｓ－α（ｄＡＴＰ）参入产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）及放射自显影。获得一批表达差异的ｃＤＮＡ克隆。选择其中３１个克隆进行部分ＤＮＡ序列分析，除一个为已知序列外其余３０个克隆为ＧｅｎｅＢａｎｋ中无匹配序列。经斑点杂交证明二个克隆在肝癌中高表达，一个克隆在正常肝中高表达。目前正在对有意义的克隆做进一步论证。

关键词：肝肿瘤信使核糖核酸 mRNA

HCAP1两种基因型对肝癌细胞系Hep3B基因表达的影响

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癌症 2002年第11期21卷 1173-1181页

作者：王俊茹覃文新何祥火潘勇胡建万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝... 详细信息

背景与目的:HCAP1(HCC-associatedprotein1)基因是我们室克隆的一个新基因,HCAP1基因有N和M两种基因型,本研究旨在探讨HCAP1N和HCAP1M基因型对肝癌细胞基因表达的影响。方法:用脂质体转染试剂,将HCAP1M与HCAP1N分别转染Hep3B-Tet-on肝细胞性肝癌细胞株;为了获得高诱导表达HCAP1N或HCAP1M的细胞株,通过Westernblot方法筛选被转染的细胞。然后,通过人cDNAarray膜片杂交技术分析HCAP1N或HCAP1M诱导表达前后的细胞基因表达谱。杂交结果用复日Smartview2001图像分析软件进行分析比较。结果:建立了HCAP1N和HCAP1M过表达前后的差异基因表达谱。结果表明HCAP1M过表达引起参与细胞增殖的基因表达上调(如c-erbB2受体和转录因子DP2),以及起凋亡作用基因(caspase9)及DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达下调;而HCAP1N过表达引起抑制细胞生长基因(如snoN和WAF1)和DNA切割修复蛋白基因(ERCC5)的表达上调,以及抗凋亡基因(HSPs)的表达下调。结论:HCAP1M基因过表达可能促进细胞过度增殖,HCAP1N过表达可能抑制细胞生长。

关键词： HCAP1 基因型肝癌细胞系 Hep3B基因表达

新基因CT120在肺癌组织中的表达及其对细胞生长的影响

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癌症 2003年第2期22卷 113-118页

作者：何祥火李锦军解翼虎张锋锐曲淑敏唐耘天覃文新万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

背景与目的:基因CT120是我们实验室从染色体17p13.3位点获得的一个细胞膜相关新基因,mRNA水平检测结果表明该基因在人正常肺组织中不表达,但在人肺癌细胞系SPC-A-1中高表达。本研究进一步从蛋白水平研究CT120在肺癌及癌旁组织中的差异... 详细信息

背景与目的:基因CT120是我们实验室从染色体17p13.3位点获得的一个细胞膜相关新基因,mRNA水平检测结果表明该基因在人正常肺组织中不表达,但在人肺癌细胞系SPC-A-1中高表达。本研究进一步从蛋白水平研究CT120在肺癌及癌旁组织中的差异表达及CT120异位表达(ectopicexpression)与过表达(overexpression)对细胞生长的影响。方法:用生物信息学方法设计15肽,合成并偶联到大分子载体KLH上制成人工免疫原,制备鸡抗CT120多肽抗体;通过Westernblotting方法检测CT120在不同肿瘤细胞系中的表达;通过免疫组织化学技术比较CT120在肺癌及癌旁组织中的差异表达;通过集落形成试验研究CT120异位表达对NIH/3T3细胞生长的影响;通过生长曲线及裸鼠成瘤试验研究CT120过表达对A549细胞生长的影响。结果:获得有效的鸡抗CT120抗体(IgY);CT120蛋白在不同肿瘤细胞系中表达程度不同,并在不同类型的肺癌组织中高表达;CT120基因异位表达显著促进NIH/3T3细胞的生长;同时CT120过表达对A549细胞在体内体外的生长有促进作用。结论:基因CT120与肺癌的发生发展有关,是一个人肺癌相关新基因。

关键词：肺癌组织细胞生长 CT120基因基因表达免疫组织化学

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EphA2在脑胶质瘤中的表达及意义

肿瘤 2007年第8期27卷 646-650页

作者：赵瑞皎石必枝李宗海王华茂上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室

目的：探讨酪氨酸蛋白激酶受体EphA2在人脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤微血管生成之间的相关性。方法：用免疫组化方法检测66例人脑胶质瘤组织，2株成胶质细胞瘤细胞系（U251和U87）和10例正常脑组织中EphA2蛋白的表达情况。并用Western... 详细信息

目的：探讨酪氨酸蛋白激酶受体EphA2在人脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤微血管生成之间的相关性。方法：用免疫组化方法检测66例人脑胶质瘤组织，2株成胶质细胞瘤细胞系（U251和U87）和10例正常脑组织中EphA2蛋白的表达情况。并用Western blot方法进一步验证高级别成胶质细胞瘤组织和正常脑组织中EphA2的表达情况。通过CD34免疫组化染色方法来计算胶质瘤组织中的微血管数（MVC），探讨EphA2的表达水平与胶质瘤的微血管生成之间可能存在的关系。结果：免疫组化结果表明：在所有检测的66例胶质瘤中，除3例低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ）未检测到EphA2表达外，其余均有不同程度的EphA2表达，阳性率为95．5％（63／66）；而10例正常脑组织中EphA2蛋白表达均为阴性，二者差异显著（P〈0．01）。并且高级别脑胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ）中EphA2强阳性表达率为63％（29／46），明显高于低级别胶质瘤30％（6／20）的阳性表达率，二者差异显著（P〈0．01）。此外，肿瘤组织内微血管内皮细胞也有EphA2蛋白表达。Westernblot结果也进一步证实了成胶质细胞瘤组织和细胞系U251高表达EphA2蛋白，且U87表达水平明显低于U251，正常脑组织中检测不到EphA2蛋白条带。胶质瘤的微血管密度与EphA2蛋白表达水平有显著相关性（r=0．713，P〈0．01），EphA2表达强阳性的肿瘤区域有较高的微血管密度。结论：EphA2特异地表达于高级别胶质瘤中，而正常脑组织中则检测不到EphA2表达，提示EphA2有可能是恶性胶质瘤的一个新的标志物，或可作为分子治疗的靶点，并且EphA2可能参与胶质瘤的血管生成，在胶质瘤的发病和恶性进展中起重要作用。

关键词：神经胶质瘤基因表达微血管密度 EphA2

基于WWW与UNIX的核酸序列分析实用软件的开发

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Acta Genetica Sinica 2001年第3期28卷 274-277页

作者：黄戈顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

讨论了计算机序列分析的工作，介绍了基于ＷＷＷ和ＵＮＩＸ的核酸序列分析实用软件，其特点是快速，易用，提高了工作效率。

关键词：序列分析计算机工具软件人类基因组计划

过表达CT120B基因诱导肺腺癌细胞G_1期停滞及基因表达谱改变

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中华肿瘤杂志 2006年第5期28卷 321-325页

作者：潘东宁魏霖姚明万大方顾健人上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室 200032

目的探讨过表达CT120B基因对肺腺癌细胞生长的影响及其诱导的基因表达谱改变。方法用cDNA转染方法建立稳定过表达CT120B细胞株;CCK-8方法和裸鼠致瘤实验观察过表达CT120B对细胞在体外和体内生长的影响;表达阵列分析显示过表达CT120B诱... 详细信息

目的探讨过表达CT120B基因对肺腺癌细胞生长的影响及其诱导的基因表达谱改变。方法用cDNA转染方法建立稳定过表达CT120B细胞株;CCK-8方法和裸鼠致瘤实验观察过表达CT120B对细胞在体外和体内生长的影响;表达阵列分析显示过表达CT120B诱导的基因表达谱变化;流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果过表达CT120B的SPC-A-1细胞株生长速度明显减慢,在裸鼠体内致瘤能力降低。在稳定过表达CT120B的细胞中,cyclin E1、cdk 2、c-kit和 CXCR4等34个基因表达下调,caspase 8等4个基因表达上调。过表达CT120B诱导细胞G1期停滞, 对细胞凋亡无明显影响。结论过表达CT120B通过诱导G1期停滞抑制肺腺癌细胞生长,稳定过表达CT120B细胞株中,c-kit和CXCR4等基因表达下调也有助于CT120B的生长抑制活性。

关键词： CT120B cDNA表达阵列生长抑制肺肿瘤基因表达谱