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基于生物信息学对骨关节炎铁超载关键基因的筛选与验证

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中国组织工程研究 2025年第9期29卷 1972-1980页

作者：邓柯淇李光第 GOSWAMI ASHUTOSH 刘星余何孝勇贵州医科大学贵州省贵阳市550004 贵州医科大学附属医院骨外科贵州省贵阳市550004

背景:铁超载是指体内铁积累过多的情况,可引起各种组织的病理改变。目前,对于骨关节炎中铁超载相关的分子机制和潜在基因靶点,仍有待进一步的研究和探索。目的:通过生物信息学手段分析骨关节炎铁超载关键基因,并利用动物实验加以验证,... 详细信息

背景:铁超载是指体内铁积累过多的情况,可引起各种组织的病理改变。目前,对于骨关节炎中铁超载相关的分子机制和潜在基因靶点,仍有待进一步的研究和探索。目的:通过生物信息学手段分析骨关节炎铁超载关键基因,并利用动物实验加以验证,以期为铁超载角度防治骨关节炎提供新的思路。方法:使用GEO数据库和GeneCards数据库筛选出与骨关节炎相关的基因和铁超载相关的基因。然后,取两者的交集,得到骨关节炎和铁超载共同相关的基因集合。采用GO和KEGG富集分析筛选这些基因的功能和通路。为了进一步研究这些基因之间的相互作用,构建PPI网络,并利用Cytoscape软件的5种计算方法来识别骨关节炎铁超载的关键基因(Hub基因)。将12只雄性SD大鼠分为骨关节炎组与对照组(正常大鼠),每组6只,骨关节炎组大鼠采用改良Hulth方法建立膝骨关节炎模型,并使用PCR检测Hub基因在两组大鼠膝关节组织中的表达情况。结果与结论:①共获得51个骨关节炎铁超载基因,GO富集分析表明其主要参与细胞因子受体结合、趋化因子受体结合、细胞因子活性、生长因子受体结合及寡糖结合等过程;②KEGG富集分析表明骨关节炎铁超载基因主要参与肿瘤坏死因子信号通路、脂质和动脉粥样硬化等信号通路;③构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,进一步分析获得细胞间黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、肿瘤坏死因子配体超家族成员11(tumor necrosis factor superfamily member 11,TNFSF11)、骨髓瘤细胞癌基因(myelocytomatosis oncogene,MYC)、Janus激酶2(janus kinase 2,JAK2)及白细胞介素6,5个骨关节炎铁超载Hub基因,动物实验证实其在对照组与骨关节炎组大鼠膝关节组织中的表达有显著差异(P<0.05);④结果显示,ICAM-1,TNFSF11,MYC,JAK2及白细胞介素6可作为骨关节炎铁超载的关键基因,有望成为防治骨关节炎的新靶点。

关键词：骨关节炎铁超载关键基因差异基因生物信息学动物实验实验验证生物标志物

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双歧杆菌脂磷壁酸延缓脾脏衰老的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2004年第7期24卷 568-570页

作者：付玉荣王跃刘明方陈淑惠重庆医科大学临床微生物学教研室 400016

目的　研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)在D 半乳糖诱导的衰老小鼠体内 ,对脾脏指数和脾细胞DNA损伤的影响。方法　在建立D 半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时 ,注射双歧杆菌LTA ;然后测定模型对照组、正常对照组、试验组小鼠的脾脏指... 详细信息

目的　研究双歧杆菌表面分子脂磷壁酸 (LTA)在D 半乳糖诱导的衰老小鼠体内 ,对脾脏指数和脾细胞DNA损伤的影响。方法　在建立D 半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时 ,注射双歧杆菌LTA ;然后测定模型对照组、正常对照组、试验组小鼠的脾脏指数 ,并以单细胞凝胶电泳试验检测脾脏淋巴细胞DNA氧化损伤的情况。结果　与正常对照组相比 ,模型对照小鼠的脾脏指数显著升高 (P <0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞DNA受到了较严重的损伤 (P <0 .0 5 ) ;用双歧杆菌LTA处理后 ,试验小鼠的脾脏指数明显下降 (P <0 .0 5 ) ,脾淋巴细胞DNA的损伤程度显著降低 (P <0 .0 5 )。结论　双歧杆菌LTA能显著抑制衰老小鼠脾脏淋巴细胞DNA的氧化损伤 ,这可能与双歧杆菌抗衰老有关。

关键词：双歧杆菌脂磷壁酸脾脏衰老 LTA 淋巴细胞

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幽门螺杆菌L型微结构的研究

中华微生物学和免疫学杂志 1996年第1期16卷 19-21页

作者：黄谷良林特夫贾继辉蚌埠医学院微生物学教研室 233003 山东医科大学微生物学教研室济南1250012

扫描电镜发现幽门螺杆菌的Ｌ型与其它细菌的Ｌ型一样形态不规则，呈多形性，有圆球体、巨形体、短杆状、串珠状和腊肠样，大小不等。超薄切片可见细胞壁部分或完全缺失，菌体内部结构稀疏，电子密度降低，部分菌体含有大量原生小体，有... 详细信息

扫描电镜发现幽门螺杆菌的Ｌ型与其它细菌的Ｌ型一样形态不规则，呈多形性，有圆球体、巨形体、短杆状、串珠状和腊肠样，大小不等。超薄切片可见细胞壁部分或完全缺失，菌体内部结构稀疏，电子密度降低，部分菌体含有大量原生小体，有的正从细胞内释放出来，是细菌Ｌ型繁殖的方式之一。

关键词：幽门螺杆菌 L型超微结构

结核分枝杆菌lhp基因原核表达载体的构建和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 332-334,340页

作者：陈全骆旭东蒋英江山朱道银重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。结果 :以重组体分别转化DH5α和BL... 详细信息

目的 :构建结核分枝杆菌 (MTB)lhp基因原核表达载体并进行表达。方法 :用PCR扩增MTBlhp基因 ,并克隆入pQE30质粒。测序正确后 ,再亚克隆入 pET32a(+)质粒 ,构建pQE30 CFP10和pET32a(+) CFP10重组体。结果 :以重组体分别转化DH5α和BL2 1(DE3)菌后 ,经IPTG诱导 ,pQE30 CFP10未表达目的蛋白 ;而 pET32a(+) CFP10则表达出Mr 为 2 0 0 0 0左右重组蛋白。SDS PAGE分析显示 ,IPTG诱导 4h重组蛋白的表达量最高。表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞质中 ,表达量占全菌蛋白质的 38% ,用Westernblot证实其具有良好的抗原性。经Ni NTA柱纯化 ,获得纯度为 93%的重组蛋白。结论 :成功地构建原核表达载体 pET32a(+) CFP10 ,并获得重组CFP10蛋白 ,为MTB重组抗原的应用奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 lhp基因 CFPIO

结核分枝杆菌Ag85B与IL-12基因真核共表达质粒的构建及表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 664-666页

作者：江山朱道银骆旭东陈全蒋英重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通... 详细信息

目的 :构建结核分枝杆菌Ag85B和鼠IL 12基因的共表达载体pBud85B IL12。方法 :将结核分枝杆菌Ag85B基因和鼠IL 12基因同时克隆入含多启动子的共表达载体pBudCE4 .1中 ,构建真核共表达质粒pBud85B IL12。以pBud85B IL12转染COS 7细胞 ,通过RT PCR及ELISA方法检测目的基因的表达。结果 :在COS 7细胞中同时可检测到Ag85B和IL12的表达。结论 :pBud85B IL12共表达质粒的成功构建 ,为对其免疫原性。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B IL-12 共表达载体

信号肽和辅助性T细胞表位增强HBV核心抗原DNA疫苗诱导的免疫应答

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生物化学与生物物理学报 2002年第3期34卷 341-346页

作者：赵平赵兰娟曹洁洪海燕戚中田第二军医大学微生物学教研室第二军医大学微生物学教研室上海200433

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HB... 详细信息

为增强HBVDNA疫苗的免疫效率 ,于HBV核心抗原 (HBcAg)基因 5′末端引入人IL 2信号肽和一个通用型辅助性T淋巴细胞表位基因 ,并构建成DNA疫苗 ,转染COS7细胞后经ELISA检测出分泌型HBcAg。通过肌肉注射途径分别将这种DNA疫苗和编码天然HBcAg的DNA疫苗免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,结果表明前者诱导细胞和体液免疫应答的强度均明显超过后者 ,且更趋向于T辅助细胞 1(Th1)型免疫应答 ,故其对慢性HBV感染的治疗可能有潜在的应用价值

关键词：乙型肝炎病毒 DNA疫苗信号肽辅助性T淋巴细胞表位免疫应答

结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的免疫效果观察

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第6期19卷 592-594页

作者：骆旭东朱道银陈全蒋英江山重庆医科大学微生物学教研室重庆400016

目的:研究并比较结核分枝杆菌(H37Rv)Ag85B、MPT64DNA.以及两者的融合基因(AM)的免疫原性。方法:雌性C57BL/6小鼠25只,随机分为5组,即A组(PBS)、B组(peDNA3.1)、C组(pcDNA/Ag85B)、D组(pcDNA/MPT64)和E组(pcDNA/AM)。分别于胫前肌注射7.5 g/L利多卡因和质粒混合物(1:4,100μL,含质粒70μg/次),间隔2 wk免疫 1次,共3次。末次免疫后4 wk取血分离血清测定总IgG,同时分离脾淋巴细胞,用PPD刺激后分别做脾淋巴细胞增殖实验(MTT比色法)和测定脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ的水平。结果:Ag85B、MPT64和AM质粒DNA,均能诱导小鼠产生较高水平的PPD特异性IgG。免疫小鼠脾淋巴细胞体外经PPD刺激后,能产生特异性淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ。peDNA/AM组IFN-γ的分泌水平明显高于pcDNA/Ag85B和pcDNA/MPT64免疫组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗,能在小鼠体内诱导特异性细胞和体液免疫。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85B MPT64 融合基因 DNA疫苗

副粘病毒Tianjin株NP蛋白的表达及分析

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病毒学报 2008年第3期24卷 234-238页

作者：王卿李梅石立莹袁立军王文秀天津医科大学微生物学教研室天津300070

1999年，本实验室从群体性暴发的急性呼吸道感染致死的普通棉耳绒猴肺组织中分离到一株副粘病毒，命名为副粘病毒Tianjin株。经研究发现该动物中心的工作人员都有此病毒抗体，且正常人群（献血员）抗体阳性率高达46％，急性呼吸道感染... 详细信息

1999年，本实验室从群体性暴发的急性呼吸道感染致死的普通棉耳绒猴肺组织中分离到一株副粘病毒，命名为副粘病毒Tianjin株。经研究发现该动物中心的工作人员都有此病毒抗体，且正常人群（献血员）抗体阳性率高达46％，急性呼吸道感染的患儿抗体阳性率为19．28％，提示此病原体与人类可能有密切的关系。经血清学、形态学及基因测序研究，表明副粘病毒Tianjin株与仙台病毒（Sendai virus，SeV）同源性较高，

关键词：副粘病毒Tianjin株 NP基因同源性及进化分析

单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型共同抗原gD在大肠埃希菌中的重组表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第2期16卷 176-178页

作者：李梅李晓眠刘民天津医科大学微生物学教研室天津300050

目的　克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ (HSV Ⅰ、Ⅱ )型共同性抗原gD基因 ,构建重组表达载体pMAL c2 gD ,诱导融合蛋白MBP gD的表达。方法　提取病毒DNA ,PCR扩增出gD基因 ,克隆于原核表达载体pMAL c2并转化大肠埃希菌DH5α。PCR、双酶切及... 详细信息

目的　克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ (HSV Ⅰ、Ⅱ )型共同性抗原gD基因 ,构建重组表达载体pMAL c2 gD ,诱导融合蛋白MBP gD的表达。方法　提取病毒DNA ,PCR扩增出gD基因 ,克隆于原核表达载体pMAL c2并转化大肠埃希菌DH5α。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后 ,IPTG诱导表达融合蛋白MBP gD ,并进行免疫学鉴定。结果　构建的重组表达质粒pMAL c2 gD在大肠埃希菌中能高效表达。经SDS PAGE分析 ,表达产物约占菌体总蛋白 35 5 % ,其中 39%以可溶蛋白形式存在于胞质中 ,61 %以包涵体形式存在。结论　构建了pMAL c2 gD表达质粒 ,Westernblot证实 ,HSV ⅠgD单克隆抗体DL6可特异识别表达的gD蛋白。

关键词：重组表达人疱疹病毒膜糖蛋白类诱导表达