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锦鲤疱疹病毒RAA-LFD检测方法的建立

中国预防兽医学报 2024年第4期46卷 374-378,425页

作者：吕晓楠徐立蒲张文王小亮王静波王姝曹欢北京市水产技术推广站北京100176

为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'... 详细信息

为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'端分别标记Biotin、FAM荧光基因。采用方阵法对RAA反应时间和温度等条件优化,结果显示,该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对KHV目的基因片段的有效扩增,并且扩增产物结果可直接观察,由此初步建立了KHV的RAA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,建立的RAA-LFD检测方法与鲤浮肿病毒(CEV)、鲫造血器官坏死病毒(CHNV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙虹彩病毒(BIV)等常见水生动物病原核酸均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品p EASY-KHV的检测限为50拷贝/μL,与行业标准常规PCR的敏感性相当。重复性试验结果显示,该方法对5份p EASY-KHV的检测结果均一致;对室温放置7 d的p EASY-KHV检测结果也均一致。采用该方法和常规PCR对60份临床样品检测,结果显示二者的阴性、阳性符合率以及总符合率均为100%。本研究首次建立了用于检测KHV的RAA-LFD方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作方便,可用于KHV的临床样品检测,为KHV现地检测提供了一种简便、快捷的技术手段。

关键词：锦鲤疱疹病毒重组酶介导扩增侧向流试纸条快速检测

美洲鲥Ⅳ、Ⅴ期卵巢营养成分、卵黄蛋白原、组织蛋白酶D及其mRNA表达的比较分析

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上海海洋大学学报 2024年第3期33卷 623-634页

作者：袁新程施永海徐嘉波于爱清邓平平张之文蒋飞上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

为探明美洲鲥(Alosa sapidissima)雌鱼发育后期卵巢内营养物质的变化规律,提高卵子受精率,采用生化分析、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法,对性腺发育期Ⅳ期和Ⅴ期的卵巢内氨基酸、脂肪酸、卵黄蛋白原(VTG)和组织蛋白酶D(CTSD)含量及其... 详细信息

为探明美洲鲥(Alosa sapidissima)雌鱼发育后期卵巢内营养物质的变化规律,提高卵子受精率,采用生化分析、酶联免疫吸附及荧光定量PCR等方法,对性腺发育期Ⅳ期和Ⅴ期的卵巢内氨基酸、脂肪酸、卵黄蛋白原(VTG)和组织蛋白酶D(CTSD)含量及其mRNA表达量进行对比分析。结果显示,Ⅳ期卵巢中水分含量(75.73%)显著低于Ⅴ期(90.64%),而粗蛋白含量(16.07%)、粗脂肪含量(2.86%)和粗灰分含量(1.28%)均显著高于Ⅴ期(5.83%、1.25%、0.81%)。在Ⅳ、Ⅴ期卵巢内各检测出18种氨基酸,其中谷氨酸含量最高(8.64%和8.13%);8种必需氨基酸中,Ⅳ期苏氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和色氨酸含量均显著高于Ⅴ期,且二者第一限制氨基酸均为色氨酸;Ⅳ期氨基酸总量(TAA)、半必需氨基酸(HEAA)和非必需氨基酸总量(NEAA)均显著高于Ⅴ期。两期卵巢内共检测出19种脂肪酸,Ⅳ期C17∶0、C20∶1n9、C20∶4n6和C20∶5n3含量显著高于Ⅴ期;其中ΣMUFA、ΣPUFA、ΣUFA、Σn3PUFA和EPA+DHA含量均大于Ⅴ期,ΣUFA(70.54%)达到显著性差异。Ⅳ期卵巢中VTG含量高于Ⅴ期,但不显著;而Ⅳ期卵巢中CTSD含量明显比Ⅴ期低。Ⅴ期卵巢VTG基因表达量是Ⅳ期的13.88倍;而Ⅴ期肝脏内VTG基因表达明显低于Ⅳ期,是Ⅳ期的25%。从Ⅳ期至Ⅴ期,卵巢中CTSD mRNA表达出现下调,肝脏中CTSD mRNA表达出现上调,但均不明显。因此,当前养殖条件下,美洲鲥雌鱼亲本后期发育过程中,卵巢内营养物质积累不均衡,建议适当调整饲料配方,提高限制性氨基酸色氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸及含量较低的赖氨酸、苏氨酸比例和调高多不饱和脂肪酸C20∶3n6、C20∶4n6(AA)、C22∶6n3(DHA)和C20∶5n3(EPA)比例,降低C18∶2n6c的比例,保证卵巢后期发育所需营养的均衡。

关键词：美洲鲥卵巢营养成分卵黄蛋白原组织蛋白酶D mRNA表达

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锦鲤人工繁殖试验

科学养鱼 2024年第5期 84-85页

作者：李天葛祥明朱静石家庄市水产技术推广站河北石家庄050091

近年来锦鲤产业生产能力不断增强,随着锦鲤养殖技术的不断提高,以及国内、国际市场的需求与日俱增,锦鲤养殖产业获得快速发展。当前我国锦鲤养殖业的发展仍存在一些短板和不足,如在人工繁殖、选育技术等方面有待提高、产出的锦鲤多数品... 详细信息

近年来锦鲤产业生产能力不断增强,随着锦鲤养殖技术的不断提高,以及国内、国际市场的需求与日俱增,锦鲤养殖产业获得快速发展。当前我国锦鲤养殖业的发展仍存在一些短板和不足,如在人工繁殖、选育技术等方面有待提高、产出的锦鲤多数品质不佳、效益优势不明显等。笔者在石家庄雅润养殖科技有限公司开展了锦鲤工厂化人工繁殖与精品筛选养殖试验,现将试验情况总结如下。

关键词：效益优势人工繁殖试验锦鲤选育技术养殖试验工厂化市场的需求生产能力

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鱼菜循环式生态种养技术试验

河北渔业 2024年第5期 27-29页

作者：闫立君王圆圆孟秋冬朱静石家庄市水产技术推广站河北石家庄050091

为探索适合石家庄市鱼菜循环种养新模式,在3个大棚内进行了试验,试验池面积684 m^(2),养殖水体828 m^(3),建有蔬菜种植水槽2400 m^(2)。通过微流水集约化养殖、蔬菜无土栽培、尾水处理系统(硝化仓)达到鱼类养殖和蔬菜共作、水体循环利... 详细信息

为探索适合石家庄市鱼菜循环种养新模式,在3个大棚内进行了试验,试验池面积684 m^(2),养殖水体828 m^(3),建有蔬菜种植水槽2400 m^(2)。通过微流水集约化养殖、蔬菜无土栽培、尾水处理系统(硝化仓)达到鱼类养殖和蔬菜共作、水体循环利用。养殖试验实现单位鱼产量41.2 kg/m^(3),蔬菜年单位产量29.8 kg/m^(2),整个生产过程实现养殖用水循环利用和零排放。实践证明,这是一种高效、生态农业综合生产模式。

关键词：鱼菜生态种养福瑞鲤(Cyprinus carpio) 零排放

一株磺胺喹噁啉降解菌株Aspergillus sp. S-3的分离、鉴定及其降解代谢途径

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应用与环境生物学报 2024年

作者：陈雪婷张玉平刘菁华上海市水产研究所(上海市水产技术推广站)

磺胺喹噁啉(SQX)在集约化的养殖业中应用广泛，其残留威胁生态系统和人体健康，目前关于微生物纯培养物降解SQX的研究较少。本研究从养殖池塘底泥样品中分离到一株SQX降解菌株S-3，通过形态学特征和ITS序列系统发育分析将其鉴定为曲霉属... 详细信息

磺胺喹噁啉(SQX)在集约化的养殖业中应用广泛，其残留威胁生态系统和人体健康，目前关于微生物纯培养物降解SQX的研究较少。本研究从养殖池塘底泥样品中分离到一株SQX降解菌株S-3，通过形态学特征和ITS序列系统发育分析将其鉴定为曲霉属(Aspergillus sp.)。单因素实验表明，菌株S-3的最佳生长和降解温度及pH分别为30 ℃和7.0，降解最佳接种量为1%-5%。在此条件下，菌株S-3对初始浓度为0.8-24 mg/L的SQX具有较高的降解率(72 h降解率均在83.0%以上)。菌株S-3还可以降解磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺异恶唑，降解率分别为和78.5%和65.5%。通过超高效液相色谱串联高分辨率电喷雾电离质谱仪鉴定了菌株S-3降解SQX生成的6种代谢产物，并据此推测菌株S-3分别采用分子内SO2的脱除、脱氨羟基化以及喹噁啉基的羟基化策略开启SQX的降解。采用Toxicity Estimation Software Tool (T.E.S.T.)软件评估了降解产物的毒性，结果表明其急性毒性、发育毒性和致突变性的毒性分级区间整体上呈现减毒趋势。斑马鱼攻毒试验初步表明菌株S-3对水生生物的安全性较高。综上所述，本研究获得一株高效安全的SQX降解菌株Aspergillus sp. S-3，为环境污染的微生物修复提供菌株资源和理论依据。(图8 表4 参34)

关键词：磺胺喹噁啉微生物降解曲霉菌属降解特性代谢产物

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冷水鱼养殖尾水治理技术试验

河北渔业 2024年第1期 12-16页

作者：闫立君王圆圆朱静孟秋冬赵强方会卿尹超石家庄市水产技术推广站河北石家庄050091 平山县水产技术推广站河北平山050400

为保护水域生态环境,实施环保养殖,加强养殖业自身环保建设,采用固液分离、沉淀吸收、氧化降解、微生物降解过滤净化和植物吸收等生态处理技术,开展冷流水养殖尾水综合处理技术研究,在处理系统为养殖面积40%的情况下,能有效降低尾水中的... 详细信息

为保护水域生态环境,实施环保养殖,加强养殖业自身环保建设,采用固液分离、沉淀吸收、氧化降解、微生物降解过滤净化和植物吸收等生态处理技术,开展冷流水养殖尾水综合处理技术研究,在处理系统为养殖面积40%的情况下,能有效降低尾水中的COD和氮磷,处理效果分别达到了100%、87.13%、75.56%。

关键词：冷水鱼养殖尾水治理

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中国南方地区稻鱼共生系统的研究进展与思考

华南农业大学学报 2024年

作者：陈欣胡中元赵璐峰郝向举李坚明何金钊胡亮亮唐建军浙江大学生命科学学院全国水产技术推广总站广西壮族自治区水产技术推广站

稻田的水热环境是鲤科Cyprinidae鱼类天然生境，为此演育出稻鱼共生系统。我国南方山丘区的稻鱼共生系统具有悠久的历史，是利用当地水热和梯田条件而发展起来的独特稻作系统，对增加稻田产出、稳定农民收入、保护当地生物资源起着重要... 详细信息

稻田的水热环境是鲤科Cyprinidae鱼类天然生境，为此演育出稻鱼共生系统。我国南方山丘区的稻鱼共生系统具有悠久的历史，是利用当地水热和梯田条件而发展起来的独特稻作系统，对增加稻田产出、稳定农民收入、保护当地生物资源起着重要作用。本文概述了我国南方山丘区稻鱼共生系统的发展历程；从稻鱼共生系统的生产力、有害生物的控制和农药减量、土壤碳氮保持和肥料减量、甲烷排放和氧化、水资源利用与保护以及遗传多样性保育等方面综述了稻鱼共生系统的研究进展；分析了我国南方山丘区的稻鱼共生产业发展的潜力和可持续发展的可能路径，并对稻鱼共生系统今后的研究方向进行了展望。

关键词：稻鱼共生系统生态过程遗产多样性保育发展潜力可持续发展南方山丘区

长江刀鲚GHRH基因遗传多态性及其与生长性状的关联分析

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西北农业学报 2024年第6期33卷 997-1007页

作者：于爱清施永海徐嘉波刘永士邓平平上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

生长激素释放激素(GHRH)是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性... 详细信息

生长激素释放激素(GHRH)是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性状的关联性研究,为其分子标记辅助育种提供技术支持。结果显示:长江刀鲚GHRH基因cDNA全长1329 bp,由5′-UTR(300 bp)、ORF(465 bp)和3′-UTR(564 bp)组成,推导的蛋白序列由154个氨基酸组成,具有一个信号肽和GLUCA结构域;该基因的DNA序列长2983 bp,由4个内含子和5个外显子组成,经筛选,在第1、2内含子和第3外显子上分别筛选到9、2和1个SNP位点;12个突变位点共36种基因型,分别与100尾长江刀鲚的体质量、体长和体高性状进行关联分析,获得2个与其生长性状显著相关的位点(g.1636C>T和g.1882A>C)(PT和g.1882A>C可以作为优选长江刀鲚繁育亲本的重要候选分子标记。

关键词：长江刀鲚 GHRH 单核苷酸多态性生长性状关联分析

鲤Rhbdd3重组乳酸菌微生物制剂的开发及效果评价

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海洋与湖沼 2024年第4期55卷 1019-1026页

作者：刘亚楠张小明邵玲上海市水产研究所、上海市水产技术推广站上海200433

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并... 详细信息

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并转化获得了重组乳酸乳球菌pNZ8148-rhbdd3 NZ9000。利用乳酸链球菌素nisin进行Rhbdd3蛋白的诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blotting进行验证。进一步,将重组乳酸乳球菌进行饲料拌喂并开展鲤春病毒血症病毒(SVCV)人工感染实验,检测鱼体免疫因子表达水平及攻毒后鱼体组织病毒载量。结果显示:经nisin诱导后,pNZ8148-rhbdd3 NZ9000能够表达约为39 kDa的特异性蛋白,与Rhbdd3蛋白大小一致。重组乳酸乳球菌的最佳nisin诱导浓度为100 ng/mL,最佳诱导时间为5 h。重组乳酸乳球菌饲喂后14 d,与对照组相比,实验组鲤鱼组织中免疫相关基因IFN1、IRF7、Viperin、Mx1和ISG15的表达水平均显著上调。此外,SVCV攻毒后,重组乳酸乳球菌饲喂组鱼体组织中病毒滴度较对照组显著降低,表明其可以抑制病毒的增殖。研究结果为Rhbdd3蛋白的大量制备和应用提供了一种可行方案,并为鱼类病毒性疾病的防控提供了一种有效措施。

关键词： Rhbdd3蛋白乳酸菌鲤鱼鲤春病毒血症病毒微生物制剂