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探讨适用于HE染色、免疫组织化学染色和分子检测的最佳脱色素方法

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中华病理学杂志 2024年第6期53卷 570-577页

作者：张文雯邱雅婷吴晨榆柯龙凤朱伟峰陈刚陈燕坪福建医科大学肿瘤临床医学院福建省肿瘤医院病理科福州350014 福建医科大学肿瘤临床医学院福建省肿瘤医院分子病理研究室福州350014

目的探索适用于HE染色、免疫组织化学染色和分子检测的最佳脱色素方法。方法收集2018年1月至2022年3月福建省肿瘤医院病理科38例富含黑色素的黑色素瘤石蜡标本,制成组织芯片,分别采用水浴过氧化氢法、双重氧化脱色素法、改良高锰酸钾法... 详细信息

目的探索适用于HE染色、免疫组织化学染色和分子检测的最佳脱色素方法。方法收集2018年1月至2022年3月福建省肿瘤医院病理科38例富含黑色素的黑色素瘤石蜡标本,制成组织芯片,分别采用水浴过氧化氢法、双重氧化脱色素法、改良高锰酸钾法、三氯异氰尿酸法脱黑色素后行HE染色。之后将切片分成2个队列,第1个队列分别采用上述4种方法脱色素后再行免疫组织化学染色(SOX10、Ki-67、HMB45和Melan A);第2个队列先行同样指标的免疫组织化学染色后再分别采用上述4种方法脱色素。另收集其中色素含量较高的17例石蜡标本,采用上述4种方法脱黑色素后提取DNA,进行DNA浓度及质量的测定。比较分析不同脱色素方法的脱色素能力,以及对HE和免疫组织化学染色的效果、DNA浓度和质量的影响。结果在脱黑色素能力方面,改良高锰酸钾法和水浴过氧化氢法脱色素效果最好,均仅5.26%(2/38)有少量色素残留;其次是三氯异氰尿酸法,10.53%(4/38)有大量色素残留;最差的是双重氧化脱色素法,15.79%(6/38)有大量色素残留。在HE染色方面,水浴过氧化氢法脱色素后染色好的比例达92.11%,优于其他3种方法。在免疫组织化学染色方面,改良高锰酸钾法、双重氧化脱色素法和三氯异氰尿酸法,先免疫组织化学染色后脱色素的染色评分均值分别为20.84、26.63和35.02,均优于先脱色素后免疫组织化学的染色评分均值(8.70、15.41和21.22);水浴过氧化氢法,先脱色素后免疫组织化学的染色评分均值为33.57,优于先免疫组织化学染后脱色素的染色评分均值(19.96)。HMB45、Melan A和Ki-67这3个指标采用先免疫组织化学染色后三氯异氰尿酸脱色素的染色评分分别为36.45、33.79和36.24,效果最佳;SOX10采用先水浴过氧化氢法脱色素后免疫组织化学染色的评分为34.39,效果最佳。在DNA浓度及质量方面,采用双重氧化脱色素法、改良高锰酸钾法及三氯异氰尿酸法脱色素后,DNA降解严重;而水浴过氧化氢法脱色素后提取的DNA平均浓度为59.59μg/L,显著高于未经脱色素处理的平均DNA浓度(30.3μg/L,P=0.001);DNA的吸光度值A_(260)/A_(280)均在1.8~2.0之间,A_(260)/A_(230)16例在2.0以上,而未经脱色素处理提取的DNA中8例A_(260)/A_(280)免疫组织化学染色后采用三氯异氰尿酸法脱色素,色素残留少,染色效果佳,且方便快捷。同一种脱色素方法对不同的抗体染色效果不同,可根据要检测的抗体选择最佳的脱色素方法。

关键词：黑色素瘤分子诊断技术免疫组织化学

程序性死亡受体1抑制剂通过促进细胞焦亡加重放射性心肌损伤的研究

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中华放射医学与防护杂志 2024年第4期44卷 255-261页

作者：赵沙沙吴碧波柏杰王刚刘瑶王羽胡银祥欧阳伟炜卢冰苏胜发贵州医科大学附属医院肿瘤科贵阳550004 贵州医科大学附属肿瘤医院肿瘤科贵阳550004 贵州医科大学肿瘤学教研室贵阳550004

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂通过细胞焦亡通路对放射性心肌损伤的影响。方法20只C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为4组:健康对照组;PD-1抑制剂组;单纯照射组(胸部单次照射20 Gy);照射联合PD-1抑制剂组,每组5只。超声心动测试... 详细信息

目的探讨程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂通过细胞焦亡通路对放射性心肌损伤的影响。方法20只C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为4组:健康对照组;PD-1抑制剂组;单纯照射组(胸部单次照射20 Gy);照射联合PD-1抑制剂组,每组5只。超声心动测试评价受照后1个月小鼠左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、左室缩短率(FS);采用苏木精-伊红(HE)、Masson染色观察心肌组织病理学改变;蛋白免疫印迹、实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测心肌组织焦亡关键因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白介素18(IL-18)、IL-1β表达;流式细胞术检测心肌淋巴细胞浸润情况。结果照射后1个月,照射联合PD-1抑制剂组的LVEF、FS、SV较单纯照射组下降(t=4.50、27.93、3.11,P0.05)。结论PD-1抑制剂可通过Caspase-1/GSDMD促进细胞焦亡,进而加重放射性心肌损伤。

关键词：程序性死亡受体1抑制剂焦亡心肌损伤放射

1例肢端黑色素瘤迟发全身转移^(18)F-FDG PET/CT表现

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中国医学影像技术 2024年第4期40卷 632-633页

作者：胡秋园冯成涛刘欣李健陈龙云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三附属医院)PET-CT/MR中心云南昆明650118 云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三附属医院)病理科云南昆明650118

患者男,67岁,右肩持续钝痛1周;右手拇指黑色素瘤切除术后7年、右侧腋窝淋巴结转移切除术后1年。查体:右肩活动受限,局部压痛;右手拇指指甲部分缺如,甲床裸露;右侧腋窝扪及多个质硬结节,较大者约3cm×3cm,活动度差。实验室检查无明显异常... 详细信息

患者男,67岁,右肩持续钝痛1周;右手拇指黑色素瘤切除术后7年、右侧腋窝淋巴结转移切除术后1年。查体:右肩活动受限,局部压痛;右手拇指指甲部分缺如,甲床裸露;右侧腋窝扪及多个质硬结节,较大者约3cm×3cm,活动度差。实验室检查无明显异常。^(18)F-FDG PET/CT:右侧肩胛骨骨质破坏伴软组织肿块形成。

关键词：黑色素瘤肿瘤转移正电子发射断层显像

卵巢癌细胞株SKOV3中诱导产生的多倍体瘤巨细胞生物学特性

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肿瘤研究与临床 2024年第3期36卷 199-204页

作者：乔爱琪闫晓燕梁钢郗彦凤李灵敏山西医科大学第一医院病理科太原030001 山西医科大学第一医院妇科太原030001 山西省肿瘤医院、中国医学科学院肿瘤医院附属山西医院、山西医科大学附属肿瘤医院病理科太原030013 山西医科大学病理教研室太原030001

目的探讨CoCl_(2)诱导卵巢癌细胞株SKOV3产生的多倍体瘤巨细胞(PGCC)的形态及生物学特性。方法采用300μmol/L CoCl_(2)模拟缺氧环境诱导培养人卵巢癌细胞株SKOV336 h,活细胞继续常规培养、传代,20 d后收集细胞,即为PGCC组细胞;以常规... 详细信息

目的探讨CoCl_(2)诱导卵巢癌细胞株SKOV3产生的多倍体瘤巨细胞(PGCC)的形态及生物学特性。方法采用300μmol/L CoCl_(2)模拟缺氧环境诱导培养人卵巢癌细胞株SKOV336 h,活细胞继续常规培养、传代,20 d后收集细胞,即为PGCC组细胞;以常规培养的SKOV3细胞为对照组细胞。采用倒置显微镜观察PGCC的形成过程及形态学特点;采用免疫细胞化学法检测两组细胞肿瘤干细胞标志物OCT4、CD117的表达;采用人骨髓间质干细胞成脂诱导分化试剂盒、人骨髓间质干细胞成骨诱导分化试剂盒检测PGCC的脂肪分化及骨分化潜能;划痕实验检测PGCC的细胞迁移能力。采用1μmol/L紫杉醇分别处理PGCC组和对照组SKOV3细胞,分别在0、24、48 h用显微镜观察两组细胞形态,检测PGCC对化疗药物的抗性。结果显微镜下观察,常规培养液培养的SKOV3细胞中有极少量PGCC;CoCl_(2)可以诱导SKOV3细胞形成PGCC,其形态近似圆形、缺乏分枝,体积为SKOV3细胞的3倍及以上,细胞核多为巨核或多核,PGCC可以出芽方式产生子代细胞。免疫细胞化学染色结果显示,部分PGCC中OCT4阳性表达,无CD117阳性表达;SKOV3细胞中OCT4和CD117均未表达。使用人骨髓间质干细胞成脂诱导分化培养液培养,在第3个周期时可观察到PGCC胞质内有较大的空泡形成,油红O染色显示为橙红色、类圆形的脂滴;使用人骨髓间质干细胞成骨诱导分化培养液培养20 d,茜素红染色可观察到PGCC组细胞较对照组细胞有明显的钙结节形成。细胞划痕实验结果显示,划痕后24、48 h,使用无血清培养液培养PGCC的迁移率[(59±1)%、(66±3)%]均高于对照组细胞的迁移率[(11±3)%、(14±5)%](t值分别为32.20、19.55,均P肿瘤干细胞的特性:表达肿瘤干细胞标志物,具有多向分化潜能和较强的化疗药物抗性。

关键词：卵巢肿瘤多倍性肿瘤干细胞细胞分化抗药性

CDK8通过JAK2/STAT3/EMT途径促进食管鳞状细胞癌的细胞增殖、迁移和侵袭(英文)

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生物化学与生物物理进展 2024年

作者：屈杭帅田雄潘怡晓鲍佳倩叶璐霞郑敬民温州医科大学附属台州医院公共实验室温州医科大学附属台州医院病理科

目的本研究旨在探究细胞周期蛋白依赖性激酶8（cyclin-dependentkinase8，CDK8）在食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）中的表达情况及其对ESCC细胞的影响，并探讨潜在的分子机制。方法首先通过UALCAN数据库分析... 详细信息

目的本研究旨在探究细胞周期蛋白依赖性激酶8（cyclin-dependentkinase8，CDK8）在食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）中的表达情况及其对ESCC细胞的影响，并探讨潜在的分子机制。方法首先通过UALCAN数据库分析了CDK8mRNA的表达水平，然后利用免疫组织化学技术检测了CDK8蛋白在ESCC患者肿瘤组织中的表达水平。利用慢病毒稳定转染食管癌Kyse-30及Kyse-150细胞株以敲低及过表达CDK8，通过EdU增殖实验、细胞集落形成实验、细胞周期实验、细胞划痕实验和侵袭实验等多种方法探究CDK8蛋白的表达水平改变对食管鳞癌细胞表型的影响。随后，通过小鼠皮下成瘤试验观察CDK8对体外食管癌移植瘤生长的影响。最后通过蛋白质印迹法检测增殖和转移相关蛋白质的表达情况。结果与正常食管组织相比，CDK8在ESCC组织中转录和蛋白质表达水平均较高。敲低CDK8的表达能够显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭；此外，抑制CDK8表达可显著影响JAK2/STAT3通路以及E-cadherin/N-cadherin/Vimentin的表达，过表达CDK8则可以逆转上述结果，抑制STAT3通路逆转了CDK8过表达对ESCC细胞表型的促进作用。结论 CDK8是ESCC的促癌因子，可介导JAK2/STAT3磷酸化水平以及上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition， EMT）的过程。

关键词： CDK8 食管鳞状细胞癌 JAK2/STAT3 上皮-间充质转化

高糖环境下肝细胞外泌体对胰腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

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中国普通外科杂志 2024年第3期33卷 376-385页

作者：杨昊长许永宁廖嘉华杨馨玥秦雯广西医科大学基础医学院病理生理学教研室广西南宁530021 广西医科大学附属武鸣医院病理科广西南宁530199 广西医科大学第二附属医院病理科广西南宁530005

背景与目的:在肿瘤微环境的影响和调控下,一些非肿瘤细胞通过外泌体在肿瘤的转移中起着关键作用。研究表明在胰腺癌中,高糖微环境可以促进其侵袭和转移。肝脏既是糖代谢的重要器官,也是胰腺癌转移的高发器官,胰腺癌肝转移的机制尚不清... 详细信息

背景与目的:在肿瘤微环境的影响和调控下,一些非肿瘤细胞通过外泌体在肿瘤的转移中起着关键作用。研究表明在胰腺癌中,高糖微环境可以促进其侵袭和转移。肝脏既是糖代谢的重要器官,也是胰腺癌转移的高发器官,胰腺癌肝转移的机制尚不清楚。因此,本研究探讨在高糖微环境下肝细胞分泌的外泌体对胰腺癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法:将永生化肝细胞MIHA分别在高糖与正常糖培养基中培养后,从上清液中提取外泌体,并通过透射电镜、粒径分析和Western blot对两种培养基来源的外泌体进行鉴定;用荧光染料PKH67标记两种培养基来源的外泌体后,分别与荧光染料DAPI标记的胰腺癌细胞PANC-1共培养,通过实时激光扫描共聚焦显微镜观察PANC-1细胞对外泌体的吞噬情况。将PANC-1细胞分别与高糖培养基来源的外泌体(高糖组)及正常糖培养基来源的外泌体(正常糖组)共培养,以未加外泌体培养的PANC-1细胞为阴性对照组,随后分别用划痕试验、Transwell实验检测各组PANC-1细胞的迁移与侵袭能力,用Western blot检测各组PANC-1细胞中上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达。结果:透射电镜显示,从MIHA细胞的两种培养基上清液中均提取出较多具有脂质双层膜结构的球形囊泡,直径为40~150 nm;Western blot显示提取物的外泌体标志蛋白CD9和CD63均为阳性;实时激光扫描共聚焦显微镜观察到两种培养基来源的外泌体均可被PANC-1细胞摄取。划痕试验与Transwell实验结果显示,高糖组PANC-1细胞的迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数均明显高于阴性对照组(均P0.05)结论:高糖环境下肝细胞来源的外泌体能够促进胰腺癌细胞的侵袭、迁移,其作用机制可能与调控胰腺癌细胞EMT相关蛋白的表达有关。

关键词：胰腺肿瘤肿瘤微环境高血糖症外泌体肿瘤浸润上皮-间质转化

T1期结直肠癌淋巴结转移风险因素的研究进展

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中国肿瘤临床 2024年第7期51卷 372-376页

作者：李林骏石素钰洁(综述) 杨雅莹(审校) 重庆医科大学附属第一医院病理科重庆市400010 重庆医科大学病理学教研室重庆医科大学分子医学检测中心

随着内镜技术的发展,结直肠癌的早筛得以广泛推广,越来越多的T1期结直肠癌患者接受了肿瘤内镜切除。T1期结直肠癌内镜切除后是否需要进一步追加肠段切除并进行区域淋巴结的清扫,应根据组织病理学结果判断淋巴结转移的风险。根据目前国... 详细信息

随着内镜技术的发展,结直肠癌的早筛得以广泛推广,越来越多的T1期结直肠癌患者接受了肿瘤内镜切除。T1期结直肠癌内镜切除后是否需要进一步追加肠段切除并进行区域淋巴结的清扫,应根据组织病理学结果判断淋巴结转移的风险。根据目前国内外指南中的风险因素进行追加手术后,结果仅约10%的T1型结直肠癌患者发现淋巴结转移,其余患者并未发现存在淋巴结转移,导致了大量的追加手术切除无临床获益。因此,目前亟需一项更为准确的淋巴结转移风险评估体系来解决该问题,本文就T1期结直肠癌淋巴结转移的风险因素评估体系的现状进行综述,并探讨其发展前景。

关键词：早期结直肠癌淋巴结转移临床病理特征

伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤的临床病理特征及预后分析

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临床与实验病理学杂志 2024年第7期40卷 730-735页

作者：何时吴晨榆卢舒怡柯龙凤邱雅婷张文雯陈刚陈燕坪福建医科大学肿瘤临床医学院/福建省肿瘤医院病理科福州350014 福建医科大学肿瘤临床医学院/福建省肿瘤医院分子病理研究室福州350014

目的探讨伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤(large B-cell lymphoma with IRF4 rearrangement, LBCL-IRF4r)的临床病理学特征、诊断和鉴别诊断。方法收集8例LBCL-IRF4r临床资料,采用HE染色、免疫组化EnVision两步法、原位杂交和FISH法进行检... 详细信息

目的探讨伴IRF4重排的大B细胞淋巴瘤(large B-cell lymphoma with IRF4 rearrangement, LBCL-IRF4r)的临床病理学特征、诊断和鉴别诊断。方法收集8例LBCL-IRF4r临床资料,采用HE染色、免疫组化EnVision两步法、原位杂交和FISH法进行检测,观察组织学、免疫表型和分子遗传学特征,并结合相关文献进行复习。结果 8例LBCL-IRF4r中,男女比为1.67∶1,年龄10~53岁,平均25.8岁,其中发生于扁桃体5例,鼻咽2例,左腹股沟淋巴结1例。镜下肿瘤呈滤泡、弥漫或滤泡和弥漫混合的生长模式,肿瘤细胞为典型的中心母细胞或中等至大的母细胞样细胞,具有细腻的染色质和不明显的核仁,核分裂象、凋亡小体易见,未见星空现象。免疫表型:8例LBCL-IRF4r的肿瘤细胞均弥漫强表达CD20(8/8)、PAX5(2/2)、CD79a(3/3)、BCL6(8/8)和MUM-1(8/8),表达CD10(7/8)、BCL2(5/8)和CD5(4/8),不表达Cyclin D1、CD23、CD30,Ki67增殖指数70%~95%。EBER原位杂交均阴性。FISH检测8例均有IRF4基因分离(8/8),部分病例有BCL6基因分离(1/2),未检出MYC(0/4)和BCL2(0/3)基因分离。结论 LBCL-IRF4r好发于儿童和青少年,弥漫性强表达MUM-1,具有特征性IG∷IRF4基因重排,预后好,需与其它类型的大B细胞淋巴瘤鉴别。

关键词：大B细胞淋巴瘤 IRF4 重排 MUM-1 免疫组织化学诊断

TREM2通过调控巨噬细胞极化在肺结核病中的作用及分子机制研究

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中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 405-410页

作者：乃菲沙·买买提尚晓倩范佳惠王亮史宁马玉玉米叶沙尔·安尼瓦尔李佳峻王晶马秀敏新疆医科大学附属肿瘤医院医学检验中心省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第五附属医院新疆医科大学第一附属医院海南医科大学第二附属医院

目的探讨肺结核患者肺病灶组织中髓系细胞触发受体2(TREM2)的表达水平,以及与巨噬细胞极化相关标志物的相关性。方法通过苏木素-伊红(H&E)染色评估病理炎症表现,采用免疫组织化学方法检测肺组织中CD68+巨噬细胞和M1/M2巨噬细胞特异性分... 详细信息

目的探讨肺结核患者肺病灶组织中髓系细胞触发受体2(TREM2)的表达水平,以及与巨噬细胞极化相关标志物的相关性。方法通过苏木素-伊红(H&E)染色评估病理炎症表现,采用免疫组织化学方法检测肺组织中CD68+巨噬细胞和M1/M2巨噬细胞特异性分子及TREM2的表达定位情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血中M1/M2巨噬细胞相关细胞因子IL-10和IL-12的表达水平,并进一步分析TREM2与M1/M2巨噬细胞特征细胞因子的相关性。结果肺结核患者病灶组织中有明显的朗汉斯巨细胞和结核性肉芽肿。TREM2和巨噬细胞极化相关标志物在肉芽肿周围的表达均显著增加,且TREM2和M2巨噬细胞标志物CD163的表达定位一致。肺结核患者外周血中TREM2、IL-10和IL-12的mRNA表达水平以及IL-10、IL-12的表达量显著高于对照组。相关性分析表明TREM2与M2巨噬细胞相关细胞因子IL-10呈显著正相关。结论TREM2与M2巨噬细胞特异性细胞因子呈正相关,提示TREM2可能介导巨噬细胞向M2极化在肺结核的发生发展过程中发挥关键作用。

关键词：肺结核 TREM2 巨噬细胞分子机制