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6种常见鼠传病原体双重实时荧光定量PCR检测方法构建

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中国媒介生物学及控制杂志 2025年

作者：陈敏梁莹刘起勇栗冬梅传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室中国疾病预防控制中心传染病控制所预防媒介生物控制室

目的建立双重实时荧光定量PCR(qPCR)方法，用于土拉弗朗西斯菌、巴尔通体、问号钩端螺旋体、地方性斑疹伤寒立克次体、嗜吞噬细胞无形体及恙虫病东方体等6种鼠传病原体的快速检测。方法根据已报道的qPCR方法，建立3种双重qPCR方法，... 详细信息

目的建立双重实时荧光定量PCR(qPCR)方法，用于土拉弗朗西斯菌、巴尔通体、问号钩端螺旋体、地方性斑疹伤寒立克次体、嗜吞噬细胞无形体及恙虫病东方体等6种鼠传病原体的快速检测。方法根据已报道的qPCR方法，建立3种双重qPCR方法，分别检测土拉弗朗西斯菌和恙虫病东方体、巴尔通体和问号钩端螺旋体、地方性斑疹伤寒立克次体和嗜吞噬细胞无形体。绘制标准曲线，并对其灵敏度、特异性和重复性进行检测。同时，对鼠组织核酸模拟标本和阳性标本进行检测，以验证方法的可靠性。结果建立的3种双重qPCR方法均只扩增目的病原体，其他病原体和阴性对照均未出现荧光信号；6种病原体最低检测下限均为1×10～1拷贝/μl；循环阈值（Ct）变异系数为0.04%～1.20%；对核酸模拟标本和阳性标本进行检测，结果全为阳性，一致性100%。结论建立的双重qPCR方法特异性好、敏感性高、重复性好，可用于快速、准确检测土拉弗朗西斯菌、巴尔通体、问号钩端螺旋体、地方性斑疹伤寒立克次体、嗜吞噬细胞无形体及恙虫病东方体。

关键词：鼠传病原体双重实时荧光定量PCR 检测

静脉及腹腔感染途径对BALB/c小鼠巴贝虫感染及脾脏免疫细胞的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2025年

作者：杨汉银蔡玉春闫书宁辛怡莫子冉徐斌郑彬中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)WHO热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室内蒙古大学生命科学学院上海交通大学医学院-国家热带病研究中心全球健康学院

目的观察经静脉和腹腔接种田鼠巴贝虫后，BALB/c小鼠田鼠巴贝虫染虫率及脾形态和脾免疫细胞占比变化，为巴贝虫感染免疫调控机制相关研究提供参考。方法利用实验室保种田鼠巴贝虫虫株制备染虫率为10%的全血血样，将75只BALB/c小鼠随机... 详细信息

目的观察经静脉和腹腔接种田鼠巴贝虫后，BALB/c小鼠田鼠巴贝虫染虫率及脾形态和脾免疫细胞占比变化，为巴贝虫感染免疫调控机制相关研究提供参考。方法利用实验室保种田鼠巴贝虫虫株制备染虫率为10%的全血血样，将75只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、静脉接种组和腹腔接种组，每组25只。腹腔接种组和静脉接种组小鼠分别经腹腔和静脉接种染虫率为10%的全血100μL，接种当天记为d0；正常对照组为健康小鼠，不作任何处理。分别于d7、d14、d21、d28、d35采集各组小鼠尾尖血样制作薄血膜血片，观察并比较红细胞染虫情况。此外，分别于d7、d14、d21、d28、d35从各组随机选择5只小鼠，剖杀后取脾脏，测量脾脏大小和质量；分离脾细胞，使用流式细胞仪检测脾脏CD3e+T细胞、CD45R+B细胞、CD49b+自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）和巨噬细胞（M?细胞）(F4/80)等免疫细胞占CD45+淋巴细胞的比例。结果静脉接种组和腹腔接种组小鼠染虫率均于d7达到高峰，染虫率分别为22.80%、44.82%，差异有统计学意义（χ2=8.141,P<0.01）；随后两组染虫率均迅速下降，至d35时血涂片中已无法观察到虫体。静脉接种组小鼠脾脏长度[（32.91±2.20）mm]、宽度[（9.82±0.43）mm]及质量[（0.78±0.10）g]均于d14达最大值，腹腔接种组小鼠脾脏长度[（32.42±3.21）mm]、宽度[（10.25±0.73）mm]及质量[（0.73±0.09）g]分别在d21、d7、d14达最大值。d21时，静脉接种组、腹腔接种组、正常对照组小鼠脾脏长度、宽度和质量差异均有统计学意义（F=10.310、9.824、10.672,P均<0.05）；腹腔接种组小鼠脾脏长度、宽度和质量均大于静脉接种组（P均<0.05）。静脉接种组和腹腔接种组小鼠脾脏CD3e+T细胞[（60.60±6.20）%和（39.68±7.62）%]、CD45R+B细胞[（43.32±2.08）%)和（49.53±4.90）%]、CD49b+NK细胞[（6.88±1.34）%和（7.71±1.59）%]、M?细胞（F4/80）占比[（2.21±0.29）%和（3.80±0.35）%]分别于d14、d21、d21、d14达峰值。d14时，静脉接种组、腹腔接种组、正常对照组小鼠脾脏CD3e+T细胞和M?细胞（F4/80）占比差异均有统计学意义（F=16.730、15.941,P均<0.05）；静脉接种组小鼠脾脏CD3e+T细胞占比高于腹腔接种组，M?细胞（F4/80）占比低于腹腔接种组（P均<0.01）。d21时，3组小鼠脾脏CD3e+T细胞、CD45R+B细胞、CD49b+NK细胞和M?细胞（F4/80）占比差异均有统计学意义（F=9.252、14.349、13.436、8.180,P均<0.05）；静脉接种组小鼠脾脏CD3e+T细胞占比高于腹腔接种组，CD45R+B细胞和M?细胞（F4/80）占比均低于腹腔接种组（P均<0.01）。d28时，3组小鼠脾脏CD3e+T细胞占比差异有统计学意义（F=9.772,P<0.05）；静脉接种组CD3e+T细胞占比低于腹腔接种组（P<0.01）。结论腹腔接种和静脉接种均可致BALB/c小鼠感染田鼠巴贝虫，且腹腔接种后小鼠染虫率高于静脉接种。腹腔接种和静脉接种田鼠巴贝虫对小鼠脾脏形态和免疫细胞占比造成的影响存在差异，提示不同接种方式对小鼠免疫应答机制具有不同影响。

关键词：田鼠巴贝虫腹腔接种静脉接种脾脏免疫细胞小鼠

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果实套袋在菠萝蜜栽培管理中的应用

热带作物学报 2025年第1期46卷 143-151页

作者：钟瑶凤王政张绍华朱恩杭査学宗吴刚林先武季恒青孟倩倩海南大学热带农林学院/热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海南儋州571737 重庆市农业科学院农业资源与环境研究所重庆400042 重庆市疾病预防控制中心消毒与媒介生物控制所/高致病性病原微生物重庆市重点实验室重庆400042 中国热带农业科学院香料饮料研究所/海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室海南万宁571533

本研究为探明果实套袋在菠萝蜜栽培过程中对果实病虫害发生率、农药使用率及品质的影响,为菠萝蜜优质高效栽培技术提供支撑。以10个菠萝蜜品种珍珠果、香饮所11号、香饮所18号、泰国四季红、马来西亚1号、马来西亚2号、马来西亚3号、马... 详细信息

本研究为探明果实套袋在菠萝蜜栽培过程中对果实病虫害发生率、农药使用率及品质的影响,为菠萝蜜优质高效栽培技术提供支撑。以10个菠萝蜜品种珍珠果、香饮所11号、香饮所18号、泰国四季红、马来西亚1号、马来西亚2号、马来西亚3号、马来西亚4号、马来西亚5号和马来西亚6号为试验材料,计算套袋和未套袋果实的病虫害发生率及新增虫孔数,评价果实果皮及果肉色泽等外观品质,测定其果实可溶性固形物含量,统计整个生长季节的农药使用次数及施用量。结果表明:10个品种未套袋果实的软腐病发生率为10.48%~25.00%,套袋果实的软腐病发生率仅为0~2.62%,套袋后软腐病发生率降低77.55%~100.00%;各品种未套袋果实的炭疽病发生率为10.00%~30.24%,套袋果实的炭疽病发生率为0~4.56%,套袋后炭疽病发生率降低69.99%~100.00%;黄翅绢丝野螟在各品种未套袋果实的发生率为23.33%~37.50%,套袋果实的发生率为4.00%~8.33%,套袋后发生率降低74.62%~88.35%;各品种套袋果实的新增虫孔和出虫数均显著少于未套袋果实;与未套袋果实相比,套袋果实果形更加饱满,果面更加光洁,果皮着色均匀;未套袋果实果形存在畸形和果皮着色不均匀等缺点;套袋对10个品种菠萝蜜可溶性固形物含量无显著影响;菠萝蜜果实套袋后化学农药使用减少5次、施用量减少85.87%。综上,果实套袋可作为菠萝蜜的一种生态友好管理方法,在减施化学农药的同时,可减轻菠萝蜜病虫为害,且不降低果实品质。

关键词：菠萝蜜套袋病虫害色泽可溶性固形物农药使用率

山西省疾病预防控制中心病原微生物实验室管理的现状分析

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中国药物与临床 2020年第6期20卷 987-989页

作者：霍俊锋孙小芳张凡非王文军杨蓓山西省疾病预防控制中心科教科太原030012 山西省疾病预防控制中心质量管理科太原030012 山西医科大学第一医院普外科

近年来,为了预防和控制禽流感,肺结核,狂犬病,炭疽,艾滋病等传染病的出现和蔓延,各国都投入了大量的人力、物力来修建病原微生物实验室。为避免受到实验室传染性试验因子的伤害,我们要加强对实验室生物安全的管理[1]。为此,我国出台了... 详细信息

近年来,为了预防和控制禽流感,肺结核,狂犬病,炭疽,艾滋病等传染病的出现和蔓延,各国都投入了大量的人力、物力来修建病原微生物实验室。为避免受到实验室传染性试验因子的伤害,我们要加强对实验室生物安全的管理[1]。为此,我国出台了一系列政策、法规和标准,为实验室人员和群众人员的生命安全以及对环境的保护提供了有力的法律依据,同时,也让我国实验室安全管理进入了法制化时代[2],山西省疾病预防控制中心着重落实病原微生物实验室生物安全管理条例,着力加强了病原微生物实验室管理。现分析2006年、2012年、2018年我中心病原微生物实验室生物安全管理的情况,为未来病原微生物实验室生物安全管理提供建议与对策。

关键词：生物安全管理试验因子病原微生物实验室禽流感安全管理条例实验室人员疾病预防控制中心狂犬病

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汉坦病毒的流行及防治研究进展

中国医药指南 2025年第1期23卷 65-67页

作者：高文华赵春春周晓伦甘肃医学院基础医学院甘肃平凉744000 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室世界卫生组织媒介生物监测与管理合作中心北京102206

汉坦病毒是重要的人兽共患病原体之一,属于布尼亚病毒目、汉坦病毒科的正汉坦病毒属,其感染呈世界性分布。人感染后,可引起两种严重的疾病:肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒心肺综合征(HCPS),严重威胁人类健康。尽管全球科学家付出了巨... 详细信息

汉坦病毒是重要的人兽共患病原体之一,属于布尼亚病毒目、汉坦病毒科的正汉坦病毒属,其感染呈世界性分布。人感染后,可引起两种严重的疾病:肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒心肺综合征(HCPS),严重威胁人类健康。尽管全球科学家付出了巨大努力,汉坦病毒的防控依旧差强人意。该文就汉坦病毒的生物学特性、流行与防治等方面的相关进展做一个简要的综述,以期为其后续相关研究提供理论支持。

关键词：汉坦病毒生物学特性流行防治

实时细胞监测技术的人肠道病毒71型感染性检测方法研究

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病毒学报 2013年第4期29卷 392-397页

作者：滕峥匡小舟王嘉瑜张曦上海市疾病预防控制中心微生物实验室上海200336

开展基于微电子传感器技术的实时细胞监测技术(Real-time Cell Assay,RTCA)在人肠道病毒71型(HEV71)病毒诱导的细胞病变检测方法中的应用价值研究。动态观察RD细胞不同阶段的生长指数,选择合适的细胞浓度开展HEV71病毒感染力和血清中HE... 详细信息

开展基于微电子传感器技术的实时细胞监测技术(Real-time Cell Assay,RTCA)在人肠道病毒71型(HEV71)病毒诱导的细胞病变检测方法中的应用价值研究。动态观察RD细胞不同阶段的生长指数,选择合适的细胞浓度开展HEV71病毒感染力和血清中HEV71中和抗体效价测定。同时应用传统的微量试验作为方法学的比较和结果验证。细胞阻抗通过软件转换成细胞指数CI值和可视的动态变化曲线显示,在96电子孔板上,当RD细胞浓度为1.5×104个/孔时能满足HEV71病毒感染性检测的观察天数大于5d的要求。与传统显微镜观察细胞CPE的方法比较,两种方法在接种病毒后的132h(约5.5d)产生病毒致细胞病变的终点判断结果一致。在中和抗体试验中,三份感染HEV71病毒的人血清中和抗体效价CI值结果和传统的96孔微量板镜检法结果相符。实时细胞监测技术可以提示研究者,即使是终点判断结果为相同的中和抗体滴度的血清,其所含病毒诱导的细胞病变出现时间也可能有所不同。实时细胞监测技术用于HEV71病毒感染力和血清中和抗体效价检测与传统的微量板法检测相比可以节省劳力,消除人为判断的误差,可以作为传统检测方法的补充手段之一,也可以动态观察细胞病变的发生和发展,为进一步深入研究病毒感染力强弱或血清抗体消长提供更为科学的数据。

关键词：实时细胞监测技术(RTCA) 人肠道病毒71型(HEV71) 中和试验(NT)

2009年上海市手足口病流行病学和病原学特征

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病毒学报 2010年第6期26卷 437-442页

作者：滕峥檀晓娟邵俊杰张勇匡小舟张曦许文波上海市疾病预防控制中心微生物实验室上海200336 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京102206

本研究对上海市手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的流行病学和病原学特征进行了分析。从国家疾病监测信息报告管理系统获取上海市2009年HFMD的流行病学数据;采用荧光定量RT-PCR方法对来自上海15个区县的799例HFMD进行肠道病... 详细信息

本研究对上海市手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)的流行病学和病原学特征进行了分析。从国家疾病监测信息报告管理系统获取上海市2009年HFMD的流行病学数据;采用荧光定量RT-PCR方法对来自上海15个区县的799例HFMD进行肠道病毒(Enterovirus,EV)核酸检测;对部分肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)的VP1区和部分其它EV的VP4区序列进行测定和分析。采用Office excel软件进行简单数据统计分析,用BioEdit和MEGA软件进行病毒基因特征分析,通过BLAST服务器的在线比对进行EV型别鉴定。分析显示:上海市18个区县均有病例报告,地区分布无显著特点;小于6岁的婴幼儿期为疾病高发年龄段;4～7月为发病高峰期;EV71和柯萨奇病毒A16(Coxsackie virus A16,CA16)为主要病原,不同地区、不同月份的病原构成各不相同,CA16为轻症病例的主要病原,EV71则为重症病例的主要病原;基于VP1区序列分析,上海EV71毒株与C4a亚型毒株具有最近的亲缘性和最高的同源性;2株其它肠道病毒经鉴定属于CA2和CA10型。结果表明:EV71和CA16为2009年上海HFMD流行的主要病原,EV71属于C4a亚型;除EV71和CA16外,还存在小部分其它EV(如:CA2和CA10)引起的HFMD。

关键词：手足口病肠道病毒71型柯萨奇病毒A16型流行病学病原学

不同毒株脊髓灰质炎疫苗序贯免疫程序的免疫原性分析

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中华预防医学杂志 2019年第5期53卷 513-518页

作者：黄卓英孙晓冬刘敏勇李崇山任佳胡家瑜杨建萍刘捷宸李智杨玉颖李云逸陆菁上海市疾病预防控制中心免疫规划所 200336 上海市疾病预防控制中心病原生物检定所 200336

目的评价不同毒株脊髓灰质炎(脊灰)疫苗序贯免疫程序的免疫原性。方法采用平行对照设计,于2016年3月至2017年9月,在上海市招募各区符合纳入排除标准的预防接种门诊受种者为研究对象,以Sabin株脊灰灭活疫苗(sIPV)、野毒株脊灰灭活疫苗(wI... 详细信息

目的评价不同毒株脊髓灰质炎(脊灰)疫苗序贯免疫程序的免疫原性。方法采用平行对照设计,于2016年3月至2017年9月,在上海市招募各区符合纳入排除标准的预防接种门诊受种者为研究对象,以Sabin株脊灰灭活疫苗(sIPV)、野毒株脊灰灭活疫苗(wIPV)和Ⅰ+Ⅲ型脊灰减毒活疫苗(bOPV)作为研究疫苗,按照4种序贯免疫程序进行基础免疫并分组,即接种sIPV+sIPV+bOPV、sIPV+wIPV+bOPV、wIPV+sIPV+bOPV和wIPV+wIPV+bOPV组,完成基础免疫前采血、基础免疫并采血者共151名,每组分别为36、44、30和41名;检测并计算脊灰Ⅰ、Ⅲ型中和抗体几何平均滴度(GMT)对数转换值,分析研究对象基础免疫后抗体阳性及阳转情况。结果151名研究对象的月龄为(2.27±0.61)个月,出生体重为(3.27±0.43)kg,其中男性为70名。脊灰Ⅰ型中和抗体阳转率为98.68%(149例),Ⅲ型为97.35%(147例);各组分别检测了36、44、30和41名,免疫后Ⅰ型阳转率分别为97.22%(35例)、100.00%(44例)、96.67%(29例)和100.00%(41例)(P=0.345),Ⅲ型分别为97.22%(35例)、95.45%(42例)、96.67%(29例)和100.00%(41例)(P=0.614)。结论同时或交替使用sIPV和wIPV开展脊髓灰质炎疫苗序贯免疫程序对于适龄婴儿均具有良好的免疫原性。

关键词：脊髓灰质炎免疫活性疫苗,灭活序贯程序实验研究

上海地区2006-2009年分离的大肠埃希菌O157特征分析研究

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中国人兽共患病学报 2011年第3期27卷 225-228,232页

作者：盛跃颖陈敏陈洪友姜华张曦吴凡上海市疾病预防控制中心微生物实验室上海200336

目的分析2006年至2009年在上海地区各监测点从病人、动物粪便及食品中分离的13株大肠埃希菌O157(***157)携带毒力基因的情况,分子分型特征及各菌株之间的相关性。方法利用聚合酶链反应(PCR)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,结合生化鉴定、... 详细信息

目的分析2006年至2009年在上海地区各监测点从病人、动物粪便及食品中分离的13株大肠埃希菌O157(***157)携带毒力基因的情况,分子分型特征及各菌株之间的相关性。方法利用聚合酶链反应(PCR)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,结合生化鉴定、血清学分型的表型分析方法及Vero细胞毒性试验对上海地区分离的13株***157进行研究。结果 PCR结果显示有9株菌株的菌体抗原基因O157,鞭毛抗原基因H7及毒力基因stx2,hly,eaeA检测结果均为阳性,其中1株食品分离株的stx1基因检测结果也为阳性;9株菌均对Vero细胞有毒性作用。其余4株牛粪分离株,除O157基因检测结果为阳性外,其他检测结果均为阴性。13株上海分离株可分成6个PFGE型别。其中1株食品分离株与同样带有stx1基因的德国分离株的图谱最为接近;2株腹泻病人分离株属于同一PFGE型别;6株牛粪分离株的PFGE型别相同或高度相似。其余4株不携带毒力基因的牛粪分离株为不相关菌株。结论上海地区从病人、动物粪便和食品中都分离获得了能产生stx毒素的***157,提示需加强对该菌的监测。

关键词：大肠埃希菌O157 聚合酶链反应脉冲场凝胶电泳