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绞股蓝鲨烯环氧酶基因的克隆与序列分析

西北植物学报 2010年第8期30卷 1520-1526页

作者：蒋军富李雄英吴耀生罗育周娟赵瑞强广西医科大学生物化学与分子生物学教研室

根据已报道植物鲨烯环氧酶（squalene epoxidase,SE）基因cDNA序列的保守区域设计引物,利用RT-PCR和RACE技术,对绞股蓝SE基因进行克隆及序列分析.结果表明,绞股蓝SE基因cDNA全长为1 818 bp,编码一个由525个氨基酸残基组成的多肽.绞股蓝S... 详细信息

根据已报道植物鲨烯环氧酶（squalene epoxidase,SE）基因cDNA序列的保守区域设计引物,利用RT-PCR和RACE技术,对绞股蓝SE基因进行克隆及序列分析.结果表明,绞股蓝SE基因cDNA全长为1 818 bp,编码一个由525个氨基酸残基组成的多肽.绞股蓝SE基因编码的氨基酸序列中含有52.4%的非极性疏水性氨基酸,26.1%极性中性氨基酸,9.0%酸性氨基酸,12.6%碱性氨基酸.Blast结果显示,绞股蓝SE基因核苷酸序列与其他已报道的植物SE基因相似性为73%～82%,推导的氨基酸序列相似性为63.2%～79.4%.SE氨基酸序列进化分析发现,绞股蓝SE与绿珊瑚、拟南芥亲缘关系较近.

关键词：绞股蓝鲨烯环氧酶 RACE 克隆序列分析

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人巨细胞病毒感染与肿瘤相关性研究进展

微生物与感染 2008年第3期3卷 166-169页

作者：崔寰王明丽安徽医科大学微生物学教研室安徽合肥230032

近几十年来,恶性肿瘤已成为全球人口的主要死亡原因.据美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)估计,2002年全球新发肿瘤患者约1 090万,肿瘤患者死亡数约670万[1],2005年则升至760万,2006年仅美国新发肿瘤患者就... 详细信息

近几十年来,恶性肿瘤已成为全球人口的主要死亡原因.据美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)估计,2002年全球新发肿瘤患者约1 090万,肿瘤患者死亡数约670万[1],2005年则升至760万,2006年仅美国新发肿瘤患者就近140万,死亡者56.5万[2].

关键词：恶性肿瘤病毒感染巨细胞肿瘤患者死亡原因死亡数死亡率美国

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物质成瘾的中枢机制研究进展

生物医学工程学杂志 2001年第2期18卷 296-298页

作者：张莉周华唐玉红刘应兵华西医科大学药理教研室成都610041 华西医科大学生理教研室成都610041

物质成瘾的中枢机制是解决临床预防和治疗药物成瘾的关键 ,至今仍不清楚。既往工作表明 ,学习记忆功能在物质成瘾的中枢机制中居于重要的中心环节。我们在总结既往物质成瘾研究工作基础上联系脑的高级功能。

关键词：物质成瘾脑高级功能心理性成瘾生理性成瘾中枢机制

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MTS1基因β启动子转录活性研究

中华血液学杂志 2003年第7期24卷 344-346页

作者：冯文莉刘兴涂植光黄宗干重庆医科大学临床血液学教研室 400016 重庆医科大学临床生物化学教研室 400016 重庆医科大学临床学院血液科 400016

目的　研究MTS1基因 β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况 ,鉴定 β启动子转录活性的功能片段区。方法　用DNA重组方法 ,构建MTS1基因 β启动子 3′端转录起始点相同 ,而 5′端序列不同的 7种pGL3重组质粒。用脂质体... 详细信息

目的　研究MTS1基因 β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况 ,鉴定 β启动子转录活性的功能片段区。方法　用DNA重组方法 ,构建MTS1基因 β启动子 3′端转录起始点相同 ,而 5′端序列不同的 7种pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法 ,将构建的重组质粒分别转染MTS1基因双等位缺失的Jurkat细胞株 ,检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达 ,观察 β启动子在Jurkat细胞中的激活情况及其基础转录活性片段区。结果　成功构建了MTS1基因 β启动子 7种不同片段的重组质粒 ,它们在Jurkat细胞中均有转录活性 ,其中 0 .38kbSacⅡ SacⅠ酶切片段是MTS1基因 β启动子转录活性的基础片段。结论　MTS1β启动子可在Jurkat细胞中被激活。

关键词： MTS1基因 β启动子基因表达急性T淋巴细胞白血病发病机制

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外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 374-377页

作者：王小莉王媛媛方强薛玉芹沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10... 详细信息

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00mmol/L,1.00mmol/L SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L硫酸亚铁(FeSO4)、1.00 mmol/L SNP+1.00 mmol/L L-半胱氨酸(L-cyst)、1.00 mmol/L SNP+0.15 mmol/LFeSO4+1.00 mmol/L L-cyst,设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/L SNP+100μl肌幼虫悬液),每组设3个复孔。置37℃5%CO2培养箱中孵育,第4天收集各孔成虫,镜检并作番红染色,计算各组虫体死亡率。结果 SNP 0.02 mmol/L和0.05 mmol/L组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)%和(3.2±1.0)%,这两组与空白对照组的死亡率[(1.9±0.2)%]之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为(9.9±1.8)%、(37.7±2.5)%、(50.1±3.5)%和(80.8±1.1)%,与空白对照组之间的差异有统计学意义(P学意义(P<0.05)。结论外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。

关键词：外源性NO 旋毛虫成虫

HIV-1 HXB2株Tat核心碱性区多肽Tat_(38-61)的原核表达及其免疫反应性

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中国生物制品学杂志 2011年第1期24卷 10-13,24页

作者：庞强曹洁陈秋莉王锦红张华群黄德胜葛宜兵潘卫第二军医大学微生物教研室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

目的构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测。方法采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组... 详细信息

目的构建HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白并进行纯化及免疫反应性检测。方法采用PCR法从HIV-1 HXB2株Tat1-101基因中扩增编码Tat38-61的基因序列,克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61。转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni2+-NTA柱亲和层析法纯化后,ELISA法鉴定其免疫反应性。结果重组原核表达质粒pET32a(+)-Tat38-61经双酶切及测序表明构建正确;SDS-PAGE分析显示,在相对分子质量约21 300处可见目的蛋白条带,表达量占菌体总蛋白的67.4%,主要以可溶形式表达;纯化后融合蛋白的纯度可达97%以上;ELISA结果显示,该融合蛋白与兔抗PEPTIDE-Tat1-101血清及HIV阳性血清均呈特异性反应。结论已成功构建了HIV-1 Tat核心碱性区多肽Tat38-61的重组原核表达质粒,表达并纯化了PET32a(+)-Tat38-61融合蛋白,该融合蛋白碱性区表位得到较好的保留,为Tat38-61噬菌体突变文库的构建及亲和筛选奠定了基础。

关键词： tat基因产物,人免疫缺陷病毒核心碱性区重组融合蛋白质类原核细胞基因表达免疫反应性

肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白T细胞表位的预测、筛选及确定

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免疫学杂志 2014年第1期30卷 21-28页

作者：麦璟莹梁雪清高志岩马长玲袁竹青梁广明梁雪清广州医科大学病原生物学与免疫学教研室 510182 广州医科大学形态学实验中心广州医科大学生物技术专业

目的确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白CD4 T细胞及CD8 T细胞的表位。方法通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子小鼠的MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)和MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)序列并人工合成相应肽段;经诱导表达、纯化、透... 详细信息

目的确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白CD4 T细胞及CD8 T细胞的表位。方法通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子小鼠的MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)和MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)序列并人工合成相应肽段;经诱导表达、纯化、透析、去内毒素、定量等步骤得到纯化的rLytA蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组小鼠和对照组小鼠的脾及淋巴结细胞并分别与每条人工合成的候选表位肽段体外共培养,取培养上清进行双夹心ELISA检测每组细胞IFN-γ的产生情况;用初步筛选到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式技术检测,筛选出LytA蛋白分子T细胞表位。结果利用多种方法分析了LytA蛋白分子的MHC-Ⅰ结合肽及MHC-Ⅱ结合肽,经整理得到候选MHC-Ⅰ结合肽26条,候选MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功免疫了小鼠;双夹心ELISA结果初步提示:肽段LⅠ4、LⅠ5、LⅠ6、LⅠ7、LⅠ11、LⅠ12、LⅠ13、LⅠ14、LⅠ25以及肽段LⅡ3、LⅡ4、LⅡ5刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高;细胞流式技术进一步确定:经肽段LⅠ4、LⅠ6、LⅠ7、LⅠ11、LⅠ12、LⅠ13、LⅠ14及LⅠ25刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性的细胞百分比较对照小鼠细胞的百分比显著升高;经肽段LⅡ4和LⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性的细胞百分比较对照小鼠细胞的百分比显著升高。结论确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子2个CD4 T细胞及8个CD8 T细胞的表位。

关键词：肺炎链球菌自溶酶 T细胞表位

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肠道病毒性脑膜炎基因诊断的研究

中国实用内科杂志 1996年第2期16卷 104-105页

作者：王维治旋福东孔秀香李呼伦钟照华谷鸿喜哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学微生物教研室

肠道病毒（ＥＶＳ）感染是无菌性脑膜炎和脑炎常见的病因之一，由于其临床表现及脑脊液（ＣＳＦ）检查无特异性，故临床难与其它细菌性或病毒性感染相鉴别。本文用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了临床诊断的２４例病毒性脑膜... 详细信息

肠道病毒（ＥＶＳ）感染是无菌性脑膜炎和脑炎常见的病因之一，由于其临床表现及脑脊液（ＣＳＦ）检查无特异性，故临床难与其它细菌性或病毒性感染相鉴别。本文用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了临床诊断的２４例病毒性脑膜炎及２０例其它神经疾病（ＯＮＤ）对照组患者的ＣＳＦ中ＥＶｓ－ＲＮＡ。所用的引物选自ＥＶｓ基因组中高度保守的５＇－非编码区（５＇－ＮＣＲ），这些引物已被证明能够检测出ＥＶｓ广泛的型别。结果在２４例病毒性脑膜炎患者ＣＳＦ中检出ＥＶｓ－ＲＮＡ阳性者７例，而对照组全部阴性。提示经ＲＴ－ＰＣＲ的早期诊断有助于对ＥＶｓ脑膜炎采取早期特异的抗病毒治疗。

关键词：肠道病毒病毒性脑膜炎聚合酶链反应基因诊断

山奈酚调控细胞衰老治疗类风湿性关节炎的体外研究

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陆军军医大学学报 2023年第12期45卷 1281-1291页

作者：先梦麟! 耿娜娜邓琳邝彪范梦恬郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院骨科重庆400010

目的基于网络药理学以及体外实验探讨山奈酚治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法通过TCMSP及SwissTarget数据库查询山奈酚靶点,检索GeneCards和DisGeNET数据库,获得RA相关功能靶点。山奈酚与RA靶点通过Venny2.... 详细信息

目的基于网络药理学以及体外实验探讨山奈酚治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法通过TCMSP及SwissTarget数据库查询山奈酚靶点,检索GeneCards和DisGeNET数据库,获得RA相关功能靶点。山奈酚与RA靶点通过Venny2.1.0交叉后,利用STRING数据库进行蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)分析,并对山奈酚和靶点进行分子对接。随后用脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)与山奈酚处理小鼠单核细胞白血病细胞RAW264.7进行验证,分组为:Control组、LPS组、LPS+Kaempferol组。MTT法检测山奈酚对RAW264.7细胞毒性的影响。使用LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症细胞模型,检测各个处理组衰老和衰老相关炎症因子表达的影响。通过SA-β-Gal检测各组RAW264.7细胞β-半乳糖苷酶水平的变化。细胞免疫荧光检测各组IL-6的表达。结果共得到138个山奈酚的作用靶点,山奈酚抗RA的潜在作用靶点76个。PPI分析结果显示TNF、EGFR、PTGS2、AKT1可能是山奈酚抗RA的核心靶点。分子对接结果表明,山奈酚与核心靶点TNF、EGFR、PTGS2、AKT1能形成较稳定的复合物。MTT结果证明,在24 h时,0.125~16μmol/L山奈酚对RAW264.7细胞增殖均具有促进作用(P<0.05)。在48 h时,0.125~8μmol/L山奈酚能够促进RAW264.7细胞增殖(P<0.05)。而72 h时,0.125~16μmol/L山奈酚对RAW264.7细胞增殖没有显著影响。qPCR和Westerm blot结果表明山奈酚能够降低LPS诱导的IL-1β、IL-6以及TNF-α的表达(P<0.05)。山奈酚也降低了细胞衰老标志基因p16和p21的表达,同时促进细胞周期标志物CCND1和CCNE1的表达(P<0.05)。免疫荧光结果表明山奈酚能够降低IL-6表达水平(P<0.05)。SA-β-Gal染色结果显示,LPS处理可以促进RAW264.7细胞β-半乳糖苷酶的水平(P<0.05),而山奈酚可以缓解LPS诱导的β-半乳糖苷酶水平增加(P<0.05)。结论山奈酚可能通过调控炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α与p16/p21衰老相关基因,防止免疫细胞过早衰老,发挥治疗RA的作用。

关键词：山奈酚类风湿性关节炎网络药理学分子对接炎性衰老衰老相关分泌表型