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抗金黄色葡萄球菌融合魏斯氏菌细菌素的理化特性分析及全基因组测序分析

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中国畜牧兽医 2024年 4559-4567页

作者：刘咪咪赵新凌苏惠李国江董文龙吉林农业科技学院动物科技学院吉林省预防兽医学重点实验室吉林省猪生态养殖及疫病防控科技创新中心

[目的]筛选产抗金黄色葡萄球菌细菌素的乳酸菌,分析其所产细菌素的理化特性并对其进行全基因组测序分析。[方法]本研究以金黄色葡萄球菌为指示菌株,从吉林省延边市的桔子中筛选产抑菌物质的乳酸菌。对筛选得到的菌株进行形态学观察和相... 详细信息

[目的]筛选产抗金黄色葡萄球菌细菌素的乳酸菌,分析其所产细菌素的理化特性并对其进行全基因组测序分析。[方法]本研究以金黄色葡萄球菌为指示菌株,从吉林省延边市的桔子中筛选产抑菌物质的乳酸菌。对筛选得到的菌株进行形态学观察和相似性鉴定,并构建系统发育树。通过排酸、排过氧化氢和蛋白酶敏感试验对抑菌物质进行初步分析,并测定抑菌物质对温度和紫外线的耐受性。对菌株进行全基因组测序及功能分析。[结果]筛选得到1株产抗金黄色葡萄球菌抑菌物质的乳酸菌,命名为LMM-1,在MRS固体培养基上为乳白色、光滑湿润的圆形菌落;革兰染色后在油镜下为短杆阳性菌。核酸序列经16S rRNA鉴定与融合魏斯氏菌相似性为99.86%,确定LMM-1为融合魏斯氏菌。排除有机酸试验结果显示,发酵上清液抑菌活性显著大于对照组;排除过氧化氢试验结果显示,抑菌活性几乎不变,可排除有机酸和过氧化氢的干扰。经蛋白酶处理分离菌抑菌产物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用降低;在100℃高温、pH 2.0～8.0和2 h的紫外线照射下,仍具有良好抑菌活性。基因测序发现,LMM-1基因组长2 194 218 bp,共有2 045个基因被预测,基因组平均GC含量为44.97%。GO功能富集分析结果显示,分子功能中的催化活性和生物过程中的代谢过程得到的基因组功能注释最多,分别为905和801个。KEGG通路富集分析结果显示,在遗传代谢、遗传信息处理和环境信息处理中有49条代谢通路,共有1 050个基因得到功能注释。[结论]融合魏斯氏菌LMM-1产细菌素对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,且细菌素具有一定的耐酸碱、高温和紫外线的能力,对环境具有良好的适应性,该菌含有较多与催化活性和新陈代谢相关的基因。本研究结果可为抗金黄色葡萄球菌替抗产品的研发奠定基础。

关键词：融合魏斯氏菌抗菌作用细菌素金黄色葡萄球菌

2018年~2021年河北省部分地区鸡源沙门菌的生物学特性及致病性研究

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中国预防兽医学报 2024年第1期46卷 16-23,31页

作者：李涵赵允清谢相悦庄洪霞王璐苏蒙蒙韩平成文武刘永波张艳英河北科技师范学院、河北省预防兽医学重点实验室河北秦皇岛066004 河北省肉鸡养殖与加工技术创新中心、河北滦平华都食品有限公司河北承德067000

为调查河北地区鸡源沙门菌及其血清型的流行及分布情况,并分析其的致病性,本研究于2018年~2021年在河北省7个地区34个养鸡场共收集631份发病鸡肛拭子和62份病料样品共计693份,分别接种普通琼脂培养基分离细菌并纯化后经革兰氏染色镜检;... 详细信息

为调查河北地区鸡源沙门菌及其血清型的流行及分布情况,并分析其的致病性,本研究于2018年~2021年在河北省7个地区34个养鸡场共收集631份发病鸡肛拭子和62份病料样品共计693份,分别接种普通琼脂培养基分离细菌并纯化后经革兰氏染色镜检;将分离菌分别接种不同的培养基培养,并对分离菌经生化及16S r RNA基因的PCR及测序鉴定,随机选择32条测序序列经NCBI的BLAST比对,并采用DNAStar软件分析该基因的同源性。采用玻片凝集法鉴定分离菌的血清群及血清型并统计各血清群与血清型在河北不同地区的分布。结果显示,从693份病料样品中共分离到238株沙门菌,除3株未定群外,其余分离菌分属于A、B、C、D、E、F 6个血清群,其中D群最多达69.7%(166/238);238株沙门菌分属于7个不同的血清型和未定型,依次为鸡白痢沙门菌(91/38.2%)、甲型副伤寒沙门菌(43/18.0%)、鸡伤寒沙门菌(40/16.8%)、肠炎沙门菌(39/16.4%)等。血清群与血清型分布的统计结果显示,除张家口地区流行A群血清群外,其余地区流行的血清群均为D群;张家口地区流行鸡白痢沙门菌;秦皇岛地区有14种血清型,其中甲型副伤寒沙门菌为其流行血清型;石家庄、承德、唐山流行的均为鸡白痢沙门菌,邢台及保定地区分别流行肠炎沙门菌与鸡伤寒沙门菌。通过K-B药敏纸片法检测238株分离菌对7类共22种药物的敏感性;采用PCR检测分离菌的相关耐药基因并采用SPSS26.0软件中的Fisher确切概率法分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性。选取12株不同血清型的分离菌以0.2 m L/只(3×108cfu/mL)感染雏鸡,分析各分离菌对雏鸡的致病性。药敏试验结果显示,对苯唑西林、红霉素、青霉素、甲氧苄啶、氨苄西林、四环素耐药的菌株分别占97.5(232/238)、89.1%(212/238)、78.6%(187/238)、74.8%(178/238)、74.4%(177/238)、64.3%(153/238),对其它药物耐药的菌株均在32%以下,但均对头孢类药物敏感;且分离菌多呈多重耐药性(58.4%,139/238),耐6重药物的菌株(32.8%,78/238)与耐5重药物的菌株(11.8%,28/238)最多。耐药基因检测结果显示,对β-内酰胺类、磺胺类、大环内酯类、四环素类、氨基糖苷类药物的耐药基因tem、erm(B)a、tetA、strA-B的检出率分别为100%(238/238)、75.2%(178/238)、71%(169/238)、65.6%(156/238)及31.9%(76/238)。未检测到喹诺酮类和醛胺醇类耐药基因。经分析,氨基糖苷类、四环素类、磺胺类、β-内酰胺类、大环内酯类药物的耐药表型与其耐药基因的符合率分别为94.7%、98.1%、99.4%、97.5%、79.9%,相关性均较强。致病性试验结果显示,12株分离菌均能致感染鸡出现不同的临床症状及肝脏和肠道的剖检病变,且能对鸡造成不同程度的死亡,其中以致鸡死亡10只(100%)、7只(87%)为主,并从死亡鸡的肝脏再次分离到相应细菌。上述结果表明,本研究从河北不同地区分离的238株沙门菌血清群与血清型众多,大多数沙门菌的耐药性较强且多呈多重耐药性,其携带的5类药物的耐药基因与其相对应的耐药表型均呈较强的相关性,且分离菌对雏鸡呈不同的致病性。本研究为河北地区鸡源沙门菌的流行病学调查及其感染的防治提供参考依据。

关键词：鸡源沙门菌血清型鉴定药物敏感性试验耐药基因耐药性分析

清远麻鸡禽白血病病毒感染特点及其受体基因序列多态性分析

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中国兽医学报 2024年第7期44卷 1380-1386+1393页

作者：郑小雪舒雪利王红梅高明超余铭成李奕滨廖明曹伟胜华南农业大学兽医学院广东天农食品集团股份有限公司人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室农业农村部兽用疫苗创制重点实验室

为了解目前不同清远麻鸡规模化种鸡场外源性禽白血病病毒（avian leukosis virus, ALV）感染特点及其受体基因Tva、Tvb及NHE1序列多态性，本研究对5个清远麻鸡种鸡场进行外源性ALV病毒分离鉴定和受体基因扩增及测序分析。病毒分离及亚... 详细信息

为了解目前不同清远麻鸡规模化种鸡场外源性禽白血病病毒（avian leukosis virus, ALV）感染特点及其受体基因Tva、Tvb及NHE1序列多态性，本研究对5个清远麻鸡种鸡场进行外源性ALV病毒分离鉴定和受体基因扩增及测序分析。病毒分离及亚群鉴定结果显示：A、B、C 3个场的外源性ALV病毒分离阳性率均低于5%,其中A场存在ALV-J单独感染，B场存在ALV-J和ALV-K混合感染，C场存在ALV-K单独感染，而D场和E场未检测出外源性ALV感染。受体基因多态性分析显示：A～E场均存在不同频率的Tvar3、Tvar4和Tvbr3抗性等位基因，Tvar3的分布频率为0.2～0.6,Tvar4的分布频率为0.3～0.7,Tvbr3的分布频率为0.1～0.7。此外，B场和D场还存在Tvar5抗性等位基因，分布频率均为0.2。NHE1受体基因序列发生18个SNP突变，其中1 279、1 361、1 369、1 406、1 442、1 912位为非同义突变，可引起氨基酸发生改变。结果表明，5个清远麻鸡规模化种鸡场外源性ALV感染率和亚群有差异，各场应该有更针对性的独特净化策略；不同频率的Tva和Tvb抗性等位基因分布以及NHE1基因发生的6个非同义突变使清远麻鸡具有一定的遗传抗性选育的潜力。

关键词：清远麻鸡禽白血病病毒 Tva Tvb NHE1

STING agonist 22免疫增强剂配伍ASFV P30蛋白对猪免疫效果的评价

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1137-1148页

作者：彭勤曹伟军杨帆刘华南茹毅朱紫祥郑海学张桂红华南农业大学兽医学院广东省人畜共患病防控重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本试验旨在探究STING agonist 22为候选免疫增强剂，配伍ASFV P30靶标蛋白开展对猪的免疫效果评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗免疫增强剂的筛选提供前期实验依据。选取本实验室原核表达ASFV免疫原性较高的P30结构蛋白作为靶标抗原，并结合ST... 详细信息

本试验旨在探究STING agonist 22为候选免疫增强剂，配伍ASFV P30靶标蛋白开展对猪的免疫效果评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗免疫增强剂的筛选提供前期实验依据。选取本实验室原核表达ASFV免疫原性较高的P30结构蛋白作为靶标抗原，并结合STINGagonist 22免疫增强剂与ISA201VG佐剂配伍ASFV P30蛋白2次免疫试验猪，比较STING agonist 22免疫增强剂诱导细胞免疫、体液免疫和抗原递呈反应的增强作用。结果显示，与单独201VG佐剂配伍相比，增加STING agonist 22免疫增强剂组免疫试验猪可以显著提早P30介导的抗体应答时间，提高B细胞成熟分化相关转录因子的表达水平，促进DCs成熟并增强其抗原递呈。本研究结果表明，STING agonist 22免疫增强剂配伍ASFV P30蛋白可以明显提高猪的细胞免疫、体液免疫反应及诱导更强的抗原递呈，可作为一种ASF亚单位疫苗的免疫增强剂。

关键词：非洲猪瘟病毒 STING agonist 22 免疫增强剂树突状细胞

艾美耳球虫的遗传操作:平台建立、应用与展望

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3362-3373页

作者：梁瑞英索静霞梁琳刘贤勇丁家波索勋汤新明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方)农业农村部兽用生物制品与化学药品重点实验室北京100193 中国农业大学动物医学院、兽医公共卫生安全全国重点实验室、农业农村部国家动物寄生原虫实验室北京100193

艾美耳属球虫是畜牧生产中最常见的寄生虫,引起鸡、兔、羊、牛等养殖动物严重消化系统疾病,影响动物健康和养殖效益。随着分子生物学技术的飞速发展,研究者们先后建立了艾美耳球虫的瞬时转染、稳定筛选和基因编辑等遗传操作平台,实现了... 详细信息

艾美耳属球虫是畜牧生产中最常见的寄生虫,引起鸡、兔、羊、牛等养殖动物严重消化系统疾病,影响动物健康和养殖效益。随着分子生物学技术的飞速发展,研究者们先后建立了艾美耳球虫的瞬时转染、稳定筛选和基因编辑等遗传操作平台,实现了艾美耳球虫的基因过表达、基因敲除和基因编辑等操作,极大推进了艾美耳球虫基础生物学和作为新型真核载体疫苗的研究进展,但仍面临一些挑战。本文围绕艾美耳球虫遗传操作平台建立的关键技术、创新性设计、存在的技术瓶颈以及应用前景进行系统梳理和总结,为其他畜禽寄生虫遗传操作平台的构建提供参考,也为球虫病新型防控制剂的研制提供新的思路。

关键词：艾美耳球虫遗传操作基因编辑技术瓶颈疫苗载体

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蛋白桑在畜禽生产上的应用研究进展

中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 66-72,78页

作者：徐晓峰何至远董虹北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京市中兽药工程技术研究中心北京102206

“桑树浑身都是宝”,桑白皮、桑枝桑叶、桑葚,乃至桑树的寄生物——桑寄生,都具有很高的药用价值,其中桑葚和桑叶还可供人类食用,是药食同源的代表性植物。此外,大量研究发现桑树可开发作为畜禽饲料。在1998年,国内研究人员从全国28个... 详细信息

“桑树浑身都是宝”,桑白皮、桑枝桑叶、桑葚,乃至桑树的寄生物——桑寄生,都具有很高的药用价值,其中桑葚和桑叶还可供人类食用,是药食同源的代表性植物。此外,大量研究发现桑树可开发作为畜禽饲料。在1998年,国内研究人员从全国28个桑树地方品种中选育出了一种具备杂交优势的饲料桑,并命名为“蛋白桑”或“饲料桑”。蛋白桑生命力顽强,生长快速,营养成分丰富,且有良好的药用、饲用及生态价值,具备良好的饲料开发资源与利用前景。与此同时,蛋白桑可以调控多种畜禽的营养代谢过程,改善肉品质,并增强畜禽的抗病能力。本文重点对蛋白桑作为畜禽饲料的优势以及在生产中应用效果的新研究成果进行总结,以期为在畜禽养殖过程中合理开发和应用蛋白桑提供理论支持。

关键词：蛋白桑饲料桑叶畜禽养殖

不同添加剂对蚕豆秸秆青贮品质及微生物多样性的影响

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草业学报 2024年

作者：陈鑫珠林平冬岳稳杨雅妮邱水玲郑向丽福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽遗传育种重点实验室福建农林大学动物科学学院福建省农业科学院资源环境与土壤肥料研究所

为研究不同添加剂对蚕豆秸秆青贮品质和微生物多样性的影响，设3%蔗糖（T1组）、乳酸菌（T2组）、乳酸菌+3%蔗糖（T3组）、乳酸菌+0.2%柠檬酸（T4组）、0.2%柠檬酸（T5组）、0.03%NaCl（T6组）、0.1%维生素C（T7组）7个添加剂处理组和... 详细信息

为研究不同添加剂对蚕豆秸秆青贮品质和微生物多样性的影响，设3%蔗糖（T1组）、乳酸菌（T2组）、乳酸菌+3%蔗糖（T3组）、乳酸菌+0.2%柠檬酸（T4组）、0.2%柠檬酸（T5组）、0.03%NaCl（T6组）、0.1%维生素C（T7组）7个添加剂处理组和无添加剂对照组（CK组），每个处理3个重复。青贮30 d后开封取样，进行青贮料的感官质量、青贮品质及微生物多样性分析。结果表明，1)在感官质量上，7个添加剂处理组均为1级，优于CK组；2)在青贮品质上，与对照组相比，T1组的乙酸（AA）含量显著提高（P生物多样性上，各组在属水平上的优势菌群均为肠杆菌属（占比19.3%～41.3%）和乳植杆菌属（占比12.0%～40.0%）；与对照组相比，T3、T5、T7组的乳植杆菌属、片球菌属和魏斯氏菌属相对丰度显著提高（P生物群落结构，其中乳酸菌联合3%蔗糖处理的青贮发酵效果最佳。

关键词：蚕豆秸秆添加剂青贮品质微生物多样性

病毒宏基因组学检测猪博卡病毒及其遗传进化分析

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中国兽医杂志 2024年第4期60卷 50-57页

作者：孙晓瑜单虎黄娟青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 山东省预防兽医学重点实验室山东青岛266109 山东省兽药诊断试剂工程技术研究中心山东青岛266109

为了探明导致某养猪场中仔猪腹泻的病原,本试验将患病仔猪样本处理并提取核酸后进行病毒宏基因组测序,对测序结果进行序列比对分析和遗传进化分析,并对样本核酸进行PCR检测验证。结果显示,RNA样本中只注释到A型流感病毒(H1N1和H3N2),读... 详细信息

为了探明导致某养猪场中仔猪腹泻的病原,本试验将患病仔猪样本处理并提取核酸后进行病毒宏基因组测序,对测序结果进行序列比对分析和遗传进化分析,并对样本核酸进行PCR检测验证。结果显示,RNA样本中只注释到A型流感病毒(H1N1和H3N2),读数比为6.8%,未发现其他猪病相关RNA病毒。DNA样本注释到的病毒主要为猪博卡病毒(PBoV),读数比为34.5%,命名为PBoV-SDPD-2022;其余猪病相关病毒包括猪巨细胞病毒、猪乳腺腺病毒和猪细环病毒,读数比均小于1.0%。基于全基因组、NS 1基因和VP 1基因构建的系统发育进化树均显示,PBoV-SDPD-2022与参考毒株PBoV3_VIRES_HuB01_C1处于同一分支,属于PBoV G3群。与21株参考毒株相比,PBoV-SDPD-2022 NS1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为49.6%~97.2%和38.5%~95.3%;VP1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为47.9%~97.9%和34.8%~98.8%;NP1蛋白的编码基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为35.2%~98.5%和26.9%~97.4%。与G3群参考毒株相比,PBoV-SDPD-2022 NS1蛋白在第654位点处有1个氨基酸的缺失;VP1蛋白在第151、152位点处有2个氨基酸的插入,且包含基序YLGPF(VPl aa 18~22)和HDLAY(VP1 aa 41~45);NP1蛋白在第15、16、35、36、212位点处发生氨基酸的缺失,在第95位点处有1个氨基酸的插入。PCR检测证实样本核酸为PBoV阳性。结果表明,导致该养猪场仔猪腹泻的优势病原是G3群PBoV。本试验有助于进一步了解我国PBoV基因组序列特征,并为未来PBoV流行病学调查提供了参考依据。

关键词：病毒宏基因组学猪博卡病毒遗传进化分析

微生物检测技术在动物细菌性疫病诊断中的研究进展

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微生物学杂志 2024年第4期44卷 111-118页

作者：孙志刚刘静王奕凯任晓敏司晓慧吕若一张倩董虹孙英健刘晓晔北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京102206 北京农学院动物科学技术学院北京102206

动物细菌性疾病一直是困扰我国兽医临床和畜禽健康养殖的一大难题,细菌性疾病的传播能力及耐药性变异能力使临床用药举步维艰,而不合理用药导致的药物残留问题,不仅危害动物和人类健康,也给养殖户造成巨大经济损失。动物细菌性疫病的快... 详细信息

动物细菌性疾病一直是困扰我国兽医临床和畜禽健康养殖的一大难题,细菌性疾病的传播能力及耐药性变异能力使临床用药举步维艰,而不合理用药导致的药物残留问题,不仅危害动物和人类健康,也给养殖户造成巨大经济损失。动物细菌性疫病的快速诊断是阻断细菌传播的先决条件之一,也是制定合理用药方案的基础。微生物检测方法是动物细菌性疫病快速诊断的主要技术手段。传统的微生物检测技术仍是现阶段的主流方法。然而,随着细菌不断变异,生存环境不断变化,传统方法不足以应对细菌变异多样、抗菌药物匮乏的当下。不断革新的微生物检测技术也随科技发展产生了许多满足临床需求的新兴技术,不仅可以快速诊断动物细菌性疾病,区分活死细菌数量,也能直观的反应细菌与药物的相互作用。本文从传统的检测手段到基于核酸、蛋白质、细菌光谱特性等更加快速、精确的检测技术进行了系统总结,同时也拓展并提出了宿主导向用药方案的临床微生物检测需求,对于微生物检测技术的综述为临床诊断动物细菌性疫病提供了方法,为兽医临床精准用药提供最佳方案。

关键词：微生物检测技术药物残留动物细菌性疫病临床诊断精准用药