检索结果-南通市图书馆

一株具有多种毒力基因的粪肠球菌噬菌体的研究分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 182-188页

作者：常军帅赵玉段付霜屈勇刚梁晏李娜石河子大学动物科技学院石河子832003 动物疾病防控兵团重点实验室石河子832003

以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,... 详细信息

以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,头部呈对称多面体,直径约66 nm,将其命名为vB_Eco T_PSL22(简称PSL22);只裂解其宿主菌,核酸类型为dsDNA;最佳感染复数为0.1,裂解量约为52 PFU/cell;在p H4.0~12.0时活性稳定,能耐受60℃左右高温。对小鼠治愈率为33.33%(2/6),含有2个耐药基因(Acc和aac(3)-Ⅳ)和4种毒力基因(gelE、cylA、ace和efaA)。通过本次试验,可为临床型乳房炎奶牛乳房中噬菌体的多样性研究提供参考,也可为研究奶牛乳房中的微生态系统提供依据。

关键词：粪肠球菌噬菌体生物学特性耐药基因毒力基因

牛结核分枝杆菌BfrB蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 395-404页

作者：史超刘素平张伟魏铭清孙志华周霞王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室

目的旨在预测和分析牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)BfrB蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为新型疫苗、诊断靶点等的开发提供理论基础。方法利用生物信息学软件预测分析BfrB蛋白的生物信息学特征,克隆其编... 详细信息

目的旨在预测和分析牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)BfrB蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为新型疫苗、诊断靶点等的开发提供理论基础。方法利用生物信息学软件预测分析BfrB蛋白的生物信息学特征,克隆其编码基因并与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体并利用IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化重组BfrB蛋白,SDS-PAGE和Western blot验证分析重组BfrB蛋白,以该蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并测定其效价。结果BfrB蛋白含有181个氨基酸,分子式为C_(903)H_(1405)N_(255)O_(276)S_(6),理论分子质量为20.442 ku,无信号肽和跨膜结构域,是一种定位于细胞质的亲水性的储铁蛋白。该蛋白有3个固定无序结构域、15个磷酸化位点、16个甲基化位点和2个乙酰化位点,无糖基化位点。其二级结构中α-螺旋占70.01%,延伸链占4.42%,β-折角占3.87%,无规则卷曲占21.55%,三级结构与二级结构预测结果一致,空间结构(四级结构)为24个亚单位(三级结构)组成的聚合物。BfrB蛋白含有9个B细胞抗原表位、7个CD4+T细胞抗原表位和3个CD8+T细胞表位。该蛋白与牛结核分枝杆菌BCG、结核分枝杆菌H37Rv等的BfrB蛋白亲缘关系较近,同源性高达99%以上。与BfrB蛋白存在相互作用的蛋白有Oxidase、rpsL、katG、hemH等,其中BfrB蛋白与Oxidase蛋白之间的相互作用关系最强。成功克隆BfrB蛋白编码基因,大小与预期相符,与表达载体pET32a连接后,经双酶切、测序验证表明重组表达载体pET32a-BfrB构建正确。IPTG诱导表达、纯化后获得条带单一、纯度较高的重组BfrB蛋白,Western blot显示重组BfrB蛋白具有良好的免疫原性,能被相应抗体识别。用该蛋白免疫新西兰大白兔能够诱导产生抗体,且其效价高达1∶512000。结论成功预测和分析了牛结核分枝杆菌BfrB蛋白的结构及功能,并获得BfrB蛋白及多克隆抗体,为后续该蛋白的研究奠定理论基础,也为牛结核病的防控等提供参考依据。

关键词：牛结核分枝杆菌 BfrB蛋白生物信息学分析表达与纯化分子对接

牛支原体感染牛巨噬细胞对线粒体途径介导凋亡的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3625-3634页

作者：唐恬王振余梦环徐坤何瑞丽秦田哲陈创夫马忠臣王勇石河子大学动物科技学院石河子832003 动物健康养殖国际联合研究中心石河子832003 动物疾病防控兵团重点实验室石河子832003

[目的]探究牛支原体石河子分离株感染牛巨噬细胞(BoMac)能否通过线粒体凋亡途径影响细胞增殖活力和凋亡。[方法]通过培养基培养及测定颜色变化单位(CCU)绘制牛支原体菌株生长曲线,确定其最高活力的培养时间;使用处于活力最高时的牛支原... 详细信息

[目的]探究牛支原体石河子分离株感染牛巨噬细胞(BoMac)能否通过线粒体凋亡途径影响细胞增殖活力和凋亡。[方法]通过培养基培养及测定颜色变化单位(CCU)绘制牛支原体菌株生长曲线,确定其最高活力的培养时间;使用处于活力最高时的牛支原体以不同感染复数(MOI)和不同感染时间感染牛巨噬细胞,分别利用实时荧光定量PCR和Western blotting试验检测线粒体凋亡通路核心分子Bax和Bcl-2的表达情况,通过CCK8试验检测细胞增殖活力水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。[结果]生长曲线分析结果显示,牛支原体石河子分离株12~54 h处在对数生长期,54~84 h处在平台期(滴度为109 CCU/mL),因此,选用培养54 h的牛支原体石河子分离株感染细胞。实时荧光定量PCR与Western blotting检测结果一致,即随感染时间和MOI的增加,促凋亡蛋白Bax基因及其蛋白表达量呈现上升趋势,抑凋亡蛋白Bcl-2基因及其蛋白表达量呈现下降趋势,其中牛支原体石河子分离株感染24 h时,Bax基因表达量极显著增加(P石河子分离株可通过线粒体凋亡途径标志因子Bax和Bcl-2的表达诱导牛巨噬细胞凋亡,为进一步解析牛支原体的致病机制提供理论基础。

关键词：牛支原体牛巨噬细胞线粒体凋亡途径细胞增殖

维普期刊数据库博看期刊

鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2024年第7期 81-89页

作者：张伟史超于海涛霍明凯魏春燕黄炜涵周霞王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室新疆石河子832003

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SD... 详细信息

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明:Bfr由476个氨基酸组成,分子式为C_(1440)H_(2406)N_(476)O_(606)S_(85),相对分子质量为38808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区,二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位,以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白,Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因,其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性,有可能成为鼠伤寒沙门氏菌的疫苗开发和疾病诊断的候选蛋白。

关键词：鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr) 生物信息学原核表达 SDS-PAGE

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定

中国兽医杂志 2024年第7期60卷 58-64页

作者：史超张伟刘素平寇茜茜刘荣慧于海涛霍明凯王震张辉石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室新疆石河子832003

为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoA)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和... 详细信息

为了解生鲜乳中是否存在肠球菌污染,本试验从石河子某奶牛场无菌采集7份生鲜乳样品,通过细菌分离纯化、生化鉴定、16S rRNA和肠球菌RNA聚合酶α亚基(rpoA)编码基因的扩增和序列分析对分离菌株进行菌种鉴定,并利用纸片扩散法药敏试验和小鼠致病性试验确定分离菌株的药物敏感性和致病性。结果显示,从生鲜乳中分离到1株细菌,其培养特性和生化特性与肠球菌相似,16S rRNA基因测序结果显示其为肠球菌,rpoA基因测序结果显示其分子特征符合海氏肠球菌;药敏试验结果显示,分离海氏肠球菌对氨基糖苷类、林可胺类、磺胺类和多肽类药物表现一定的耐药性,而对四环素类、β-内酰胺类和部分喹诺酮类药物具有不同程度的敏感性;小鼠致病性试验结果显示,该菌株具有一定的致病性。本试验基于生鲜乳中海氏肠球菌的分离鉴定、耐药性和致病性分析,初步说明该牛场乳品中存在肠球菌污染的风险,且分离菌株具有一定耐药性和致病性,因此需在日常生产加工环节加强监测。

关键词：生鲜乳海氏肠球菌 rpoA基因耐药性致病性

牛种布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株生物学特性及其免疫原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2135-2145页

作者：徐朕宇邓肖玉王月丽孙灿吴澳迪曹剑易继海王勇王震陈创夫石河子大学动物科技学院石河子832000 绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心石河子832000 天康生物制药有限公司乌鲁木齐830011 石河子大学动物疾病防控兵团重点实验室石河子832000

布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响,并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失... 详细信息

布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响,并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失,通过qRT-PCR检测布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株中的BtpA mRNA表达水平,并探究布鲁氏菌A19株和A19ΔBtpA缺失株在生长曲线、胞内生存、黏附侵袭和体外应激方面的差异。此外,将A19株和A19ΔBtpA缺失株免疫小鼠,在免疫后的第7、14、21、28和35天使用间接ELISA检测小鼠体内的布鲁氏菌特异性抗体水平;通过ELISpot检测免疫第21天时小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达水平,利用流式细胞术测定了小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ阳性CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞以及CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞的分类情况。结果表明:成功构建了A19ΔBtpA缺失株,A19ΔBtpA缺失株中BtpA的转录水平显著低于A19株,A19ΔBtpA缺失株与亲本株在生长曲线、胞内生存和黏附侵袭方面呈现相似的趋势。而体外应激试验显示,高渗应激条件下A19ΔBtpA缺失株的存活菌量明显低于A19株(P<0.05)。免疫原性研究中,与PBS组相比,A19组和A19ΔBtpA组均可极显著诱导小鼠产生布鲁氏菌特异性抗体(P<0.01);与A19组相比,A19ΔBtpA组淋巴细胞IFN-γ表达水平显著升高(P<0.05),使小鼠产生的IFN-γ阳性CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞以及CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值显著增高(P<0.05)。BtpA基因缺失不会影响布鲁氏菌A19体外胞内增殖,但可能参与布鲁氏菌抗高渗环境能力相关。此外,A19ΔBtpA缺失株比A19株更好地诱导Th1型免疫应答,诱导宿主产生与A19株相当的IgG特异性抗体,具有布鲁氏菌基因缺失疫苗的潜力。该研究将为进一步探究布鲁氏菌的致病机制和开发基因缺失株疫苗提供理论基础和数据支持。

关键词：布鲁氏菌 BtpA 生物学特性免疫原性

维普期刊数据库博看期刊

嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1调控宿主细胞剪接体转录机制的初步分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2024年第1期46卷 39-48页

作者：李芮芮史梦华张妍何洪琴王雨璐陈佳王勇陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心新疆石河子832003 动物疾病防控兵团重点实验室新疆石河子832003

为研究嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1对宿主细胞内蛋白表达的影响,并初步分析Ats-1对宿主细胞剪接体的调控机制,本研究将嗜吞噬无形体的Ats-1基因克隆后连接至pcDNA3.1质粒,构建pcDNA3.1-Ats-1重组质粒,经PCR和测序鉴定正确后利用脂质体Lip... 详细信息

为研究嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1对宿主细胞内蛋白表达的影响,并初步分析Ats-1对宿主细胞剪接体的调控机制,本研究将嗜吞噬无形体的Ats-1基因克隆后连接至pcDNA3.1质粒,构建pcDNA3.1-Ats-1重组质粒,经PCR和测序鉴定正确后利用脂质体LipofectamineTM3000将其转染HEK293T细胞,继续培养至24 h、48 h时经western blot鉴定,结果显示,在48 ku(全长蛋白)和35 ku(成熟蛋白)出现特异性条带,表明Ats-1蛋白在细胞内可正确表达;且相较于24 h,48 h Ats-1蛋白在细胞内的表达量显著增加(P子生物合成过程,有核酸和RNA结合活性。KEGG信号通路分析结果显示,差异显著表达蛋白显著富集于剪接体、N-糖基化、蛋白输出和RNA运输等信号通路。q RT-PCR结果显示,剪接体通路富集的差异显著表达蛋白仅O43143蛋白的m RNA转录水平上调,其他33个蛋白(A0A024R1K8、Q13435、Q13573等)m RNA的转录水平均显著下调,与iTRAQ的分析结果一致。综上所述,本研究首次证实Ats-1蛋白表达后可能参与宿主细胞中剪接体、N-糖基化和蛋白输出信号通路的调控,抑制宿主细胞中剪接体调控通路中部分蛋白的转录,从而可能抑制剪接体调控,该结果为研究嗜吞噬无形体效应蛋白Ats-1在宿主细胞中的调控机制提供了新的方向和思路。

关键词： Ats-1蛋白 iTRAQ 差异表达蛋白剪接体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

胡桃及其附加产品药理活性和机制研究进展

天然产物研究与开发 2024年

作者：韩馨馨王嘉文张辉孙志华石河子大学动物科技学院新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室绵羊健康养殖与人兽共患病防控省部共建协同创新中心

从资源丰富的植物中寻找高效、低毒、无公害的植物源农药和药物替代品成为当前研究热点之一。胡桃属植物含有黄酮类、醌类、酚酸类及挥发油类等多种活性成分，近年来，诸多研究对胡桃植物不同部位化学成分进行了提取、分离及药理功能研... 详细信息

从资源丰富的植物中寻找高效、低毒、无公害的植物源农药和药物替代品成为当前研究热点之一。胡桃属植物含有黄酮类、醌类、酚酸类及挥发油类等多种活性成分，近年来，诸多研究对胡桃植物不同部位化学成分进行了提取、分离及药理功能研究，发现其具有抑菌、抗氧化及抗癌等多种生物活性，临床上常用于治疗癌症、抗炎症抑菌等。现对胡桃不同部位的化学成分、药理活性及机制进行综述，以期为胡桃资源的开发利用和胡桃源药物的开发提供参考价值。

关键词：胡桃化学成分药理活性

布鲁氏菌BspF蛋白生物信息学分析及其对巨噬细胞炎症因子表达的影响

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 1846-1856页

作者：孙灿魏硕鄢余静赵天艺朱德馨邓兴梅郭嘉张辉孙志华石河子大学动物科技学院石河子832000 绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心石河子832000 新疆生产建设兵团动物疾病防控重点实验室石河子832000

【目的】对布鲁氏菌BspF蛋白进行生物信息学分析,并进一步探究BspF蛋白对巨噬细胞炎症因子表达的影响。【方法】利用生物信息学在线软件分析布鲁氏菌BspF蛋白的理化性质、亲/疏水性、信号肽、跨膜区、抗原决定簇及结构域、二级结构、三... 详细信息

【目的】对布鲁氏菌BspF蛋白进行生物信息学分析,并进一步探究BspF蛋白对巨噬细胞炎症因子表达的影响。【方法】利用生物信息学在线软件分析布鲁氏菌BspF蛋白的理化性质、亲/疏水性、信号肽、跨膜区、抗原决定簇及结构域、二级结构、三级结构。构建重组质粒pET-32a-BspF并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达BspF蛋白并进行纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting检测蛋白表达及纯化情况。通过CCK-8法检测纯化后BspF蛋白对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的毒性,利用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测BspF蛋白对细胞中炎症相关因子mRNA和蛋白表达的影响。【结果】BspF蛋白分子质量为48.75 ku,属于不稳定蛋白,具有15个抗原决定簇,不存在跨膜区域和信号肽,二级结构以α-螺旋为主。成功构建了布鲁氏菌BspF基因原核表达载体,诱导表达后获得大小为60 ku的目标蛋白。纯化后蛋白以50μg/mL终浓度刺激RAW264.7细胞24 h后,与对照组相比,BspF组细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA表达量均显著或极显著升高(P子的表达。结果为布鲁氏菌致炎机制的研究和抗炎靶点的筛选提供理论基础。

关键词：布鲁氏菌 BspF蛋白生物信息学原核表达炎性因子