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上海市食源性单核细胞增生李斯特菌MLST分析及毒力基因分布

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中国食品学报 2019年第2期19卷 223-229页

作者：成梦雅王文凯史贤明施春雷上海交通大学农业与生物学院中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心上海200240

为了解上海市食源性单核细胞增生李斯特菌亚型和毒力基因的分布情况,于2013年6月至2014年6月在上海市采集各类食品样品,从中分离到86株单核细胞增生李斯特菌,并对其进行多位点序列分型(MLST)及毒力基因检测。MLST分析结果显示:86株单核... 详细信息

为了解上海市食源性单核细胞增生李斯特菌亚型和毒力基因的分布情况,于2013年6月至2014年6月在上海市采集各类食品样品,从中分离到86株单核细胞增生李斯特菌,并对其进行多位点序列分型(MLST)及毒力基因检测。MLST分析结果显示:86株单核细胞增生李斯特菌可以分为15个ST型,其中,80.2%(69/86)属于谱系II,其余属于谱系I,未发现谱系III和IV菌株。同时检测了10个毒力基因(prfA,hly,plcA,plcB,actA,clpE,mpl,inlA,inlB和iap),结果发现,这些分离株中10个毒力基因的携带率均为100%。以上结果提示:上海市市售食品中单核细胞增生李斯特菌存在较大的食品安全风险,需加强监测和防控。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 MLST 毒力基因

扫描探针技术在食品大分子纳米结构领域的应用

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农业工程学报 2009年第8期25卷 280-287页

作者：邓云肖晨龙朱立伟罗文上海交通大学陆伯勋食品安全研究中心上海200240 上海交通大学农业与生物学院上海200240

简介了扫描隧道显微镜(STM)、原子力显微镜(AFM)和扫描近场显微术(SNOM)的基本原理并比较了其优缺点,重点阐述了STM、AFM和SNOM在食品中多糖、淀粉、蛋白质和脂质等大分子微观形貌和纳米结构的表征和操纵方面的研究发现和成果,表明高清... 详细信息

简介了扫描隧道显微镜(STM)、原子力显微镜(AFM)和扫描近场显微术(SNOM)的基本原理并比较了其优缺点,重点阐述了STM、AFM和SNOM在食品中多糖、淀粉、蛋白质和脂质等大分子微观形貌和纳米结构的表征和操纵方面的研究发现和成果,表明高清晰度、高分辨率的STM、AFM和SNOM非常适于食品中大分子在系统保持原生态或者不同状态条件下进行纳米级的结构研究。不断发展的扫描探针显微技术在食品工业中具有巨大发展潜力和广泛应用前景。

关键词：食品纳米结构扫描探针技术应用生物大分子

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藏灵菇益生菌奶片的制作及其品质分析

农业工程学报 2013年第11期29卷 278-285页

作者：袁祎琳梅俊彭勇王邦权李云飞上海交通大学农业与生物学院上海200240 上海交通大学陆伯勋食品安全研究中心上海200240

为了以藏灵菇为发酵剂研制出新型片剂乳制食品,该文通过口味正交试验确定了藏灵菇益生菌奶片的最佳制作工艺配方,其配方的质量分数分别为10%脱脂藏灵菇奶冻干粉+40%全脂奶粉+14%白砂糖粉+2.5%硬脂酸镁+2.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+31%... 详细信息

为了以藏灵菇为发酵剂研制出新型片剂乳制食品,该文通过口味正交试验确定了藏灵菇益生菌奶片的最佳制作工艺配方,其配方的质量分数分别为10%脱脂藏灵菇奶冻干粉+40%全脂奶粉+14%白砂糖粉+2.5%硬脂酸镁+2.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+31%脱脂奶粉。通过电子鼻检测不同配比的脱脂藏灵菇益生菌奶片,绘制线性判别分析(LDA)图,客观地描述了脱脂(包括不同评分)和全脂藏灵菇益生菌奶片在LDA图上的分布区域。藏灵菇益生菌奶片的初始乳酸菌总数对数值为9.26,经过120d的4℃保存,乳酸菌总数对数值为7.41,满足市售要求。将藏灵菇和脱脂藏灵菇奶片的扫描电镜图进行比较展示了其结构以及内部菌种的分布。综合成本和品质分析,认为藏灵菇益生菌奶片的生产可行性强。

关键词：工艺优化质量控制藏灵菇益生菌奶片电子鼻线性判别分析电镜扫描

壳聚糖蜂蜡复合膜对冷冻黄桃片生理和品质的影响(英文)

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农业工程学报 2010年第4期26卷 368-374页

作者：邓云朱立伟罗文上海交通大学陆伯勋食品安全研究中心上海200240 上海交通大学农业与生物学院上海200240

为了解决延长冷冻水果保质期问题,研究了壳聚糖和壳聚糖蜂蜡复合膜对冷冻黄桃片生理和品质的影响。分析了样品多酚氧化酶(PPO)、膜透性、pH值、硬度、色泽、汁液流失、维生素C和可溶性固形物含量在–20℃下60d贮藏过程中的变化。结果表... 详细信息

为了解决延长冷冻水果保质期问题,研究了壳聚糖和壳聚糖蜂蜡复合膜对冷冻黄桃片生理和品质的影响。分析了样品多酚氧化酶(PPO)、膜透性、pH值、硬度、色泽、汁液流失、维生素C和可溶性固形物含量在–20℃下60d贮藏过程中的变化。结果表明:与对照相比,壳聚糖或壳聚糖蜂蜡复合膜抑制了PPO活性和膜透性的增加,降低了果肉褐变、汁液流失和维生素C损失。研究表明,壳聚糖-蜂蜡复合膜比单独壳聚糖更有助于减少冷冻黄桃片的汁液流失、硬度和维生素C损失,从而更好地保持了冷冻黄桃片的生理和品质。

关键词：水果贮藏生理品质黄桃可食性膜蜂蜡

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纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析

食品科学 2017年第14期38卷 1-8页

作者：崔青钱炳俊姚晓敏季顺利鲁飞凤吴静张建华上海交通大学农业与生物学院陆伯勋食品安全研究中心上海200240

纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增*** natto的aprN基因,并依据***的密码子偏好性优化了起始30个氨基... 详细信息

纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)的aprN基因编码,在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增*** natto的aprN基因,并依据***的密码子偏好性优化了起始30个氨基酸的密码子,构建了重组表达质粒pHT01-aprN。经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入***,利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。经IPTG诱导表达,摇瓶发酵培养最高酶活力为(289.00±3.42)U/mL,是野生菌的3.9倍,酶活力表达稳定性良好。

关键词：纳豆激酶 aprN基因枯草芽孢杆菌基因工程菌酶活力

添加有扩增内标的沙门氏菌荧光定量PCR检测体系的建立与评价

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微生物学报 2011年第8期51卷 1119-1127页

作者：但现龙刘斌李小玲张利达施春雷周敏史贤明上海交通大学农业与生物学院陆伯勋食品安全研究中心中美食品安全联合研究中心上海200240

【目的】建立添加有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的沙门氏菌EvaGreen荧光定量PCR检测体系,提高PCR检测可靠性。【方法】通过比较已有沙门氏菌属细菌的基因组序列,筛选沙门氏菌属特异检测靶点,设计特异引物;再用复合引... 详细信息

【目的】建立添加有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的沙门氏菌EvaGreen荧光定量PCR检测体系,提高PCR检测可靠性。【方法】通过比较已有沙门氏菌属细菌的基因组序列,筛选沙门氏菌属特异检测靶点,设计特异引物;再用复合引物法构建扩增内标,优化参数,建立沙门氏菌内标PCR检测体系,利用特异性和灵敏度实验评价体系的检测性能。【结果】筛选得到的新特异靶点基因编码III型分泌系统蛋白(ssaQ)。针对该基因设计特异引物(SsaQ6),建立了添加有扩增内标的常规PCR和EvaGreen荧光定量PCR检测体系;二者对151株沙门氏菌和34株非沙门氏菌的检测符合率均达100%,对基因组DNA的检测下限达14.9拷贝/PCR和2.76拷贝/PCR;人工污染牛奶样品(初始染菌量:4-6 cfu/10 mL),増菌10 h和8 h后分别可检出沙门氏菌。【结论】本研究发掘的新靶点基因ssaQ特异性强,基于这一新靶点建立的添加有扩增内标的EvaGreen荧光定量PCR比常规内标PCR的检测限更低,重复性更好,快速方便,在12 h内即可得出检测结果,并且定量准确,有利于推进沙门氏菌PCR检测方法的标准化应用。

关键词：沙门氏菌靶点筛选 EvaGreen荧光定量PCR 扩增内标

原壳小球藻番茄红素ε环化酶基因的克隆和分析

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微生物学报 2009年第9期49卷 1180-1189页

作者：李婷施春雷淦志兵史贤明上海交通大学农业与生物学院食品科学系陆伯勋食品安全研究中心上海200240

【目的】番茄红素ε环化酶(lycopene epsilon cyclase)是叶黄素代谢途径中处于分支位点的关键酶。它催化线性的番茄红素选择性环化,形成胡萝卜素,再进一步合成叶黄素(lutein)。本研究的目标是克隆原壳小球藻(Chlorella protothecoides C... 详细信息

【目的】番茄红素ε环化酶(lycopene epsilon cyclase)是叶黄素代谢途径中处于分支位点的关键酶。它催化线性的番茄红素选择性环化,形成胡萝卜素,再进一步合成叶黄素(lutein)。本研究的目标是克隆原壳小球藻(Chlorella protothecoides CS-41)LCYE基因的全长cDNA,通过该基因的生物学信息分析预测其表达产物的空间结构与功能位点,并验证该表达产物的生物学活性。【方法】采用cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends)和RT-PCR技术克隆原壳小球藻LCYE基因的全长cDNA序列。分别采用PredictProtein、Pfam HMMs和Swiss-Model等在线分析软件分析LCYE的基本生物学信息,预测蛋白质功能位点和空间结构。利用pET28-a(+)构建LCYE基因的原核表达质粒pET-LCYE,并转入大肠杆菌BL21(DE3),再利用IPTG诱导LCYE基因超量表达。此外,携带pAC-LYC质粒的大肠杆菌工程菌能够积累番茄红素,可用于验证LCYE基因编码蛋白的酶活。【结果】获得了原壳小球藻的LCYE基因的cDNA序列,长2107bp,GenBank登录号为FJ752528。序列分析表明:它含有1731bp的完整开放阅读框(ORF),编码576个氨基酸,与高等植物和其他藻类的LCYE有很高的相似性,其中相似性最高的是莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii XM001696477.1),达到67%。第48～459个氨基酸残基为一个典型的番茄红素环化酶蛋白(Lycopene cyclase protein)结构域(pfam05834),第261～284个氨基酸残基为一个典型的环化酶保守的模体。SDS-PAGE检测表明,LCYE基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了超量表达。携带pAC-LYC质粒的大肠杆菌工程菌在获得LCYE基因后,其颜色从粉红色变为黄色。【结论】原壳小球藻LCYE基因的全长cDNA为2107bp,预测出番茄红素ε环化酶所特有的保守功能区域,构建了它的三维结构模型。同时,阐明了小球藻和衣藻的亲缘关系。最后,证实了本研究克隆到的LCYE基因编码的蛋白具有番茄红素ε环化酶的功能与活性。

关键词：原壳小球藻叶黄素番茄红素ε环化酶

富氢水对结直肠癌荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制作用及其机制

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第二军医大学学报 2016年第9期37卷 1082-1087页

作者：张瑶姜婧周海玥蒋芮李雅婷宋立华上海交通大学农业与生物学院上海200240 上海交通大学陆伯勋食品安全研究中心上海200240

目的初步探讨富氢水(hydrogen-rich water,[H]H2O)对结直肠癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及其机制。方法小鼠右腋皮下接种人结直肠癌SW480细胞(4×106/只),建立移植瘤小鼠模型,造模的同时给予小鼠自由饮用富氢水(0.8mg/kg),每日早、中、晚3... 详细信息

目的初步探讨富氢水(hydrogen-rich water,[H]H2O)对结直肠癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及其机制。方法小鼠右腋皮下接种人结直肠癌SW480细胞(4×106/只),建立移植瘤小鼠模型,造模的同时给予小鼠自由饮用富氢水(0.8mg/kg),每日早、中、晚3次更换新鲜富氢水。对照组给予普通水。荷瘤28d后处死小鼠,取肿瘤组织,通过检测肿瘤体积和质量判断肿瘤的生长情况。用免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67蛋白的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况,比色法检测谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,基因芯片和qRT-PCR方法筛选并验证差异表达基因。结果与对照组相比,富氢水干预后可抑制小鼠肿瘤的形成,减小肿瘤体积和质量(P<0.01,P<0.05),降低Ki-67蛋白的表达(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),增高GSSG/GSH比值(P<0.05);富氢水干预可调节γ-干扰素(IFN-γ)相关基因的表达。结论在结直肠癌中,富氢水可通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、调节细胞内氧化还原环境及IFN-γ相关基因的表达而发挥抗肿瘤活性作用。

关键词：氢结直肠肿瘤细胞凋亡氧化性应激 γ-干扰素相关基因

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食品中沙门氏菌分子检测靶点的筛选与评价

微生物学报 2008年第7期48卷 941-946页

作者：向雪菲刘斌张利达史贤明上海交通大学农业与生物学院食品科学系陆伯勋食品安全研究中心上海200240

【目的】发掘新的沙门氏菌分子检测靶点,筛选检测性能优秀的引物。【方法】利用BLAST程序比较沙门氏菌属内基因组DNA序列的同源性以及沙门氏菌与非沙门氏菌基因组DNA序列之间的特异性,发掘出100多个检测沙门氏菌属的特异性片段,并从中... 详细信息

【目的】发掘新的沙门氏菌分子检测靶点,筛选检测性能优秀的引物。【方法】利用BLAST程序比较沙门氏菌属内基因组DNA序列的同源性以及沙门氏菌与非沙门氏菌基因组DNA序列之间的特异性,发掘出100多个检测沙门氏菌属的特异性片段,并从中随机挑选出15个片段作为候选靶点,一共设计了27对引物(FS1～FS27),对它们的特异性、灵敏度加以评价,从中筛选检测性能最好的引物。【结果】在27对引物中,检测性能最优的引物为FS23,采用该引物对供试菌株的相应检测靶点进行PCR扩增,44株沙门氏菌都能扩增到一条492bp特异性片段,而22株非沙门氏菌则不能扩增出这一特异性片段。以FS23为引物建立PCR方法检测猪霍乱沙门氏菌基因组DNA的灵敏度为11.9fg/μL,细菌纯培养物灵敏度为4.9×102cfu/mL;用猪霍乱沙门氏菌人工污染牛奶样品,如果接种起始菌量为100cfu/25mL时,只需要增菌5h,采用上述方法即能检测出沙门氏菌。【结论】引物FS23对应的基因序列是一个性能优良的新分子检测靶点,具备很高的特异性和灵敏性,能够广泛应用于食品中沙门氏菌的快速检测。

关键词：沙门氏菌 PCR 靶点筛选评价