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烟草镰刀菌根腐病生防菌GDND-2的鉴定及防病效果

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中国农学通报 2024年第23期40卷 126-134页

作者：沈会芳杨祁云张景欣蒲小明孙大元刘平平林壁润广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

为烟草根腐病生防菌剂的研发储备菌株资源。以烟草根腐病菌为靶标,筛选拮抗菌,通过培养形态、生化特征和分子技术鉴定菌株。用平板划线测定拮抗菌耐受力,盆栽试验验证其对病害的防效。筛选出拮抗菌GDND-2,其10%和20%发酵滤液对病菌生长... 详细信息

为烟草根腐病生防菌剂的研发储备菌株资源。以烟草根腐病菌为靶标,筛选拮抗菌,通过培养形态、生化特征和分子技术鉴定菌株。用平板划线测定拮抗菌耐受力,盆栽试验验证其对病害的防效。筛选出拮抗菌GDND-2,其10%和20%发酵滤液对病菌生长抑制率为53.09%和62.24%。鉴定GDND-2为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velenzensis),该菌抑菌谱广,耐极端温度、酸碱和盐碱,对多菌灵等7种常用杀菌剂不敏感。GDND-2发酵液处理15、30、45 d,对烟草根腐病的防效为70.00%、74.62%和79.51%,处理45 d的防效高于多菌灵。贝莱斯芽孢杆菌GDND-2抗菌谱广,性状优良,可有效防治烟草根腐病,有望开发为生防菌剂。

关键词：烟草镰刀菌根腐病贝莱斯芽孢杆菌鉴定耐受性防治效果

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河南烟草镰刀菌的分子鉴定及致病性分析

中国烟草学报 2018年第2期24卷 129-134页

作者：邱睿白静科李成军李淑君李小杰陈玉国胡亚静刘东升河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南省许昌市461000

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和r DNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌... 详细信息

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和r DNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,获得的98个菌株在PDA培养基上均产生白色菌丝,大型分生孢子呈镰刀形或马特形,无色、多孢;小型分生孢子呈肾形、椭圆形或卵形,无色、多无分隔。序列比对结果显示,所分离的98株菌分属尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、茄病镰刀菌(Fusarium solani)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)和Fusarium nematophilum。致病性分析结果表明,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌对烟苗具有致病性;48株致病菌中豫南烟区烟草镰刀菌根腐病致病性病原菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌,以尖孢镰刀菌为主;豫中为尖孢镰刀菌;豫东、豫西为茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。因此,尖孢镰刀菌为全省烟区重点防控对象,豫南烟区还需加强层出镰刀菌和木贼镰刀菌的防控,豫东、豫西需防范茄病镰刀菌的发生。

关键词：河南省烟草镰刀菌分子鉴定致病性

多粘类芽胞杆菌LB−9的诱变及抑菌防病效果研究

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中国生物防治学报 2020年第5期36卷 771-777页

作者：李小杰刘畅李成军姚晨虓白静科于冰娜邱睿陈玉国李淑君河南省农业科学院烟草研究所/烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室许昌461000

为获得对烟草疫霉菌生防效果更佳的拮抗菌株,对多粘类芽胞杆菌LB−9进行基因诱变。利用原生质体电转化法,构建了菌株LB−9的Tn−5转座插入突变体库,获得约2000个转化子,通过平板对峙法筛选出对烟草疫霉菌拮抗能力增强且效果稳定的突变菌株3... 详细信息

为获得对烟草疫霉菌生防效果更佳的拮抗菌株,对多粘类芽胞杆菌LB−9进行基因诱变。利用原生质体电转化法,构建了菌株LB−9的Tn−5转座插入突变体库,获得约2000个转化子,通过平板对峙法筛选出对烟草疫霉菌拮抗能力增强且效果稳定的突变菌株3个,其中编号为A13的突变菌株对烟草疫霉菌的抑制效果达到80%以上,与原始菌株LB−9的抑菌率相比提高了20%以上。采用室内盆栽接种法研究了正突变菌株A13对烟草黑胫病的防控效果,并利用实时荧光定量PCR法初步分析了其诱导烟株体内抗病相关基因的表达。结果表明,正突变菌株A13处理烟株7 d后,对烟草黑胫病的防效高于原始菌株LB−9,防效可达80%以上,同时可诱导烟株体内不同信号通路中抗性相关基因的上调表达。本研究为多粘类芽胞杆菌插入诱变育种方法研究提供了理论支撑,对烟草黑胫病的生物防治具有重要意义。

关键词：多粘类芽胞杆菌诱变烟草疫霉菌防效诱导抗病性

基于全基因组测序的贝莱斯芽胞杆菌Ba-0321抑菌机制分析及相关功能验证

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中国生物防治学报 2023年第4期39卷 885-894页

作者：李小杰邱睿刘畅姚晨虓白静科陈玉国李淑君河南省农业科学院烟草研究所/烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室许昌461000

贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis Ba-0321是从健康烟株根际土壤中分离获得的一株具有较强抑菌活性的根际促生细菌,具有较好的生防潜力和应用前景。本研究采用菌丝生长速率法测定菌株Ba-0321无菌滤液对烟草尖孢镰刀菌Fusariumoxysporu... 详细信息

贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis Ba-0321是从健康烟株根际土壤中分离获得的一株具有较强抑菌活性的根际促生细菌,具有较好的生防潜力和应用前景。本研究采用菌丝生长速率法测定菌株Ba-0321无菌滤液对烟草尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum和疫霉菌Phytophthoranicotianae的抑制效果,采用二代illumina与三代Nanopore相结合的测序技术,对菌株Ba-0321进行全基因组测序,并对测序数据进行基因组组装、基因功能注释及次级代谢产物合成基因簇预测等。结果表明,菌株Ba-0321无菌滤液对尖孢镰刀菌和疫霉菌均具有抑制效果,其中含有10%无菌滤液的培养基对两种病原菌菌丝生长的抑制率较高,分别达57.38%和34.30%。全基因组测序结果表明,菌株Ba-0321基因组大小为4099109 bp,共有编码基因3897个,基因组测序数据提交至NCBI获得GenBank登录号为CP101904。在GO、COG和KEGG Pathway数据库中有大量编码酶类、萜类化合物、聚酮化合物代谢途径和参与防御机制相关基因被注释。利用anti-SMASH预测到13个次级代谢产物合成基因簇,编码Surfactin、Fengycin、difficidin、Bacillaene、Bacillibactin、Macrolactin H、Bacilysin等多种抑菌活性物质。通过PCR扩增和序列测定分析,证实了Ba-0321菌株基因组中确实存在抑菌物质合成基因簇及防御机制相关基因。酶活测定结果表明,该菌株具有蛋白酶、几丁质酶和纤维素酶等抗性酶活性。本研究在基因组层面上解析了菌株Ba-0321的抑菌机制,为挖掘抑菌相关基因资源提供了分子基础,对该菌株的后续相关研究及应用具有重要意义。

关键词：贝莱斯芽胞杆菌全基因组抑菌机制功能注释功能验证

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绿盲蝽对果园常用杀虫剂敏感基线与诊断剂量的建立

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果树学报 2020年第12期37卷 1974-1979页

作者：赵钧涂洪涛张金勇陈汉杰中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009 河南省农业科学院烟草研究所·黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室郑州450002

【目的】明确绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-Dür)对果园常用杀虫剂的敏感性差异,并建立其对这些杀虫剂的敏感基线和抗药性检测的诊断剂量,为生产上推断绿盲蝽对不同药剂的抗性发生状况以及合理用药提供理论依据。【方法】采用玻璃管... 详细信息

【目的】明确绿盲蝽(Apolygus lucorum Meyer-Dür)对果园常用杀虫剂的敏感性差异,并建立其对这些杀虫剂的敏感基线和抗药性检测的诊断剂量,为生产上推断绿盲蝽对不同药剂的抗性发生状况以及合理用药提供理论依据。【方法】采用玻璃管药膜法测定9种杀虫剂对绿盲蝽室内敏感品系三龄若虫的毒力水平,并用死亡概率值法计算得到LC50值和LC99值。以LC50值作为敏感基线数据,以两倍LC99值作为诊断剂量数据。【结果】供试的9种杀虫剂对绿盲蝽的毒力从高到低为:联苯菊酯(LC50=0.79 mg·L^-1)、毒死蜱(3.96 mg·L^-1)、高效氯氟氰菊酯(6.25 mg·L^-1)、噻虫嗪(10.47 mg·L^-1)、甲氰菊酯(10.91 mg·L^-1)、马拉硫磷(29.42 mg·L^-1)、啶虫脒(36.26 mg·L^-1)、吡虫啉(78.29 mg·L^-1)和氟啶虫胺腈(160.89 mg·L^-1)。并得出各杀虫剂相应的敏感基线和抗性诊断剂量。【结论】测定了9种果园常用杀虫剂对实验室敏感品系绿盲蝽的毒力水平,并提供了敏感基线和诊断剂量,为测定和评估田间绿盲蝽抗性及其发展趋势提供了理论依据。

关键词：果园绿盲蝽杀虫剂玻管药膜法抗药性敏感基线

EMS诱变NC 55突变体库的创建及高钾突变材料的筛选

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种子 2020年第1期39卷 69-73,87页

作者：孙计平娄亚楠孙焕李雪君陈飞平文丽丁燕芳河南省农业科学院烟草研究所/黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室

为了获得不同类型的烟草突变体库,用0.6%的EMS诱变处理NC 55,对诱变后的M 1代的大田性状进行调查分析,并从中筛选高钾突变材料。EMSNC 55 M 1代植物学性状和农艺性状变异类型丰富,突变率为11.88%,主要为多头突变、株型突变、叶片突变等... 详细信息

为了获得不同类型的烟草突变体库,用0.6%的EMS诱变处理NC 55,对诱变后的M 1代的大田性状进行调查分析,并从中筛选高钾突变材料。EMSNC 55 M 1代植物学性状和农艺性状变异类型丰富,突变率为11.88%,主要为多头突变、株型突变、叶片突变等;通过大田筛选和烟叶化验,筛选到钾含量高于对照NC 55的突变材料74份,其中钾含量超过1.50%的35份,以EMSNC 55-5501烟叶钾含量最高,为2.03%。EMSNC 55 M 1代单株留种606份,为进一步筛选各种类型突变体和选育新品种创建了很好的突变体库。

关键词： EMS诱变烟草钾突变体

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接种蚜虫后不同烟草品种茉莉酸含量变化研究

河南农业科学 2021年第1期50卷 101-107页

作者：孙计平陈飞李雪君孙焕李旭辉河南省农业科学院烟草研究所/黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南许昌461000

植物茉莉酸含量与抗病抗虫性密切相关,为了筛选抗蚜烟草品种,并研究其抗蚜机制,采用离体叶片试验和盆栽试验,从烟蚜选择性和繁殖特性两方面对12个烟草品种进行了抗蚜性鉴定,并分析其接种蚜虫前后烟株茉莉酸含量变化。结果表明,茄棵、胎... 详细信息

植物茉莉酸含量与抗病抗虫性密切相关,为了筛选抗蚜烟草品种,并研究其抗蚜机制,采用离体叶片试验和盆栽试验,从烟蚜选择性和繁殖特性两方面对12个烟草品种进行了抗蚜性鉴定,并分析其接种蚜虫前后烟株茉莉酸含量变化。结果表明,茄棵、胎里肥2411、竖把老母鸡2113和王坡二4个烟草品种表现为抗蚜,务川黑烟、红县乡大叶烟、MC Nair和Vesta 33四个品种对蚜虫表现为中抗,中烟100和SpeightG-28两个品种表现为感蚜,螺丝头2474和云烟97两个品种表现为高感;抗蚜烟草品种茉莉酸含量均极显著高于其他品种;参试12个烟草品种在蚜虫侵袭后茉莉酸含量均极显著增加,且抗蚜烟草品种茉莉酸增加量和增幅均大于感蚜烟草品种。因此,烟草茉莉酸含量与抗蚜性有较好的相关性,可以作为烟草品种抗蚜鉴定的生理指标。

关键词：烟草品种烟蚜抗蚜虫茉莉酸抗蚜鉴定

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河南烟区烟草病毒病种类与分布

烟草科技 2018年第10期51卷 20-26页

作者：白静科李淑君李成军王海涛李小杰邱睿陈玉国周硕野宋瑞芳河南省农业科学院烟草研究所烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南省烟草公司郑州市商务外环15号450002

为明确近年来河南省烟草病毒病的种类及分布状况,利用9种病毒血清通过酶联免疫吸附法(ELISA)对2015—2017年间河南11个烟叶产区的566份病毒病样品进行了系统检测。结果表明,河南烟区病毒病总检出率为96.47%;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic... 详细信息

为明确近年来河南省烟草病毒病的种类及分布状况,利用9种病毒血清通过酶联免疫吸附法(ELISA)对2015—2017年间河南11个烟叶产区的566份病毒病样品进行了系统检测。结果表明,河南烟区病毒病总检出率为96.47%;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草蚀纹病毒(Tobacco etch virus, TEV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)和烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus, TVBMV)5种病毒在河南烟区危害最为严重,且TMV已发展为河南烟区病毒的优势种。全省侵染类型中单一病毒侵染率为34.63%,TMV的单一病毒侵染率最高,为26.86%;两种及以上病毒复合侵染率为61.84%,复合侵染主要存在5种类型,即TMV+CMV、TMV+CMV+TEV、TMV+TEV+PVY、TMV+TEV+TVBMV、TMV+CMV+TEV+PVY,侵染率分别为18.73%、3.36%、3.89%、5.83%和7.24%。因此,河南省11个烟叶产区的主要病毒种类确定为TMV、CMV、TEV、PVY和TVBMV,侵染类型为TMV+CMV、TMV+CMV+TEV、TMV+TEV+PVY,TMV+TEV+TVBMV、TMV+CMV+TEV+PVY。

关键词：烟草病毒病 ELISA检测种类分布侵染类型

烟草疫霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及发酵条件优化

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中国烟草科学 2019年第1期40卷 68-74页

作者：李小杰李成军刘红彦邱睿赵辉陈玉国胡亚静刘畅白静科李淑君烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南省农业科学院烟草研究所河南许昌461000 烟草行业黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室河南省农业科学院植物保护研究所郑州450002

为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防细菌菌株,本研究从烟草黑胫病病圃地采集健康烟株的根际土样,采用对峙培养法筛选得到8株对烟草黑胫病具有拮抗作用的细菌菌株,其中编号为LB-9的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率... 详细信息

为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防细菌菌株,本研究从烟草黑胫病病圃地采集健康烟株的根际土样,采用对峙培养法筛选得到8株对烟草黑胫病具有拮抗作用的细菌菌株,其中编号为LB-9的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为60.6%,且抑菌谱广,对其进行16S rRNA基因序列分析后将该菌株鉴定为多粘芽孢杆菌。采用单因素优化试验初步探究了多粘芽孢杆菌LB-9的最适发酵条件,明确了LB-9的最适发酵培养基、最适发酵温度、最适发酵时间和最适发酵初始pH值,对其生防制剂的开发应用具有重要意义。

关键词：烟草疫霉拮抗细菌筛选鉴定发酵条件