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基于非靶向代谢组学的烟草镰刀菌根腐病和黑胫病拮抗链霉菌及其代谢产物的鉴定

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中国生物防治学报 2023年第4期39卷 875-884页

作者：刘鹤单宇航邱睿李淑君张崇吴元华安梦楠沈阳农业大学植物保护学院沈阳110866 烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室/河南农业科学院烟草研究所许昌461000

针对烟草两种土传病害病原菌—镰刀根腐病菌Fusarium oxysporum和黑胫病菌Phytophthora parasitica,本实验室前期从烟草根际土壤中筛选得到1株具有良好生防作用的链霉菌,结合形态学、生理生化特性及分子生物学分析,将其鉴定为淀粉酶产... 详细信息

针对烟草两种土传病害病原菌—镰刀根腐病菌Fusarium oxysporum和黑胫病菌Phytophthora parasitica,本实验室前期从烟草根际土壤中筛选得到1株具有良好生防作用的链霉菌,结合形态学、生理生化特性及分子生物学分析,将其鉴定为淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochromogenes。通过对该生防菌发酵液进行色谱-质谱联用(LC/MS)非靶向代谢组学分析,确定其重要代谢产物为茴香霉素。利用高效液相色谱对产物进行验证及含量测定,表明每克粗提物中含有茴香霉素423.98μg。菌丝生长抑制试验结果表明,茴香霉素对镰刀根腐病菌和黑胫病菌的EC_(50)值分别为1556.36和40.74μg/m L。本研究为烟草镰刀菌根腐病和黑胫病的生物防治提供了新的方法,并为其代谢产物—茴香霉素的进一步利用提供了有价值的理论基础。

关键词：烟草镰刀菌根腐病烟草黑胫病淀粉酶产色链霉菌 LC/MS非靶向代谢组学茴香霉素

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烟草拟茎点霉快速检测方法的建立

烟草科技 2022年第12期55卷 19-24页

作者：邢国珍孙帅李旭邱睿程琨李博陈佳敏何雷李淑君郑文明河南农业大学生命科学学院郑州市450002 河南省农业科学院烟草研究所黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南省许昌市461000 中国烟草总公司河南省公司郑州市450018

为实现烟草拟茎点霉的快速准确检测,利用真菌rDNA-ITS通用引物对拟茎点霉和其他10种烟草病原菌基因组DNA进行了PCR扩增、片段回收及DNA测序,在序列比对基础上设计了两对特异性检测引物,并鉴定了引物的检测灵敏度和特异性,同时优化建立了... 详细信息

为实现烟草拟茎点霉的快速准确检测,利用真菌rDNA-ITS通用引物对拟茎点霉和其他10种烟草病原菌基因组DNA进行了PCR扩增、片段回收及DNA测序,在序列比对基础上设计了两对特异性检测引物,并鉴定了引物的检测灵敏度和特异性,同时优化建立了PCR反应体系。结果表明,在退火温度为60℃时,两对特异性引物P2F/P3R和P3F/P3R从烟草拟茎点霉DNA样本中分别扩增出来420 bp和381 bp的特异性条带,而在其他10种烟草病原菌DNA以及阴性对照中均不能扩增到任何条带。两对特异性引物的检测灵敏度均达到10 pg/μL。建立的基于两对特异性引物P2F/P3R和P3F/P3R的分子检测方法可实现对病原菌烟草拟茎点霉的快速准确检测。

关键词：烟草拟茎点霉特异性引物分子检测

河南烟区烟草镰刀菌根腐病病原鉴定及侵染烟草根系观察

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烟草科技 2023年第7期56卷 17-24页

作者：邱睿李小杰李娟刘畅陈玉国李成军何晓冰苗圃白静科刘东升李淑君河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南省461000 定西市植保植检站甘肃省743000 河南省烟草公司平顶山市公司河南省467002 河南省烟草公司洛阳市公司河南省471000

为明确河南烟区烟草镰刀菌根腐病的病原组成结构及其侵染过程,通过形态学和分子生物学方法鉴定了从河南烟区分离的烟草镰刀菌根腐病病原菌,采用组织染色显微和荧光显微观察了病原菌对烟草根系的侵染过程。结果表明,豫南和豫西烟区尖孢... 详细信息

为明确河南烟区烟草镰刀菌根腐病的病原组成结构及其侵染过程,通过形态学和分子生物学方法鉴定了从河南烟区分离的烟草镰刀菌根腐病病原菌,采用组织染色显微和荧光显微观察了病原菌对烟草根系的侵染过程。结果表明,豫南和豫西烟区尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)平均检出率最高,分别为53.04%和48.18%;其次是茄病镰刀菌(***)和层出镰刀菌(***),平均检出率分别为33.62%、37.24%和6.67%、9.91%。豫中烟区茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌的平均检出率相近,分别为46.19%和45.48%,各烟区均检出共享镰刀菌(***)、三线镰刀菌(***)和藤仓镰刀菌(***)等新的病原菌。尖孢镰刀菌可通过根系表皮细胞间隙、根毛、根系破损细胞处、侧根生长处等位点侵染植物组织;附着在植株根系表面的病原孢子萌发形成芽管,通过植物表皮细胞间隙及根毛顶端侵入烟草组织,之后芽管生长分化形成菌丝,菌丝沿皮层薄壁细胞间隙逐渐扩展延伸,进入维管束并大量繁殖,进而堵塞导管管腔,阻止水分及营养运输,造成植物病变。因此,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和层出镰刀菌为河南各烟区镰刀菌根腐病的主要病原;尖孢镰刀菌可通过多种途径侵染烟草,病原菌在接触烟株根系早期开始侵染。

关键词：河南烟区烟草镰刀菌根腐病病原侵染过程

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氰戊菊酯对东亚小花蝽的毒力测定及风险评估

山东农业大学学报（自然科学版） 2022年第6期53卷 874-877页

作者：李青燕刘馨桧李前进侯国望郭梅燕田华星王海燕李成军项城市农业科学研究所河南项城466200 河南省农业科学院烟草研究所/烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南许昌461000

为明确氰戊菊酯对东亚小花蝽的毒害作用。采用药膜法分别测定了东亚小花蝽1~5龄若虫及成虫的毒性,并进行了风险评估。结果显示,不同龄期的东亚小花蝽对该药剂的敏感性存在差异,敏感性降序排列为:1龄若虫,2龄若虫,3龄若虫,成虫,4龄若虫,... 详细信息

为明确氰戊菊酯对东亚小花蝽的毒害作用。采用药膜法分别测定了东亚小花蝽1~5龄若虫及成虫的毒性,并进行了风险评估。结果显示,不同龄期的东亚小花蝽对该药剂的敏感性存在差异,敏感性降序排列为:1龄若虫,2龄若虫,3龄若虫,成虫,4龄若虫,5龄若虫。1龄若虫最为敏感,LC50最低;5龄若虫敏感性最低,LC50最高。在农田内和农田外两个暴露场景下,氰戊菊酯对不同龄期的东亚小花蝽的危害商值均小于触发值5,表明风险可接受。

关键词：氰戊菊酯东亚小花蝽毒力测定

不同烟草品种接种蚜虫后NtCPI1基因表达分析

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中国烟草科学 2020年第2期41卷 43-47页

作者：孙计平张慧敏陈飞孙焕娄亚楠李雪君平文丽河南省农业科学院烟草研究所黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南许昌461000 平顶山市农业科学院河南平顶山467000

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPI)与植物抗病抗虫性密切相关,为了明确烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因NtCPI1功能,研究其与烟草品种抗虫性的关系,对不同蚜虫抗性烟草品种进行了接虫前后NtCPI1荧光定量表达分析。结果表明,抗蚜烟草品种接种蚜虫后... 详细信息

半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPI)与植物抗病抗虫性密切相关,为了明确烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因NtCPI1功能,研究其与烟草品种抗虫性的关系,对不同蚜虫抗性烟草品种进行了接虫前后NtCPI1荧光定量表达分析。结果表明,抗蚜烟草品种接种蚜虫后,NtCPI1表达量显著增加,664-01接种蚜虫3 h后,NtCPI1表达量为对照的10.8倍,Blue River接种蚜虫6 h后,NtCPI1表达量为对照的6.28倍;而螺丝头2474、云烟97和中烟100等感蚜品种接虫后,NtCPI1表达量极显著降低。NtCPI1可以作为高效抗蚜候选基因,具有潜在的应用价值。

关键词：烟草 NtCPI 抗蚜虫表达

烤烟新品系Y2001团棵期生理特性和产量产值对氮素的响应

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山东农业科学 2023年第8期55卷 121-128页

作者：韩会阁阎海涛郭芳阳常栋阴广宇张凯阎小毛吴照辉刘巧真徐文正李雪君李俊营河南省农业科学院烟草研究所/烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南许昌461100 河南省烟草公司平顶山市公司河南平顶山467000

为揭示烤烟新品系Y2001低氮条件下生长势强的内在机理,本研究采用大田小区试验法,以中烟100(Nicotiana tabacum *** 100)为对照、烤烟品系Y2001为研究对象,测定不施氮、30 kg/hm^(2)(低氮)、60 kg/hm^(2)(中氮)和90 kg/hm^(2)(高氮)4个... 详细信息

为揭示烤烟新品系Y2001低氮条件下生长势强的内在机理,本研究采用大田小区试验法,以中烟100(Nicotiana tabacum *** 100)为对照、烤烟品系Y2001为研究对象,测定不施氮、30 kg/hm^(2)(低氮)、60 kg/hm^(2)(中氮)和90 kg/hm^(2)(高氮)4个不同施氮水平下,两品种(系)烤烟团棵期生理和生长发育特性及氮素效应指标。结果表明,(1)与中烟100相比,Y2001叶片氮含量和干物质积累量均在低氮条件下增幅较大、中高氮条件下增幅较小,其氮素农学效率和氮肥表观回收效率表现为低氮处理显著高于中高氮处理,其氮素干物质生产效率则相反;氮肥梯度上,Y2001茎和根的氮素农学效率和干物质生产效率显著低于中烟100;Y2001各处理叶片氮素生产力均较高、根茎较低。(2)氮肥梯度上,Y2001叶片的叶绿素指数(Chl)相对稳定无显著变化、类黄酮指数(Flav)逐渐减小、氮平衡指数(NBI)逐渐增大,中烟100叶片的Flav逐渐减小、Chl和NBI逐渐增大;与中烟100相比,Y2001叶片的Chl无氮处理较高,各处理NBI均较高、Flav较低。(3)氮肥梯度上,Y2001根茎叶中氮磷钾积累量的增幅接近,中烟100钾的增幅大于氮和磷;与中烟100相比,Y2001根茎叶中氮和钾积累量表现为低氮处理较高、中高氮处理较低。(4)从产量和产值看,Y2001和中烟100最佳施氮量分别为30 kg/hm^(2)和60 kg/hm^(2)。综上,与中烟100相比,Y2001低氮时较强的养分吸收能力、较高的叶片氮素生产能力和干物质分配比例可能是其叶片生产能力较强的重要原因;而相对稳定的叶片氮含量和Chl、相对平衡的氮磷钾吸收能力可能是其叶片生产受土壤养分状况影响较小的重要原因;Y2001替代中烟100可在氮肥减施30 kg/hm^(2)的同时产值增加6600元/hm^(2)。

关键词：烤烟 Y2001 养分利用效率氮平衡指数类黄酮指数氮素生产力

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烟草镰刀菌根腐病抗性鉴定方法研究

中国烟草科学 2023年第2期44卷 43-51页

作者：李雪君郭敬孙计平孙焕李芳芳平文丽李建华俎焕新李旭辉侯咏耿胜娜河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南许昌461000 河南省烟草公司郑州450018 河南省烟草公司许昌市公司河南许昌461000

为获得不同烟草品种镰刀菌根腐病抗性的鉴定方法,采用镰刀菌粗毒素幼芽接种、孢子悬浮液培养、带菌菌谷接种、离体叶片菌饼接种、草酸局部注射等5种方法对4个品种(小黄金1025、中烟100、长脖黄、664-01)的镰刀菌抗病性进行了研究。结果... 详细信息

为获得不同烟草品种镰刀菌根腐病抗性的鉴定方法,采用镰刀菌粗毒素幼芽接种、孢子悬浮液培养、带菌菌谷接种、离体叶片菌饼接种、草酸局部注射等5种方法对4个品种(小黄金1025、中烟100、长脖黄、664-01)的镰刀菌抗病性进行了研究。结果表明,镰刀菌毒素液胁迫法可以鉴定品种的抗感程度,适宜体系毒素浓度为8%,处理时间6 d;镰刀菌孢子悬浮液接种法可以鉴定品种的抗感程度,适宜体系孢子液浓度为107个/mL,处理时间4 d;带菌菌谷接种也可以鉴定品种的抗感程度,适宜体系菌谷比例为20%,处理时间9 d;离体叶片用菌饼和草酸液处理,能区分品种的抗感性,但不能区分品种的抗感程度。研究结果认为孢子悬浮液接种法和带菌菌谷接种与其他3种方法相比可以准确评价品种对镰刀菌根腐病的抗感性。

关键词：烟草镰刀菌根腐病毒素孢子液菌饼抗病性

3种拮抗烟草疫霉及产IAA内生细菌的分离鉴定

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江苏农业科学 2023年第18期51卷 107-114页

作者：李颖颖康业斌李成军李淑君河南科技大学园艺与植物保护学院河南洛阳471000 烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室/河南省农业科学院烟草研究所河南许昌461000

为挖掘河南省洛阳地区烟株体内的内生细菌功能菌株,以期开发优良生防菌剂。采用稀释涂布平板法分离纯化烟株各生育时期内生细菌菌株,采用平板对峙法、生长速率法测定内生菌株对烟草疫霉的抑制作用,紫外分光光度计法测定菌株产生IAA的水... 详细信息

为挖掘河南省洛阳地区烟株体内的内生细菌功能菌株,以期开发优良生防菌剂。采用稀释涂布平板法分离纯化烟株各生育时期内生细菌菌株,采用平板对峙法、生长速率法测定内生菌株对烟草疫霉的抑制作用,紫外分光光度计法测定菌株产生IAA的水平。对筛选出的功能内生菌株进行形态学、生理生化鉴定及16S rDNA、gyrB序列分析鉴定,并测定对种子萌发的促生作用。结果表明,筛选出的12株内生菌株的鉴定结果为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)7株,沙福芽孢杆菌(***)4株,奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)1株。芽孢杆菌属占菌株总数的91.67%,其中菌株LYYY63-1、LYRY39-1、LYSX141具有较强的抑制活性,对烟草疫霉的抑菌率分别为88.10%、84.55%和73.33%;沙福芽孢杆菌菌株LYYY61-2、LYYY117对烟草疫霉的抑菌率达62.10%、64.72%;奇异变形杆菌菌株LYRY45产IAA水平达11.06 mg/L,具有较高的产IAA水平。12株细菌对烟草7种病原真菌具有不同程度的抑制作用,抑菌谱广,对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,其中菌株LYRY45的促生效果最为显著,种子萌发率达98.00%,处理组根长增长37.76%,茎长增长21.43%,总长增长33.96%。研究分离鉴定了洛阳地区健康烟株中3类具有抑菌、促生效能的内生细菌菌株,希望为生防菌防治烟草病害提供理论基础。

关键词：烟草疫霉内生细菌分子鉴定 IAA 促生作用

烟草尖孢镰刀菌拮抗真菌的筛选鉴定及促生作用研究

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中国生物防治学报 2021年第5期37卷 1066-1072页

作者：姚晨虓李小杰李琦邱睿白静科刘畅陈玉国康业斌李淑君河南科技大学园艺与植物保护学院洛阳471023 烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室/河南省农业科学院烟草研究所许昌461000 中国烟草总公司河南省公司郑州450018

为获得烟草镰刀菌根腐病拮抗真菌菌株,试验以河南省豫中烟区烟草根际土壤为试材,以主要致病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum为主要靶标,采用稀释涂布平板法分离获得土壤真菌371株,平板对峙培养法测定获得1株具有明显抑制效果的拮抗菌株,... 详细信息

为获得烟草镰刀菌根腐病拮抗真菌菌株,试验以河南省豫中烟区烟草根际土壤为试材,以主要致病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum为主要靶标,采用稀释涂布平板法分离获得土壤真菌371株,平板对峙培养法测定获得1株具有明显抑制效果的拮抗菌株,利用形态学和分子生物学的方法将其鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum Tr-0111。抑制效果测定表明,该菌株对尖孢镰刀菌的抑制率最高可达93.13%,对根串珠霉菌、拟茎点霉、链格孢菌等其他8种烟草病原菌均具有较强的抑制效果。促生作用测定结果表明,菌株发酵液使烟草种子萌发率提高5.34%,烟苗根长增长率为62.39%,对盆栽烟草的最大叶面积和地上部鲜重也具有显著的促生效果。为进一步相关机理的研究和生防菌剂的研制奠定了基础。

关键词：烟草镰刀菌根腐病尖孢镰刀菌棘孢木霉抑制效果促生作用