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野尻链霉菌9-13对大豆炭疽病病原菌的抑制活性及作用机制

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植物保护学报 2024年第4期51卷 830-840页

作者：石妞妞连金番邱德柱居骋张楠殷越李本金杜宜新福建省农业科学院植物保护研究所福州350013 福建省农业科学院植物保护研究所福建省作物有害生物监测与治理重点实验室福州350001 宁夏农林科学院农作物研究所银川750002 福建农林大学植物保护学院福州350000 农业农村部农药检定所北京100125

为明确野尻链霉菌Streptomyces nojiriensis 9-13对大豆炭疽病病原菌的抑制活性及作用机制,采用对峙培养法、菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定该菌株对引起大豆炭疽病的平头炭疽菌Colletotrichum truncatum、胶孢炭疽菌C. gloeospori... 详细信息

为明确野尻链霉菌Streptomyces nojiriensis 9-13对大豆炭疽病病原菌的抑制活性及作用机制,采用对峙培养法、菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定该菌株对引起大豆炭疽病的平头炭疽菌Colletotrichum truncatum、胶孢炭疽菌C. gloeosporioides和C. plurivorum,以及对苯醚甲环唑和啶氧菌酯的平头炭疽菌抗药性突变体的拮抗活性、抑菌活性和对分生孢子萌发的抑制活性;观察野尻链霉菌9-13发酵液对平头炭疽菌菌丝形态和细胞结构的影响。结果表明:野尻链霉菌9-13对引起大豆炭疽病的3种病原菌平头炭疽菌、胶孢炭疽菌和C. plurivorum均具有较强的拮抗作用。野尻链霉菌9-13的10%发酵液对3种大豆炭疽菌菌丝生长的抑制率为56.67%~87.04%,且抑制活性与发酵液的浓度呈正相关。此外,野尻链霉菌9-13对苯醚甲环唑和啶氧菌酯的平头炭疽菌抗药性突变体同样具有较强的拮抗作用。野尻链霉菌9-13的10%发酵液对苯醚甲环唑和啶氧菌酯的平头炭疽菌抗药性突变体的菌丝生长抑制率分别为74.79%~77.80%和46.53%~58.33%。野尻链霉菌9-13的10%发酵液对9种供试炭疽菌分生孢子萌发的抑制率均达100.00%。野尻链霉菌9-13发酵液可以破坏平头炭疽菌菌丝的细胞膜结构,使细胞发生质壁分离。发酵液处理后平头炭疽菌菌丝表现出膜相关的红色荧光斑点。表明野尻链霉菌9-13是一株具有开发前景的生防菌株。

关键词：大豆炭疽病野尻链霉菌抑菌机理生物防治抗性治理

以单壁碳纳米管为涂层的固相微萃取纤维在水中苯氧基羧酸类除草剂测定中的应用

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分析化学 2013年第11期41卷 1758-1761页

作者：林宏立马晓霞李权龙关雄福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室厦门大学环境与生态学院

采用以单壁碳纳米管（SWCNTs）为涂层的固相微萃取（SPME）纤维,通过衍生化-SPME-GC-ECD方法,研究了不同实验条件对SWCNTs纤维萃取效率的影响,考察了SWCNTs纤维的使用寿命及涂层的化学稳定性,建立了水中5种苯氧基羧酸类除草剂的测定方... 详细信息

采用以单壁碳纳米管（SWCNTs）为涂层的固相微萃取（SPME）纤维,通过衍生化-SPME-GC-ECD方法,研究了不同实验条件对SWCNTs纤维萃取效率的影响,考察了SWCNTs纤维的使用寿命及涂层的化学稳定性,建立了水中5种苯氧基羧酸类除草剂的测定方法。结果表明,SWCNTs纤维可耐受的pH=1,使用寿命可达160次,说明SWCNTs纤维具有良好的化学稳定性。方法的线性范围为0.5;0.0μg/L（麦草畏、2,4,5-三氯苯氧丙酸和2,4,5-三氯苯氧乙酸）,1.0;00.0μg/L（2,4-二氯苯氧乙酸）和5.0;00.0μg/L（2,4-二氯苯氧丁酸）;LOD为0.03;.25μg/L,LOQ为0.08;.84μg/L。

关键词：单壁碳纳米管固相微萃取苯氧基羧酸衍生化

煤矿中苏云金芽胞杆菌(Bt)菌株的分离及其鉴定

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农业生物技术学报 2014年第11期22卷 1402-1410页

作者：林白容章秋萍王毅斌关雄福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是一种已被广泛用于农业害虫生物防治的昆虫病原细菌。本研究从永春天湖山矿区采集的159份样品中分离出1株Bt,光学显微镜检测发现菱形伴孢晶体。以cry1/7/9、cry2、cry3、cry4/10、cry5、cry6... 详细信息

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是一种已被广泛用于农业害虫生物防治的昆虫病原细菌。本研究从永春天湖山矿区采集的159份样品中分离出1株Bt,光学显微镜检测发现菱形伴孢晶体。以cry1/7/9、cry2、cry3、cry4/10、cry5、cry6、cry8、cry11和cry1I的通用引物对该Bt分离菌进行Cry毒素基因分析,利用SDS-PAGE和双向电泳-质谱法(2-dimensional electrophoresis/mass spectrometry,2-DE/MS)对Bt分离菌进行蛋白鉴定。结果表明,分离菌含有cry1基因型,经克隆、测序后可知,菌株中的cry1亚基因型与cry1Ac有极高的同源性。分离株表达的晶体蛋白约为130 k D,通过蛋白质谱分析表明,杀虫蛋白为Cry1Ac,与PCR-RFLP所得出的结果一致;通过质谱分析还鉴定出分子伴侣Gro EL、F0F1型ATP-β亚基合成酶、延伸因子Tu和丙酮酸脱氢酶。生物信息学分析结果表明,这些蛋白主要参与帮助新生肽的正确折叠、能源生产和转换,以及提高细胞的应激能力以抵御外界不良刺激。本研究从煤矿中分离鉴定出Bt菌,为发现新资源、新型杀虫蛋白基因以及利用微生物治理重金属污染提供基础资料。

关键词：苏云金芽胞杆菌(Bt) 煤矿 cry基因型菌株分离和鉴定

辣椒内生菌BS-2在白菜体内的定殖、促生和防炭疽病作用

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植物保护学报 2004年第4期31卷 347-352页

作者：何红蔡学清兰成忠关雄胡方平福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室

辣椒体内的枯草芽孢杆菌BS-2菌株在白菜体内定殖、促生和防病作用表明:①用抗利福平标记BS-2r株浸种、浇灌土壤和涂抹叶片等方法接种,菌株均能进入白菜体内,并可在其全生育期内定殖;②菌液浸种24h后播种20天,其苗的鲜重比清水对照增加了... 详细信息

辣椒体内的枯草芽孢杆菌BS-2菌株在白菜体内定殖、促生和防病作用表明:①用抗利福平标记BS-2r株浸种、浇灌土壤和涂抹叶片等方法接种,菌株均能进入白菜体内,并可在其全生育期内定殖;②菌液浸种24h后播种20天,其苗的鲜重比清水对照增加了91.20%～138.04%;③菌株对白菜炭疽病有较好的防治效果,但对不同时间接种病原菌的防治效果有所不同,以叶表面喷雾接种菌液后,立即接种病原菌的防效最好,其第3天和第6天的防效分别达95.12%和46.71%;而对接种菌液之前已接种病原菌的处理无防病效果.④菌株胞外分泌物对炭疽病菌菌丝生长、分生孢子产生与萌发均有很强的抑制作用.由此可见,来自辣椒体内的枯草芽孢杆菌BS-2 菌株不仅可在白菜体内定殖传导,而且对白菜有明显的促生作用,同时对炭疽病还有良好的防治作用.

关键词：白菜定殖辣椒接种菌株浸种促生枯草芽孢杆菌内生菌萌发

藤黄轮丝链霉菌T0907-107抑菌活性研究

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农业生物技术学报 2014年第11期22卷 1329-1336页

作者：肖顺张婷婷卢云彬刘国坤张绍升福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室

从海产虾壳上分离筛选拮抗放线菌、研究其抑菌活性具有重要的实践意义。藤黄轮丝链霉菌(Streptomyces luteoverticillatus)T0907-107是分离自海产虾壳上并经初筛和鉴定的一株链霉菌,为了进一步开发和利用该菌,本研究采用极性不同的5种溶... 详细信息

从海产虾壳上分离筛选拮抗放线菌、研究其抑菌活性具有重要的实践意义。藤黄轮丝链霉菌(Streptomyces luteoverticillatus)T0907-107是分离自海产虾壳上并经初筛和鉴定的一株链霉菌,为了进一步开发和利用该菌,本研究采用极性不同的5种溶剂(丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和甲醇),对该菌株的发酵液菌体活性物质进行了提取,对粗提物的理化性质和抑菌活性进行了初步研究。结果表明,其发酵液活性物质大部分存在于菌体中,采用甲醇和丙酮浸提的效果好,其抑菌圈直径分别为26.20和22.50 mm;对粗提物进行耐热性实验,结果表明,粗提物是一种能够耐60℃高温和一定酸碱的物质;粗提物对蛋白酶K稳定;菌体及粗提物对多种植物病原菌物如烟草炭疽病菌(Colletotrichum nicotianae Sacc.)、烟草赤星病菌(Alternaria alternata(Fries)Keissler)、烟草立枯丝核病菌(Rhizoctonia solani Kühn)、枇杷炭疽菌(***(Penz.)Sacc.)和白菜炭疽病菌(*** Sacc.)有较强抑制作用。研究结果表明,甲醇和丙酮是较合适的萃取溶剂,该菌发酵液菌体粗提物极性强、稳定性好、有较广的抑菌谱,显示出好的开发前景。本研究为进一步鉴定该活性物质及开发和利用该菌提供了基础资料。

关键词：藤黄轮丝链霉菌提取稳定性抑菌活性

苏云金杆菌Cry2Ab可溶蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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农业生物技术学报 2013年第1期21卷 106-111页

作者：邵恩斯林莉关雄福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室

苏云金杆菌Cry2Ab蛋白是一类对鳞翅目昆虫有特异性毒性作用的毒素蛋白,已广泛应用于针对鳞翅目害虫的防治之中。依据苏云金杆菌cry2Ab基因序列设计一对全长引物,从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)WB9菌株总DNA中克隆出cry2Ab基因全... 详细信息

苏云金杆菌Cry2Ab蛋白是一类对鳞翅目昆虫有特异性毒性作用的毒素蛋白,已广泛应用于针对鳞翅目害虫的防治之中。依据苏云金杆菌cry2Ab基因序列设计一对全长引物,从苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)WB9菌株总DNA中克隆出cry2Ab基因全序列,构建Cry2Ab-PK表达载体,将获得的Cry2Ab-PK阳性克隆进行原核诱导表达,获得约90kD的Cry2Ab-GST融合蛋白,经批量纯化并切除GST标签后获得可溶Cry2Ab蛋白,约65kD。利用纯化Cry2Ab可溶蛋白免疫新西兰雄性大白兔(Oryctolagus cuniculus),制备Cry2Ab兔源多克隆抗血清,通过间接ELISA法测定Cry2Ab抗血清效价超过1:150000。Western blot测定结果表明,制备的Cry2Ab兔源抗血清能特异性识别Cry2Aa及Cry2Ab抗原蛋白,不能识别Cry1Ab及Cry3Aa抗原蛋白。研究结果对深入研究Cry2A毒素蛋白作用机理及毒素与受体间互作关系提供了技术支持。

关键词：苏云金杆菌 Cry2Ab 可溶蛋白多克隆抗体

低磷诱导水稻化感抑草能力增强的分子生理特性

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应用与环境生物学报 2009年第3期15卷 289-294页

作者：王海斌何海斌邱龙沈荔花方长旬林瑞余林文雄福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福建农林大学生命科学学院福州350002

以化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont为供体,以无芒稗(Echinochloa crusgalli L.)为受体,采用水培的方法研究低磷(P,0.5mg L-1)胁迫下稻/稗共培体系中水稻化感抑草作用的分子生理机制.结果表明,低磷条件下,化感水稻PI312777抑草效应增... 详细信息

以化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont为供体,以无芒稗(Echinochloa crusgalli L.)为受体,采用水培的方法研究低磷(P,0.5mg L-1)胁迫下稻/稗共培体系中水稻化感抑草作用的分子生理机制.结果表明,低磷条件下,化感水稻PI312777抑草效应增强,对稗草的保护酶活性及其它生理生化指标呈明显的抑制作用.进一步分析发现,低磷条件下,化感水稻PI312777根和叶组织中苯丙氨酸解氨酶活性及总酚含量上升,且明显高于非化感水稻Lemont.对水稻根系分泌物中酚类物质的HPLC分析结果表明,低磷条件下,从化感水稻PI312777根系分泌物中检出的酚酸类物质总量是正常磷素条件下的2.89倍,而非化感水稻Lemont中的则是正常磷素条件下的1.17倍.两个水稻品种根部和叶部酚酸代谢途径关键酶基因的差异表达分析结果表明,化感水稻PI312777酚酸代谢途径的4个关键酶基因均上调表达,而非化感水稻Lemont中只有苯丙氨酸解氨酶基因上调,其余均下调.可见,低磷条件下,化感水稻PI312777化感抑草能力增强与其酚酸代谢途径关键酶基因增强表达,代谢途径旺盛,进而导致酚酸类物质含量增加有关.

关键词：水稻(Oryza sativaL.) 化感作用化感物质低磷胁迫基因表达

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内生细菌在荔枝体内的定殖及其防病保鲜功能

应用生态学报 2011年第8期22卷 2140-2146页

作者：蔡学清陈炜林娜林通胡方平福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002 福建农林大学植物保护学院福州350002

用含有GFP基因标记的内生细菌菌株BS-2-gfp和TB2-gfp,采用喷雾接种的方法,研究其在荔枝叶片、花、幼果及成熟果实果皮内的定殖动态及其与防病保鲜之间的关系.结果表明:内生细菌BS-2-gfp和TB2-gfp能在荔枝叶片、花、幼果及采后果皮上定殖... 详细信息

用含有GFP基因标记的内生细菌菌株BS-2-gfp和TB2-gfp,采用喷雾接种的方法,研究其在荔枝叶片、花、幼果及成熟果实果皮内的定殖动态及其与防病保鲜之间的关系.结果表明:内生细菌BS-2-gfp和TB2-gfp能在荔枝叶片、花、幼果及采后果皮上定殖,能在各组织内繁殖并可在花和幼果间传导.内生细菌在荔枝叶片上的定殖因季节和荔枝生长期的不同而异,与秋季相比,春季定殖期限长,定殖量大.内生细菌在荔枝不同部位的定殖时间和定殖量也不同,在叶片上接种37d后还可分离回收到接种的2种目标细菌,在花上接种10d后就回收不到BS-2-gfp,而成熟荔枝果皮上2种菌的定殖量最大.防病试验表明,当荔枝霜疫病的病情指数急剧上升时,TB2-gfp在荔枝果皮的定殖量达到最大,为1.90×106CFU.g-1FM;保鲜试验发现,TB2-gfp菌株的保鲜效果优于BS-2-gfp,菌株在荔枝果皮内的定殖量也高于菌株BS-2-gfp,表明供试内生细菌在荔枝果皮的定殖量与其防病及保鲜效果呈正相关.

关键词：荔枝内生细菌定殖防病保鲜

两株海洋真菌的鉴定及其次级代谢产物抑制烟草花叶病毒及抗肿瘤活性(英文)

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微生物学报 2009年第9期49卷 1240-1246页

作者：沈硕李玮欧阳明安吴祖建林奇英谢联辉福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福建农林大学植物病毒研究所福州350002

【目的】通过对2株活性海洋真菌发酵产物提取物抑制烟草花叶病毒和抗肿瘤活性进行研究,为进一步得到活性纯品化合物作为抗病毒及抗肿瘤的先导化合物奠定基础。【方法】菌株发酵产物的粗提物是通过甲醇浸取并在真空条件下蒸干得到的。粗... 详细信息

【目的】通过对2株活性海洋真菌发酵产物提取物抑制烟草花叶病毒和抗肿瘤活性进行研究,为进一步得到活性纯品化合物作为抗病毒及抗肿瘤的先导化合物奠定基础。【方法】菌株发酵产物的粗提物是通过甲醇浸取并在真空条件下蒸干得到的。粗提物中溶于水的部分为水溶性部分,不溶于水的部分为脂溶性部分。通过间接酶联免疫法检测样品抑制烟草花叶病毒的活性,通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测样品抗肿瘤活性,通过形态及ITSrDNA序列法进行菌株鉴定。【结果】两株海洋真菌抑制烟草花叶病毒活性和抗肿瘤的活性均较高。分子鉴定结果显示,两株真菌分别与Penicillium oxalicum和Neosartorya fischeri的同源性极高。菌株0312F1发酵液的水溶性部分具有抗病毒及抗肿瘤活性,菌株1008F1发酵液的脂溶性部分具有抑制烟草花叶病毒活性,而水溶性部分具有抗肿瘤活性。【结论】菌株0312F1和菌株1008F1发酵液的提取物抑制烟草花叶病毒的活性部位不同,而抗肿瘤活性部位相同。菌株0312F1发酵液提取物的水溶性活性部位对肝癌细胞BEL-7404的抑制效果比对胃癌细胞SGC-7901的抑制效果明显,而菌株1008F1发酵液提取物的水溶性活性部位对胃癌细胞SGC-7901的抑制效果比对肝癌细胞BEL-7404的抑制效果明显。

关键词：海洋真菌抑制活性烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV) 抗肿瘤鉴定