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基于HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路探讨天冬多糖调控COMMD3抑制肝癌血管生成的作用机制

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中华中医药杂志 2022年第5期37卷 2836-2841页

作者：朱婷婷程紫薇邢东炜张闽光上海中医药大学附属市中医医院上海200071

目的:研究天冬多糖通过HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路调控COMMD3抑制肝癌血管生成的作用机制。方法:体外实验:采用平板克隆实验、流式细胞凋亡检测、划痕实验、Transwell小室实验和血管形成实验检测天冬多糖干预COMMD3过表达的SK-Hep1和H... 详细信息

目的:研究天冬多糖通过HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路调控COMMD3抑制肝癌血管生成的作用机制。方法:体外实验:采用平板克隆实验、流式细胞凋亡检测、划痕实验、Transwell小室实验和血管形成实验检测天冬多糖干预COMMD3过表达的SK-Hep1和Hep-3B细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和血管生成。Western Blot测定COMMD3、HIF1-α、VEGF和NF-κB蛋白表达水平。体内实验:通过构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察天冬多糖灌胃干预后裸鼠瘤体的变化和免疫组化染色检测各组裸鼠皮下移植瘤的HIF-1α、VEGF、NF-κB和CD34的表达变化。结果:体外实验:与Control组的肝癌细胞SK-Hepl和Hep-3B比较,OvCOMMD3组的增殖(P实验:ASP对裸鼠瘤体生长和血管生成的抑制作用能够被COMMD3过表达所回补,ASP对瘤体中HIF-1α、VEGF、NF-κB和CD34表达的抑制作用也被COMMD3过表达所回补。结论:天冬多糖可以通过下调COMMD3的表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管生成,其机制可能与调节HIF-1α/VEGF/NF-κB信号通路有关。

关键词：天冬多糖 CO M MD3 血管生成缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子核转录因子κB 肝癌机制

三子黄石方对骨髓增生异常综合征小鼠细胞自噬作用及其表观遗传学调控机制

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中华中医药杂志 2023年第11期38卷 5454-5458页

作者：王冬琴陶雨晨任建业胡可心徐皓王艳璐薛婷婷董孝杰陆嘉惠上海中医药大学附属市中医医院上海200071

目的:探讨三子黄石方对骨髓增生异常综合征(MDS)的可能作用机制。方法:15只MDS模型小鼠分为模型组、雄黄组、三子黄石方组,每组5只;另取5只C57BL/6J小鼠作为空白组。经口灌胃给药,2周后采集小鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)标本,使用WesternB... 详细信息

目的:探讨三子黄石方对骨髓增生异常综合征(MDS)的可能作用机制。方法:15只MDS模型小鼠分为模型组、雄黄组、三子黄石方组,每组5只;另取5只C57BL/6J小鼠作为空白组。经口灌胃给药,2周后采集小鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)标本,使用WesternBlot、ELISA检测自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、组蛋白H4K16ac、H4K16ac转移酶hMOF水平;流式细胞术、共聚焦显微镜检测自噬水平。结果:与空白组比较,模型组hMOF、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达及H4K16ac蛋白(量)表达显著降低(P<0.01,P<0.05),自噬水平及囊泡数目显著降低(P<0.01)。与模型组比较,雄黄组、三子黄石方组hMOF、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达及H4K16ac蛋白(量)表达显著升高(P<0.05,P<0.01),自噬水平及囊泡数目显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:表观遗传H4K16ac、hMOF表达及自噬降低参与MDS发病。雄黄及三子黄石方可能具有类hMOF/H4K16ac干预作用诱导MDS小鼠BMMNCs自噬发挥抗肿瘤作用,但雄黄组、三子黄石方组尚未发现明显差异。

关键词：骨髓增生异常综合征复方砷剂三子黄石方表观遗传学细胞自噬

加味荷泽降脂方对肝郁脾虚型代谢相关脂肪性肝病患者的临床疗效

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中成药 2023年第8期45卷 2794-2797页

作者：刘莉丹刘晏上海中医药大学附属市中医医院上海200041

目的考察加味荷泽降脂方对肝郁脾虚型代谢相关脂肪性肝病患者的临床疗效。方法68例患者随机分为对照组和观察组,每组34例,2组均给予健康宣教,同时对照组给予多烯磷脂酰胆碱胶囊,观察组给予加味荷泽降脂方,疗程4个月。检测临床疗效、中... 详细信息

目的考察加味荷泽降脂方对肝郁脾虚型代谢相关脂肪性肝病患者的临床疗效。方法68例患者随机分为对照组和观察组,每组34例,2组均给予健康宣教,同时对照组给予多烯磷脂酰胆碱胶囊,观察组给予加味荷泽降脂方,疗程4个月。检测临床疗效、中医证候评分和疗效、肝/脾CT值、肝功能指标(ALT、AST、ALP、GGT、TBIL)、血脂指标(TG、TC、HDL-C、LDL-C)、血黏度、体质量指数、安全性指标变化。结果观察组总有效率高于对照组(P中医证候评分、体质量指数降低(P中医临床症状,改善肝功能、影像学表现,降低血脂、血黏度、体质量。

关键词：加味荷泽降脂方代谢相关脂肪性肝病肝郁脾虚

桃红四物汤对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制

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临床肝胆病杂志 2021年第11期37卷 2563-2568页

作者：刘旭凌杨广越张玮孙田甜马文婷吴柳薛冬英刘成陶乐上海中医药大学附属普陀医院肝病实验室上海200062 上海中医药大学附属普陀医院感染科上海200062 上海中医药大学附属普陀医院中心实验室上海200062

目的探讨桃红四物汤对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和桃红四物汤组,每组8只。模型组和桃红四物汤组小鼠腹腔注射10%CCl_(4),第3周开始给予桃红四物汤灌胃给药4周... 详细信息

目的探讨桃红四物汤对CCl_(4)诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其作用机制。方法24只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和桃红四物汤组,每组8只。模型组和桃红四物汤组小鼠腹腔注射10%CCl_(4),第3周开始给予桃红四物汤灌胃给药4周,检测肝功能(ALT、AST),观测肝组织病理形态学。实时荧光定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、透明质酸合成酶-2(HAS-2)、Ⅰ型胶原(Col1)mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测α-SMA、Col1及HAS-2蛋白的表达。分离小鼠原代肝星状细胞(HSC),应用siRNA沉默HAS-2,检测其对HSC激活的影响。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用SNK或LSD-t检验。结果与正常组相比,模型组血清肝功能指标ALT、AST水平显著升高,桃红四物汤组小鼠血清ALT、AST水平均显著下降(P值均<0.01)。病理学染色显示:模型组炎症细胞浸润明显,增生的胶原纤维形成纤维间隔;桃红四物汤组胶原纤维间隔较疏松及炎症细胞浸润减轻。与模型组相比,桃红四物汤组α-SMA、Col1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P值均<0.001)。与正常组比较,模型组肝组织中HAS-2 mRNA表达水平显著升高(t=6.14,P<0.05),桃红四物汤组HAS-2蛋白表达水平(0.29±0.10)较模型组(1.00±0.12)明显减少(t=70.73,P<0.001)。siRNA沉默HAS-2,TGFβ处理后(Si HAS-2+TGFβ组)α-SMA、Col1 mRNA表达水平较NC+TGFβ组显著降低(P<0.01)。结论桃红四物汤通过抑制HAS-2对CCl 4致小鼠纤维化有显著治疗作用。

关键词：肝硬化桃红四物汤透明质酸合成酶2 小鼠,近交C57BL

电针对体外受精-胚胎移植肾精亏虚型卵巢低反应患者妊娠结局的影响

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针刺研究 2023年第4期48卷 392-398页

作者：钟秀芳宗道宽迟令侃任春霞刘希茹张武文尹萍童国庆徐莲薇上海中医药大学龙华临床医学院上海201203 上海中医药大学附属曙光医院生殖医学中心上海201203 上海中医药大学附属龙华医院中医妇科上海200032

目的:观察电针对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)肾精亏虚型卵巢低反应(POR)患者的卵巢反应性、卵子和胚胎质量及妊娠率的影响。方法:将符合纳入标准的96例患者随机分为电针组48例(脱落2例)和对照组48例。在进入IVF-ET前,电针组在对照组(空... 详细信息

目的:观察电针对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)肾精亏虚型卵巢低反应(POR)患者的卵巢反应性、卵子和胚胎质量及妊娠率的影响。方法:将符合纳入标准的96例患者随机分为电针组48例(脱落2例)和对照组48例。在进入IVF-ET前,电针组在对照组(空白等待)基础上予电针关元、气海、三阴交、肾俞等穴治疗12周,1次/d,每周2~3 d。评估两组患者治疗前后中医证候评分;化学发光法检测血清促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素、雌二醇、孕酮、抗缪勒管激素含量;ELISA法检测血清胰岛素样生长因子-1、血清抑制素B(INHB)、卵泡液Kisspeptin的含量;彩色多普勒超声观察卵巢窦卵泡数目(AFC);显微镜下观察卵子及胚胎情况等,胚胎移植14 d后计算血绒毛膜促性腺激素(HCG)阳性率、临床妊娠率。结果:与本组治疗前比较,电针组患者治疗后中医证候评分、血清FSH水平均降低(P中医证候评分、血清FSH水平均降低(P中医临床症状,提高患者的卵巢储备功能,降低血清FSH水平,提高血清INHB含量及卵子、胚胎质量,提高患者血清HCG阳性率,有改善临床妊娠结局的趋势。

关键词：电针体外受精-胚胎移植肾精亏虚型卵巢低反应妊娠结局

淫羊藿苷调控线粒体动力学改善慢性肾衰竭模型大鼠肾间质纤维化

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中国中药杂志 2022年第8期47卷 2170-2177页

作者：王蒙王凌晨冯晓轩周圆叶朝阳王琛上海中医药大学附属曙光医院肾病科上海201203 上海中医药大学中医肾病研究所上海201203 上海中医药大学肝肾疾病病证教育部重点实验室上海201203 上海市中医临床重点实验室上海201203

观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对慢性肾衰竭大鼠模型线粒体动力学的影响,探讨淫羊藿苷抗肾间质纤维化的分子机制。SD雄性大鼠采用5/6(ablation and infarction,A/I)术(左肾动脉2/3结扎,右肾切除术)制备慢性肾衰竭大鼠模型,随机分为5/6(A/I... 详细信息

观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对慢性肾衰竭大鼠模型线粒体动力学的影响,探讨淫羊藿苷抗肾间质纤维化的分子机制。SD雄性大鼠采用5/6(ablation and infarction,A/I)术(左肾动脉2/3结扎,右肾切除术)制备慢性肾衰竭大鼠模型,随机分为5/6(A/I)组、5/6(A/I)+淫羊藿苷低剂量组、5/6(A/I)+淫羊藿苷高剂量组,另取12只假手术大鼠随机分为假手术组(sham)和假手术+淫羊藿苷高剂量组(sham+ICAH)。各组给予相应干预,8周后,Western blot法检测Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、线粒体动力学相关蛋白(p-Drp1 S616、p-Drp1 S637、Mfn1、Mfn2)和线粒体功能相关蛋白(TFAM、ATP6)表达水平,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E),不同浓度淫羊藿苷干预,CCK-8法检测细胞活力;20 ng·mL^(-1)TGF-β1刺激NRK-52E细胞24 h,同时给予淫羊藿苷处理,Western blot法检测淫羊藿苷对纤维连接蛋白(Fn)、结缔组织生长因子(CTGF)、p-Drp1 S616、p-Drp1 S637、Mfn1、Mfn2、TFAM和ATP6蛋白的影响,检测ATP含量和线粒体形态;20 ng·mL^(-1)TGF-β1刺激的NRK-52E细胞用或不用5μmol·L^(-1)淫羊藿苷和10μmol·L^(-1)线粒体融合启动子M1(mitochondrial fusion promoter M1,MFP-M1)处理24 h,Western blot法检测纤维化标志蛋白Fn、CTGF的表达。Western blot结果显示,与sham组相比,5/6(A/I)组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-Drp1 S616蛋白水平升高,p-Drp1 S637、Mfn1、Mfn2、TFAM、ATP6蛋白水平降低;与5/6(A/I)组比较,淫羊藿苷组大鼠Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、p-Drp1 S616蛋白水平明显降低,p-Drp1 S637、Mfn1、Mfn2、TFAM、ATP6蛋白水平明显升高。免疫组化结果显示,5/6(A/I)组α-SMA在肾小管间质区域阳性染色较sham组升高,淫羊藿苷组较5/6(A/I)组α-SMA蛋白表达明显降低。并且,纤维化程度、线粒体动力学和线粒体功能的改善在淫羊藿苷高剂量组的大鼠中尤为突出。体外研究发现,淫羊藿苷可以剂量依赖性地抑制TGF-β1诱导NRK-52E细胞Fn、CTGF和p-Drp1 S616蛋白水平的升高,增加p-Drp1 S637、Mfn1、Mfn2、TFAM、ATP6蛋白水平,升高ATP含量和改善线粒体形态;进一步研究发现,与淫羊藿苷单独处理相比,淫羊藿苷联合MFP-M1可进一步下调TGF-β1诱导NRK-52E细胞Fn和CTGF蛋白表达。总之,淫羊藿苷可明显抑制慢性肾衰竭肾间质纤维化,其机制与改善线粒体动力学密切相关。

关键词：慢性肾衰竭肾间质纤维化线粒体动力学淫羊藿苷

液相色谱串联质谱技术在精准医疗中的应用进展

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中华预防医学杂志 2022年第11期56卷 1675-1684页

作者：金静怡裘福荣张珏上海中医药大学附属曙光医院临床药代动力学实验室上海201203 上海中医药大学附属曙光医院检验科上海201203

液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)是结合液相高分离与质谱高选择及高灵敏的一种分析方法。近年来,LC-MS/MS广泛应用于临床实践,包括先天性疾病筛查、内源性化合物水平测定、生物标志物分析等方面。因LC-MS/MS可提供准确的数据,所以对临... 详细信息

液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)是结合液相高分离与质谱高选择及高灵敏的一种分析方法。近年来,LC-MS/MS广泛应用于临床实践,包括先天性疾病筛查、内源性化合物水平测定、生物标志物分析等方面。因LC-MS/MS可提供准确的数据,所以对临床某些疾病的精准预防及诊治具有重要价值。本文阐述LC-MS/MS在精准医疗中的应用优势,并展望其在临床实践中的未来前景,以期推动临床LC-MS/MS技术在疾病预防和诊治中的发展。

关键词：精准医疗遗传性疾病,先天性生物标志物液相色谱串联质谱内源性物质

牛膝-杜仲药对治疗糖皮质激素性骨质疏松症的网络药理学分析

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中药新药与临床药理 2022年第10期33卷 1377-1385页

作者：张孙正远李峻昊章喻魏元基吴宏进王成龙戴薇薇上海中医药大学附属龙华医院科技中心实验室上海200032

目的运用网络药理学方法及体外实验探讨牛膝-杜仲药对治疗糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)的作用机制。方法利用TCMSP数据库筛选牛膝-杜仲药对的活性成分并预测其作用靶点;利用DrugBank、GeneCards、OMIM、PharmGkb数据库筛选GIOP疾病相... 详细信息

目的运用网络药理学方法及体外实验探讨牛膝-杜仲药对治疗糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)的作用机制。方法利用TCMSP数据库筛选牛膝-杜仲药对的活性成分并预测其作用靶点;利用DrugBank、GeneCards、OMIM、PharmGkb数据库筛选GIOP疾病相关靶点,并与牛膝-杜仲活性成分作用靶点映射取交集,交集基因即为牛膝-杜仲药对治疗GIOP的潜在作用靶点。采用STRING数据库构建潜在作用靶点的蛋白互作(PPI)网络;利用Cytoscape 3.8.2软件构建“活性成分-潜在作用靶点”网络;通过R 4.1.1软件对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析。以牛膝-杜仲(10μg·mL-1)对地塞米松(10-5mol·L^(-1))诱导损伤的MLO-Y4骨细胞进行干预,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果从牛膝、杜仲中分别筛选出20、28个活性成分,预测得到976个作用靶点(牛膝、杜仲共同作用靶点205个),筛选出2006个GIOP疾病相关靶点,最终确定133个牛膝-杜仲药对治疗GIOP的潜在作用靶点。筛选出槲皮素、山柰酚、汉黄芩素、黄芩素、β-胡萝卜素、β-谷甾醇、豆甾醇等关键活性成分;得到JUN、FOS、ESR1、MYC、CDKN1A、AKT1、CCND1、CTNNB1、HIF1A、MAPK14、RELA等核心靶点;KEGG通路富集分析得到166条信号通路,筛选得到与GIOP密切相关的细胞增殖、凋亡相关通路及骨代谢相关通路。体外实验结果显示,与模型组比较,牛膝+杜仲组的细胞存活率明显升高,细胞总坏死率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论牛膝-杜仲药对治疗GIOP具有多成分、多靶点、多途径的特点,可能与其通过槲皮素、山柰酚、黄芩素、β-谷甾醇等活性成分,调控细胞凋亡、自噬、PI3K-Akt、HIF-1等多条信号通路有关。

关键词：牛膝杜仲糖皮质激素性骨质疏松症网络药理学 MLO-Y4骨细胞凋亡体外实验

基于蛋白质组学探讨泻南补北法对去卵巢雌鼠脑组织蛋白表达水平的影响

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中华中医药杂志 2022年第7期37卷 4026-4032页

作者：吴宏进戴薇薇王利波张婕王成龙上海中医药大学附属龙华医院科技中心实验室上海200032

目的:基于蛋白质组学方法研究泻南补北法对去卵巢雌鼠脑组织蛋白表达水平的影响,进而探索其脑保护机制。方法:将40只雌性SD大鼠随机分为4组,对照组(等容积蒸馏水)、模型组(等容积蒸馏水)、中药组(中药复方,5.46g·kg^(-1)·d^(-1))、西... 详细信息

目的:基于蛋白质组学方法研究泻南补北法对去卵巢雌鼠脑组织蛋白表达水平的影响,进而探索其脑保护机制。方法:将40只雌性SD大鼠随机分为4组,对照组(等容积蒸馏水)、模型组(等容积蒸馏水)、中药组(中药复方,5.46g·kg^(-1)·d^(-1))、西药组(戊酸雌二醇,0.1mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。给药6周后,分析各组大鼠体质量、性激素水平。取大鼠脑组织用非标记蛋白质组学联合液性色谱质谱(LC-MC/MC)进行蛋白质组学分析,并将筛选出差异蛋白进行Western blot法进行检测验证。结果:共得到4678个蛋白质。对照组和模型组共有87个差异蛋白(上调37个,下调50个);中药组和模型组共有242个差异蛋白(上调95个,下调147个)。中药组或西药组与对照组变化趋势相一致的差异蛋白质有22个,这些差异蛋白质主要涉及脂肪酸代谢、生物氧化、信号转导、胆固醇代谢、免疫反应、应激反应及细胞凋亡等生物学过程;Western blot方法检测相关差异蛋白结果,泻南补北法对去卵巢大鼠脑组织中的GAT1、ApoE、JNK和p-JNK蛋白具有一定的调节作用(P<0.05),与蛋白质组学分析结果一致。结论:泻南补北法可能通过调节GAT1、ApoE、JNK、p-JNK等蛋白水平,影响脂质代谢、免疫反应、应激反应等,从而实现对去卵巢大鼠的脑部保护作用。

关键词：泻南补北围绝经期脑保护蛋白质组学中医药神经系统疾病