检索结果-南通市图书馆

Tmem119基因敲入荧光示踪工具小鼠的构建及表型验证

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术 2023年第2期33卷 143-149,168页

作者：梁敏李青郭洋王成稷陈艳娟董全全沈如凌上海实验动物研究中心上海201203 上海市模式动物工程技术研究中心上海201318 上海南方模式生物科技股份有限公司上海201318

[目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了Tmem119-tdTomato工具小鼠模型,并对该小鼠进行表型验证。[方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6... 详细信息

[目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了Tmem119-tdTomato工具小鼠模型,并对该小鼠进行表型验证。[方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6小鼠受精卵中,通过交配及基因型鉴定获得F1代阳性小鼠;通过荧光检测验证小鼠Tmem119蛋白在大脑各区域的表达情况。[结果]基因型检测结果表明,tdTomato表达片段成功插入到Tmem119基因终止密码子前;免疫荧光检测结果表明,tdTomato蛋白荧光在小胶质细胞内与经典标记蛋白Iba1荧光重叠,与星形胶质细胞标记蛋白GFAP不重叠。[结论]成功构建特异性标记小胶质细胞的红色荧光示踪工具小鼠,为小胶质细胞的动态深入研究提供模式工具。

关键词： Tmem119 小胶质细胞 CRISPR/Cas9 基因编辑小鼠模型

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

β2m基因敲除小鼠构建

生物工程学报 2021年第8期37卷 2924-2935页

作者：李振孙瑞林刘雯复旦大学基础医学院细胞与遗传医学系上海200300 上海南方模式生物科技股份有限公司上海201318

2m(Beta-2-microglobulin)基因编码一个非糖基化蛋白,作为主要组织相容性复合体1类(MHCⅠ)的重要组分,发挥抗原递呈的作用。为了避免免疫介导的清除,人类肿瘤和病原体采取了不同的策略,其中包括MHCⅠ表达的丢失。合适的动物模型对于评... 详细信息

2m(Beta-2-microglobulin)基因编码一个非糖基化蛋白,作为主要组织相容性复合体1类(MHCⅠ)的重要组分,发挥抗原递呈的作用。为了避免免疫介导的清除,人类肿瘤和病原体采取了不同的策略,其中包括MHCⅠ表达的丢失。合适的动物模型对于评估和开发肿瘤及其他疾病的临床治疗新方法,以及阐明目前临床有效治疗方法的机制至关重要。利用CRISPR/Cas9基因编辑、显微注射等方法构建了β2m基因敲除小鼠。随后,通过PCR鉴定、qPCR、流式分析等实验技术进行基因型和表型鉴定。基因型鉴定结果显示在该品系小鼠中,目的基因编码区目标区域缺失。qPCR检测发现,β2m的mRNA水平发生显著的下调。流式结果显示,在不同的免疫组织和器官中,CD8^(+)杀伤性T细胞显著减少。综上,成功构建β2m基因敲除小鼠,为后续体内研究β2m基因的功能奠定了基础。

关键词：主要组织相容性复合物 β2m 基因敲除小鼠 CRISPR/Cas9

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PD-L1基因敲除小鼠构建及初步表型验证

中国生物工程杂志 2019年第12期39卷 42-49页

作者：万颖寒慈磊王珏龚慧李俊董茹孙瑞林费俭沈如凌模式生物及比较医学研究联合实验室上海实验动物研究中心上海201203 同济大学生命科学与技术学院上海200092 上海南方模式生物科技股份有限公司上海201318

目的:程序性死亡配体-1(PD-L1)是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一。利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注... 详细信息

目的:程序性死亡配体-1(PD-L1)是免疫调节途径的重要因子,是抗肿瘤免疫疗法中重要的靶标之一。利用CRISPR/Cas9技术成功构建PD-L1基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。方法:构建Cas9和sgRNA载体,并转录获得RNA,通过显微注射方式将RNA注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经过鉴定获得F0代阳性小鼠。F0代小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配获得F1代杂合子小鼠,再通过F1代小鼠自交获得F2代纯合子小鼠品系。随后通过Real-Time PCR和流式实验分别检测PD-L1基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。结果:Real-Time PCR和流式实验检测结果显示与野生型C57小鼠相比,PD-L1纯合子小鼠的PD-L1 mRNA相对表达水平和细胞上的蛋白质表达均有显著性下降,仅测定到本底的信号,证实已成功构建PD-L1基因敲除小鼠品系,为PD-L1体内基因功能研究提供了新的小鼠模型。

关键词： PD-L1 PD-1 CRISPR/Cas9 基因敲除

淋巴细胞活化基因-3敲除(Lag-3-/-)小鼠构建及初步表型分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国实验动物学报 2020年第1期28卷 49-57页

作者：万颖寒慈磊王珏龚慧万志鹏奚骏何敏珠孙瑞林费俭沈如凌上海实验动物研究中心上海201203 模式生物技术联合实验室上海实验动物研究中心上海201203 同济大学生命科学与技术学院上海200092 上海南方模式生物科技股份有限公司上海201318

目的构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR... 详细信息

目的构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析Lag-3基因敲除对小鼠表型影响,为后续Lag-3体内功能研究提供动物模型。方法利用CRISPR/Cas9技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用RT-PCR和流式检测方法进一步验证Lag-3基因敲除小鼠体内Lag-3基因敲除效果;通过建立Con A诱导的肝损伤模型研究Lag-3基因在体内的功能。结果PCR和产物测序结果显示,获得了exon 2缺失的Lag-3基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠(Lag-3-/-)经刀豆蛋白(Con A)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Lag-3 mRNA本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Lag-3阳性细胞。表型分析发现,Lag-3基因的缺失显著减少了Con A诱导的小鼠外周血、骨髓和脾CD3+T细胞的数量,减轻了Con A诱发的急性肝损伤情况。结论成功构建Lag-3基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag-3缺失可以显著缓解Con A引发的肝损伤的发生。

关键词： Lag-3 CRISPR/Cas9 基因敲除刀豆蛋白

C57BL/6J、129/SvJ及其杂交一代小鼠的行为学比较研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实验动物与比较医学 2019年第6期39卷 429-436页

作者：万颖寒沈如凌王珏龚慧李俊董茹费俭上海实验动物研究中心/同济大学生命科学与技术学院模式生物技术联合实验室上海201203 上海南方模式生物科技股份有限公司上海模式动物工程技术研究中心上海201318

目的比较C57BL/6J和129/SvJ两种不同遗传背景及其杂交一代(F1)在行为学表型上的差异。方法将C57BL/6J小鼠和129/SvJ小鼠交配繁育,得到两种F1小鼠129B6F1和B6129F1,连同C57BL/6J和129/SvJ按照不同性别分为8组,每组小鼠数量n≥12,进行旷... 详细信息

目的比较C57BL/6J和129/SvJ两种不同遗传背景及其杂交一代(F1)在行为学表型上的差异。方法将C57BL/6J小鼠和129/SvJ小鼠交配繁育,得到两种F1小鼠129B6F1和B6129F1,连同C57BL/6J和129/SvJ按照不同性别分为8组,每组小鼠数量n≥12,进行旷场活动、悬尾、水迷宫、被动回避、热板实验等行为学研究,分别从焦虑、抑郁、学习记忆、热痛四个方面比较C57BL/6J和129/SvJ小鼠及F1小鼠的行为表现。结果在旷场活动中,与129/SvJ比较,F1在外周、边缘的活动差异显著(P<0.01);在悬尾活动中,F1的行为没有显著性差异;在水迷宫和被动回避活动中,与C57BL/6J比较,F1寻找到平台的潜伏期和进入暗箱的潜伏期差异显著(P<0.05)。结论 F1的不同行为表型受到亲代的不同遗传背景影响。

关键词：近交系小鼠 C57BL/6J 129/SvJ 杂交一代(F1) 行为学

Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型的建立及表型分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

实验动物与比较医学 2014年第5期34卷 345-352页

作者：郑晋华何敏珠奚骏庄华王铸钢匡颖上海南方模式生物研究中心上海201203 上海南方模式生物科技发展有限公司上海201203

目的建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型并开展相关表型分析,以满足我国糖尿病相关研究和药物研发的需求.方法通过基因工程技术建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型,测定三种基因型小鼠体质量、血糖变化;分别取三种基因型8月龄小鼠,检测... 详细信息

目的建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型并开展相关表型分析,以满足我国糖尿病相关研究和药物研发的需求.方法通过基因工程技术建立Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型,测定三种基因型小鼠体质量、血糖变化;分别取三种基因型8月龄小鼠,检测血糖、血清胰岛素,以及肝功能、肾功能、血脂等血液生化指标,进行统计分析;对纯合子和野生型小鼠的肝脏、肾脏进行病理分析.结果成功获得Leprtm1Srcmo基因敲入小鼠模型;初步表型分析显示：Leprtm1Srcmo基因敲入纯合子小鼠出生4周起即表现出过度肥胖,纯合子雄鼠表现出高血糖、高胰岛素、脂质代谢紊乱、肝肾功能异常等表型,13月龄Leprtm1Srcmo小鼠血糖恢复正常;病理检测发现,Leprtm1Srcmo小鼠肝肿大,并出现肝细胞空泡化等脂肪变性现象,以及肾小球肥大等病理改变.结论该模型的建立为进一步研究2型糖尿病发病机制及治疗方法奠定了基础.

关键词： Lepr基因基因敲入小鼠 2型糖尿病

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Afp-cre-lacZ转基因小鼠的构建

实验动物与比较医学 2017年第2期37卷 89-93页

作者：顾晓雯孙瑞林费俭同济大学生命科学与技术学院上海200092 上海南方模式生物科技股份有限公司上海201203

目的研究甲胎蛋白(Afp)阳性细胞的增殖分化在组织生长修复,肿瘤发生过程中的作用,建立Afp-CreERT转基因小鼠细胞示踪系统。方法采用DNA雄原核显微注射方法获得Afp-CreERT转基因小鼠,筛选出合适的品系后,使之与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,... 详细信息

目的研究甲胎蛋白(Afp)阳性细胞的增殖分化在组织生长修复,肿瘤发生过程中的作用,建立Afp-CreERT转基因小鼠细胞示踪系统。方法采用DNA雄原核显微注射方法获得Afp-CreERT转基因小鼠,筛选出合适的品系后,使之与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,获得Cre/lacZ双阳性的Afp-cre-lacZ转基因小鼠。结果显微注射后,共出生小鼠56只,经PCR鉴定Cre阳性小鼠共4只,阳性小鼠传代后各为一系。筛选内源性Afp表达与Cre表述相对符合的品系作为Afp-CreERT转基因小鼠品系建系。Afp-CreERT转基因小鼠与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,经PCR鉴定后获得Cre/lacZ双阳性的Afp-cre-lacZ转基因小鼠。经实时PCR,X-gal染色,免疫荧光染色鉴定后得到Afp-cre-lacZ转基因小鼠细胞示踪系统,同时证实该系统能够正确示踪Afp表达阳性的细胞,同时也能够应用于肝损伤小鼠模型中。结论成功构建了Afp-cre-lacZ转基因小鼠细胞示踪系统,为研究这类细胞的谱系发生提供了工具。

关键词：甲胎蛋白(Afp) 转基因小鼠模型细胞示踪

固定比率为10的大鼠吗啡静脉注射自身给药模型建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国新药杂志 2020年第3期29卷 269-274页

作者：李贝贝张欢谢行舟邱云良中国医药工业研究总院上海益诺思生物技术股份有限公司上海201203 上海工程技术大学化学化工学院上海201620

目的:建立固定比率为10(FR10)的大鼠吗啡静脉注射(iv)自身给药模型。方法:先对20只雄性SD大鼠进行2种条件刺激程序下的食物训练,比较2种程序下训练效果差异,大鼠学会踏板后进行颈静脉插管手术,手术恢复期过后以吗啡训练剂量(0.5 mg·kg... 详细信息

目的:建立固定比率为10(FR10)的大鼠吗啡静脉注射(iv)自身给药模型。方法:先对20只雄性SD大鼠进行2种条件刺激程序下的食物训练,比较2种程序下训练效果差异,大鼠学会踏板后进行颈静脉插管手术,手术恢复期过后以吗啡训练剂量(0.5 mg·kg^-1·injection^-1)进行FR1模式下静脉注射自身给药的建立,2 h·d^-1,随后进行消退测试证明动物已经吗啡成瘾,接着恢复FR1自身给药行为后提升难度至FR10,FR10自身给药稳定后依次替换吗啡剂量为0.125,0.25,0.5和1.0 mg·kg^-1·injection^-1,每个剂量连续替换3 d,进行剂量反应关系的测试。结果:20只雄性大鼠,在食物训练阶段的2种条件刺激程序下均有8只动物食物训练成功,但2种程序训练效果无明显差别;FR1自身给药阶段有13只动物成功建立FR1静脉注射自身给药行为和消退测试,并呈现出了明显的消退特点;FR10自身给药阶段有5只动物成功建立FR10静脉注射自身给药稳定行为并呈现出典型的"倒U"型剂量反应曲线。结论:通过FR1静脉注射自身给药行为的建立和消退,以及FR10静脉注射自身给药行为建立和剂量反应关系的结果分析,本实验初步建立了FR10模式下的静脉注射自身给药模型。

关键词：自身给药吗啡 FR10 依赖性评价食物训练

Onconase对B16黑色素瘤细胞的体内外生长抑制作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞生物学杂志 2007年第6期29卷 901-904页

作者：沈如凌孙瑞林王庆诚欧伶费俭华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 中国科学院上海生命科学研究院上海200031 上海南方模式生物科技发展有限公司上海201203

Onconase(Onc)是一种从林蛙(Rana pipiens)卵细胞内提取的核酸酶,实验证实其在体外和体内对多种肿瘤细胞都具有显著的杀伤效果。在大肠杆菌中表达纯化的重组Onc和天然提取蛋白质具有相似的活性,通过测定该蛋白质对黑色素瘤B16细胞的IC5... 详细信息

Onconase(Onc)是一种从林蛙(Rana pipiens)卵细胞内提取的核酸酶,实验证实其在体外和体内对多种肿瘤细胞都具有显著的杀伤效果。在大肠杆菌中表达纯化的重组Onc和天然提取蛋白质具有相似的活性,通过测定该蛋白质对黑色素瘤B16细胞的IC50和建立荷瘤小鼠模型探讨了Onc体内外的抗肿瘤效果。实验结果表明:B16细胞在体外对Onc敏感性较K562细胞低,其IC50为6.37μmol/L;但体内每次每只小鼠给予5mg/kg Onc也可显著地抑制B16细胞的生长,延长小鼠的生存时间。实验提供了一种简化高效获得具有天然活性Onc的方法,同时通过Onc对低敏感性肿瘤黑色素瘤细胞的杀伤研究,丰富了对Onc抗肿瘤作用的认识,为治疗黑色素瘤提供了线索。

关键词： onconase 黑色素瘤动物模型抗肿瘤