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不同刚度Ⅰ型胶原凝胶三维环境调控NK细胞免疫功能

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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 81-86页

作者：龙世棋吴翠芳曾柱贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院免疫学教研室贵阳550029

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,... 详细信息

目的构建不同刚度Ⅰ型胶原凝胶并探讨其三维(three-dimensional,3D)培养环境对自然杀伤(natural killer,NK)细胞形态、自由迁移能力以及细胞杀伤功能的影响。方法分离Sprague Dawley(SD)大鼠鼠尾Ⅰ型胶原蛋白并制备不同刚度的胶原凝胶,通过激光共聚焦显微镜观察其微结构,流变仪测量平台期的储能模量表征其刚度。将NK-92MI细胞培养于不同刚度Ⅰ型胶原凝胶中,倒置显微镜观察NK-92MI细胞的形态,高内涵成像系统记录NK-92MI细胞的自由迁移过程,分析迁移速度和距离。不同刚度的Ⅰ型胶原凝胶培养NK-92MI细胞24、48 h,再与人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)共培养后,用CCK8法检测DLD-1细胞增殖率,分析NK-92MI细胞的细胞杀伤能力。结果成功制备出刚度为(10.97±2.10)Pa的低刚度Ⅰ型胶原凝胶和刚度为(114.50±3.40)Pa的高刚度Ⅰ型胶原凝胶。与在低刚度Ⅰ型胶原凝胶中相比,在高刚度Ⅰ型胶原凝胶中,NK-92MI细胞呈现更细长的形态(P学意义。与低刚度Ⅰ型胶原凝胶相比,高刚度Ⅰ型胶原凝胶培养24 h的NK-92MI细胞可促进DLD-1细胞增殖〔增殖率(46.39±12.79)%vs.(65.87±4.45)%,P学意义。结论不同刚度Ⅰ型胶原凝胶3D培养环境可改变NK-92MI细胞的形态、迁移能力以及杀伤功能。该研究为探索和理解生物力学微环境影响NK细胞免疫应答机制提供了研究基础,为优化免疫治疗方案提供理论依据。

关键词： Ⅰ型胶原细胞外基质力学杀伤细胞免疫应答

白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的特异性细胞免疫应答对BMDM细胞中DENV-2复制的影响

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中国热带医学 2024年第8期24卷 907-913页

作者：覃燕春李莹胡欢周璐黄贞植吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州贵阳561113 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳561113

目的体外探究白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1诱导的小鼠脾淋巴细胞特异性免疫应答对2型登革病毒(dengue virus type 2,DENV-2)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的影响。方法采用CCK-8法分析rAlb-34k2-1蛋白对免疫/未免疫小鼠脾细胞的特异性增殖反应;制备荷载蚊唾液蛋白rAlb-34k2-1、rAalb_CTL1蛋白(蚊唾液C型凝集素蛋白)的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),与免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养,取细胞培养上清处理DENV-2感染的BMDM细胞,实时荧光定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测DENV-2的核酸变化,分析rAlb-34k2-1蛋白诱导的特异性T淋巴细胞应答对BMDM内DENV-2复制的影响。将免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞与rAlb-34k2-1蛋白预处理的感染BMDM进行共培养,通过qRT-PCR检测培养48、72 h后DENV-2 E基因的表达,分析免疫/未免疫小鼠淋巴细胞对预处理的BMDM中DENV-2复制的影响。结果小鼠脾细胞体外特异性增殖实验显示,与未免疫组比较,rAlb-34k2-1蛋白能导致免疫小鼠脾细胞特异性增殖,刺激指数(stimulation index,SI)>2,P免疫/未免疫小鼠脾淋巴细胞混合培养后,rAlb-34k2-1预处理的BMDM中DENV-2复制无差异。结论rAlb-34k2-1蛋白诱导的小鼠T淋巴细胞应答上清可抑制BMDM细胞中DENV-2的复制,为探究蚊唾液蛋白诱导免疫效应在蚊媒病毒致病中的作用提供前期实验基础。

关键词： rAlb-34k2-1蛋白 2型登革病毒细胞免疫应答

癌相关成纤维细胞与M2型巨噬细胞相互作用促进肿瘤发生发展的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第2期40卷 168-173页

作者：吴江为张巧玲杨泽羊张瑞张舰曾柱吴介恒贵州医科大学免疫学教研室贵州贵阳550025 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 贵州医科大学附属医院胸外科贵州贵阳550001

癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境(TME)中主要成分之一。在TME中,肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间或非肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间的相互作用能促进肿瘤发生发展。CAF可与多种免疫细胞之间产生相互作用,通过抑制适应性免疫细胞功能,重塑TME中... 详细信息

癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境(TME)中主要成分之一。在TME中,肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间或非肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间的相互作用能促进肿瘤发生发展。CAF可与多种免疫细胞之间产生相互作用,通过抑制适应性免疫细胞功能,重塑TME中免疫微环境促进肿瘤的发生发展。其中CAF与巨噬细胞相互作用,并诱导巨噬细胞向M2型极化在促进肿瘤发生发展中起到重要作用。

关键词：癌相关成纤维细胞(CAF) M2型巨噬细胞肿瘤微环境(TME) 细胞相互作用综述

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疟原虫内膜复合体蛋白研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 111-116,120页

作者：韩竹茜朱晓彤中国医科大学基础医学院免疫教研室辽宁沈阳110122

疟疾是由疟原虫感染所致的全球危害最严重的三大传染病之一。疟原虫的裂殖子、动合子和子孢子均具有特征性的内膜复合体(IMC)。IMC定位于质膜下,在胞质侧与膜下网络紧密相连。IMC在细胞分裂过程中提供支撑骨架,维持细胞的形态和稳定性,... 详细信息

疟疾是由疟原虫感染所致的全球危害最严重的三大传染病之一。疟原虫的裂殖子、动合子和子孢子均具有特征性的内膜复合体(IMC)。IMC定位于质膜下,在胞质侧与膜下网络紧密相连。IMC在细胞分裂过程中提供支撑骨架,维持细胞的形态和稳定性,参与疟原虫发育和入侵宿主细胞等过程。深入研究IMC蛋白的结构、功能和转录调控机制,对研发相应的抑制剂或阻断剂以阻断疟疾传播有重要意义。本文就近年来IMC蛋白结构及其转录调控机制的研究进展进行综述。

关键词：疟原虫内膜复合体肺泡蛋白棕榈酰化磷酸化

NLRP3炎症小体在感染性疾病中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1371-1376页

作者：高雪涵卫麟娜董品志陈晋柯源张浪浪王海燕覃明罗军敏遵义医科大学基础医学院免疫学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学流行病学与卫生统计学教研室

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的... 详细信息

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nucleotide-bindingoligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)是一类存在于胞浆中的大分子蛋白复合物,作为炎症反应的核心,能够感知外源性病原体和内源性危险信号,在多种感染性疾病的发生发展中发挥重要作用。因此,本文对NLRP3炎症小体的激活机制以及NLRP3炎症小体在感染性疾病中的研究进展予以综述,旨在为感染性疾病的治疗提供新的靶点。

关键词：固有免疫模式识别受体 NLRP3炎症小体感染性疾病综述

基于蛋白质组学探讨Ppp3cb和Ppm1g在NHE1基因敲除模型鼠海马组织中的表达

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陆军军医大学学报 2024年第11期46卷 1244-1253页

作者：马鹏飞杨攀郑乾张祥明屠秋霞张春林叶兰冯占辉贵州医科大学临床医学院贵阳550000 贵州医科大学基础医学院:分子医学工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物教研室贵阳550025

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫... 详细信息

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫游泳实验对模型组和对照组小鼠进行行为学评估,并按照Racine评分标准对模型鼠进行癫痫发作分级;②通过串联质谱分析技术对模型组和对照组的海马组织进行差异蛋白筛选,基因本体论(Gene Ontology Analysis,GO)分析差异蛋白并进行注释和富集,蛋白网络数据库(search tool for the retrieval of interesting genes,STRING)分析差异蛋白之间的蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI);③应用qPCR和Western blot检测Ppp3cb和Ppm1g的转录和翻译水平,应用免疫组织化学技术分别观察其在组织中的表达量。结果①模型组小鼠NHE1基因未见表达,旷场实验中模型鼠的运动总距离较对照组减少(P=0.0073),跨越的格子数比对照组显著减少(P免疫系统过程的差异蛋白数量最多。STRING分析显示差异蛋白Ppp3cb和Slc9a1直接作用,Ppm1g通过Ppp3cb和Slc9a1间接作用,Ppp3cb和Ppm1g之间相互作用。③Ppp3cb的转录和翻译水平减少,在组织中的表达量下降,而Ppm1g转录和翻译水平增加,在组织中的表达量上升(P<0.05)。结论本研究确定了NHE1基因敲除小鼠海马组织中差异蛋白Ppp3cb表达下调,而Ppm1g表达上调,为进一步研究Ppp3cb和Ppm1g参与癫痫发病机制提供了依据。

关键词： NHE1基因敲除癫痫海马蛋白质组学 Ppp3cb Ppm1g

高通量测序揭示系统性红斑狼疮B细胞异常的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第7期44卷 641-645页

作者：夏彦祺赵晗段荦袁慧慧首都医科大学基础医学院免疫学系北京100069

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以致病性自身抗体和免疫复合物形成并介导多器官损伤的急性或慢性自身免疫病,好发于育龄期女性,具有显著异质性。自身反应性B细胞过度活化产生自身抗体是SLE全身免疫病理损伤的... 详细信息

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以致病性自身抗体和免疫复合物形成并介导多器官损伤的急性或慢性自身免疫病,好发于育龄期女性,具有显著异质性。自身反应性B细胞过度活化产生自身抗体是SLE全身免疫病理损伤的重要原因,靶向B细胞治疗SLE的显著疗效提示其在疾病发生和进展中的重要作用。由于自身反应性B细胞参与疾病进展的具体机制和标志分子尚不明确,目前,B细胞耗竭疗法均是针对总的B细胞群体,无法靶向清除自身反应性B细胞。随着科学技术手段的进步,高通量测序技术为研究SLE B细胞异常提供了新思路。本综述重点就高通量测序揭示B细胞受体新的异常、新的B细胞亚群和B细胞相关治疗靶点等在SLE中的作用进展进行总结和讨论,为深入了解SLE的发病机制和探讨治疗方法提供借鉴。

关键词：系统性红斑狼疮高通量测序 B细胞亚群 B细胞受体自身免疫

过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 118-127页

作者：王舜蒋林何琦杨浩王依滢周宇宁梁芯张毅晁凤蕾张蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位... 详细信息

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P学习与记忆能力。

关键词： LINGO-1 树突棘突触海马学习记忆

当归多糖调控肠道菌群对脑缺血再灌注小鼠的影响

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中国临床解剖学杂志 2024年第3期42卷 270-277页

作者：阙松年涂经典韩尚峰熊航宋海旺黄涛贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳561113

目的探讨当归多糖(Angelica Sinensis Polysaccharide,ASP)改善小鼠肠道微生态对脑缺血再灌注(Ischemia/reperfusion injury,I/R injury)的影响。方法将雄性SPF级昆明小鼠随机分为假手术组(Sham组),大脑中动脉栓塞组(MCAO组),当归多糖灌胃组(ASP组),粪菌移植组(Fecal microbiota transplantation,ASP-FMT),每组16只。连续给药7 d后建立MCAO模型,24 h后使用mNSS法检测小鼠神经功能缺陷评分;TTC染色法检测脑梗死相对面积;试剂盒法测定右侧大脑缺血半暗带组织SOD、MDA、GSH含量;Western blot测定炎症因子IL-1β、IL-5、IL-6、IL-10表达量;盲肠内容物16s rRNA测序分析肠道微生物多样性。结果与MCAO组相比,ASP干预后小鼠神经功能明显改善(P<0.001),脑梗死相对面积明显减少(P<0.01),氧化应激水平下降(P<0.05);与MCAO组相比,ASP降低了脑组织IL-1β、IL-5及IL-6表达、上调IL-10表达量(P<0.05);MACO后小鼠肠道菌群丰富度明显减少,益生菌比例下调,当归多糖灌胃或菌群移植均可部分恢复菌群丰富度,上调益生菌比例;肠道菌群的变化与脑组织损伤程度具有相关性。结论当归多糖通过改善肠道微生态,降低氧化应激水平,下调炎症因子水平,减轻脑缺血再灌注后神经功能损伤,减少梗死范围。

关键词：脑缺血再灌注损伤当归多糖肠道菌群炎症反应