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PPARγ1的SUMO化修饰对巨噬细胞M2极化的抑制作用

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第12期39卷 1402-1408页

作者：王秀芝左勇上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系

目的·探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(peroxisome proliferator activated receptorγ1,PPARγ1)的SUMO化修饰在白介素4(interleukin-4,IL-4)诱导巨噬细胞M2极化过程中的作用和机制。方法·在HEK293T细胞中共转染FLAG-PPARγ1-WT/突变体质粒、HA-SUMO1质粒,使用标签FLAG及HA的抗体分别进行免疫共沉淀后进行蛋白质印迹分析,确认PPARγ1的SUMO化修饰和修饰位点。过表达FLAG-PPARγ1-WT、HA-SUMO1及野生型RGS-SENP1以及去SUMO化修饰酶活缺失的突变体RGSSENP1mut,证明SENP1是PPARγ1的去SUMO化修饰酶。用IL-4刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7和体外分离的原代小鼠腹腔巨噬细胞,使其向M2型活化,使用PPARγ及SUMO1的抗体进行免疫共沉淀,明确内源性PPARγ1的SUMO化修饰在M2极化过程中的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-4刺激后的PPARγ1野生型及突变型稳转细胞系RAW264.7中M2相关基因的m RNA水平。用染色质免疫共沉淀实验比较PPARγ1 WT及突变体结合于精氨酸酶Ⅰ(arginaseⅠ,Arg1)启动子的能力。结果·PPARγ1蛋白第77位赖氨酸(K77R)能被SUMO化修饰,并能被SENP1去SUMO化。在IL-4诱导巨噬细胞M2型极化时,PPARγ1的SUMO化水平降低。稳定表达SUMO化位点突变体PPARγ1-K77R的RAW264.7细胞,Arg1 mRNA水平升高;PPARγ1-K77R与Arg1的启动子结合能力增强,促进Arg1表达。结论·PPARγ1通过去SUMO化促进下游Arg1基因的表达从而参与调控巨噬细胞M2型极化。

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体γ1 SUMO化修饰 SENP1 巨噬细胞 M2极化

流式细胞术在检测细胞氧化还原状态荧光蛋白探针中的应用

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第1期38卷 10-17页

作者：田烨刘奥董瑞祁星易静杨洁上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025

目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针ro GFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值。方法·用ro GFP2转... 详细信息

目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针ro GFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值。方法·用ro GFP2转染He La细胞,经H_2O_2处理后,采用LSCM技术和流式细胞术分别检测ro GFP2,以405 nm/488 nm荧光信号强度比值反映细胞氧化还原状态。转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞,应用流式细胞术检测CD44和CD24不同标记细胞亚群的ro GFP2,比较干细胞与其他细胞氧化还原状态的异同。结果·与LSCM技术相比,流式细胞术也可检测H_2O_2引起的ro GFP2变化,且可区分群体中不同的亚群。Panc-1细胞中CD24^+/CD44^+肿瘤干细胞群与非干细胞群相比,ro GFP2比值更低,细胞处于更还原的状态。结论·流式细胞术可用于检测基因编码的氧化还原探针和特异地分析亚群的变化,可能将应用于肿瘤生物学、干细胞生物学等研究中。

关键词：流式细胞术细胞氧化还原状态基因编码荧光蛋白探针 roGFP2 肿瘤干细胞

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CBX8抑制前列腺癌细胞侵袭的机制研究

上海交通大学学报（医学版） 2023年第12期43卷 1507-1519页

作者：杨万里宋娟李兵劳一敏上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025

目的·探究染色质组织调节框同源蛋白8(chromobox protein homolog 8,CBX8)在前列腺癌中的生物学功能,并通过转录组及表观修饰分析揭示CBX8在前列腺癌转移中的作用机制。方法·利用cBioPortal数据库对癌症基因组图谱(The Cancer Genome ... 详细信息

目的·探究染色质组织调节框同源蛋白8(chromobox protein homolog 8,CBX8)在前列腺癌中的生物学功能,并通过转录组及表观修饰分析揭示CBX8在前列腺癌转移中的作用机制。方法·利用cBioPortal数据库对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中前列腺腺癌(prostate adenocarcinoma,PRAD)患者样本数据集进行CBX家族蛋白mRNA表达分析。采用短发夹RNA技术敲低DU145前列腺癌细胞系中的CBX8,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭水平的变化。使用RNA转录组测序(RNA-seq)分析敲低CBX8后影响的差异表达基因。对这些差异表达基因进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)、基因本体论(Gene Ontology,GO)功能分析以及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)信号通路富集分析。通过染色质免疫沉淀测序(ChIPseq)观察和测定敲低CBX8后基因组H3K27me3甲基化水平的变化。结果·根据对TCGA-PRAD患者样本数据的分析,发现CBX8 mRNA在前列腺癌中高表达。在前列腺癌细胞系DU145中敲低CBX8后,细胞的增殖能力没有显著变化(P>0.05),但其侵袭能力却显著提高(P生物过程包括转运RNA(transfer RNA,tRNA)氨酰化、DNA复制、氨酰基-tRNA连接酶活性变化以及钙黏蛋白的结合等;特别是在GO功能分析的细胞组分方面富集了与肿瘤转移有关的细胞-基底连接相关基因。利用ChIP-seq对表观修饰的研究显示,在敲低CBX8后全基因组的H3K27me3水平有所下降;并鉴定了97个位于CBX8敲低后转录上调基因附近的位点,其中包括BCAT1转录起始位点。结论·CBX8在人前列腺癌中高表达。CBX8具有抑制肿瘤细胞侵袭的功能。其机制可能是CBX8/PRC1复合体结合于BCAT1转录起始位点并抑制BCAT1转录。

关键词：染色质组织调节框同源蛋白8 前列腺癌细胞增殖肿瘤侵袭

冬凌草甲素上调PLK1对Jurkat细胞细胞周期的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2021年第5期41卷 603-611页

作者：赫玮左勇上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025

目的·探索冬凌草甲素对Jurkat细胞增殖的抑制作用及其机制。方法·采用CCK-8法、流式细胞术、瑞士吉姆萨染色、蛋白质印迹法,检测冬凌草甲素处理后Jurkat细胞的增殖情况、细胞周期、凋亡情况及有丝分裂相关蛋白激酶表达情况。蛋白质印... 详细信息

目的·探索冬凌草甲素对Jurkat细胞增殖的抑制作用及其机制。方法·采用CCK-8法、流式细胞术、瑞士吉姆萨染色、蛋白质印迹法,检测冬凌草甲素处理后Jurkat细胞的增殖情况、细胞周期、凋亡情况及有丝分裂相关蛋白激酶表达情况。蛋白质印迹法检测冬凌草甲素处理后,Jurkat细胞中Polo样蛋白激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)下游蛋白的磷酸化水平。通过计算机模拟、免疫沉淀、蛋白质印迹法、细胞热力学迁移实验方法研究冬凌草甲素与PLK1的结合方式及结合位点。组间比较采用t检验,P细胞发生G2/M期阻滞;冬凌草甲素可与PLK1蛋白直接结合抑制其通过泛素蛋白酶体途径降解;如PLK1蛋白的Cys67或Cys133氨基酸残基发生突变则抑制冬凌草甲素与其直接结合,且抑制冬凌草甲素对PLK1蛋白的稳定作用。结论·冬凌草甲素通过直接结合PLK1蛋白抑制其泛素化修饰及降解,促进其活性,诱导Jurkat细胞发生G2/M期阻滞;PLK1蛋白的Cys67和Cys133位点是蛋白与冬凌草甲素结合的关键位点。

关键词：冬凌草甲素 Polo样蛋白激酶1(PLK1) 细胞周期阻滞急性T淋巴细胞白血病

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肿瘤干细胞代谢在肿瘤发展中作用的研究进展

上海交通大学学报（医学版） 2022年第6期42卷 825-832页

作者：郑诗凡马皎上海交通大学医学院上海200025 上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025

无法彻底清除肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)被认为是肿瘤治疗过程中的一个巨大障碍。CSCs是一群存在于异质性肿瘤组织中的细胞亚群,它们具有自我更新和分化的潜能。作为一个功能性的概念,CSCs能够表现出启动肿瘤发生、抵抗放射治... 详细信息

无法彻底清除肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)被认为是肿瘤治疗过程中的一个巨大障碍。CSCs是一群存在于异质性肿瘤组织中的细胞亚群,它们具有自我更新和分化的潜能。作为一个功能性的概念,CSCs能够表现出启动肿瘤发生、抵抗放射治疗与化学治疗(化疗)以及导致肿瘤复发等恶性行为。有关CSCs多方面的研究已被陆续开展,包括特异性的细胞表面标志、自我更新信号通路以及表观遗传调控等,然而CSCs代谢却未得到足够的关注。基于现有的相关研究,该文综述了CSCs的能量和物质代谢特性,并从代谢角度探讨了CSCs在导致肿瘤治疗抗性与复发中的作用,同时还阐述了CSCs代谢与表观遗传调控的密切联系,并强调靶向CSCs代谢在肿瘤治疗中具有巨大的潜在价值。

关键词：肿瘤干细胞代谢治疗抗性肿瘤复发表观遗传调控肿瘤治疗

SUMO特异肽酶3调控小鼠睾丸Sertoli细胞自噬

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第7期39卷 706-713页

作者：陶亚群朱慧琴潘艺青劳一敏易静杨洁上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025 上海交通大学基础医学院组织胚胎与遗传发育学系上海200025

目的·探讨小鼠睾丸中SUMO特异肽酶3(SUMO specific peptidase3,SENP3,又称SUMO特异蛋白酶3)对自噬的调控作用。方法·采用免疫荧光法对SENP3在睾丸生精细胞和支持细胞(Sertoli cells,简称Sertoli细胞)中的定位进行检测。对Senp3野生型(... 详细信息

目的·探讨小鼠睾丸中SUMO特异肽酶3(SUMO specific peptidase3,SENP3,又称SUMO特异蛋白酶3)对自噬的调控作用。方法·采用免疫荧光法对SENP3在睾丸生精细胞和支持细胞(Sertoli cells,简称Sertoli细胞)中的定位进行检测。对Senp3野生型(Senp3+/+)小鼠和Senp3基因敲除杂合子(Senp3+/-)小鼠进行饥饿处理,诱导自噬的发生。提取小鼠的睾丸组织蛋白质,采用Western blotting检测自噬的程度。利用透射电子显微镜技术、免疫荧光法检测睾丸组织切片中的细胞自噬,并区分睾丸生精细胞和Sertoli细胞自噬的程度。结果·SENP3主要定位于Sertoli细胞核。与Senp3+/+小鼠相比,Senp3+/-小鼠饥饿后,Sertoli细胞自噬增加。结论·SENP3能够抑制营养缺乏时Sertoli细胞自噬,可能对细胞自噬的程度发挥控制作用。

关键词：自噬 SUMO特异蛋白酶3 睾丸支持细胞(Sertoli细胞)

ChREBP在糖脂代谢和肿瘤中的作用及其机制的研究进展

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生命科学 2021年第4期33卷 438-448页

作者：崔中锐王敬泽向禹童雪梅吴丽芳上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025

高发的糖尿病、肥胖症、脂肪肝等代谢性疾病和肿瘤对生活品质和生命健康带来极大威胁,寻找更加有效的药物靶标至关重要。碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate responsive element binding protein,ChREBP)是调控糖脂代谢的转录因子... 详细信息

高发的糖尿病、肥胖症、脂肪肝等代谢性疾病和肿瘤对生活品质和生命健康带来极大威胁,寻找更加有效的药物靶标至关重要。碳水化合物反应元件结合蛋白(carbohydrate responsive element binding protein,ChREBP)是调控糖脂代谢的转录因子,显著影响肝脏糖酵解、脂质生成和胰岛素敏感性,在胰岛中促进β细胞适应性增殖,提示ChREBP对糖尿病等代谢性疾病的发展起重要作用。近年发现,ChREBP在肝癌、结直肠癌等肿瘤的发生发展中举足轻重。现就ChREBP的结构及特点、在正常组织和肿瘤中的作用及机制进行综述。ChREBP作为细胞代谢和肿瘤发生发展的纽带,为代谢性疾病和肿瘤研究提供了新的思路,其潜在靶标具有临床应用前景。

关键词：碳水化合物反应元件结合蛋白代谢细胞增殖正常组织肿瘤

SUMO特异性蛋白酶1在动脉粥样硬化发病机制中的作用

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第8期32卷 1056-1061页

作者：黄弦吴际程金科上海交通大学生命科学技术学院生物化学与分子生物学系上海200240 上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在小鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法采用主动脉整体和主动脉根部油红O染色以及主动脉根部巨噬细胞标志物MOMA-2的免疫组织化学染色,观察SENP1+/+X Apoe-/-(n=5)与SENP1+/-XApoe-/-(n=4)两组小... 详细信息

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在小鼠动脉粥样硬化发病机制中的作用。方法采用主动脉整体和主动脉根部油红O染色以及主动脉根部巨噬细胞标志物MOMA-2的免疫组织化学染色,观察SENP1+/+X Apoe-/-(n=5)与SENP1+/-XApoe-/-(n=4)两组小鼠在饲喂高胆固醇高脂食物后动脉粥样硬化病理改变。采用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)诱导巨噬细胞RAW264.7泡沫化,油红O染色检测RAW264.7 si-ns及RAW264.7 si-SENP1的泡沫细胞形成能力。采用Real-Time PCR和Western blotting分别检测RAW264.7 si-ns和RAW264.7 si-SENP1中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)mRNA和蛋白的相对表达量。结果饲喂高胆固醇高脂食物后,油红O染色显示,SENP1+/-X Apoe-/-小鼠的斑块相对面积(斑块面积/血管总面积)和主动脉弓斑块面积均大于SENP1+/+X Apoe-/-小鼠,分别为(6.716±1.442)%和(5.952±2.332)%以及(364 249±45 838)和(273 486±158 814)μm2;免疫组织化学染色显示,主动脉根部巨噬细胞面积/斑块面积分别为(41.00±0.05)%和(40.47±0.07)%,差异无统计学意义(P=0.954)。Real-Time PCR和Western blotting检测以及油红O染色结果显示,RAW264.7 si-SENP1的FABP4表达水平及泡沫细胞形成能力均较RAW264.7 si-ns高。结论 SENP1通过下调FABP4的表达,抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成,从而抑制动脉粥样硬化的发生。

关键词：动脉粥样硬化泡沫细胞 SUMO特异性蛋白酶1 脂肪酸结合蛋白4

SUMO特异性蛋白酶家族与肿瘤生物学行为的关系

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第3期38卷 348-352页

作者：缪慧娴刘子豪李维娅黄答李文博左勇上海交通大学医学院上海200025 上海交通大学基础医学院生物化学与细胞生物学系上海200025

SUMO化修饰是一个动态可逆的过程,需要特异性连接酶参与,其逆反应(去SUMO化)则是由一组SUMO特异性蛋白酶(SUMO-specific proteases,SENPs)参与的催化解离。SUMO化修饰的靶蛋白分子与机体的发育、疾病,特别是肿瘤、代谢、炎症与免疫等密... 详细信息

SUMO化修饰是一个动态可逆的过程,需要特异性连接酶参与,其逆反应(去SUMO化)则是由一组SUMO特异性蛋白酶(SUMO-specific proteases,SENPs)参与的催化解离。SUMO化修饰的靶蛋白分子与机体的发育、疾病,特别是肿瘤、代谢、炎症与免疫等密切相关,且SENPs在SUMO蛋白的加工成熟和靶蛋白去SUMO化修饰中发挥重要作用。该文就SENPs家族蛋白在肿瘤发生发展中的作用和机制进行综述。

关键词： SUMO SUMO特异性蛋白酶肿瘤