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羽毛降解菌的筛选鉴定及转录组分析

西北农林科技大学学报(自然科学版) 2024年 1-11页

作者：张朋振薛琳琳杨小进范收武李旺河南科技大学动物科技学院洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司

【目的】从自然环境中筛选、鉴定高效降解羽毛细菌,并通过转录组学筛选该菌株中差异表达基因(DEGs),以探明其降解羽毛的分子机制。【方法】利用梅花桩采样法采集长期堆放羽毛的土壤,利用羽毛发酵培养基筛选分离可高效降解羽毛的细菌,对... 详细信息

【目的】从自然环境中筛选、鉴定高效降解羽毛细菌,并通过转录组学筛选该菌株中差异表达基因(DEGs),以探明其降解羽毛的分子机制。【方法】利用梅花桩采样法采集长期堆放羽毛的土壤,利用羽毛发酵培养基筛选分离可高效降解羽毛的细菌,对其进行形态学描述和分子生物学鉴定。以筛选菌株为研究对象,将其分别接种于羽毛发酵培养基(试验组)和LB培养基(对照组)中,培养36 h后收集2个处理组菌体进行转录组测序,之后对试验组与对照组中DEGs进行筛选,利用GO功能注释和KEGG富集分析对DEGs进行注释,探索DEGs在羽毛降解菌降解过程中起关键作用的功能和通路。【结果】筛选得到1株高效降解羽毛的菌株XS6,培养24 h后其能将羽毛发酵培养基(羽毛10.0 g/L)中羽枝降解97%,角蛋白酶活性为201.2 U/mL;且培养36 h后,在培养基中检测到了亚硝酸盐。经形态学和分子生物学鉴定,菌株XS6为白色芽孢杆菌。转录组测序结果表明,在2个处理组之间共筛选出655个DEGs,其中表达上调基因148个,表达下调基因507个。GO功能注释结果显示,DEGs注释到3大类32个功能组中,其中与代谢过程、细胞过程、细胞、细胞部分、催化活性有关的基因注释较多。KEGG富集分析结果显示,DEGs主要在能量和物质代谢途径、信号传导途径、生物合成途径富集。【结论】成功获得了1株高效降解羽毛的白色芽孢杆菌XS6,其在降解羽毛过程中参与了菌株间的协同作用、能量代谢以及生物大分子物质的合成。

关键词：羽毛降解降解菌转录组学降解机制

猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 413-418页

作者：周建浩王东方刘影王淑娟马震原谢彩华赵雪丽杨海波冯桂丹康台生胡煜锋李博文闫若潜河南农业大学动物医学院郑州450046 河南省动物疫病预防控制中心/河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室郑州450008 河南科技大学动物科技学院洛阳471000 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异... 详细信息

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR 方法建立

玉米赤霉烯酮降解菌的筛选鉴定及降解效果评价

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西北农林科技大学学报(自然科学版) 2024年 1-10页

作者：薛琳琳张朋振杨小进范收武李旺河南科技大学动物科技学院洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司

【目的】筛选高效实用的玉米赤霉烯酮(ZEN)降解菌株,并初步探究其降解机制及降解效果。【方法】以ZEN为唯一碳源,从发霉饲料和土壤样品中筛选菌株,通过形态学观察、16S r DNA测序分析对菌株进行鉴定;以培养时间为变量对菌株生长速率和ZE... 详细信息

【目的】筛选高效实用的玉米赤霉烯酮(ZEN)降解菌株,并初步探究其降解机制及降解效果。【方法】以ZEN为唯一碳源,从发霉饲料和土壤样品中筛选菌株,通过形态学观察、16S r DNA测序分析对菌株进行鉴定;以培养时间为变量对菌株生长速率和ZEN降解率进行相关分析;通过测定菌株不同活性成分及失活处理后的ZEN降解率对降解活性物质进行初步分析定位;对比探究硫酸铵沉淀法(硫酸铵饱和度分别为30%,40%,50%,60%,70%和80%)和单宁-聚乙二醇法(单宁质量浓度分别为2,5,10,15和20 mg/m L;聚乙二醇质量浓度分别为6,8,10,12和14 mg/m L)对粗降解酶的提取效果;通过SDS-PAGE凝胶电泳测定目标活性蛋白的分子质量,最后以菌株和粗酶液调节霉变玉米粉的水分质量分数,测定ZEN的降解效果。【结果】筛选得到试验菌株XJ-140,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),该菌在培养24 h时可降解93.75%的ZEN(2μg/m L)。菌株XJ-140以胞外酶降解ZEN为主,同时辅以细胞壁吸附。硫酸铵沉淀法(硫酸铵饱和度60%)和单宁-聚乙二醇法(最优单宁质量浓度为10mg/m L,最优聚乙二醇质量浓度为10 mg/m L)提取粗降解酶的ZEN降解率分别为37.14%和51.49%,单宁-聚乙二醇法提取效果更优。初步推断目标活性蛋白的分子质量在61 ku或28 ku。此外,菌株XJ-140的发酵液和粗酶液均能够降解霉变玉米粉中的ZEN。【结论】筛选的菌株XJ-140通过胞外酶降解ZEN,实际应用中对ZEN污染的玉米粉有一定清除效果。

关键词：玉米赤霉烯酮解淀粉芽孢杆菌降解酶降解效果

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训练免疫和跨代免疫的研究进展与展望

中国预防兽医学报 2024年第8期46卷 876-884页

作者：刘航马梦瑶李健波钱梦薇贾鑫浩刘译丹项玉强马世杰杨正伟郑兰兰河南农业大学动物医学院河南郑州450046 动物病原与生物安全教育部重点实验室河南郑州450046 深圳海关广东深圳518038 洛阳市畜牧兽医服务中心河南洛阳471026

免疫记忆完全归因于适应性免疫系统。一旦被激活,B和T细胞就会增殖,产生特定的长期记忆,从而产生保护作用,这是脊椎动物适应性免疫系统的标志,也是当前阶段研究疫苗和治疗性药物的基础^([1])。相比于脊椎动物特有的适应性免疫系统,先天... 详细信息

免疫记忆完全归因于适应性免疫系统。一旦被激活,B和T细胞就会增殖,产生特定的长期记忆,从而产生保护作用,这是脊椎动物适应性免疫系统的标志,也是当前阶段研究疫苗和治疗性药物的基础^([1])。相比于脊椎动物特有的适应性免疫系统,先天性免疫系统缺乏免疫记忆的能力,只能促进机体对早期病原体感染的防御^([2])。近几十年的研究表明,机体先天免疫系统可以在病毒或细菌感染后适应其功能,防止再感染。此外,免疫系统的记忆反应并不完全依赖于抗原受体(如免疫球蛋白、T细胞受体)的激活。

关键词：免疫球蛋白病原体感染细菌感染免疫记忆 T细胞受体免疫系统抗原受体长期记忆

猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析

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中国兽医杂志 2024年第4期60卷 58-65页

作者：马红伟潘华春杨书敏张可杨红蔺肖阮坤祥李家奎华中农业大学动物科学与动物医学学院湖北武汉430070 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000 襄阳傲农雪生畜牧养殖有限公司湖北襄阳441000

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗... 详细信息

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。

关键词：猪瘟活疫苗猪圆环病毒2型基因工程疫苗猪肺炎支原体灭活疫苗不同免疫程序免疫效果评价

抗菌肽PMAP-24KK水凝胶的制备及抗菌活性研究

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中国药学杂志 2024年第13期59卷 1219-1225页

作者：毛付康范文琦路思阳王君辉王恩典崔靖靖王晓利牛明福廖成水河南科技大学功能微生物与畜禽健康实验室河南洛阳471023 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室河南洛阳471023 河南科技大学基础医学与法医学院河南洛阳471023 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023

目的制备含猪源抗菌肽-24KK(porcine myeloid antimicrobial peptide-24KK,PMAP-24KK)的水凝胶,评价其理化性能和抗菌活性。方法将PMAP-24KK与海藻酸钠、碳酸钙和葡萄糖酸内酯结合得到PMAP-24KK水凝胶,首先分析PMAP-24KK水凝胶的形成... 详细信息

目的制备含猪源抗菌肽-24KK(porcine myeloid antimicrobial peptide-24KK,PMAP-24KK)的水凝胶,评价其理化性能和抗菌活性。方法将PMAP-24KK与海藻酸钠、碳酸钙和葡萄糖酸内酯结合得到PMAP-24KK水凝胶,首先分析PMAP-24KK水凝胶的形成时间、溶胀率、含水率、保水率和释放率等理化性质,然后进行药敏试验测定其对细菌的体外抗菌活性、缓释和抗菌屏障以及对小鼠皮肤创伤愈合的效果。结果 PMAP-24KK水凝胶在2 min左右可以形成具有网状结构的凝胶态,溶胀率和含水率均在10 h达到平衡状态,分别为(158.83±3.26)%和(61.01±2.41)%,24 h的保水率和释放率约为55%和81%。PMAP-24KK水凝胶对金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、猪霍乱沙门菌和鼠伤寒沙门菌表现出抑菌效果。PMAP-24KK水凝胶18 h内的缓释作用没有明显区别,18 h后开始逐渐下降至36 h无抗菌活性。PMAP-24KK水凝胶能有效地起到抗菌屏障作用,且有助于小鼠创伤模型皮肤伤口的愈合。结论本研究成功制备获得具有良好理化特性和抗菌活性的PMAP-24KK水凝胶,且具有较好的缓释和抗菌屏障以及促进伤口愈合的作用,为抗菌肽水凝胶应用的进一步研究奠定基础。

关键词：抗菌肽猪源抗菌肽-24KK 海藻酸钠水凝胶抗菌活性

一例猫创伤性疝合并股骨远端生长板骨折的诊断和治疗

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北方牧业 2024年第11期 42-43页

作者：王聪慧赵帅张茜毛福超王迎鲜翟崇凯河南省动物疫病与公共卫生工程研究中心河南洛阳471000 洛阳市动物病毒病诊断与免疫预防重点实验室河南洛阳471000 洛阳职业技术学院河南洛阳471000 洛阳关爱动物医院河南洛阳471003 漯河市畜牧兽医执法大队河南漯河462000

猫的创伤性膈疝是指隔肌因外伤而受损或破裂,导致腹腔内的器官进入胸腔的情况。这种情况可能是由于车祸、跌落、或其他外力导致的胸部或腹部严重撞击造成的。创伤性膈疝可能导致严重的健康问题,如胃肠道受压迫、呼吸困难、休克等。症状... 详细信息

猫的创伤性膈疝是指隔肌因外伤而受损或破裂,导致腹腔内的器官进入胸腔的情况。这种情况可能是由于车祸、跌落、或其他外力导致的胸部或腹部严重撞击造成的。创伤性膈疝可能导致严重的健康问题,如胃肠道受压迫、呼吸困难、休克等。症状可能包括呼吸急促、呕吐、腹痛、脱水以及体内器官功能障碍等。如果发生了创伤性隔疝,需要紧急就医。治疗通常需要进行紧急手术以修复受损的隔肌并将腹腔内的器官放回到原位。手术后,动物通常需要在恢复期间接受特殊的护理和监测,以确保身体能够康复并避免并发症的发生。

关键词：创伤性膈疝器官功能障碍隔肌股骨远端腹腔内呼吸急促呼吸困难生长板

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不同饲草对杜湖杂交羊饲喂效果的影响

中国草食动物科学 2024年第1期44卷 72-75页

作者：蔡海霞王跃卿李丽峰王洁琼杨浩哲关毅博洛阳市农林科学院洛阳471000 汝阳县农业技术推广服务中心汝阳471200

为研究苜蓿、羊草、燕麦、花生秧对肉羊的饲喂效果,选择膘情中等、健康无病、体重相近的5月龄杜湖杂交一代羊60只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个试验组,每组15只羊,分别饲喂以黄贮玉米秸秆+苜蓿干草、黄贮玉米秸秆+羊草干草、黄贮玉米秸秆... 详细信息

为研究苜蓿、羊草、燕麦、花生秧对肉羊的饲喂效果,选择膘情中等、健康无病、体重相近的5月龄杜湖杂交一代羊60只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个试验组,每组15只羊,分别饲喂以黄贮玉米秸秆+苜蓿干草、黄贮玉米秸秆+羊草干草、黄贮玉米秸秆+燕麦干草、黄贮玉米秸秆+花生秧为粗饲料的日粮,育肥60 d。结果表明,试验Ⅰ组羊的日增重最高,为193.56 g,分别较试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组高8.07%(P>0.05)、5.01%(P>0.05)和12.90%(P<0.05)。试验Ⅰ组羊的屠宰率最高,达45.53%,显著高于其他3组(P<0.05)。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组羊的只均净收益分别比Ⅳ组羊高18.86元、17.11元和-8.69元。综上,饲喂苜蓿和羊草可以明显提高杜湖杂交羊的育肥经济效益。

关键词：粗饲料杜湖杂交羊饲喂效果

酵母水解物对哺乳犊牛精神状态、血清生化指标和肠道菌群的影响

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饲料研究 2024年第17期47卷 1-6页

作者：李元晓刘丹晏克灿孙成振孙娟娟皮庆洁鲁志民张才河南科技大学动物科技学院河南洛阳471023 河南省动物福利与健康养殖国际联合实验室河南洛阳471023 中国农业科学院草原研究所内蒙古呼和浩特010010 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 济源市伟恒牛业有限公司河南济源459017

试验旨在研究酵母水解物对犊牛精神状态、血清生化指标和肠道菌群的影响。试验选取健康体重(39±2)kg的1日龄荷斯坦母犊牛30头,随机分为对照组和试验组,每组15个重复,每个重复1头牛。试验组补饲5 g/(头·d)酵母水解物。预试期7 d,正式... 详细信息

试验旨在研究酵母水解物对犊牛精神状态、血清生化指标和肠道菌群的影响。试验选取健康体重(39±2)kg的1日龄荷斯坦母犊牛30头,随机分为对照组和试验组,每组15个重复,每个重复1头牛。试验组补饲5 g/(头·d)酵母水解物。预试期7 d,正式试验期56 d。结果显示:补饲5 g/(头·d)酵母水解物能够改善犊牛的精神状态、皮毛状态和粪便的评分。63日龄时,与对照组相比,试验组犊牛血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、血糖(GLU)、尿素氮(BUN)和胆固醇(TC)含量显著升高(P<0.05)。35日龄时,试验组粪便菌群Chao1指数和Observed-species指数显著降低(P<0.05)。微生物属水平对比发现,试验组14日龄时犊牛粪便中普拉梭菌丰富度有所增加;35日龄时犊牛粪便中普拉梭菌丰富度有所降低。研究表明,补饲5 g/(头·d)的酵母水解物可改善犊牛精神状态、皮毛状态、粪便评分、血清生化指标,提高肠道有益菌群丰度,促进犊牛健康生长。

关键词：酵母水解物哺乳犊牛状态评分生化指标粪便菌群