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尿路致病性大肠埃希菌毒力因子TcpC在其免疫逃逸中的作用及致病机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第3期44卷 198-204页

作者：蒋委余范佳颖樊力铭王家栋江子妍管子瑜欧茜方佳琪浙大城市学院医学院临床医学系杭州310015 浙江大学医学院基础医学系杭州310058

目的探究尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenicEscherichia coli,UPEC)毒力因子TcpC在其免疫逃逸中的作用,并初步了解其相关致病机制。方法从C57BL/6小鼠的尿道插管至膀胱,滴注分泌TcpC的UPEC CFT073野生株(CFT073wt)或tcpc基因敲除株(CF... 详细信息

目的探究尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenicEscherichia coli,UPEC)毒力因子TcpC在其免疫逃逸中的作用,并初步了解其相关致病机制。方法从C57BL/6小鼠的尿道插管至膀胱,滴注分泌TcpC的UPEC CFT073野生株(CFT073wt)或tcpc基因敲除株(CFT073Δtcpc)悬液109菌落形成单位,构建肾盂肾炎小鼠模型。5 d后处死小鼠取肾脏,观察大体形态变化。HE染色观察肾脏组织病理变化,免疫组织化学法对肾组织中TcpC进行定位。采集感染后的小鼠尿液,十倍稀释法计数尿液中细菌载量,PCR检测小鼠肾脏组织和尿液细菌基因组DNA中的tcpc基因。实时荧光定量PCR检测CFT073wt菌株感染树突状细胞后胞内TcpC mRNA水平。Western blot和ELISA分别检测CFT073wt和CFT073Δtcpc菌株对树突状细胞NF-κB活化和促炎因子水平的影响,激光共聚焦显微镜观察UPEC菌株感染树突状细胞后的细菌活力。结果与CFT073Δtcpc组相比,CFT073wt组小鼠肾脏有明显脓肿产生,肾脏组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073wt组小鼠尿液中的细菌载量显著高于CFT073Δtcpc组;PCR结果显示,肾脏组织和尿液中细菌均能扩增出tcpc基因。在CFT073wt菌株感染树突状细胞过程中,胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073wt抑制树突状细胞NF-κB信号通路p50的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073wt在树突状细胞内的存活。结论TcpC在CFT073wt感染及引发小鼠肾盂肾炎过程中表达水平显著升高,并通过抑制树突状细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生有利于CFT073wt在树突状细胞内的存活,与UPEC致病及抗树突状细胞免疫密切相关。

关键词：免疫逃逸 TcpC 尿路致病性大肠埃希菌肾盂肾炎树突状细胞

甘草多糖对ETEC诱导断奶腹泻仔猪肠道损伤及肠道菌群的调控机制

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 740-747,833页

作者：曾雯玉肖乐刘峻源韩雯珏汪芹刘彦泠范誉肖雄王自力西南大学动物医学院重庆北碚400715 浙江大学动物医学中心浙江杭州310058

将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(Con)、模型组(Mod)和甘草多糖组(GP),连续14d给GP组灌服甘草多糖水溶液(1mL/kg,10g/L),其余组灌服等量无菌水,第15天给Mod组、GP组仔猪按1mL/kg连续3d灌服1011 CFU/mL的产肠毒素大肠杆菌(enterotoxi... 详细信息

将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(Con)、模型组(Mod)和甘草多糖组(GP),连续14d给GP组灌服甘草多糖水溶液(1mL/kg,10g/L),其余组灌服等量无菌水,第15天给Mod组、GP组仔猪按1mL/kg连续3d灌服1011 CFU/mL的产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)菌液,GP组继续灌服甘草多糖水溶液。分别记录各组仔猪腹泻评分、HE法检测肠道组织病理学变化、实时荧光定量PCR检测肠道组织IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA水平、微生物宏基因组学分析肠道菌群变化情况、Western blot检测肠道组织NF-κB/MAPK信号通路相关蛋白水平。结果显示,与Con组相比,ETEC感染后Mod组腹泻评分极显著升高(P<0.01),肠道组织结构破坏,大量肠绒毛脱落,V/C值极显著下降(P<0.01),炎性因子IL-1β、IL-6和IL-8mRNA水平极显著升高(P<0.01),变形菌门极显著上调(P<0.01),厚壁菌门极显著下调(P<0.01),乳酸菌属下调,梭菌属上调,肠道组织p-JNK/JNK、p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值极显著升高(P<0.01);与Mod组相比,GP组仔猪腹泻评分极显著降低(P<0.01),肠道结构较完整,仅有少量肠绒毛脱落,V/C值极显著升高(P<0.01),炎性因子IL-6和IL-8 mRNA水平显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),变形菌门极显著下调(P<0.01),厚壁菌门极显著上调(P<0.01),乳酸菌属上调,梭菌属下调,肠道组织p-JNK/JNK、p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。微生物组学筛选出各组可能的标记物种分别为Con组的Lactobacillus、Mod组的Fusobacterium、GP组的Rothia和Eubacterium。结果表明,甘草多糖可有效缓解ETEC诱导的断奶仔猪腹泻,改善ETEC感染引起的肠道菌群紊乱,提高有益菌丰度,降低有害菌丰度,并通过抑制NF-κB/MAPK信号通路的激活,缓解ETEC诱导的肠道炎性损伤。

关键词：产肠毒素大肠杆菌断奶仔猪腹泻肠道菌群 NF-κB/MAPK信号通路

尿素气管内滴注促进肺脏炎症及肠道特定微生物群变化诱导肉鸡肺动脉高压

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中国兽医学报 2024年第4期44卷 793-801页

作者：叶璐婕刘睿周淳桢谭勋浙江大学动物科学学院浙江杭州310058 浙江大学动物医学中心浙江杭州310058

18日龄AA肉鸡随机分为试验组和对照组2组,每组9只。气管滴注尿素100μL/只(1.2g/L),每3d滴注1次,共滴注3次,对照组肉鸡滴注等量的PBS溶液。在最后1次气管滴注后3d,采集肺脏进行病理形态学分析;采用免疫组化法检测内皮型一氧化氮合酶(end... 详细信息

18日龄AA肉鸡随机分为试验组和对照组2组,每组9只。气管滴注尿素100μL/只(1.2g/L),每3d滴注1次,共滴注3次,对照组肉鸡滴注等量的PBS溶液。在最后1次气管滴注后3d,采集肺脏进行病理形态学分析;采用免疫组化法检测内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)和Ⅱ型精氨酸酶(arginase 2,ARG2)的表达;采用Western blot法检测炎症因子的表达;采用丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测试剂盒检测肺组织中MDA水平;采用体内基质胶试验观察尿素对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)血管生成能力的影响;无菌收集空肠内容物,采用16SrRNA测序鉴定肠道菌群。结果显示,气管内滴注尿素显著促进肺血管重构和丛样病变形成,上调肺血管内皮ARG2的表达,抑制eNOS生成,促进MDA和炎症因子生成;尿素处理显著抑制EPCs血管生成能力;与对照组相比,尿素处理组肉鸡肠道中与促炎反应和氧化应激相关的菌属(Tyzzerella_3)丰度升高,与抗炎有关的产短链脂肪酸的菌属(Virvallis,Papillibacter和Barnesiella)丰度降低。结果表明,肺脏局部尿素生成增多可诱导炎症反应和氧化应激,引起肺血管内皮和EPCs功能障碍,促进肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)形成;肠道微生物群变化可能在PAH进程中发挥作用。

关键词：尿素肉鸡肺动脉高压肠道菌群炎症氧化应激

蛋白酶抑制剂DUBs-IN-1抑制马立克病病毒在鸡细胞内的增殖

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中国兽医学报 2024年

作者：艾馨许家翠谢佳良马浩原于凯刘洺丞王馨悦林俊彦高旭吉林大学动物科学学院延边大学农学院动物医学系

接种疫苗是防御鸡马立克病的主要手段，但疫苗不能扼制马立克病病毒的感染、增殖、传播以及毒力增强，因此，抑制马立克病病毒在鸡细胞内的增殖是增强疫苗防御效果的重要手段。本研究以马立克病毒编码的大被膜蛋白MDV049为靶点，应用泛... 详细信息

接种疫苗是防御鸡马立克病的主要手段，但疫苗不能扼制马立克病病毒的感染、增殖、传播以及毒力增强，因此，抑制马立克病病毒在鸡细胞内的增殖是增强疫苗防御效果的重要手段。本研究以马立克病毒编码的大被膜蛋白MDV049为靶点，应用泛素探针从蛋白酶抑制剂库中筛选出一种化合物DUBs-IN-1，可抑制MDV049的酶活性。分子对接分析发现，DUBs-IN-1可以与MDV049的催化活性中心袋口处的7个残基互作，阻止泛素底物与活性中心的CYS98结合，进而抑制MDV049酶的活性。应用CEF细胞病变（CPE）模型研究发现，0.35 μmol/L和0.7 μmol/L的DUBs-IN-1可显著抑制MDV所致的CPE，定量分析揭示，DUBs-IN-1可显著抑制MDV在CEF细胞内的增殖（P动物水平的研究发现，使用80μg/kg和150μg/kg 的DUBs-IN-1每日给药处理，DUBs-IN-1可显著抑制MDV在鸡T细胞内的增殖（P<0.01）。总之，本研究发现蛋白酶抑制剂DUBs-IN-1通过竞争性抑制方式抑制 MDV049酶活性，并有效抑制马立克病病毒在鸡细胞内增殖，这一发现为研发抗马立克病病毒的药物奠定了理论与实践基础。

关键词：马立克病病毒蛋白酶 DUBs-IN-1 抑制增殖

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犬下颌恶性黑色素瘤的诊治

中国兽医杂志 2024年第7期60卷 147-150页

作者：郑智杰潘嘉臻王鹿敏李越鹏鲁彦吴海冲浙江大学动物医学中心浙江杭州310058 浙江大学动物科学学院浙江杭州310058

恶性黑色素瘤是犬常见的口腔恶性肿瘤,其治疗方法以手术切除为主,但难以根治。本院接诊了1例因门齿间出现1个红色肿物而前来就诊的拉布拉多巡回犬。通过超声检查发现患犬脾脏肿大,通过计算机断层扫描(CT)进行辅助诊断,并行左侧下颌部分... 详细信息

恶性黑色素瘤是犬常见的口腔恶性肿瘤,其治疗方法以手术切除为主,但难以根治。本院接诊了1例因门齿间出现1个红色肿物而前来就诊的拉布拉多巡回犬。通过超声检查发现患犬脾脏肿大,通过计算机断层扫描(CT)进行辅助诊断,并行左侧下颌部分切除术和脾切除术治疗,病理切片结果显示为口腔恶性黑色素瘤和脾脏慢性充血。2023年1月回访,患犬预后良好未见复发。本文通过对该病例的病史、诊断和治疗过程进行总结和分析,以期为国内兽医诊治该类疾病提供参考。

关键词：犬口腔恶性黑色素瘤脾脏慢性充血

CATH-B1抑制肠外致病性大肠杆菌诱导小胶质细胞炎性反应的作用研究

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微生物学报 2024年第7期64卷 2381-2393页

作者：许雅婷潘言迪徐刘溢方仁东江莎彭练慈西南大学动物医学院重庆400715

【目的】探究抗菌肽CATH-B1对肠外致病性大肠杆菌RS218感染诱导小胶质细胞(BV2细胞)炎症反应的影响及作用机制。【方法】使用RS218感染小胶质细胞作为炎症模型,试验分为Mock组、RS218感染组和CATH-B1预处理+RS218感染组。采用Cell Count... 详细信息

【目的】探究抗菌肽CATH-B1对肠外致病性大肠杆菌RS218感染诱导小胶质细胞(BV2细胞)炎症反应的影响及作用机制。【方法】使用RS218感染小胶质细胞作为炎症模型,试验分为Mock组、RS218感染组和CATH-B1预处理+RS218感染组。采用Cell Counting Kit-8(CCK8)试剂盒检测细胞活力,通过菌落计数法检测CATH-B1对细菌生长的影响和细菌的黏附入侵,酶联免疫吸附测定法检测炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)含量,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)检测IL-1β和IL-6 m RNA表达水平,蛋白质印迹分析(Western blotting)法检测细胞中转录因子蛋白家族核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)P65和P-P65、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)ERK和P-ERK的蛋白表达水平。【结果】CATH-B1显著降低了RS218诱导的促炎细胞因子IL-1β、IL-6和IL-12的水平,同时显著抑制IL-1β和IL-6 m RNA表达,尽管CATH-B1对细菌的黏附入侵无显著影响,但CATH-B1能够显著抑制P65和ERK磷酸化蛋白的表达。【结论】CATH-B1通过抑制NF-κB和MAPK信号通路的活化来发挥抑制炎症作用,为阐明抗菌肽抗神经炎症机制提供了重要依据。

关键词： CATH-B1 肠外致病性大肠杆菌小胶质细胞炎症 NF-κB/MAPK信号通路

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基于CRISPR/Cas9构建伪结核棒状杆菌cp40敲除株及其生物学特性与致病性研究

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微生物学报 2024年第7期64卷 2453-2464页

作者：吕红李鑫灿牛禄婷王芝英周作勇西南大学动物医学院重庆402460

【目的】建立更高效的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)靶基因敲除方法,敲除丝氨酸蛋白酶编码基因(cp40),并评价其在Cp感染致病中的作用。【方法】以p ECXK99E为载体,Cp宣汉株(XH02)cp40为靶基因,设计含CRISPR/C... 详细信息

【目的】建立更高效的伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)靶基因敲除方法,敲除丝氨酸蛋白酶编码基因(cp40),并评价其在Cp感染致病中的作用。【方法】以p ECXK99E为载体,Cp宣汉株(XH02)cp40为靶基因,设计含CRISPR/Cas9的间隔序列(spacer)、导向RNA(guide RNA,g RNA)和cp40上下游同源臂的表达质粒(p EC-cp40g RNA-HDarm),转入含p Cas9g RNA-ccd B的Cp感受态细胞,构建CRISPR/Cas9基因编辑系统以敲除cp40基因。通过比较cp40敲除株和野生株的菌落形态及生长曲线、体外对J774A.1巨噬细胞活力及白细胞介素(interleukin,IL)-1β分泌,以及体内感染小鼠致死率及脏器载菌水平,研究cp40与该病原感染致病之间的关系。【结果】应用所建立的双质粒CRISPR/Cas9编辑系统成功获得XH02的cp40敲除株(XH02Δcp40)。与XH02相比,XH02Δcp40在菌落形态及生长曲线上无明显差异,但XH02Δcp40感染J774A.1巨噬细胞的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放(P=0.06)、碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色比例均降低(P<0.01),体内感染小鼠致死率下降50%,并且被感染小鼠肝脏和肾脏中Cp含量显著降低(P<0.001)。【结论】本研究所建立的CRISPR/Cas9编辑系统可较高效敲除Cp基因,证实cp40是该病原感染致病相关基因,为后续基于该基因研究Cp感染致病机制奠定基础。

关键词： CRISPR/Cas9 伪结核棒状杆菌丝氨酸蛋白酶基因敲除致病性

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吉林省648例犬乳腺肿瘤病例的流行病学调查及其诊断

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中国兽医学报 2024年

作者：蔡桦林叶彦刘祥雨谢光洪郑慧华吉林大学动物医学学院谢博士动物医院浙江农林大学动物科技学院/动物医学学院

乳腺肿瘤作为犬常见的肿瘤类型，常发于老年雌性犬中，约50%为恶性。因其复发率高，导致患犬死亡率较高，对犬的生命健康造成了严重的威胁。为了解犬乳腺肿瘤在吉林省的流行情况，本研究在2019—2023年期间，于吉林省6个地区共采集648... 详细信息

乳腺肿瘤作为犬常见的肿瘤类型，常发于老年雌性犬中，约50%为恶性。因其复发率高，导致患犬死亡率较高，对犬的生命健康造成了严重的威胁。为了解犬乳腺肿瘤在吉林省的流行情况，本研究在2019—2023年期间，于吉林省6个地区共采集648例病历资料和信息，其中良性肿瘤280例，恶性肿瘤368例。通过临床检查、实验室诊断以及病理组织学诊断确诊为犬乳腺肿瘤，随后统计分析犬乳腺肿瘤的发病情况以及预后情况，最后分析确定犬的品种、年龄、绝育状态及发情情况、肿瘤大小、肿瘤数量、肿瘤位置与犬乳腺肿瘤的相关性。结果表明，648例犬乳腺肿瘤中，45例存在转移情况，5年内累计复发率为21.3%（138/648），且常见于第四对乳腺处；同时，犬乳腺肿瘤常见于未绝育的老年雌性犬，当犬发情次数超过3次后，发病率为49.54%（321/648），且其与犬的肿瘤大小、数量和位置有显著性关系。因此，作为人乳腺癌的最佳研究模型，本研究深入且全面地剖析导致犬乳腺肿瘤的主要因素，有望为探究其他肿瘤的临床危险因素、优化诊疗策略提供了极具价值的参考依据。

关键词：犬乳腺肿瘤流行病学诊断吉林省

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沈阳市犬子宫蓄脓的流行病学调查及其诊断

中国兽医学报 2024年

作者：刘祥雨赵艺鸿孙真真谢光洪郑慧华吉林大学动物医学学院谢博士动物医院浙江农林大学动物科技学院/动物医学学院

犬子宫蓄脓是一种子宫化脓性细菌感染致使炎症渗出物积聚的疾病，临床上在老年母犬中高发，常见临床症状为厌食、抑郁、嗜睡、多尿、腹围增大等。为进一步了解犬子宫蓄脓的流行病学特点，本研究对沈阳地区的310例健康犬和292例子宫蓄脓... 详细信息

犬子宫蓄脓是一种子宫化脓性细菌感染致使炎症渗出物积聚的疾病，临床上在老年母犬中高发，常见临床症状为厌食、抑郁、嗜睡、多尿、腹围增大等。为进一步了解犬子宫蓄脓的流行病学特点，本研究对沈阳地区的310例健康犬和292例子宫蓄脓病例基本信息进行统计学分析。结果显示子宫蓄脓常发于6～15岁中老年犬，以未绝育母犬为主；不同体型、品种对犬子宫蓄脓有一定影响，小型犬的发病率较高；在生育次数中，无生育史患犬占比最高；在发情周期中，发情后期病例数显著高于泛情期和发情期；且春秋季节是该病的高发时段。此外，本研究进一步利用多种方法对41例子宫蓄脓患犬和32例健康犬进行鉴别与诊断，血液学检查结果显示患犬体内存在严重炎症；阴道涂片证实了子宫蓄脓导致犬阴道炎症反应；影像学检查可见子宫角和子宫体中明显扩张和积液；病理组织学表明子宫蓄脓患犬子宫内膜层有炎性细胞浸润。总之，这一研究为临床子宫蓄脓的发病机理及诊治提供一定的理论依据和参考价值。

关键词：犬子宫蓄脓流行病学临床检查诊断