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全氟辛酸对肉鸡肝脏和十二指肠的损伤作用

中国兽医杂志 2024年第2期60卷 9-17页

作者：姚文梅寇晨雨孙雨昕刘涛王晓丹河北农业大学中兽医学院河北保定071000 河北省兽医生物技术创新中心河北保定071000 瑞普(保定)生物药业有限公司河北保定071000

全氟辛酸(PFOA)是环境中常见的一种有机污染物,可以通过饲料或饮水进入机体,对家禽的健康产生威胁。为探究PFOA对肉鸡生长性能、胸肌肉品质、肝脏和十二指肠的影响,本试验将160羽1日龄健康爱拔益佳肉鸡随机分为4个组,分别于试验4~42 d... 详细信息

全氟辛酸(PFOA)是环境中常见的一种有机污染物,可以通过饲料或饮水进入机体,对家禽的健康产生威胁。为探究PFOA对肉鸡生长性能、胸肌肉品质、肝脏和十二指肠的影响,本试验将160羽1日龄健康爱拔益佳肉鸡随机分为4个组,分别于试验4~42 d在饮水中添加0 mg/L PFOA(C组)、0.5 mg/L PFOA(D组)、1 mg/L PFOA(Z组)和1.5 mg/L PFOA(G组),每组4个重复,每个重复10羽鸡。于试验42 d在每个重复中随机选取4羽鸡处死,收集胸肌、肝脏和十二指肠,计算平均日增重和肝脏指数;检测胸肌亮度值、红度值、黄度值、pH和蒸煮损失;组织病理学观察肉鸡肝脏和十二指肠的形态变化;检测肉鸡肝脏中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的活力;检测肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肉鸡肝脏和十二指肠中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果显示,与C相比,PFOA处理会对肉鸡肝脏和十二指肠造成不同程度的损伤,其中1.5 mg/L的PFOA会使肉鸡平均日增重极显著降低(P<0.01),肝脏指数极显著增加(P<0.01),蒸煮损失显著升高(P<0.05),肝细胞出现空泡变性和核固缩,且AST和ALT的活力极显著升高(P<0.01),MDA、IL-1β、IL-6和TNF-α的含量极显著升高(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px的活性极显著降低(P<0.01);并引起肉鸡十二指肠绒毛高度变低、肿胀,且IL-1β、IL-6和TNF-α的含量极显著升高(P<0.01)。结果表明,饮水中添加1.5 mg/L PFOA会增加肉鸡胸肌蒸煮损失,导致肝脏细胞损伤和炎症反应,使抗氧化能力降低;且导致肉鸡十二指肠绒毛变短、水肿和炎症反应。

关键词：全氟辛酸肉鸡肝脏十二指肠

努力开创学会工作新局面,为振兴我省畜牧业经济而贡献力量——湖北省畜牧兽医学会第五届理事会工作报告

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湖北畜牧兽医 1983年第1期 1-6页

作者：张乐昌湖北省畜牧兽医学会

同志们: 现在,我代表湖北省畜牧兽医学会第五届理事会向畜牧兽医学会一九八二年会员代表大会作学会工作报告。一、四年来学会工作的回顾我省畜牧兽医学会是在一九七八年恢复

关键词：畜牧业牧业畜牧兽医经济湖北省力量

发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白的表达和定位及宿主互作蛋白的筛选和分析

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吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1286-1296页

作者：骆丽可程子文程廓李永刚王大为杨宝玲锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室辽宁锦州121000 锦州医科大学畜牧兽医学院基础兽医学教研室辽宁锦州121000

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pS... 详细信息

目的:通过免疫沉淀联合质谱分析的方法筛选发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)非结构蛋白(NSs)的宿主互相作用(互作)蛋白,探讨互作蛋白的功能、亚细胞定位及参与的生物途径,为阐明SFTSV的复制和致病机制提供依据。方法:将真核表达载体pSFTSV-NSs-Flag (实验组)和Flag-CMV-3 (阴性组)分别转染进人胚胎肾293T细胞中,同时设置空白组(不进行任何处理)。收集各组细胞裂解液,采用间接免疫荧光和Western blotting法验证SFTSV NSs在宿主细胞中的表达及定位。蛋白裂解液经protein A/G处理,采用免疫沉淀法富集与NSs结合的宿主蛋白,通过银染和考马斯亮蓝染色初步分析捕获的互作蛋白,观察各组蛋白差异条带。采用液相色谱和串联质谱技术得到蛋白质的序列信息,保留可信蛋白基于UniProt数据库检索,对鉴定到的蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析、蛋白结构域和功能位点数据库(IPR)、真核生物同源蛋白簇(KOGs)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、亚细胞定位和转录因子(TF)功能注释,确定互作蛋白的亚细胞结构、基因功能及参与的生物过程。结果:SFTSV NSs在相对分子质量33 000处表达单一特异性条带,免疫荧光检测其定位于细胞质中,且聚集呈砂粒体包涵体样。银染和考马斯亮蓝染色,实验组和阴性组均存在显著差异条带。质谱筛选出46种潜在互作蛋白;GO功能富集分析、KOGs功能注释和KEGG信号通路富集分析,与病毒翻译、细胞代谢及蛋白质运输相关的生物途径富集到较多数目的蛋白,注释中有8种蛋白具有中间丝蛋白结构域。亚细胞定位所占百分率最高的是细胞质蛋白;与NSs定位场所一致。TF功能注释,有1种蛋白来自NF-Y家族。结论:互作蛋白在协助蛋白质正确折叠、参与核糖体翻译和构成细胞骨架等进程中发挥作用,可能参与了抗病毒复制,可作为候选蛋白进一步研究SFTSV的复制机制。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒非结构蛋白蛋白-蛋白互相作用免疫沉淀质谱

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四种藏兽医药用植物和屎肠球菌联用对大肠杆菌E6生物被膜的影响

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中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 12-20页

作者：谭敏杨丹娇汪露黄志宏陈朝喜西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省甘孜藏族自治州畜牧业科学研究所康定626000

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯... 详细信息

采用改良结晶紫半定量法和微量肉汤稀释法分别对152株大肠杆菌进行生物被膜形成能力分析和12种常用抗菌药物敏感性试验。同时,利用棋盘稀释法评价四种藏兽医药用植物(马蹄黄、偏翅唐松草、华丽龙胆和岩生忍冬)不同提取部位(甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和石油醚)、屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗生素(氯霉素、土霉素、氨苄西林和磺胺甲噁唑)联合对10株多重耐药大肠杆菌(E1-E10)杀菌活性,以探讨不同药物组合对E6生物被膜的清除作用。实验结果显示:152株大肠杆菌多表现为中等成膜能力和无成膜能力表型,对氯霉素、磺胺二甲嘧啶、土霉素、氨苄西林、磺胺甲噁唑的耐药率均高于90%,对二氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、头孢噻呋、妥布霉素和头孢曲松的耐药率均低于50%,其中阿米卡星的敏感率最高,耐药率仅为19.90%;马蹄黄甲醇提取物、偏翅唐松草乙酸乙酯提取物、华丽龙胆甲醇提取物和岩生忍冬乙酸乙酯提取物、屎肠球菌S16和S17乙酸乙酯提取物对E1~E10的MIC范围分别为3.93~15.63、3.93~31.52,7.81~15.63、7.81~31.52、0.42~13.38和0.45~3.63 mg/mL;四种藏兽医药用植物不同提取部位和屎肠球菌乙酸乙酯提取物与高耐药率抗菌药物分别呈现不同的联合作用;在MIC浓度下,药物联合对E6表现出较强的生物被膜清除能力,其中岩生忍冬和偏翅唐松草乙酸乙酯提取物与土霉素和氨苄西林联用对E6生物被膜的抑制率高于其他组合,岩生忍冬和偏翅唐松草乙酸乙酯提取部位与土霉素联用的抑制率分别为48.92%、42.58%,与氨苄西林联用的抑制率分别为48.58%、47.84%。选用的四种藏兽医药用植物、益生菌和抗菌药物联合应用在一定程度上能够解决本研究藏猪和藏鸡源大肠杆菌耐药性和生物被膜形成等问题。

关键词：藏兽医药用植物生物被膜形成能力多重耐药性耐药谱型

一株牛呼吸道冠状病毒的分离鉴定及部分生物学特征

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畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3094-3104页

作者：班玛王清陈曦岳怡苏玉蓉岳华汤承西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省阿坝州动物疫病预防控制中心阿坝州624011

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种... 详细信息

牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)是引起牛呼吸道疾病和消化道疾病的重要病原之一。本研究旨在分离牛呼吸道冠状病毒(BRCV)并研究其部分生物学特性。采集暴发呼吸道疾病的肉牛鼻拭子,经荧光定量PCR鉴定为BCoV阳性。将阳性样本接种人盲肠腺癌细胞(HCT-8),分离纯化后,对引起细胞病变的病毒分离株的S和HE基因进行序列测定和系统发育分析,并将病毒分离株接种BALB/c小鼠进行致病性研究。结果显示,成功分离到1株致细胞病变的毒株,经荧光定量PCR、间接免疫荧光和电镜观察鉴定为BRCV,蚀斑纯化后计算病毒TCID_(50)为10^(-8.46)·0.1 mL^(-1)。S基因和HE基因序列分析表明两种基因均发生重组事件;S蛋白具有2个独特的氨基酸突变(A33G和A975V),分别位于S1亚基的受体结合域和S2亚基;HE基因具有2个独特的氨基酸突变(L235R和L365F),分别位于凝集素域和近膜端域。分离株对4周龄BALB/c小鼠具有较强的致病性,能够引起小鼠呼吸加快和腹泻等临床症状,剖检和组织病理学显示肺和肠道出血,病毒主要分布在肺和肠组织,以肺组织中病毒载量最高。本研究首次在国内肉牛中分离到1株BRCV,S和HE基因分子有独特氨基酸突变,成功建立了小鼠感染模型,为进一步研究BCoV的生物学特性和遗传进化提供了参考。

关键词：牛呼吸道冠状病毒 S基因 HE基因小鼠致病性

EGCG的生物学活性及其调节卵母细胞老化的研究进展

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生物工程学报 2024年

作者：张伟莹张慧珠李钰浚兰道亮熊显荣王亚营李键何翃闳西南民族大学畜牧兽医学院青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate， EGCG)是绿茶中一类含量最高的次级代谢产物，具有抗氧化、抗癌和抗炎等多种生理活性。EGCG在调节卵母细胞老化的过程中起重要作用，主要通过增强卵母细胞的抗氧化能力、改善线粒... 详细信息

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate， EGCG)是绿茶中一类含量最高的次级代谢产物，具有抗氧化、抗癌和抗炎等多种生理活性。EGCG在调节卵母细胞老化的过程中起重要作用，主要通过增强卵母细胞的抗氧化能力、改善线粒体功能和减少细胞凋亡来延缓卵母细胞的衰老进程。本文对EGCG主要分子特性及其调节卵母细胞老化的作用机制进行综述，为深入理解EGCG在减缓卵母细胞老化中的作用提供参考。

关键词： EGCG 抗氧化卵母细胞老化氧化应激

锡兰钩虫ASP4基因的表达与免疫保护效果分析

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中国农业大学学报 2024年第11期 102-111页

作者：聂林冲袁浩杨子鹏何厚劲李文豪杨留禄金梦圆袁子国华南农业大学兽医学院

为克隆锡兰钩虫ASP4基因（Ace-ASP4），评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果，先扩增AceASP4基因序列，并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析，并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，然后利用CCK-8法和间接ELISA... 详细信息

为克隆锡兰钩虫ASP4基因（Ace-ASP4），评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果，先扩增AceASP4基因序列，并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析，并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，然后利用CCK-8法和间接ELISA方法分别检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力和血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。同时检测首免后小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10水平。最后，在三免后14 d经口感染500条L3幼虫，48h后检测肺、胃肠道和肌肉的虫体数量，计算减虫率，以评估其免疫保护效果。结果表明：1)Ace-ASP4基因的ORF全长为750 bp，编码249个氨基酸。生物信息学分析显示，Ace-ASP4编码蛋白为亲水性蛋白，具有信号肽序列且无跨膜结构，其三维结构模型质量良好（GMQE值为0.9）。2)Ace-ASP4蛋白分子大小为27 ku，在上清和沉淀中均有表达，但主要以包涵体形式富集于沉淀中，并具有良好的免疫反应性。3)Ace-ASP4重组蛋白可诱导免疫小鼠IgG、IgG1和IgG2a抗体显著上升，并极显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖（P<0.01）。与PBS对照组相比，在首免后第35天用Ace-ASP4重组蛋白免疫小鼠后其体内的IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10显著升高（P<0.05）。4）攻虫后，与PBS对照组小鼠相比，50μg/mL重组蛋白免疫小鼠在肺中获得了52%的减虫率，在胃肠道中获得了46%的减虫率，在肌肉中获得了61%的减虫率。综上，本研究成功克隆表达了Ace-ASP4蛋白，Ace-ASP4蛋白能使免疫小鼠产生抗体，促进其脾淋巴细胞增殖等，为进一步研究ASP4基因的生物学功能奠定基础，也为研制锡兰钩虫疫苗提供参考数据。

关键词：锡兰钩虫 ASP4基因原核表达免疫保护效果分析

抗猪德尔塔冠状病毒CTD蛋白特异性抗体的制备与鉴定

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中国动物传染病学报 2024年

作者：季裕婷杨姗姗刘楚鑫唐国瑞王毅储丽宇文晓晓王丽丽李封赛芮萍张鼎侯桂芳宋涛马增军河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室河北省动物疫病预防控制中心山西农业大学动物医学学院

猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）是一种引起猪只腹泻的单股正链RNA冠状病毒，严重威胁了全球养猪业的发展。本研究以真核表达的PDCoV CTD蛋白作为抗原，免疫4周龄Balb/c小鼠，利用单细胞流式分选技术分选出164个与PDCoV CTD蛋白特异性结合的... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）是一种引起猪只腹泻的单股正链RNA冠状病毒，严重威胁了全球养猪业的发展。本研究以真核表达的PDCoV CTD蛋白作为抗原，免疫4周龄Balb/c小鼠，利用单细胞流式分选技术分选出164个与PDCoV CTD蛋白特异性结合的记忆B细胞，反转录后通过巢式PCR 扩增抗体轻重链可变区，成功构建了带有鼠源抗体恒定区的真核表达载体，并于HEK-293T细胞上共转染表达了53株抗体。酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示有 16 株抗体效价较高。流式抗体阻断试验和中和试验证实其中2株抗体的中和效果均较好，同时表面等离子共振（SPR）测试结果显示2株抗体的亲和力较高。本研究通过单细胞流式分选技术成功筛选出了PDCoV特异性中和抗体，为防治PDCoV感染提供理论依据和参考价值。

关键词： PDCoV CTD 单细胞流式分选技术真核表达特异性抗体

杆状病毒表达系统表达BCoV纤突蛋白及其对小鼠的免疫原性

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 640-648页

作者：喻琦胜朱庆周群宋鑫张家祺陈涛云徐林张朝辉张斌西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 四川省甘孜藏族自治州动物疫病预防控制中心康定626000

旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH1... 详细信息

旨在为表达牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的纤突蛋白(S蛋白),并评价其作为免疫原免疫小鼠后的免疫效果。本研究以BCoV/SWUN/HXD-4/2021株的全长S基因为模板,针对昆虫细胞进行密码子优化和合成,构建重组质粒pFastBac-Dual-S,与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rpFastBac-S,利用基因组PCR、免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验对其进行鉴定,测定杆状病毒滴度。优化和筛选感染剂量对蛋白表达的影响,超速离心纯化蛋白,免疫小鼠和评估其免疫效果。结果显示:优化后全长4108 bp的BCoV S基因CAI(密码子适应指数)从0.39调整为0.87,平均GC含量从35.8%调整为50.6%。经双酶切、PCR验证,重组质粒与重组杆粒均构建成功。用5μg重组杆粒Bacmid-S转染Sf9细胞并传代至第四代后细胞病变趋于稳定,感染杆状病毒约20 h后产生典型病变,收获重组杆状病毒进行鉴定。PCR电泳结果显示重组杆粒携带S目的蛋白基因;间接免疫荧光试验显示,试验组观察到特异性绿色荧光;Western blot结果显示重组杆状病毒rpFastBac-S所表达的蛋白为S目的蛋白,目的条带位于250 ku左右,感染剂量MOI=0.5时蛋白表达量最高。将50μg蛋白、20μg CpG免疫增强剂与等体积MF59佐剂充分混合乳化后,肌肉注射免疫小鼠,间接ELISA试验结果显示,小鼠免疫蛋白后产生了IgG特异性抗体,且抗体水平高于佐剂对照组(P0.05)。本研究利用杆状病毒表达系统表达了牛冠状病毒S蛋白,并对S蛋白免疫保护效果做了进一步评价,为后续牛冠状病毒疫苗研究提供了理论依据。

关键词：牛冠状病毒 S蛋白杆状病毒表达系统免疫原性