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基于cAMP/AQP2/NLRP3通路探讨济生肾气丸对慢性肾脏病模型大鼠的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 52-59页

作者：崔言坤王琳黄艳美陈丽梅刘春花郭怡姜劼琳左铮云刘超姚凤云江西中医药大学中医学院南昌330004 江西中医药大学方-证研究中心南昌330004 江西中医药大学附属医院南昌330006

目的:通过观察济生肾气丸对慢性肾脏病(CKD)模型大鼠环磷酸腺苷(cAMP)/水通道蛋白2(AQP2)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及其相关炎性因子的影响,探讨其改善慢性肾脏病大鼠的作用机制。方法:将60只SPF级SD大鼠随机分为空白组(15只)和... 详细信息

目的:通过观察济生肾气丸对慢性肾脏病(CKD)模型大鼠环磷酸腺苷(cAMP)/水通道蛋白2(AQP2)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路及其相关炎性因子的影响,探讨其改善慢性肾脏病大鼠的作用机制。方法:将60只SPF级SD大鼠随机分为空白组(15只)和造模组(45只),通过腺嘌呤灌胃28 d诱导建立CKD大鼠模型,将造模组随机分为模型组和济生肾气丸高、中、低剂量组(1.2、0.6、0.3 g·kg^(-1)·d^(-1)),空白组和模型组灌胃等体积纯净水,连续给药28 d。在给药的第14、28天收集大鼠24 h尿量,检测大鼠24 h尿蛋白含量。经末次给药后,大鼠称体质量麻醉取材,采用生化法检测大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的含量。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肾组织AQP2、cAMP、精氨酸加压素(AVP)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织NLRP3、AQP2蛋白表达水平。苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色及过碘酸-雪夫染色(PAS)观察大鼠肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量、24 h尿量显著下降,24 h尿蛋白、肾脏湿重及肾体比显著升高(P<0.01),血清SCr、BUN和肾组织IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),肾组织AVP、cAMP、AQP2含量显著降低(P<0.01),肾组织NLRP3蛋白表达水平显著升高(P<0.01),AQP2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),肾脏组织病理损伤严重;与模型组比较,济生肾气丸组明显改善大鼠精神状况,体质量、24 h尿量显著增加,24 h尿蛋白含量、肾脏湿重及肾体比明显下降(P<0.05,P<0.01),血清SCr、BUN水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肾组织AVP、cAMP、AQP2含量显著升高(P<0.01),肾组织IL-1β和NLRP3蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),AQP2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),肾脏组织病理损伤得到明显改善。结论:济生肾气丸可通过调控cAMP/AQP2/NLRP3信号通路减少炎性因子释放,改善肾脏功能和病理损伤,发挥防治慢性肾脏病作用。

关键词：济生肾气丸慢性肾脏病环磷酸腺苷(cAMP) 水通道蛋白2(AQP2) NOD样受体蛋白3(NLRP3)

原代大鼠主动脉血管干细胞的体外培养扩增及鉴定

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南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1881-1886页

作者：马华根黄燕杨盈欣刘海琴唐元瑜丛伟红中国中医科学院西苑医院北京100091 北京中医药大学中医学院北京100029 海军军医大学上海长征医院上海200003 福建中医药大学中医学院福建福州350122

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞,为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2~3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉,切成长约2.0 mm的血管节段,均匀种瓶,经外膜贴壁固化后... 详细信息

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞,为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2~3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉,切成长约2.0 mm的血管节段,均匀种瓶,经外膜贴壁固化后进行原代培养,待细胞生长融合度达80%~90%时传代。镜下观察细胞形态及其生长特性,采用流式细胞仪分析目的细胞表面标志物CD分子表达情况,成脂、成骨诱导分化实验检测其多向分化潜能。结果接种3 d后,少量梭形、星形或多角形的细胞从血管节段周围爬出;5~6 d后形成岛屿状细胞集落,细胞增殖迅速,呈放射状向外扩大,并出现细胞克隆现象;7~8 d后细胞融合成片,呈涡旋状分布;传至第3代后,细胞匀质性较高,表现为典型的“成纤维样”排列生长。流式细胞仪分析细胞主要表达CD44、CD73、CD90,阳性率分别为80.3%、62.2%、46.8%;低表达CD34、CD45、CD11b/c,阳性率分别为1.1%、0.2%、0.2%。体外诱导分化实验表明目的细胞具有成脂、成骨分化潜能。结论“切段外膜贴壁培养法”可成功分离培养出具有间充质干细胞特性的大鼠主动脉血管干细胞。

关键词：血管干细胞主动脉切段外膜贴壁培养法原代培养免疫表型分化潜能血管重构

基于《黄帝内经》核心观念探析消渴病证治思路

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北京中医药大学学报 2024年第6期47卷 797-801页

作者：田栋廖书琴佟常青张潇逸曹娜王维广陈子杰翟双庆北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学东直门医院

消渴病在《黄帝内经》中论述较多,《素问·奇病论篇》将其归属于“奇病”范畴,体现了消渴病的难治性。本文基于《黄帝内经》核心观念认识、探析消渴病。首先,从《黄帝内经》象思维方法切入,认识到消渴病可以导致人体内在气象的变动;再... 详细信息

消渴病在《黄帝内经》中论述较多,《素问·奇病论篇》将其归属于“奇病”范畴,体现了消渴病的难治性。本文基于《黄帝内经》核心观念认识、探析消渴病。首先,从《黄帝内经》象思维方法切入,认识到消渴病可以导致人体内在气象的变动;再以《黄帝内经》精气学说、阴阳学说、五行学说为指导,解构、分析消渴病导致气象变动的原因及精气的气化规律,认为消渴病的变动气象为“热象”。“热象”引发之因主要为脾虚湿盛,其气化规律为少阴热化,其难治性主要体现在五行失衡导致的“热象”无制。基于对消渴病热象的认识,提出消渴病以化湿调脾预防疾病、调和肾气防止传变及阴阳皆调治疗久病不愈的证治思路,以期为优化消渴病的治疗提供参考。

关键词：消渴病核心观念糖尿病热象黄帝内经

基于脾脏代谢组学研究肿节风总黄酮治疗免疫性血小板减少症的作用机制

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北京中医药大学学报 2024年第2期47卷 213-222页

作者：卢震尚广彬卢晓南张钟康刘慧珍曾英坚江西中医药大学附属医院南昌330006 江西中医药大学中医基础理论分化发展中心江西中医药大学中医学院

目的运用代谢组学技术研究肿节风总黄酮干预免疫性血小板减少症(ITP)的作用机制。方法48只雄性SD大鼠使用Excel随机函数分为正常对照组,模型组,肿节风总黄酮低、中、高剂量组和醋酸泼尼松龙组,每组8只。除正常对照组外,其他各组大鼠第1... 详细信息

目的运用代谢组学技术研究肿节风总黄酮干预免疫性血小板减少症(ITP)的作用机制。方法48只雄性SD大鼠使用Excel随机函数分为正常对照组,模型组,肿节风总黄酮低、中、高剂量组和醋酸泼尼松龙组,每组8只。除正常对照组外,其他各组大鼠第1、3、4、6、7、8天腹腔注射兔抗大鼠血小板血清(5 mL/kg)复制ITP大鼠模型,正常对照组大鼠腹腔注射等体积生理盐水。造模日同时给药干预,每日1次。肿节风总黄酮低、中、高剂量组分别灌胃肿节风总黄酮(31.5、63.0、94.5 mg/kg),醋酸泼尼松龙组腹腔注射醋酸泼尼松龙(10.0 mg/kg)。第0、3、6、9天检测各组大鼠外周血小板数量,第10天称量脾脏质量,并计算脾脏指数。利用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱技术和多元统计分析对各组大鼠脾脏差异代谢物进行筛选和鉴定,并进行通路富集分析。结果与正常对照组比较,模型组大鼠第6、9天外周血小板减少,脾脏质量增加,脾脏系数升高(P<0.05)。与模型组比较,肿节风总黄酮低、中、高剂量组第6、9天外周血小板数量增加,肿节风总黄酮高剂量组脾脏质量减少,肿节风总黄酮中、高剂量组脾脏指数降低(P<0.05)。脾脏代谢组学分析筛选得到24种与ITP相关的生物标志物,肿节风总黄酮高剂量组可以回调其中的21种,主要涉及亚油酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、甘油磷脂代谢。结论肿节风总黄酮可能通过调节脾脏亚油酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、甘油磷脂代谢等代谢通路恢复免疫系统的正常调节能力,以抑制血小板过度破坏,发挥治疗ITP的作用。

关键词：肿节风总黄酮免疫性血小板减少症代谢组学脾脏免疫大鼠

原代大鼠主动脉血管干细胞的体外培养扩增及鉴定

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南方医科大学学报 2024年

作者：马华根黄燕杨盈欣刘海琴唐元瑜丛伟红中国中医科学院西苑医院北京中医药大学中医学院海军军医大学上海长征医院福建中医药大学中医学院

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞，为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2～3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉，切成长约2.0 mm的血管节段，均匀种瓶，经外膜贴壁... 详细信息

目的采用“切段外膜贴壁培养法”体外培养扩增出原代大鼠主动脉血管干细胞，为开展血管重构及相关疾病研究提供实用的工具细胞。方法无菌分离2～3周龄Sprague-Dawley大鼠胸腹主动脉，切成长约2.0 mm的血管节段，均匀种瓶，经外膜贴壁固化后进行原代培养，待细胞生长融合度达80%～90%时传代。镜下观察细胞形态及其生长特性，采用流式细胞仪分析目的细胞表面标志物CD分子表达情况，成脂、成骨诱导分化实验检测其多向分化潜能。结果接种3 d后，少量梭形、星形或多角形的细胞从血管节段周围爬出；5～6 d后形成岛屿状细胞集落，细胞增殖迅速，呈放射状向外扩大，并出现细胞克隆现象；7～8 d后细胞融合成片，呈涡旋状分布；传至第3代后，细胞匀质性较高，表现为典型的“成纤维样”排列生长。流式细胞仪分析细胞主要表达CD44、CD73、CD90，阳性率分别为80.3%、62.2%、46.8%；低表达CD34、CD45、CD11b/c，阳性率分别为1.1%、0.2%、0.2%。体外诱导分化实验表明目的细胞具有成脂、成骨分化潜能。结论 “切段外膜贴壁培养法”可成功分离培养出具有间充质干细胞特性的大鼠主动脉血管干细胞。

关键词：血管干细胞主动脉切段外膜贴壁培养法原代培养免疫表型分化潜能血管重构

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 104-110页

作者：赖颖蓉赵倩琳姜丽红长春中医药大学中医学院长春130117 长春中医药大学附属医院长春130117

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注... 详细信息

目的:探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠细胞凋亡的作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型(MI/RI模型),造模成功后第1天起,空白组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、模型组(生理盐水1.0 mL·kg^(-1))、参红通络方剂低、中、高剂量组(1.031、2.063、4.126 g·kg^(-1)参红通络方标准浓缩液)和辛伐他汀组(辛伐他汀0.71 mg·kg^(-1)),定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红(HE)染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平。结果:与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升(P<0.05);心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05);与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平(P<0.05);明显下调心肌细胞凋亡率(P<0.05);Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加(P<0.05)。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高(P<0.05)。结论:参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。

关键词：参红通络方心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡 B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2) Bcl-2相关X蛋白(Bax) 胱天蛋白酶-3(Caspase-3)

缩泉益肾方对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤的影响

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中国老年学杂志 2024年第17期 4155-4159页

作者：黄明月朱叶谢毅强钟军华邱龙尹德辉海南医学院中医学院海南医学院第一附属医院

目的观察缩泉益肾方对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤的影响。方法体外培养小鼠足细胞，分为正常(N)组、高糖(HG)组、含5%、10%、20%缩泉益肾方含药血清低/中/高剂量高糖(SQYSF-L、M、H)组、含4.45μg/ml卡格列净高糖(Cana)组，CCK8法... 详细信息

目的观察缩泉益肾方对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤的影响。方法体外培养小鼠足细胞，分为正常(N)组、高糖(HG)组、含5%、10%、20%缩泉益肾方含药血清低/中/高剂量高糖(SQYSF-L、M、H)组、含4.45μg/ml卡格列净高糖(Cana)组，CCK8法检测细胞活力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，流式细胞术分析细胞凋亡，实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测各组细胞骨架相关蛋白分子结蛋白(Desmin)、α-辅动肌蛋白(actinin)-4表达。结果体外实验结果显示，与SQYSF-L、SQYSF-H组比较，SQYSF-M组细胞存活率明显升高(P<0.01);与N组比较，HG组足细胞活力、划痕愈合率显著降低，凋亡率明显升高(P<0.01);与HG组比较，SQYSF-M组和Cana组足细胞活力、划痕愈合率显著升高，凋亡率显著下降(P<0.01);与N组比较，HG组Desmin mRNA和蛋白水平均明显增加，α-actinin-4 mRNA和蛋白水平均明显减少(P<0.01);与HG组比较，SQYSF-M组和Cana组Desmin mRNA和蛋白水平均明显减少，α-actinin-4 mRNA和蛋白水平均明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论缩泉益肾方可增加高糖诱导的小鼠肾脏足细胞活力，提高细胞划痕愈合率，减少其凋亡，其可能通过修复细胞骨架相关蛋白分子Desmin、α-actinin-4的异常表达，稳定细胞骨架，减轻足细胞损伤。

关键词：糖尿病肾脏疾病缩泉益肾方骨架相关蛋白分子结蛋白(Desmin) α-辅动肌蛋白(actinin)-4

附子理中丸通过调节NLRP3炎症小体信号通路对化疗性恶心呕吐异食癖大鼠的改善作用

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中成药 2024年第10期 3445-3449页

作者：姚凤云姜劼琳刘蕊郭怡黄艳美王琳崔言坤江西中医药大学中医学院江西中医药大学方-证研究中心

目的探讨附子理中丸对顺铂诱导的化疗性恶心呕吐(CINV)异食癖大鼠的药效及其作用机制。方法大鼠随机分为空白组、模型组、帕洛诺司琼组(0.045 mg/kg)及附子理中丸高、中、低剂量组(4.86、2.43、1.215 g/kg),每组8只。预防性给药7 d后... 详细信息

目的探讨附子理中丸对顺铂诱导的化疗性恶心呕吐(CINV)异食癖大鼠的药效及其作用机制。方法大鼠随机分为空白组、模型组、帕洛诺司琼组(0.045 mg/kg)及附子理中丸高、中、低剂量组(4.86、2.43、1.215 g/kg),每组8只。预防性给药7 d后，除空白组外，其余各组单次腹腔注射顺铂(6 mg/kg)建立异食癖恶心呕吐模型。造模72 h后(末次给药1 h后)取材，HE染色观察大鼠胃窦和回肠组织病理变化，生化法检测大鼠血清SOD活性及NO、MDA水平，ELISA法检测大鼠肾组织IL-1β、TNF-α水平及回肠组织5-HT、5-HIAA水平，Western blot法检测回肠组织中NLRP3、ASC、caspase-1、NF-κB p65蛋白表达。结果与空白组比较，模型组大鼠高岭土摄入量升高(P附子理中丸各剂量组及帕洛诺司琼组高岭土摄入量降低(P附子理中丸能防治CINV,纠正顺铂诱导的大鼠异食癖行为，其机制可能与抑制NLRP3/ASC/caspase-1通路激活、调节炎症因子释放、抗氧化应激、抑制5-HT生成有关。

关键词：附子理中丸顺铂化疗性恶心呕吐异食癖 NLRP3炎症小体信号通路炎症氧化应激

基于复杂网络分析技术的针灸治疗子宫内膜异位症选穴规律与证–穴关系研究

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中国针灸 2024年第5期44卷 602-610页

作者：张清源孟晞黄晟赫黄丽丹吴麟周志刚江西中医药大学中医学院南昌330004 江西中医药大学针灸推拿学院南昌330004

目的:基于复杂网络分析技术探索针灸治疗子宫内膜异位症(EMs)的选穴规律与证-穴关系。方法:检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台(Wanfang)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(SinoMed)、PubMed、EM... 详细信息

目的:基于复杂网络分析技术探索针灸治疗子宫内膜异位症(EMs)的选穴规律与证-穴关系。方法:检索中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据知识服务平台(Wanfang)、维普中文科技期刊数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(SinoMed)、PubMed、EMbase、Cochrane Library建库至2022年12月14日收录的针灸治疗EMs的临床研究文献。采用Microsoft Excel 2019软件建立数据库,统计腧穴频次及频率、腧穴归经、腧穴分布、证-穴关系,并使用SPSS Modeler 18.0软件中的Apriori算法进行关联规则分析;采用Cytoscape3.7.2软件绘制复杂共现网络图谱;运用SPSS Statistics 26.0软件对高频腧穴实现层次聚类分析并绘制树状图。结果:共纳入163篇文献,提取核心处方167条,证型-腧穴处方74条,涉及腧穴92个,累计频次1223次。使用频次前5的腧穴为关元、三阴交、中极、气海、子宫;腧穴归经以任脉、足太阴脾经与足阳明胃经为主,胸腹部与下肢部腧穴占比较高;关元-三阴交、关元-中极、关元-子宫为高频腧穴配伍;关元、三阴交、气海、中极相互之间联系紧密,与其他穴位的联通性最好;前25位高频腧穴可分为5个有效聚类群。寒凝血瘀证常用穴位为关元、气海、三阴交、子宫、中极;肾虚血瘀证常用穴位为关元、三阴交、中极、大赫、太溪;气滞血瘀证常用穴位为中极、关元、三阴交、血海、地机;气虚血瘀证常用穴位为气海、关元、足三里、血海、子宫;痰瘀互结证常用穴位为三阴交、丰隆、中髎、次髎、下髎;湿热瘀阻证常用穴位为大横、关元、中极、气海、中脘。结论:针灸治疗EMs核心处方为关元、三阴交、中极、气海、子宫,临床以6类证型为主,当根据不同证型在核心处方基础上配以对证穴位。

关键词：子宫内膜异位症针灸选穴规律证-穴关系复杂网络