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银环毒素多表位抗原肽的原核表达和免疫原性研究

第十一届中国生物毒素研究及医药应用年会

作者：郭平叶峰平崔庆华张富强邱薇胡挺松周卫国郑颖范泉水成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所

【目的】:泰国红十字会批准上市的一种针对泰国境内四种眼镜蛇科毒蛇咬伤治疗的多价抗神经毒血清（Neuro Polyvalent Snake Antivenom,NpAV）,即金环蛇、银环蛇、眼镜蛇、眼镜王蛇蛇伤患者治疗用药,还未曾报道对我国境内眼镜蛇科主要致... 详细信息

【目的】:泰国红十字会批准上市的一种针对泰国境内四种眼镜蛇科毒蛇咬伤治疗的多价抗神经毒血清（Neuro Polyvalent Snake Antivenom,NpAV）,即金环蛇、银环蛇、眼镜蛇、眼镜王蛇蛇伤患者治疗用药,还未曾报道对我国境内眼镜蛇科主要致伤毒蛇蛇毒的中和作用。如能了解其对我国境内相应蛇毒的中和能力,将对我国眼镜蛇科蛇伤患者的治疗具有重要指导意义。【方法】:针对我国境内眼镜蛇科金环蛇、银环蛇和眼镜蛇的三种主要致伤毒蛇蛇毒,采用小鼠体外中和实验法,NpAV与毒液等体积混匀,37℃水浴孵育45分钟后腹腔注射实验小鼠。72小时后观察实验小鼠的存活情况,以每毫升抗蛇毒血清所能中和保护50%动物存活的蛇毒总质量（即半数有效率ED50,mg/ml）为中和效价,用改良寇氏法计算NpAV对三种不同蛇毒的中和能力。【结果】:小鼠体外中和实验表明:NpAV对我国境内眼镜蛇科的金环蛇、银环蛇和眼镜蛇三种蛇毒所致伤的动物都有显著保护作用,其中和效价ED50依次为2.43 mg/ml、0.82 mg/ml和0.96mg/ml,均高于NpAV说明书中其对泰国境内相应毒蛇蛇毒的中和效价（1.5 mg/ml、0.73mg/ml和0.69 mg/ml）,尤以金环蛇毒液最为明显。【结论】:泰国产多价抗神经毒血清能有效中和我国境内眼镜蛇科三种主要伤人的金环蛇、银环蛇和眼镜蛇蛇毒中主要致命毒素的毒性作用。在我国眼镜蛇科毒蛇咬伤患者的临床救治领域中,泰国产NpAV具有较大的临床应用价值。

关键词：蛇咬伤多价抗神经蛇毒血清中和作用金环蛇银环蛇眼镜蛇

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银环毒素多表位抗原肽的原核表达和免疫原性研究

第十一届中国生物毒素研究及医药应用年会

作者：崔庆华叶峰平郭平王熙邱薇周卫国张富强范泉水郑颖成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所

【目的】:针对银环毒素中主要致死性毒素成分,设计制备含有多种致死性银环毒素主要抗原表位的抗原,并利用通过该基因工程抗原免疫动物获得只针对蛇毒中致死性毒素成分的抗体,探索建立一种制备高效、广谱、专一的抗蛇毒抗体制备方法。【... 详细信息

【目的】:针对银环毒素中主要致死性毒素成分,设计制备含有多种致死性银环毒素主要抗原表位的抗原,并利用通过该基因工程抗原免疫动物获得只针对蛇毒中致死性毒素成分的抗体,探索建立一种制备高效、广谱、专一的抗蛇毒抗体制备方法。【方法】:采用Jameson-Wolf方法并和Clustal X软件相结合的生物信息学方法分析α、p和K银环毒素的抗原位点,人工合成含有多个银环毒素抗原位点的序列;将该序列连接到原核表达载体pET-28a（+）后,转化至BL21大肠杆菌中,挑选的阳性克隆,用:IPTG诱导表达,通过亲和柱层析得到表达的目的蛋白,目的蛋白免疫连续免疫小鼠5次后采血,ELISA和毒素攻毒保护实验检测免疫后的抗体效价。【结果】:通过生物信息学分析得到10个银环毒素抗原表位,构建的原核表达载体在BL21中的表达的目的蛋白分子量约为20Kda,纯化后的目的蛋白纯度为95%。ELISA抗体效价为10-3阳性,在全数致死剂量的银环蛇毒攻毒下,能够保护66.7%小鼠存活。【结论】:用构建的含有三种银环毒素多个关键抗原表位序列的原核表达载体转化BL21大肠杆菌后,诱导表达的蛋白免疫小鼠能使小鼠产生较高效价中和抗体;本研究通过生物信息学方法分析预测的含有蛇毒主要毒性蛋白关键抗原表位的人工合成序列,利用原核表达系统获得的新型免疫源,为新型广谱、多价,高效,专一抗蛇毒血清的研究探索了一种新的方法。

关键词：银环毒素多抗原表位原核表达抗体

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某医院一台全身伽玛刀辐射防护的设计评价

中国辐射卫生 2008年第4期17卷 475-476页

作者：吴敏陈军军冯晓妍谢向东苟于强张继军曾发贵何启兰州军区疾病预防控制中心甘肃兰州730020 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

目的通过放射防护预审使医院新建的立体定向伽玛射线全身治疗系统项目设计达到放射防护最优化要求。方法根据相关辐射标准和资料,对某医院肿瘤治疗中心立体定向伽玛射线全身治疗系统项目的机房选址、布局和防护设计进行放射防护的预审... 详细信息

目的通过放射防护预审使医院新建的立体定向伽玛射线全身治疗系统项目设计达到放射防护最优化要求。方法根据相关辐射标准和资料,对某医院肿瘤治疗中心立体定向伽玛射线全身治疗系统项目的机房选址、布局和防护设计进行放射防护的预审和评价,运用剂量率仪对相关工作场所进行放射性水平监测,对其放射防护效果进行验证。结果经过实践论证(专家评审及项目竣工验收),该立体定向伽玛射线全身治疗系统在机房选址、布局和防护设施符合有关标准和规定的要求。结论放射单位严格按照国家有关法规标准设计建设大型医用射线项目的同时,加强设计预审与放射防护效果验证,对于消除项目隐患、节省建设经费,提高放射诊疗质量和保证防护安全具有深远的意义。

关键词：立体定向伽玛射线全身治疗系统最优化设计设计评价辐射防护

云南战区部队首次检出携带耶尔森菌HPI毒力岛基因irp^(-2)的大肠杆菌

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中国卫生检验杂志 2005年第10期15卷 1179-1180页

作者：李刚山朱姝媛范泉水侯敏徐庆邱薇龙沛然周卫国尹惠琼成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所昆明650032 昆明市疾病预防控制中心昆明650034

目的:了解携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的大肠杆菌在云南战区部队腹泻患者粪便标本中的存在情况,并对其菌株做毒力试验。方法:用PCR扩增法检测毒力岛基因irp-2,小白鼠腹腔注射检测毒力。结果:从268份腹泻病人粪便中分离的... 详细信息

目的:了解携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的大肠杆菌在云南战区部队腹泻患者粪便标本中的存在情况,并对其菌株做毒力试验。方法:用PCR扩增法检测毒力岛基因irp-2,小白鼠腹腔注射检测毒力。结果:从268份腹泻病人粪便中分离的大肠杆菌菌株中,检测出携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的18株,检出率为6.72%(18/268)。毒力试验使小白鼠发病并死亡。结论:云南战区存在携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的大肠杆菌,该菌对部队指战员的健康具有潜在性的威胁。

关键词：腹泻毒力岛基因irp^-2 小肠结肠炎耶尔森菌

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汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

中国病原生物学杂志 2014年第4期9卷 347-350,355页

作者：胡丹郝丽娜李丙军张锦海吕恒张凤玉龚秀芳耿美玲谭维国操敏郑峰朱进姚苹苹张云王长军南京军区军事医学研究所江苏南京210002 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051

目的通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒。方法根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立检测两型汉坦病毒的实时荧光定量... 详细信息

目的通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒。方法根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立检测两型汉坦病毒的实时荧光定量PCR方法。结果建立的检测方法特异性良好,与其他常见病原不发生交叉反应;最低检测限为101copies/μl,灵敏度高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间线性关系表达式分别为y=-3.4607x+40.988(HTN),y=-3.5307x+39.356(SEO),扩增效率分别为92.2%(HTN)和92.6%(SEO),相关系数R2分别为0.9968(HTN)和0.9997(SEO),呈良好的线性关系,且重复性好。结论建立的实时荧光定量PCR灵敏度高,重复性好,可用于汉坦病毒的快速检测,并可初步辨别汉滩型和汉城型汉坦病毒,对肾综合征出血热的病原早期诊断和流行病学调查有较好的应用价值。

关键词：汉坦病毒荧光定量PCR S片段基因

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对肾综合征出血热传播媒介小盾纤恙螨的研究

中国媒介生物学及控制杂志 2009年第6期20卷 583-584页

作者：钱俊英邓小昭张云陕西省疾病预防控制中心流行病科西安710054 南京军区军事医学研究所

目的探索小盾纤恙螨在肾综合征出血热(HFRS)传播中的作用及传播疾病的关系。方法在疫区捕获野鼠,采集小盾纤恙螨,用Vero-E6细胞组织培养及间接免疫荧光法(IFA)检测汉坦病毒(HV)感染情况,并用RT-PCR检测螨体内HV-RNA,观察螨体内HV增殖,原... 详细信息

目的探索小盾纤恙螨在肾综合征出血热(HFRS)传播中的作用及传播疾病的关系。方法在疫区捕获野鼠,采集小盾纤恙螨,用Vero-E6细胞组织培养及间接免疫荧光法(IFA)检测汉坦病毒(HV)感染情况,并用RT-PCR检测螨体内HV-RNA,观察螨体内HV增殖,原位RT-PCR分子杂交法进行螨体内HV定位。结果IFA检测HV抗原阳性鼠寄生小盾纤恙螨HV自然感染率为66.7%,IFA检测阴性鼠寄生螨HV自然感染率为25.0%;该螨通过叮刺和经卵传播HV。结论小盾纤恙螨为野鼠型HFRS主要传播媒介之一,在传播HFRS中的作用不容忽视。

关键词：小盾纤恙螨肾综合征出血热传播媒介

南充地区肾综合征出血热宿主动物及其生态学的调查研究

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解放军预防医学杂志 1990年第1期8卷 26-31页

作者：金华卢登明赵琼莲郭安荣成都军区后勤部军事医学研究所

肾综合征出血热(HFRS)是一种自然疫源性疾病,四川南充是高发区之一。为了探索肾综合征出血热宿主动物生态,我们于1987年6月至1988年5月在南充进行了研究。本研究共捕鼠7种1677只,其总密度为12.15％(1677/13798)。其中野外捕获781只,密度... 详细信息

肾综合征出血热(HFRS)是一种自然疫源性疾病,四川南充是高发区之一。为了探索肾综合征出血热宿主动物生态,我们于1987年6月至1988年5月在南充进行了研究。本研究共捕鼠7种1677只,其总密度为12.15％(1677/13798)。其中野外捕获781只,密度为15.62％;室外362只,密度为9.95％;室内534只,密度为10.35％。野外以四川短尾鼩和黑线姬鼠为优势种,分别占66.91％和26.50％;室内以褐家鼠为优势种占77.15％。用间接免疫荧光技术检查1477只,有5种鼠携带HFRS病毒,42只鼠带毒,带毒率为2.84％。以黑线姬鼠带毒率为最高6.76％;次为褐家鼠2.42％;四川短尾鼩为1.76％。由此可见该流行区主要宿主动物为黑线姬鼠,褐家鼠和四川短尾鼩。这些鼠种的带毒在自然界中起到储存病原体的重要作用。因此,控制疫区的鼠害对减弱HFRS病毒的传播极为重要。

关键词：出血热宿主动物生态

H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达

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云南大学学报（自然科学版） 2007年第6期29卷 623-627页

作者：王金萍宋建领张文东李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省动物疫病预防控制中心云南昆明650051 成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所云南昆明650032

根据已知H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计、合成克隆引物.自灭活的云南地方H5N1亚型病毒阳性临床组织样品中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNA Poly-merase)扩增HA基因,采用Invitrogen定向表达系统(Champ... 详细信息

根据已知H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计、合成克隆引物.自灭活的云南地方H5N1亚型病毒阳性临床组织样品中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNA Poly-merase)扩增HA基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组HA,分子质量约78 ku.采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组HA的免疫反应性,结果表明重组HA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性.

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型血凝素表达

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扩大艾滋病检测促进早检测专家共识

中国艾滋病性病 2021年第11期27卷 1202-1206页

作者：韩孟杰金聪李敬云钟平潘晓红吴国辉梁姝于茂河刘惠张福杰耿文清蒋岩尚红中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 上海市疾病预防控制中心上海200051 浙江省疾病预防控制中心杭州310051 重庆市疾病预防控制中心重庆400042 四川省疾病预防控制中心成都610044 天津市疾病预防控制中心天津300011 首都医科大学附属北京地坛医院北京100102 中国医科大学附属第一医院沈阳110001

艾滋病是世界范围内流行的以经性传播为主的重大慢性传染病,对人类健康构成严重威胁。2020年全球有150万HIV新发感染和68万艾滋病相关死亡,存活HIV感染者中有16%未被检测发现,27%未接受抗病毒治疗,34%未得到有效病毒抑制[1]。2020年我... 详细信息

艾滋病是世界范围内流行的以经性传播为主的重大慢性传染病,对人类健康构成严重威胁。2020年全球有150万HIV新发感染和68万艾滋病相关死亡,存活HIV感染者中有16%未被检测发现,27%未接受抗病毒治疗,34%未得到有效病毒抑制[1]。2020年我国尚有约20%的HIV感染者不知道自己的感染状况,高于全球平均水平(根据中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心2020年疫情估计结果)。尽早发现感染者、尽快开展抗病毒治疗,实现有效病毒抑制是全球终结艾滋病流行的重要策略。

关键词：艾滋病病毒感染扩大检测早检测专家共识