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长时程亚低温联合复方脑肽节苷脂注射液对颅脑创伤大鼠的神经行为学影响

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安徽医科大学学报 2024年第3期59卷 448-454页

作者：赵万勇徐书刚王景景李晓红孙洪涛山东大学齐鲁医院德州医院神经外科德州253014 武警特色医学中心神经创伤修复研究所天津300162 天津大学医学工程与转化医学研究院天津300350

目的探讨长时程亚低温(MHT)联合复方脑肽节苷脂注射液(CPCGI)治疗对颅脑创伤(TBI)大鼠的神经行为学影响及其作用机制。方法36只健康成年雄性SD大鼠随机均分为模型组、MHT组、CPCGI组和MHT+CPCGI组。采用电子可控性皮质损伤装置制备TBI... 详细信息

目的探讨长时程亚低温(MHT)联合复方脑肽节苷脂注射液(CPCGI)治疗对颅脑创伤(TBI)大鼠的神经行为学影响及其作用机制。方法36只健康成年雄性SD大鼠随机均分为模型组、MHT组、CPCGI组和MHT+CPCGI组。采用电子可控性皮质损伤装置制备TBI大鼠模型,模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水(NS,2 ml/kg)并给予常温(37℃)治疗48 h,MHT组大鼠腹腔注射等量NS并给予亚低温(33.0±1.0)℃治疗48 h,CPCGI组大鼠腹腔注射等量CPCGI(0.6 ml/kg)并给予常温治疗48 h,MHT+CPCGI组大鼠腹腔注射等量CPCGI并给予亚低温治疗48 h;通过神经功能缺损评分评估大鼠的感觉运动功能,Morris水迷宫实验检测大鼠的运动和空间记忆能力,横杆跑动实验和斜坡爬壁实验评估大鼠的运动功能;尼氏染色观察海马神经元数量的变化;采用免疫荧光法检测微管相关蛋白(DCX)和神经元特异性核蛋白(NeuN)表达情况;采用免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达情况。结果与MHT组和CPCGI组相比,MHT+CPCGI组小鼠神经功能缺损评分更低,逃避潜伏期时间更短,跨越平台次数和目标象限所占时间百分比更高,BWT评分更高,爬坡角度更大,神经元数量、DCX和NeuN阳性细胞数量增多,同时Bcl-2表达量增加,Bax和Caspase-3表达量降低(P神经再生、抑制细胞凋亡有效改善TBI大鼠的神经行为缺陷,为TBI的临床治疗提供潜在的策略和依据。

关键词：亚低温复方脑肽节苷脂颅脑创伤神经行为神经元凋亡

ts—SV40LT抗原转基因干细胞增殖活性的温度调控机制分析

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中华神经外科杂志 2010年第6期26卷 557-561页

作者：涂悦刘晓智张赛武警医学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所天津300162

目的研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原（ts-SV40LT）转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞（UCMSCs）,PCR方法 ... 详细信息

目的研究温度敏感性猿猴病毒40大T抗原（ts-SV40LT）转基因干细胞增殖活性的温度调控机制,为实现脑创伤患者在亚低温治疗期间实施干细胞移植奠定基础.方法用含ts-SV40LT抗原的表达质粒转染人源性脐带间充质干细胞（UCMSCs）,PCR方法检测外源基因的整合效率,将其分别置于亚低温（33℃）和正常体温（37℃）下培养,细胞免疫荧光方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）活性,PCR-ELISA端粒酶检测法检测端粒酶活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测细胞周期调控蛋白--周期素D1（Cyclin D1）、CyclinE、周期素依赖性蛋白激酶-2（CDK2）、CDK4、CDK6、P16和P21的蛋白表达情况,免疫荧光方法检测巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达;SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 PCR结果显示ts-SV40LT抗原的基因片段被成功整合入干细胞,该细胞株在33℃条件下增殖生长旺盛,端粒酶活性高,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6均高表达,P16和P21低表达,同时高表达nestin,不表达NSE和GFAP;在37℃条件下细胞增殖缓慢甚至停滞,端粒酶活性低,Cyclin D1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6的表达强度明显低于33℃条件,P16和P21则相反,与此同时nestin表达强度明显下降,NSE和GFAP表达水平上升.结论通过ts-SV40LT抗原基因的有效转染可实现干细胞在不同温度环境下的增殖调控,为在亚低温条件下实现干细胞移植救治颅脑创伤患者提供了实验支持.

关键词：干细胞颅脑创伤低温疗法分化

脑源性神经营养因子对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响

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中华创伤杂志 2011年第1期27卷 68-71页

作者：张赛刘晓智孙洪涛涂悦程世翔武警医学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所、脑系科中心天津300162

目的研究脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响.方法脂质体介导BDNF表达质粒转染293T细胞,ELISA法确定BDNF高峰表达时相,收集高表达时相阶段细胞上清液.建立SD... 详细信息

目的研究脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）对亚低温处理后移植干细胞的存活及分化的影响.方法脂质体介导BDNF表达质粒转染293T细胞,ELISA法确定BDNF高峰表达时相,收集高表达时相阶段细胞上清液.建立SD大鼠液压脑创伤模型,分为A组（干细胞移植组）和B组（干细胞移植＋BDNF组）,两组同时给予亚低温治疗（33℃）5 d.对第4天和第8大（复温后第3天）脑组织标本行增殖细胞核抗原（PCNA）、巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫组织化学及原位细胞凋亡检测,实验动物予以神经功能缺陷评分.结果 ELISA结果显示细胞转染48～60 h后BDNF持续高表达.亚低温处理第4天两组PCNA、巢蛋白均高表达,NSE及GFAP无或极低表达,细胞凋亡少见,但B组较A组更少（P＜0.05）.复温后第3天两组PCNA、巢蛋白均表达下降,NSE及GFAP表达升高,但B组较A组NSE阳性率更高,细胞凋亡更少（P＜0.05）.B组获得最佳动物神经功能评分.结论 BDNF可增加低温环境下的干细胞存活率,并诱导干细胞向神经元分化.

关键词：颅脑损伤干细胞脑源性神经营养因子亚低温

颅内压相关参数预测重型创伤性脑损伤预后的研究进展

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中华创伤杂志 2024年第4期40卷 336-342页

作者：夏晶韩冰莎王炬冯光新乡医学院研究生院新乡453004 河南省人民医院神经外科重症监护病房郑州450003

重型创伤性脑损伤(sTBI)患者常存在颅内血肿、脑积水等和全身并发症如多器官功能障碍、急性呼吸窘迫综合征等较为严重的并发症。目前,颅内压被认为是sTBI临床管理中最重要的目标导向参数,可实时监测颅内疾病进展,从而最大限度降低继发... 详细信息

重型创伤性脑损伤(sTBI)患者常存在颅内血肿、脑积水等和全身并发症如多器官功能障碍、急性呼吸窘迫综合征等较为严重的并发症。目前,颅内压被认为是sTBI临床管理中最重要的目标导向参数,可实时监测颅内疾病进展,从而最大限度降低继发性脑损伤等并发症的发生率。但单纯颅内压监测存在一定局限性,如颅内压数据信息不完整及数据信息滞后等。临床上往往还需采用除颅内压以外的其他相关参数辅助进行全面监测,包括血管压力反应指数(PRx)、平均颅内压波幅(MWA)、颅内压波幅与颅内压的相关系数(RAP),颅内压波幅与动脉血压波幅的相关系数(IAAC)等,通过精确反映脑顺应性及脑血管自动调节能力等进一步在临床中辅助指导sTBI治疗策略与评估患者预后。但目前临床尚缺乏对颅内压相关参数的全面认识。为此,笔者就颅内压相关参数在预测sTBI预后中应用的研究进展进行综述,为其临床应用与未来研究提供参考。

关键词：颅脑损伤颅内压脑血管循环顺应性压力反应指数

骨髓基质干细胞因子对受损神经元的营养保护作用研究

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中华神经外科杂志 2012年第2期28卷 170-173页

作者：刘晓智涂悦孙洪涛张赛武警医学院附属医院神经外科、武警部队脑创伤与神经疾病研究所天津300162

目的观察骨髓基质干细胞（BMSCs）外分泌因子对损伤神经的保护作用。方法利用Transwell双室培养体系使BMSCs浸润于神经元裂解液中，酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞因子浓度；将BMSCs条件培养液加入经谷氨酸致伤的神经元表面，ELISA法... 详细信息

目的观察骨髓基质干细胞（BMSCs）外分泌因子对损伤神经的保护作用。方法利用Transwell双室培养体系使BMSCs浸润于神经元裂解液中，酶联免疫吸附（ELISA）法测定细胞因子浓度；将BMSCs条件培养液加入经谷氨酸致伤的神经元表面，ELISA法和原位凋亡法检测乳酸脱氢酶（LDH）含量和凋亡细胞数量；条件培养液原位注射于大鼠创伤灶后予以动物神经功能缺陷综合评分。结果经神经元裂解液诱导后，BMSCs条件培养液中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNr）含量明显增加，基质衍生因子-1α（SDF-1α）、转化生长因子-β-1（TGF-β-1）含量变化差异无统计学意义；LDH含量和细胞凋亡数量随BMSCs条件培养液浓度的增加而降低；实验动物的神经运动功能明显好转。结论BMSCs外分泌因子对损伤神经元具有明确的保护作用，其中NGF和BDNF可能扮演重要角色。

关键词：外伤性脑损伤干细胞神经元凋亡

重型颅脑创伤亚低温治疗中脑组织氧分压持续监测的应用

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中华神经外科杂志 2012年第2期28卷 141-144页

作者：孙洪涛程世翔涂悦吴焕成李兆麟张赛武警部队脑创伤与神经疾病研究所、武警医学院附属医院脑系科中心天津300162

目的研究亚低温治疗状态下重型颅脑创伤（sTBI）患者伤后早期脑组织氧分压（PbtO2）的动态变化及临床意义。方法38例sTBI患者进行亚低温治疗，连续监测PbtO2、颈静脉血氧饱和度（SjvO2）、颅内压（ICP）、和脑灌注压（CPP）等指标，对... 详细信息

目的研究亚低温治疗状态下重型颅脑创伤（sTBI）患者伤后早期脑组织氧分压（PbtO2）的动态变化及临床意义。方法38例sTBI患者进行亚低温治疗，连续监测PbtO2、颈静脉血氧饱和度（SjvO2）、颅内压（ICP）、和脑灌注压（CPP）等指标，对监测结果以及PbtO2和其他指标相关性进行分析，并记录患者伤后3个月的格拉斯哥预后评分。结果在亚低温治疗初期，患者PbtO2、SjvO2和CPP明显上升，ICP明显下降，而治疗36h和48h后PbtO2及SjvO2无明显变化。亚低温治疗后ICP较治疗前明显下降，低PbtO2隋况明显改善，ICP和PbtO2之间呈负相关；PbtO2及SjvO2水平明显上升，PbtO2与SjvO2呈直线正相关；PbtO2与CPP呈直线正相关。监测过程中，在SjvO2和CPP水平正常的情况下，仍有较大比例的患者出现低PbtO2隋况。治疗过程中没有出现过低PbtO2水平的患者预后良好。结论PbtO2是监测sTBI患者局部脑组织氧合的一项重要指标，具有很高敏感性，对于指导治疗和判断预后具有重要意义，而亚低温能够明显改善PbtO2降低的情况。

关键词：外伤性脑损伤亚低温脑组织氧分压

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3D打印技术制备大鼠脊髓仿生支架的研究

中国修复重建外科杂志 2015年第3期29卷 364-367页

作者：陈以胜王景景陈旭义陈翀涂悦张赛李晓红武警部队脑创伤与神经疾病研究所武警后勤学院附属医院脑科医院脑研所天津300162

目的探讨3D打印技术制备大鼠脊髓仿生支架方法,为用生物材料制备脊髓支架并进行脊髓损伤修复研究奠定基础。方法取3只雌性SD大鼠,采用7.0T动物专用核磁共振仪进行扫描,获得T8~10节段脊髓截面位置和形状图像,结合脊髓各神经传导束的位置... 详细信息

目的探讨3D打印技术制备大鼠脊髓仿生支架方法,为用生物材料制备脊髓支架并进行脊髓损伤修复研究奠定基础。方法取3只雌性SD大鼠,采用7.0T动物专用核磁共振仪进行扫描,获得T8~10节段脊髓截面位置和形状图像,结合脊髓各神经传导束的位置和形状资料,应用Getdata数据获取软件获取相关数据。应用Solid Works三维制图软件进行支架三维模型设计,并将数据转换为立体平版印刷（stereolithography,STL）格式;最后以光敏树脂为材料,通过3D打印机制作脊髓仿生支架。结果 MRI扫描显示,T8~10节段脊髓截面呈纵轴较长、横轴相对较短的椭圆形,横径为（2.05±0.24）mm,纵径为（2.20±0.52）mm;其神经传导束在STL格式的三维模型中清晰显示,应用3D打印机制备了目标节段脊髓的仿生支架。该脊髓支架形态、截面与大鼠正常脊髓相似,其中各神经传导束孔隙位置模拟了大鼠脊髓正常神经传导束走行。结论 3D打印技术制备的大鼠脊髓支架与正常脊髓外形和尺寸接近,内部神经传导束通道也更仿生,且制作程序简便,有望用于脊髓损伤修复研究。

关键词： 3D打印脊髓损伤仿生支架 Solid Works三维制图软件大鼠

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针刺优化方案治疗中风后偏瘫的临床研究

中国中西医结合急救杂志 2011年第3期18卷 131-134页

作者：张民涂悦程世翔马铁柱张赛武警部队脑创伤与神经疾病研究所武警医学院附属医院脑系科天津300162

目的观察针刺优化方案治疗中风后偏瘫患者神经功能缺损的变化，寻求治疗中风偏瘫的最佳方案。方法将90例中风患者按入院先后顺序随机均分为针刺组、康复组、针刺＋康复组。3组患者均给予常规基础药物治疗；针刺组采用优化醒脑开窍方案... 详细信息

目的观察针刺优化方案治疗中风后偏瘫患者神经功能缺损的变化，寻求治疗中风偏瘫的最佳方案。方法将90例中风患者按入院先后顺序随机均分为针刺组、康复组、针刺＋康复组。3组患者均给予常规基础药物治疗；针刺组采用优化醒脑开窍方案，针刺内关、人中（3d后改印堂）、三阴交、极泉、尺泽、委中、风池、完骨、天柱穴，并随证加减，每次30min；康复组进行康复训练，每次45min；针刺＋康复组在醒脑开窍针法治疗的同时加康复治疗。各组每周连续治疗5次，共治疗4周。于治疗前后进行神经功能缺损程度评分（NDS），并比较各组神经功能缺损疗效。结果3组治疗后NDS评分均较治疗前明显降低（均P〈0．01）；其中针刺组和针刺＋康复组NDS评分（分）下降程度较康复组更明显（6．13±3．18、6．13±4．03比8．77±3．35，均P〈0．05），而针刺组与针刺＋康复组间无明显差异。治疗后针刺组和针刺＋康复组神经功能缺损总有效率均明显高于康复组（100．00％、100．0％比93．3％，均P〈0．05），而针刺组与针刺＋康复组间无明显差异。结论针刺法、康复疗法和针刺结合康复疗法均可明显改善中风后偏瘫的临床症状，减轻神经功能缺损，改善日常生活能力，且针刺法和针刺结合康复疗法的疗效优于单纯康复疗法。

关键词：针刺疗法康复训练中风偏瘫

糖化β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响

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新乡医学院学报 2019年第6期36卷 511-516页

作者：夏天光刁云锋毕莹张健陈江龙董化江董月青武警后勤学院附属医院脑创伤与神经疾病研究所

目的探讨糖化β-淀粉样蛋白(Aβ-AGE)对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响。方法将β-淀粉样蛋白(Aβ)与甲基乙二醛于37℃下温育1个月合成Aβ-AGE。将40只SpragueDawley大鼠随机分为Aβ组、Aβ+小鼠单克隆高级糖化终产物受体抗体(Anti-R... 详细信息

目的探讨糖化β-淀粉样蛋白(Aβ-AGE)对阿尔茨海默病样大鼠认知功能的影响。方法将β-淀粉样蛋白(Aβ)与甲基乙二醛于37℃下温育1个月合成Aβ-AGE。将40只SpragueDawley大鼠随机分为Aβ组、Aβ+小鼠单克隆高级糖化终产物受体抗体(Anti-RAGE)组、Aβ-AGE组、Aβ-AGE+Anti-RAGE组,每组10只。行立体定向左侧侧脑室注射制备阿尔茨海默病样模型,其中Aβ组大鼠给予Aβ5μg,Aβ+Anti-RAGE组大鼠给予Aβ5μg和RAGE抗体Anti-RAGE50μg,Aβ-AGE组大鼠给予Aβ-AGE5μg,Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠给予Aβ-AGE5μg和Anti-RAGE50μg。注射后第2~7天进行Morris水迷宫实验,记录大鼠寻找隐匿平台的潜伏期;注射后第9天,记录各组大鼠穿越平台次数和目标象限停留时间;Westernblot法检测各组大鼠海马组织中高级糖化终产物受体(RAGE)蛋白的表达,免疫组织化学染色法检测各组大鼠大脑皮层中RAGE的表达。结果在注射后第2天,各组大鼠潜伏期比较差异无统计学意义(F=3.767,P>0.05)。注射后第3~7天,各组大鼠潜伏期比较差异均有统计学意义(F=9.167、25.050、56.980、62.380、122.200,P0.05),Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠海马组织中RAGE蛋白相对表达量显著低于Aβ-AGE组(P脑皮层中RAGE阳性细胞数比较差异有统计学意义(F=76.370、P脑皮层中RAGE阳性细胞数显著高于Aβ组(P<0.01),Aβ+Anti-RAGE组大鼠皮层中RAGE阳性细胞数显著低于Aβ组(P<0.01);Aβ-AGE+Anti-RAGE组大鼠皮层中RAGE阳性细胞数显著低于Aβ-AGE组(P<0.01)。结论Aβ-AGE可能通过激活RAGE信号转导通路介导加重AD样大鼠的认知功能障碍,Aβ-AGE和RAGE可能成为治疗AD的新靶点。

关键词：阿尔兹海默病 β-淀粉样蛋白糖基化晚期糖基化终产物受体