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肺炎克雷伯菌钼酸盐转运体modA基因缺失株的构建及其生物学特性

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 748-756页

作者：王慧姜晓宇李飞雨黄石市妇幼保健院(湖北理工学院附属妇幼保健院)检验科湖北黄石435000 黄石爱尔眼科医院湖北黄石435000 黄石市中医医院湖北黄石435000 湖北医药学院基础医学院湖北十堰442000

目的利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌NTUH-K2044株钼酸盐转运系统modA基因缺失株和回补株,探讨modA基因对肺炎克雷伯菌厌氧硝酸盐呼吸生长及表型的影响。方法利用自杀载体pKO3-Km质粒构建modA基因缺失株,同时扩增包含modA基因启动子... 详细信息

目的利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌NTUH-K2044株钼酸盐转运系统modA基因缺失株和回补株,探讨modA基因对肺炎克雷伯菌厌氧硝酸盐呼吸生长及表型的影响。方法利用自杀载体pKO3-Km质粒构建modA基因缺失株,同时扩增包含modA基因启动子、开放阅读框(ORF)和终止子区域的整条序列片段,将其克隆至pGEM-T-easy质粒中获得重组质粒modA-pGEM-T-easy,电转化至modA缺失株中得到回补株C-modA,通过体外厌氧硝酸盐呼吸生长测定、竞争力指数实验、生物膜结晶紫定量实验、黏度定量实验以及菌株形态ImageJ测量法比较分析NTUH-K2044野生株、modA基因缺失株、回补株的厌氧硝酸盐呼吸生长、细菌竞争力、生物膜合成能力及超黏表型、菌株形态改变。结果利用自杀载体pKO3-Km质粒成功构建肺炎克雷伯菌modA基因缺失株ΔmodA;随后将重组质粒modA-pGEM-T-easy电转化入ΔmodA中,得到回补株C-modA;相较于肺炎克雷伯菌野生株(WT)、C-modA,modA基因缺失株厌氧硝酸盐呼吸生长受抑制;ΔmodA相对野生株WT的体外厌氧培养竞争力明显减弱(P系统编码基因modA与肺炎克雷伯菌的厌氧硝酸盐呼吸、细菌体外竞争力、生物膜形成、超黏表型以及菌体形态变化等致病力因素相关。

关键词：肺炎克雷伯菌 ModA蛋白厌氧生长菌体形态

中医药融入公共卫生应急管理体系面临的若干困境与对策研究

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中国医学伦理学 2024年第3期37卷 366-372页

作者：王卓怡孙婷婷江艳菊倪娅岳远雷湖北中医药大学医学人文学院湖北武汉430065

中医药在抗击新发突发传染病等情况中具有特殊优势和独立价值。发挥中医药在公共卫生应急管理领域的功效,需要明确中医药融入公共卫生应急管理体系的必要性,分析将中医药融入公共卫生应急管理体系中的障碍、隐患与伦理风险。通过优化中... 详细信息

中医药在抗击新发突发传染病等情况中具有特殊优势和独立价值。发挥中医药在公共卫生应急管理领域的功效,需要明确中医药融入公共卫生应急管理体系的必要性,分析将中医药融入公共卫生应急管理体系中的障碍、隐患与伦理风险。通过优化中医药融入公共卫生应急管理体系的法律制度,完善中医药防治重大疫情的卫生应急管理体制、机制建设,提升中医药防治疫病的临床科研技术力度,加强中医药学科教育及人才队伍建设,基于中西结合的背景,推进中医药融入国家公共卫生应急管理体系。

关键词：中医药公共卫生应急管理伦理法治

过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型的建立

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生物学杂志 2024年第4期41卷 24-29页

作者：徐菁何柳周芳婷潘勤陈姗罗靓湖北中医药大学、药学院、药物分析教研室武汉430071 武汉大学泰康医学院(基础医学院)人体解剖学与组织胚胎学系武汉430071 武汉市蔡甸区人民医院检验科武汉430100

为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞(TLR2^(-)),嘌呤霉素筛选获得稳... 详细信息

为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞(TLR2^(-)),嘌呤霉素筛选获得稳定表达TLR2分子的Nalm-6细胞(TLR2^(+))。利用倒置荧光显微镜观察细胞状态和绿色荧光表达情况,通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测相关蛋白表达水平,采用CCK-8以及流式细胞术检测细胞存活率和细胞增殖水平。结果显示:倒置荧光显微镜下可见成功转染慢病毒的Nalm-6细胞表达绿色荧光和嘌呤霉素抗性。Western Blot检测到TLR2在Nalm-6细胞中成功表达,且TLR2信号的激活明显增强PI3K-AKT信号轴分子的磷酸化水平。CCK-8和流式细胞术发现TLR2活化可提升细胞存活率,促进细胞增殖。研究成功构建了过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型,并在此基础上验证TLR2活化不仅能够增强B细胞PI3K-AKT信号通路传导,还可促进细胞增殖。此模型为进一步探究TLR2通路对B细胞抗感染免疫功能的影响奠定基础。

关键词： TLR2 慢病毒载体 B淋巴细胞 PI3K-AKT信号通路细胞增殖

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牛膝多糖对外周血单核细胞的激活作用

华中科技大学学报（医学版） 2005年第4期34卷 413-415页

作者：宁勇姚彩萍王宇学陈家春湖北中医学院医学检验与技术系武汉430064

目的探讨牛膝多糖对外周血单核细胞是否具有激活作用。方法分别应用中性红试验检测牛膝多糖(1.250mg/ml)对单核细胞吞噬作用的影响;非特异性脂酶染色及电镜技术检测牛膝多糖(1.250mg/ml)诱导单核细胞内溶酶体的改变;0.312、1.250、5.000... 详细信息

目的探讨牛膝多糖对外周血单核细胞是否具有激活作用。方法分别应用中性红试验检测牛膝多糖(1.250mg/ml)对单核细胞吞噬作用的影响;非特异性脂酶染色及电镜技术检测牛膝多糖(1.250mg/ml)诱导单核细胞内溶酶体的改变;0.312、1.250、5.000mg/ml牛膝多糖对体外培养的外周血单核细胞进行诱导培养12h,ELISA法测定单核细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素6(IL6)的表达。结果牛膝多糖能增强单核细胞的吞噬作用,增加单核细胞胞质内溶酶体量,显著诱导单核细胞表达TNFα和IL6。结论牛膝多糖对单核细胞具有激活作用。

关键词：牛膝多糖单核细胞

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湖北地区已知革螨区系分析

中国媒介生物学及控制杂志 2005年第4期16卷 294-296页

作者：陶建武刘亦仁杨振琼湖北中医学院医学检验与技术系武汉430064

目的调查研究湖北地区已知革螨种类及地理区划。方法分析已知革螨的分布及区系成分。结果已知革螨有35属78种。其中属东洋界种类36种,占46.2%;属古北界种类25种,占32.1%;广布两界种类17种,占21.8%。结论分析研究后认为,湖北地区革螨区... 详细信息

目的调查研究湖北地区已知革螨种类及地理区划。方法分析已知革螨的分布及区系成分。结果已知革螨有35属78种。其中属东洋界种类36种,占46.2%;属古北界种类25种,占32.1%;广布两界种类17种,占21.8%。结论分析研究后认为,湖北地区革螨区系应划归为东洋界。

关键词：湖北革螨区系分析种类分布医学昆虫学

基于高光谱成像技术与异构集成学习的龟甲药材生长年限鉴别

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光谱学与光谱分析 2024年第9期44卷 2613-2619页

作者：位云朋胡会强毛晓波赵宇平张蕾盛文涛郑州大学电气与信息工程学院生物医学工程系河南郑州450001 中国中医科学院中药资源中心北京100020 江西中医药大学药学院江西南昌330004 湖北京山盛昌乌龟原种场湖北荆门431800

龟甲是常见的集药、食两用的中药之一,富含维生素、氨基酸、胶原蛋白及大量矿物质成分,被广泛应用于贫血、骨质疏松、免疫力低下等临床症状的医疗与日常饮片炮制。研究表明,龟甲的生长年限越长,其滋阴有效部位及微量元素含量越充足。由... 详细信息

龟甲是常见的集药、食两用的中药之一,富含维生素、氨基酸、胶原蛋白及大量矿物质成分,被广泛应用于贫血、骨质疏松、免疫力低下等临床症状的医疗与日常饮片炮制。研究表明,龟甲的生长年限越长,其滋阴有效部位及微量元素含量越充足。由于对生长规律认识不足、培育不规范等因素,市场上普遍存在以次充好的现象。目前对龟甲生长年限的鉴别主要通过经验法与理化手段。经验法具有较强的主观性,不利于推广应用;理化技术操作周期长,会破坏样本的完整性。考虑到传统经验、理化检验等鉴别方法的局限性,该研究构建了一种基于高光谱成像技术的龟甲年限鉴别模型。以不同生长年限的龟甲药材为研究对象,采用高光谱成像系统采集原始龟甲药材在可见近红外(VNIR)与短波红外(SWIR)透镜下的高光谱图像,并建立基于支持向量机(SVM)、逻辑回归(LR)与K近邻(KNN)分类策略的异构集成学习模型。结果表明,基于VNIR与SWIR融合波段下的高光谱图像包含更丰富的光谱信息,采用异构集成学习模型可以有效地对龟甲年限实现精确鉴别。模型在龟甲背甲与腹甲样本的测试集准确率分别达到96.14%与93.82%,表明龟甲背甲对其生长年限的鉴别更有优势。考虑到快速性检测的因素,采用波段选择方法剔除冗余特征,降低龟甲药材图像的复杂度,并采用特征波段表征龟甲药材的光谱信息,进一步提升模型分类性能。结果表明,模型在波段数目为32时的背甲样本可以达到96.35%的分类准确率,超过了全波段光谱数据的鉴别精度,表明波段选择策略对提取有效光谱信息的可行性。基于高光谱成像技术的异构集成学习模型可以快速、准确地鉴别龟甲药材的生长年限,为龟甲及其他药材属性的检测提供新的技术参考。

关键词：龟甲高光谱图像波段选择集成学习

巢式甲基化特异性PCR检测肺癌患者基因异常甲基化

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中国肿瘤临床 2005年第15期32卷 894-895页

作者：姚群峰张利平宁勇曾卫周宜开湖北中医学院医学检验与技术系武汉市430064

近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切，CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制。MGMT基因是一个DNA损伤修复基因，其表达失活的主要原因不是缺失、突变或基因重排，启动子的过甲基化可能是... 详细信息

近年来的研究显示肿瘤的发生与DNA甲基化模式的异常关系密切，CpG岛的异常甲基化是导致许多抑癌基因转录失活的一个重要机制。MGMT基因是一个DNA损伤修复基因，其表达失活的主要原因不是缺失、突变或基因重排，启动子的过甲基化可能是其转录调节的主要方式。在本研究中，我们利用改进的巢式甲基化特异性PCR技术检测了53例肺癌患者血清及肿瘤组织中MGMT基因的甲基化状态，并对其在肺癌早期诊断中的潜在应用进行了探讨。

关键词： MGMT基因巢式甲基化特异性PCR 肺癌

酶双循环法测定一氧化氮合酶活性实验条件探讨

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检验医学 2006年第1期21卷 35-38页

作者：宁勇邹光楣宋杰陈鹏白晶湖北中医学院医学检验与技术系湖北武汉430064

目的运用Wang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶（NOS）活性。方法先改良Wang法测定NOS活性的实验条件，再探讨Wang法与酶双循环法偶联的实验条件，比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS（tNOS）测定试剂由20mmol／L L-精氨酸... 详细信息

目的运用Wang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶（NOS）活性。方法先改良Wang法测定NOS活性的实验条件，再探讨Wang法与酶双循环法偶联的实验条件，比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS（tNOS）测定试剂由20mmol／L L-精氨酸、25μmol／L还原型辅酶Ⅱ（NADPH＋H^＋）、50．0μmol／LCaCl2、45．0μmol／L二硫苏糖醇（DTT）、36．0μmol／L乙二胺四乙酸（EDTA）、1．8μmol／L苯甲磺酰氯（PMSF）、80μmol／L尼克酰胺、1μg／ml钙调蛋白（CalM）和10μg/ml蛋白酶抑制剂Antipain组成。以上试剂添加诱导性NOS（iNOS）抑制剂N^W-硝基-D-精氨酸用于测定结构型NOS（cNOS）。对NOS生成的氧化型辅酶Ⅱ（NADP^＋）采用酶双循环产物6-磷酸葡萄糖酸（6PG）脱氢生成的大量NADPH＋H^＋，其放大倍数约为70～80倍。结论酶双循环法提高了测定NOS的灵敏度。

关键词：一氧化氮合酶酶双循环法辅酶Ⅱ 灵敏度

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小金丹酊剂有效成分体内透皮吸收的初步研究

中成药 1993年第10期15卷 4-6页

作者：刘焱文何再安吴和珍湖北中医学院 430061 湖北中医学院中药系

将加味小金丹酊剂外敷小鼠和大鼠脱毛表皮,用同位素示踪技术测定其有效成分——马钱子碱在小鼠尿液中的排泄量和大鼠中的血药浓度。实验结果表明,马钱子碱在尿液中的排泄量为6.892μg/(cm^2·h),其最大血药浓度为51.81ng/me。

关键词：小金丹马钱子碱透皮吸收体内