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DAAO在砷暴露致仔鼠学习记忆损害中的作用

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中华地方病学杂志 2024年第6期43卷 440-445页

作者：金晓霞孙佳麒王欢王艳沈阳医学院公共卫生学院职业卫生与职业医学教研室沈阳

目的探究D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase, DAAO)在砷暴露致仔鼠学习记忆损害中的作用。方法将18只昆明种妊娠小鼠采用随机数字表法分为未处理组(蒸馏水, n = 6)和染砷组[饮用水中含60 mg/L亚砷酸钠(NaAsO2), n = 12], 自由饮水;... 详细信息

目的探究D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase, DAAO)在砷暴露致仔鼠学习记忆损害中的作用。方法将18只昆明种妊娠小鼠采用随机数字表法分为未处理组(蒸馏水, n = 6)和染砷组[饮用水中含60 mg/L亚砷酸钠(NaAsO2), n = 12], 自由饮水;自妊娠第1天至仔鼠断乳前经母鼠染砷, 仔鼠断乳后至实验结束以自由饮水方式染砷。仔鼠出生后6周, 根据母鼠的组别, 将染砷组仔鼠分为NaAsO2组和NaAsO2 + DAAO抑制剂6-氯苯并[d]异恶唑-3-醇(6-chlorobenzo[d]isoxazol-3-ol, CBIO)组, 未处理组仔鼠为对照组;对照组和NaAsO2组仔鼠腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠, NaAsO2 + CBIO组仔鼠腹腔注射60 mg/kg CBIO, 连续干预2周。干预结束后, 采用Y迷宫实验测定仔鼠空间学习记忆能力;仔鼠经心脏灌流后取脑组织, 并分离海马, 经苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察仔鼠海马组织神经细胞形态;超高效液相串联三重四级杆质谱法测定D-丝氨酸含量;实时荧光定量PCR测定突触素(synaptophysin, SYP), 突触小体相关蛋白25(synaptosomal-associated protein 25, SNAP25), 突触后致密物95(postsynaptic density 95, PSD95), DAAO和N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)亚基NR1、NR2A、NR2B mRNA水平。结果对照组、NaAsO2组、NaAsO2 + CBIO组仔鼠Y迷宫实验交替反应率[(58.06 ± 3.78)%、(48.61 ± 5.75)%、(56.25 ± 6.76)%]比较, 差异有统计学意义(F = 4.87, P = 0.023), 且NaAsO2组明显低于对照组和NaAsO2 + CBIO组(均P < 0.05)。HE染色结果显示, 对照组仔鼠海马组织CA1、CA3区神经细胞数量较多, 状态良好;NaAsO2组神经细胞数量较少, 形态不规则, 细胞形态轮廓不清晰;NaAsO2 + CBIO组神经细胞数量较多, 细胞轮廓有所改善, 组织损伤减轻。对照组、NaAsO2组、NaAsO2 + CBIO组仔鼠海马D-丝氨酸含量及SYP、SNAP25、PSD95、DAAO、NR1、NR2A、NR2B mRNA水平比较, 差异均有统计学意义(F = 5.41、4.41、10.16、7.60、6.98、5.63、6.53、4.33, P = 0.017、0.031、0.002、0.005、0.007、0.015、0.009、0.033);其中, NaAsO2组仔鼠海马D-丝氨酸含量和SYP、SNAP25、PSD95、NR1、NR2B mRNA水平均明显低于对照组和NaAsO2 + CBIO组, NR2A mRNA水平明显低于对照组, DAAO mRNA水平明显高于对照组和NaAsO2 + CBIO组(均P < 0.05)。结论砷暴露能够损害仔鼠学习记忆能力, 降低海马D-丝氨酸含量以及NMDAR亚基和突触相关基因转录水平, 上调DAAO转录水平;而抑制DAAO可使D-丝氨酸含量以及NMDAR亚基和突触相关基因转录水平升高, 改善砷暴露所致的仔鼠学习记忆能力损害。

关键词：砷中毒 D-丝氨酸 D-氨基酸氧化酶 N-甲基-D-天冬氨酸受体

人支气管上皮样细胞中苯并[a]芘代谢物-DNA加合物图谱:基于染色质免疫共沉淀测序技术

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环境与职业医学 2024年第3期41卷 323-329页

作者：冀婷玉曹彬吕懿佟晓敏孙宏宇郑金平山西医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室山西太原030001 长治医学院公共卫生与预防医学系山西长治046000

[背景]苯并[a]芘(BaP)的活性代谢产物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)可与DNA加合,但BPDE-DNA加合物图谱尚不明确。[目的]采用染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-Seq),在全基因组水平上鉴定BPDE加合位点分布及加合基因,为深入研究BaP的... 详细信息

[背景]苯并[a]芘(BaP)的活性代谢产物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)可与DNA加合,但BPDE-DNA加合物图谱尚不明确。[目的]采用染色质免疫共沉淀测序技术(ChIP-Seq),在全基因组水平上鉴定BPDE加合位点分布及加合基因,为深入研究BaP的毒作用机制提供依据。[方法]人支气管上皮样细胞16HBE培养至第四代达对数生长期。收获细胞并加入染色质免疫共沉淀裂解缓冲液,将裂解产物等分为实验组和对照组,实验组添加终浓度20μmol·L^(–1)的BPDE溶液,对照组添加相同体积的二甲基亚砜溶液,在37℃环境下孵育24 h。超声获得100~500 bp的染色质小片段。使用BPDE特异性抗体(anti-BPDE 8E11)富集与BPDE加合的DNA片段,高通量测序检测BPDE加合位点,使用MEME和DREME软件对前1000个峰序列进行模体分析,注释BPDE在全基因组水平的加合靶基因,并通过生物信息学技术对BPDE加合靶基因进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。[结果]高通量测序共检测出842个BPDE结合位点,在各染色体上均有分布。BPDE可以与基因编码区和非编码区共价结合,73.9%的结合位点分布在基因间区,19.6%分布在内含子区,上游2千碱基区域、外显子区、下游2千碱基区域及5′非翻译区也有少量分布。对前1000个峰序列进行分析,寻找到4条可靠的模体,发现富含鸟嘌呤(G)和腺嘌呤(A)的位点易于结合。对结合位点进行富集,共鉴定出199个BPDE加合靶基因,大多分布在1号、5号、7号、12号、17号和X染色体上。GO分析显示,靶基因主要富集于核酸和蛋白质结合,参与调节催化活性、转运活性、翻译延伸因子活性,在细胞分裂、分化、运动、物质运输和信息传递方面发挥重要作用。KEGG分析显示靶基因主要富集于心血管疾病、癌症、免疫炎症反应等相关通路。[结论]利用ChIP-Seq在全基因组水平上共鉴定出199个BPDE加合靶基因,主要影响细胞分裂、分化、运动、物质运输和信息传递等生物学功能,与心血管疾病、肿瘤及免疫炎症反应密切相关。

关键词： 7 8-二羟-9 10-环氧苯并[a]芘人支气管上皮样细胞染色质免疫共沉淀测序 DNA加合物生物信息学

肺腺癌ceRNA调控网络构建及AFAP1-AS1功能验证

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中国胸心血管外科临床杂志 2024年第4期31卷 576-584页

作者：王会新李倩侯晓雯史新竹冯旭沈阳医学院公共卫生学院统计教研室沈阳110034 沈阳医学院公共卫生学院流行病学教研室沈阳110034

目的基于生物信息学方法构建肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)特异性长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)相关的竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络,并分析肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(actinfilament-associated protein 1-antisense RNA1,AFAP1-AS1)在LUAD中的功能机制,以期为LUAD治疗靶点研究提供新的方向。方法从基因表达综合性基因库(GEO)中下载LUAD的基因芯片,并使用GEO2R在线软件筛选LUAD与正常组织之间具有差异表达的lncRNA和mRNA,并通过在线数据库预测其靶基因,构建ceRNA网络,并进行富集分析。在细胞实验中,对AFAP1-AS1进行基因敲除并构建siRNA,通过细胞转染法转染LUAD细胞A549。用CCK8、Transwell、划痕实验和流式细胞术实验检测细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的能力。结果在LUAD的芯片中共鉴定出6个差异表达lncRNA和494个差异表达的mRNA。ceRNA网络共涉及6个lncRNA、22个miRNA和55个mRNA。富集分析发现mRNA与癌症相关通路有关。在细胞实验中,敲除AFAP1-AS1可抑制细胞增殖、侵袭和迁移,且AFAP1-AS1促进细胞凋亡。结论本研究构建了一个lncRNA介导的ceRNA网络,这可能有助于进一步研究LUAD的作用机制。此外,通过细胞实验,本研究发现AFAP1-AS1有潜力作为LUAD的治疗靶点。

关键词：生物信息学肺腺癌竞争性内源RNA 长链非编码RNA 肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1

一株可拮抗致病性肠球菌的益生菌D-19发酵条件和拮抗稳定性

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中国微生态学杂志 2024年第8期36卷 915-921页

作者：车雨辰孙冶李舒音肖纯凌沈阳医学院免疫学教研室辽宁沈阳110034 沈阳医学院辽宁省环境污染与微生态重点实验室沈阳市肖纯凌劳模创新工作室辽宁沈阳110034 沈阳医学院病原生物学教研室辽宁沈阳110034 沈阳医学院人事处辽宁沈阳110034

目的研究益生菌D-19发酵液对致病性肠球菌的拮抗能力,多方面评价其拮抗稳定性,为挖掘其作为微生态制剂的潜在益生特性和医疗应用提供理论基础。方法采用纸片扩散法探讨益生菌D-19发酵液对粪链球菌和屎肠球菌的拮抗能力,优化其发酵条件,... 详细信息

目的研究益生菌D-19发酵液对致病性肠球菌的拮抗能力,多方面评价其拮抗稳定性,为挖掘其作为微生态制剂的潜在益生特性和医疗应用提供理论基础。方法采用纸片扩散法探讨益生菌D-19发酵液对粪链球菌和屎肠球菌的拮抗能力,优化其发酵条件,从理化因素和保存条件等方面探讨其拮抗稳定性,通过生物膜形成试验研究益生菌D-19的抑菌机制。结果益生菌D-19发酵液原液、无菌体上清液可以抑制粪链球菌和屎肠球菌的生长,菌体本身无明显抑菌作用;在培养液接种量1%、初始液pH 7、37℃培养24 h的优化条件下,益生菌D-19发酵液对粪链球菌和屎肠球菌表现出较强的拮抗能力,抑菌圈直径分别为(24.70±0.71)mm和(22.57±0.43)mm;在40~50℃时,益生菌D-19发酵液拮抗粪链球菌和屎肠球菌的能力无显著变化,随着温度的升高、处理时间的增加,其拮抗能力逐渐降低直至失去;同样,在pH5~8时,益生菌D-19发酵液表现出稳定的拮抗能力,低于或高于这个范围,其将逐渐失去拮抗粪链球菌和屎肠球菌的能力;当保存温度为-20℃、保存月数m=5时,益生菌D-19发酵液对粪链球菌和屎肠球菌的抑菌圈直径分别降至(7.56±8.20)mm和(5.64±0.32)mm;当保存温度为4℃、保存天数d=75时,对粪链球菌和屎肠球菌的抑菌圈直径分别降至(10.02±0.91)mm和(6.62±0.55)mm;当保存温度为25℃、保存天数d=15时,对粪链球菌和屎肠球菌的抑菌圈直径分别降至(8.26±0.42)mm和(5.99±0.35)mm;益生菌D-19发酵液分别与2种肠球菌共培养可以显著抑制其生物膜的形成。结论益生菌D-19发酵液在最佳发酵条件下对粪链球菌和屎肠球菌具有较强的拮抗能力,其中主要抑菌活性成分为无菌体上清液,其无菌体上清液具有一定的酸碱稳定性和热稳定性,在pH 5~8、40~50℃的环境下能保持稳定的拮抗能力,对强酸强碱、高热敏感,可在-20℃的条件下保持拮抗活性1~5个月,不适合在室温、4℃进行长期保存。

关键词：益生菌肠球菌抑菌拮抗作用稳定性

BMP/Smad信号通路与先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部的软骨发育

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中国组织工程研究 2024年第16期28卷 2500-2504页

作者：常宇李慧张天水王春雨于丽武子媚李玟王正东沈阳医学院基础医学院辽宁省沈阳市110034 沈阳医学院研究生院辽宁省沈阳市110034 沈阳医学院解剖学教研室辽宁省沈阳市110034

背景:先天性马蹄内翻足主要表现为骨本身异常及软骨发育异常,BMP/Smad信号通路可以指导胚胎期骨和软骨的发育,但其在马蹄内翻足病因领域发挥的作用尚无动物实验证实。目的:探讨BMP/Smad信号通路参与调控先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部... 详细信息

背景:先天性马蹄内翻足主要表现为骨本身异常及软骨发育异常,BMP/Smad信号通路可以指导胚胎期骨和软骨的发育,但其在马蹄内翻足病因领域发挥的作用尚无动物实验证实。目的:探讨BMP/Smad信号通路参与调控先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部软骨发育异常的机制。方法:将生长状况相同的孕10 d的SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组采用135 mg/kg维甲酸灌胃制作马蹄内翻足模型,对照组采用等量植物油灌胃;孕21 d后剖腹取出胎鼠,实验组孕鼠产下胎鼠41只中出现马蹄足畸形27只,畸型率65.9%;对照组获得胎鼠36只,均未出现畸形。分离胎鼠足踝部组织进行苏木精-伊红染色,并采用Western blot、RT-qPCR、免疫组化检测BMP/Smad信号通路核心蛋白Smad5、P-Smad5、通路下游蛋白SP7以及Sox9的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,苏木精-伊红染色可见实验组大鼠足踝部组织中软骨基质增多,骨间缝隙增大;②免疫组化显示实验组Smad5与SP7表达水平下降,而Sox9基因表达增高;③RT-qPCR结果显示实验组大鼠足踝部组织中Smad5、SP7的mRNA表达水平下降,Sox9 mRNA表达水平升高;④Western blot结果显示实验组大鼠足踝部软骨组织中P-Smad5/Smad5及SP7表达降低,Sox9表达升高;⑤结果说明,先天性马蹄内翻足模型大鼠足踝部软骨异常的发生与BMP/Smad信号通路传导障碍有关。

关键词：先天性马蹄内翻足 BMP/Smad信号通路 Smad5 P-Smad5 SP7

教育信息化背景下医学生对教学信息化平台的了解和使用现状

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沈阳医学院学报 2024年第2期26卷 213-216页

作者：史新竹李荣梅李舒苑光梅李京峰裴秀丛沈阳医学院公共卫生学院预防医学教研室辽宁沈阳110034 沈阳医学院辽宁沈阳110034 沈阳医学院基础医学院辽宁沈阳110034

目的:了解医学生对教学信息化平台和教学资源的认知和使用情况,为现代医学信息化技术在教学改革中的应用提供参考。方法:选取2019至2022级所有自愿参加本调查的在校医学生为调查对象,采用问卷调查和半开放式访谈进行调查。结果:医学生... 详细信息

目的:了解医学生对教学信息化平台和教学资源的认知和使用情况,为现代医学信息化技术在教学改革中的应用提供参考。方法:选取2019至2022级所有自愿参加本调查的在校医学生为调查对象,采用问卷调查和半开放式访谈进行调查。结果:医学生对多个教学平台均有所了解,通过平台获取课程资料的频率较高;教师在平台推送的案例分析浏览率不高;学生对优质课程有所了解,尤其是慕课和微课的使用率高于其他课程。结论:医学生的信息化意识较强,具备通过多平台多渠道解决课业问题的能力。教学平台资源建设需进一步优化提高其简洁性和亲和度,同时教师要有选择性地推送优质教学资源,实现医学信息化技术在教学中的合理应用。

关键词：医学教育教学平台信息化

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多功能闭合式迷宫空间认知能力评价与应用

实验室研究与探索 2024年第9期43卷 6-9,40页

作者：夏旖婕彭顺勤刘求智项持彰王弘运崔跃沈阳医学院基础医学院沈阳110034

针对空间学习记忆测试仪器的局限性,自主研发了1款多功能闭合式迷宫,该迷宫由圆形实验箱体、摄像头及电路控制系统组成,可实现远程实验动物行为学监测。利用该系统对吗啡成瘾与戒断空间学习记忆行为学进行测试和验证:皮下注射吗啡10 mg/... 详细信息

针对空间学习记忆测试仪器的局限性,自主研发了1款多功能闭合式迷宫,该迷宫由圆形实验箱体、摄像头及电路控制系统组成,可实现远程实验动物行为学监测。利用该系统对吗啡成瘾与戒断空间学习记忆行为学进行测试和验证:皮下注射吗啡10 mg/kg,每天2次,连续9 d建立吗啡成瘾大鼠模型;第12 d开始自然戒断,对照组给予等体积生理盐水,比较第11、13、15、17 d 2组动物空间认知能力变化。测试结果表明,在第11 d和第13 d的观察期间,吗啡组相较于对照组在目标区域的停留时间显著增长;在第15 d和第17 d的观察期间,2组实验动物在目标区域的停留时间无统计学差异,基于大鼠的成瘾和戒断行为可在系统中稳定训练完成。实验表明该多功能闭合式迷宫能满足对实验动物的空间导航认知能力的评价,且有较好的应用效果。

关键词：空间导航迷宫认知能力成瘾动物模型

血链球菌cpnp培养上清液抑制铜绿假单胞菌生长和生物膜的作用

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中国微生态学杂志 2024年第6期36卷 637-646,656页

作者：高毅敏李娜李新鸣金慧张家鑫耿大升孙贺刘光焱马明月沈阳医学院基础医学院沈阳110034 辽宁省环境污染与微生态重点实验室沈阳医学院附属中心医院检验科沈阳医学院附属第二医院检验科

目的研究血链球菌cpnp培养上清液抑制铜绿假单胞菌生长和生物膜形成、破坏成熟生物膜的作用,以及其联合抗生素的抑菌作用,为利用呼吸道共生菌制剂干预铜绿假单胞菌呼吸道定植,减少呼吸道感染提供依据。方法采用牛津杯法测定血链球菌c... 详细信息

目的研究血链球菌cpnp培养上清液抑制铜绿假单胞菌生长和生物膜形成、破坏成熟生物膜的作用,以及其联合抗生素的抑菌作用,为利用呼吸道共生菌制剂干预铜绿假单胞菌呼吸道定植,减少呼吸道感染提供依据。方法采用牛津杯法测定血链球菌cpnp对铜绿假单胞菌生长的抑制作用。使用96孔板法测定血链球菌cpnp培养上清液联合头孢他啶对铜绿假单胞菌生长的抑制作用。体外建立铜绿假单胞菌生物膜模型,利用结晶紫半定量法、刚果红染色法、RT-qPCR法测定血链球菌cpnp培养上清液对生物膜形成的抑制作用;利用结晶紫半定量法、MTT法测定血链球菌cpnp培养上清液对成熟生物膜的破坏作用;采用光镜和电镜观察生物膜的形态。结果血链球菌cpnp培养上清液对铜绿假单胞菌生长有抑制作用,与头孢他啶联用时表现出协同作用(P<0.001)。血链球菌cpnp培养上清液可减少铜绿假单胞菌生物膜形成量(P<0.001)、胞外多糖产量(P<0.001)及降低胞外多糖基因表达水平(P<0.050)。血链球菌cpnp培养上清液可减少成熟生物膜总量(P<0.001)和降低生物膜代谢活性(P<0.001)。结论血链球菌cpnp上清液和其联用抗生素能拮抗铜绿假单胞菌生长,并且上清液对其生物膜有良好的抑制和破坏作用。

关键词：血链球菌铜绿假单胞菌生物膜协同作用

重型载货运营卡车司机的疲劳状况及影响因素分析

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环境与职业医学 2024年第7期41卷 789-795页

作者：张建江王少颖陈思萍刘建铃宁德师范学院医学院福建省毒物与药物毒理学重点实验室福建宁德352100 宁德师范学院医学院临床医学教研室福建宁德352100 韶关学院医学院广东韶关512005

[背景]疲劳驾驶是现代社会公路交通事故的重要诱因,重型载货运营卡车司机疲劳状况引起广泛关注。目前,我国对重型载货运营卡车司机的疲劳状况及其影响因素的研究比较薄弱。[目的]分析重型载货运营卡车司机的疲劳状况以及工作时间、失眠... 详细信息

[背景]疲劳驾驶是现代社会公路交通事故的重要诱因,重型载货运营卡车司机疲劳状况引起广泛关注。目前,我国对重型载货运营卡车司机的疲劳状况及其影响因素的研究比较薄弱。[目的]分析重型载货运营卡车司机的疲劳状况以及工作时间、失眠和职业倦怠等因素对其疲劳状况的影响。[方法]采用整群抽样的方法,于2023年7—8月选取新疆维吾尔自治区W市3个行政区的长途货运物流市场(站)的重型载货运营卡车司机为调查对象进行横断面研究。使用自行设计的问卷调查重型载货运营卡车司机的人口信息学特征和职业特征,并采用中文版《疲劳量表-14》、《阿森斯失眠量表》和《职业倦怠量表》对其疲劳、失眠和职业倦怠状况进行测量。采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验比较组间差异,Spearman相关系数分析各变量之间的相关性,以疲劳状况为应变量进行分层回归,研究各自变量对疲劳状况的影响。[结果]有效问卷311份,有效率88.86%(311/350)。调查对象的身体疲劳、脑力疲劳和疲劳总分的中位数和第25、75百分位数[M(P_(25),P_(75))]分别为3.00(2.00,4.00)、2.00(1.00,3.00)和5.00(4.00,6.00)分。分组比较结果显示,除是否吸烟外,不同年龄、婚姻状况、子女数量、文化程度、从事货运时间、日均工作时间和平均月收入组疲劳总分差异均有统计学意义(P<0.05);无睡眠障碍、可疑失眠和失眠组疲劳总分的差异有统计学意义(P<0.001);无、中度和重度职业倦怠组疲劳总分的差异亦有统计学意义(P<0.001)。失眠状况得分与身体疲劳(r_(s)=0.507)、脑力疲劳(r_(s)=0.547)和疲劳总分(r_(s)=0.618)间均呈正相关(P<0.001)。分层回归分析结果提示,子女数量增加、日均工作时间延长、失眠问题和个人成就感降低维度得分的增加与重型载货运营卡车司机疲劳状况呈正向关联(P<0.05),所建立的重型载货运营卡车司机疲劳状况的多元回归方程为:疲劳总分=7.579+0.581×子女数量+0.916×日均工作时间+0.434×失眠状况得分+0.754×个人成就感降低维度得分。[结论]重型载货运营卡车司机的疲劳状况不容乐观,子女数量增加、日均工作时间延长、失眠症状严重和个人成就感降低维度得分增加可能对其疲劳状况具有负面影响。

关键词：重型载货运营卡车司机疲劳失眠职业倦怠