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丹参SmCYP76S7基因的克隆、亚细胞定位和表达分析

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中草药 2024年第13期55卷 4500-4507页

作者：张顺仓刘肖宇邱琳程琪茗马喆晨符婷扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

目的克隆获得丹参SmCYP76S7基因序列,并对其进行生物信息学和表达特性分析。方法克隆获得SmCYP76S7的c DNA及基因组DNA序列,运用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白进行结构和理化性质分析。构建融合表达载体pEGAD-SmCYP76S7-eGFP,转... 详细信息

目的克隆获得丹参SmCYP76S7基因序列,并对其进行生物信息学和表达特性分析。方法克隆获得SmCYP76S7的c DNA及基因组DNA序列,运用生物信息学软件对该基因及其编码蛋白进行结构和理化性质分析。构建融合表达载体pEGAD-SmCYP76S7-eGFP,转化烟草后分析SmCYP76S7蛋白的亚细胞定位。利用qRT-PCR测定SmCYP76S7基因在各器官中的表达量,同时分别利用不同光质和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理丹参幼苗和丹参毛状根,探究SmCYP76S7基因对光质和MeJA的响应。结果SmCYP76S7基因包含2个外显子和1个1506 bp的开放阅读框,编码501个氨基酸。该基因在根、茎、叶和花中均有表达,其中花中表达量最低。SmCYP76S7蛋白除定位于内质网外,还分布于多个细胞结构。SmCYP76S7基因的表达在红光处理和MeJA处理样品中显著上调,是典型的光和MeJA诱导基因。结论SmCYP76S7基因是CYP76家族成员,结合其表达特性和同家族其他成员的催化活性,该蛋白很可能参与丹参酮类成分的生物合成,其具体的生物学作用值得进一步深入挖掘。

关键词：丹参细胞色素P450 基因克隆亚细胞定位表达分析

ppGpp介导的抗生素胁迫应答机制研究进展

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微生物学报 2024年第3期64卷 687-700页

作者：胡晓沈盆闪许健萍余佳琪音建华浙江工业大学生物工程学院浙江杭州310014

抗生素是由微生物在生长发育后期产生的次级代谢产物,具有杀死或抑制细菌生长的能力,因此被广泛应用于细菌感染的临床治疗。在长期的进化过程中,细菌采取多种方式应对环境中抗生素的威胁。除了广为人知的抗生素耐药性(resistance)之外,... 详细信息

抗生素是由微生物在生长发育后期产生的次级代谢产物,具有杀死或抑制细菌生长的能力,因此被广泛应用于细菌感染的临床治疗。在长期的进化过程中,细菌采取多种方式应对环境中抗生素的威胁。除了广为人知的抗生素耐药性(resistance)之外,细菌还能对抗生素产生耐受性(tolerance)和持留性(persistence),严重影响抗生素的临床疗效。鸟苷四磷酸(guanosine tetraphosphate,ppGpp)和鸟苷五磷酸(guanosine pentaphosphate,pppGpp)(本文统称ppGpp)是细菌应对营养饥饿等不利环境时产生的“报警”信号分子,其能够在全局水平调控基因的表达,使细菌适应不利的环境。越来越多的研究表明,ppGpp与细菌应对抗生素胁迫密切相关。基于此,本文综述了细菌中ppGpp的合成与水解及其作用机制,并重点阐述了ppGpp介导抗生素胁迫应答的分子机制,以期为新型抗生素的开发提供新思路。

关键词： ppGpp 严紧反应抗生素耐药性抗生素耐受性抗生素持留性胁迫应答

美拉德反应交联对静电纺丝葡聚糖/玉米醇溶蛋白纳米纤维性质的影响

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食品与发酵工业 2024年第11期50卷 95-101页

作者：任玉朋瞿子翔罗仕园安建辉邓伶俐湖北民族大学生物与食品工程学院湖北恩施445000

该研究通过静电纺丝法制备葡聚糖/玉米醇溶蛋白纳米纤维,并在60℃、相对湿度50%的条件下进行美拉德反应交联,分析交联后纳米纤维微观形态和宏观特性的变化。通过扫描电子显微镜观察到美拉德反应交联对纳米纤维形态无显著影响。红外光谱... 详细信息

该研究通过静电纺丝法制备葡聚糖/玉米醇溶蛋白纳米纤维,并在60℃、相对湿度50%的条件下进行美拉德反应交联,分析交联后纳米纤维微观形态和宏观特性的变化。通过扫描电子显微镜观察到美拉德反应交联对纳米纤维形态无显著影响。红外光谱变化证明了美拉德反应交联的发生,热性能分析、X射线衍射分析观察到交联后纳米纤维的热稳定性有所提高,呈有序向无序转变的趋势。水接触角测试表明交联使纳米纤维疏水性得到提升。拉伸测试的结果表明,交联使纳米纤维的弹性模量显著增加,而对其断裂伸长率和拉伸强度无显著影响。水蒸气渗透率试验的结果表明,交联使纳米纤维的水蒸气阻隔性得到提高。研究结果表明,在美拉德反应后,葡聚糖/玉米醇溶蛋白纳米纤维的性能得到一定的改善,并有望应用于食品包装材料。

关键词：美拉德反应交联静电纺丝纳米纤维

普通油茶良种资源表型性状多样性分析与综合评价

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第2期50卷 244-257页

作者：邢凯峰张剑陈尚张立冬谢昊星赵耀戎俊南昌大学生命科学学院江西南昌330031

普通油茶(Camellia oleifera)是我国总产油量最高、栽培面积最广的木本油料作物。为促进我国普通油茶良种资源的挖掘与利用,本研究使用主成分分析、相关性分析、聚类分析、巢式方差分析、多元回归分析等方法以及变异系数、表型分化系数... 详细信息

普通油茶(Camellia oleifera)是我国总产油量最高、栽培面积最广的木本油料作物。为促进我国普通油茶良种资源的挖掘与利用,本研究使用主成分分析、相关性分析、聚类分析、巢式方差分析、多元回归分析等方法以及变异系数、表型分化系数、香农-维纳多样性指数,探究560份普通油茶良种资源的表型性状多样性及其与环境因子的相关性,并使用熵权TOPSIS法对560份普通油茶良种资源进行综合评价和排序。结果表明,560份普通油茶良种资源存在丰富的遗传多样性,34个表型性状的香农-维纳多样性指数为0.05~2.35,均值为1.06,数量性状的变异系数为3.02%~53.33%,均值为23.25%。普通油茶良种资源34个表型性状种源间和种源内的方差分量均值分别为53.591%和32.382%,说明普通油茶良种资源表型性状种源内相似性较高,其分化主要来自种源间。随着纬度的升高和年平均温度的降低,普通油茶良种资源平均单果质量、种仁含油率及饱和脂肪酸含量呈现下降趋势,而不饱和脂肪酸含量呈现上升趋势,表明纬度和年平均温度是限制普通油茶生长的主要因子。熵权TOPSIS法综合评价和排序结果显示,长林4号综合得分指数最高,浙江、云南、安徽、湖南等地区均有多个选育的良种综合排名在前30以内。本研究结果为普通油茶育种及良种推广提供了数据支撑。

关键词：普通油茶良种资源表型性状熵权TOPSIS法综合评价

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钛/铋氧化物纳米材料用于声动力/放射联合治疗肿瘤

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精细化工 2024年

作者：郑之裕修梦婷王通张艳艳朱利民东华大学生物与医学工程学院

以钛酸四丁酯和冰醋酸为原料，经水热反应制备了TiO2纳米晶体，其与Bi(NO3)3反应得到Bi2O3/TiO2纳米颗粒(BTH)，BTH经聚多巴胺(PDA)涂层包覆，得到了BTH@PDA纳米颗粒(BTP)。通过TEM、XRD和XPS对BTP形貌和组成进行了表征，采用生物安全... 详细信息

以钛酸四丁酯和冰醋酸为原料，经水热反应制备了TiO2纳米晶体，其与Bi(NO3)3反应得到Bi2O3/TiO2纳米颗粒(BTH)，BTH经聚多巴胺(PDA)涂层包覆，得到了BTH@PDA纳米颗粒(BTP)。通过TEM、XRD和XPS对BTP形貌和组成进行了表征，采用生物安全性实验、体外细胞毒性测试、体外细胞摄取和活性氧染色测试了BTP的生物相容性、细胞毒性和活性氧生成能力。结果表明，BTP呈梭形，最长边粒径(125.18±14.66) nm，Zeta电位为(-4.17±0.33) mV；BTP悬液在远高于正常治疗质量浓度(300 μg/mL)的条件下，对L929细胞和4T1细胞无明显的毒性；BTP能增强放疗的疗效，在超声和X射线共同处理后，能将4T1细胞的存活率降至34.3%，并能有效产生活性氧；4T1细胞对BTP的摄取是时间依赖性的，在12 h附近有最大摄取。

关键词：纳米材料金属氧化物声动力治疗放射治疗联合治疗生物工程

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南极磷虾油不同极性脂质的提取工艺优化

中国油脂 2024年

作者：罗静茹杨云云王太伟谢亮亮朱西平朱秀灵张瑞涛张恒郭玉宝谢丹安徽工程大学生物与食品工程学院

为有效分离南极磷虾油的中性脂质与极性脂质，采用单因素试验与响应面试验优化超临界CO2萃取以及乙醇提取的工艺条件。在单因素试验基础上，采用中心组合Box－Behnken试验设计，选择萃取压强、萃取温度、萃取时间为影响因素，以虾油中... 详细信息

为有效分离南极磷虾油的中性脂质与极性脂质，采用单因素试验与响应面试验优化超临界CO2萃取以及乙醇提取的工艺条件。在单因素试验基础上，采用中心组合Box－Behnken试验设计，选择萃取压强、萃取温度、萃取时间为影响因素，以虾油中甘油三酯的含量为响应值，设计响应面优化实验并确定最佳萃取工艺条件；剩余的虾粉粕采用乙醇提取法富集磷脂成分，以磷脂含量为指标，单因素试验优化工艺条件。结果表明:超临界CO2萃取南极磷虾油中性脂质最佳工艺条件为萃取压强35.22 MPa、萃取温度41.77 ℃、萃取时间1.5 h，甘油三酯得率为68.56%，虾青素、生育酚和维生素A的含量分别高达(74.91±1.10) mg/kg、44.96 mg/kg±0.18 mg/kg、448.31 mg/kg±2.12 mg/kg; 醇提极性脂的最佳工艺条件为：料液比(g:ml)为1:3，萃取温度50 ℃，萃取时间2 h，磷脂得率为81.22%，其中EPA和DHA的含量分别高达27.39%±2.05%和0.33%±0.01%。

关键词：南极磷虾油脂质提取中性脂质极性脂质响应面优化

NAC转录因子调控植物生长发育和胁迫应答的研究进展

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植物生理学报 2024年第2期60卷 271-283页

作者：陆海芹李娜蒋凯旋王幼平蒋金金扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009

由于植物具有固着生长的特性,其在生长发育过程中往往面临多种来自环境的不利影响。因此,植物必须通过不同的调节机制以维持生长发育和应对胁迫的危害。NAC(NAM/ATAF/CUC)是植物中重要的转录因子家族之一,由高度保守的N端和相对多变的C... 详细信息

由于植物具有固着生长的特性,其在生长发育过程中往往面临多种来自环境的不利影响。因此,植物必须通过不同的调节机制以维持生长发育和应对胁迫的危害。NAC(NAM/ATAF/CUC)是植物中重要的转录因子家族之一,由高度保守的N端和相对多变的C端组成,可以影响植物花器官发育、开花时间、叶片衰老、果实成熟、细胞次生壁形成和根系发育等过程,并参与植物对多种生物胁迫和非生物胁迫的响应过程。本文概述了植物中NAC家族成员在生长发育和胁迫应答过程中发挥的功能,为深入解析NAC转录因子的分子调控机制及其应用提供理论依据。

关键词： NAC转录因子生长发育胁迫应答分子调控

两种根癌农杆菌储铁蛋白功能的鉴定和体外自组装

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微生物学报 2024年

作者：周琴高苗苗潘晓玥王浩徐楠郭敏亮扬州大学生物科学与技术学院

【目的】验证根癌农杆菌（Agrobacterium fabrum，以前也叫Agrobacterium tumefaciens）两种储铁蛋白：来自饥饿细胞的DNA结合蛋白（DNA-binding protein from starved cell， Dps）和细菌铁蛋白（bacterioferritin， Bfr）的编码基因atu2477和atu2771的功能。确定Bfr编码基因的开放阅读框。研究末端融合、血红素和个别关键氨基酸突变对Bfr功能和体外自组装的影响。探讨两种储铁蛋白的可能应用潜力。【方法】通过质粒将编码储铁蛋白的基因重新引入根癌农杆菌储铁蛋白缺失突变体中，回补储铁蛋白，验证回补的储铁蛋白编码基因是否能表达出具有储铁能力的储铁蛋白。用非变性凝胶电泳分离细胞粗提液中的蛋白质，铁特异性染色的方法鉴定电泳分离的蛋白质中是否有储铁蛋白。将不同的肽或蛋白质融合到储铁蛋白的末端，通过异源过量表达和纯化储铁蛋白的重组蛋白，用非变性凝胶电泳分析这些重组蛋白在体外的自组装。用血红素重构处理和氨基酸定点突变的方法研究血红素和个别关键氨基酸对Bfr功能和体外自组装的影响。【结果】非变性凝胶电泳和铁特异性染色结果显示，不管是根癌农杆菌的野生菌株，还是相关的突变体或者是对应的回补菌株，都只能检测到Bfr，检测不到Dps。分别回补能编码161个和169个氨基酸Bfr的基因，发现，野生型菌株中的Bfr与回补编码161个氨基酸Bfr的回补菌株一样大。多肽和蛋白质的末端融合对Bfr的功能和自组装有一定影响，但不会使Bfr完全失去功能和自组装能力。结果还表明，血红素和预测可络合血红素铁的Met60的替换也只会影响Bfr的功能和自组装，不会使Bfr完全丧失功能。【结论】根癌农杆菌是以Bfr存储铁，bfr基因的开放阅读框（open reading frame， ORF）是以少用的UUG为起始密码子，编码的是161个氨基酸，而不是169个氨基酸的蛋白质。根癌农杆菌的dps基因在大多数情况下可能不表达。根癌农杆菌的Bfr和Dps蛋白均比较稳定，能够承受末端的多肽或蛋白质融合，不会使蛋白质的结构完全破坏，因此，经适当改造后具有开发应用的潜力。

关键词：根癌农杆菌储铁蛋白细菌铁蛋白Bfr 来自饥饿细胞的DNA结合蛋白Dps 蛋白质纳米笼蛋白质自组装

aprN的N端编码序列改造促进纳豆激酶的高效表达

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食品与发酵工业 2024年

作者：黄茜琳黄俊宝高旭丽罗雅妮陶伟郭明雨刘永圆吴超吴晶刘艳安徽工程大学生物与食品工程学院

为提高纳豆激酶的表达量，在不改变编码纳豆激酶的氨基酸序列前提，将aprN基因的N端编码序列（N-terminal coding sequences，NCSs）进行同义突变，构建包含突变序列的pHY-P43质粒，经转化和测序分别构建4株突变菌株NK1、NK2、NK3和NK4... 详细信息

为提高纳豆激酶的表达量，在不改变编码纳豆激酶的氨基酸序列前提，将aprN基因的N端编码序列（N-terminal coding sequences，NCSs）进行同义突变，构建包含突变序列的pHY-P43质粒，经转化和测序分别构建4株突变菌株NK1、NK2、NK3和NK4，纤维蛋白板检测纳豆激酶活力，利用SDS-PAGE验证，通过响应面优化发酵条件。结果表明，NK1、NK2、NK3、NK4菌株纳豆激酶活力分别为94.8、101.9、124.2、69.4 IU/mL。其中NK3菌株的酶活力最高，较原始菌株提高了50%；NK4菌株酶活力最低仅为原始菌株酶活力的83%。SDS-PAGE显示重组酶生产纳豆激酶的分子质量约为28 kDa，与理论的分子质量27 kDa相符。通过响应面分析得出优化后重组菌株NK3产纳豆激酶的最佳条件为：初始pH 7.56、发酵温度35 ℃、发酵时间38 h。纳豆激酶酶活力138.1 IU/mL，较未优化前提高11.2%。该研究为提高纳豆激酶活力提供一种新的策略，且不改变纳豆激酶本身的性质。

关键词：纳豆激酶 aprN基因 N端编码枯草芽孢杆菌同义突变