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急、慢性肾损伤患者血清中生物标志物的研究与验证

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中国病理生理杂志 2024年第2期40卷 335-342页

作者：丁璐刘胜胡波中山大学附属第三医院检验科广东广州510000

目的:探讨血清中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及其他生物标志物在急、慢性肾损伤患者中的临床应用价值。方法:选取2022年1月~2023年7月在广州市中山大学附属第三医院就诊的急性... 详细信息

目的:探讨血清中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及其他生物标志物在急、慢性肾损伤患者中的临床应用价值。方法:选取2022年1月~2023年7月在广州市中山大学附属第三医院就诊的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者171例及慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者209例。收集各组成员的钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、二氧化碳(CO_(2))、尿素(Urea)和葡萄糖(GLU)数据。选取同时期健康体检者94例作为健康对照组,并用胶乳免疫比浊法检测3组成员血清中的NGAL水平。分析血清NGAL和其他生物标志物在鉴定急性和慢性肾损伤中的诊断有效性。采用多因素logistic回归方程分析影响AKI和CKD患者发生的因素。此外,还构建了受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,以评估这些生物标志物在肾损伤患者中的临床意义。结果:通过生物信息学分析,提示NGAL可能是肾损伤的检测标志物。一般资料显示,在AKI组及CKD组中,K、Na、CO_(2)、Urea、GLU和NGAL水平均高于健康对照组(P<0.05)。多因素logistic回归方程分析显示,Na、Urea、GLU和NGAL水平均为AKI或者CKD疾病发生的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,在AKI组中,Na、Urea、GLU和NGAL的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.711、0.960、0.793和0.841(P<0.01);在CKD组中,Na、Urea、GLU和NGAL的AUC分别为0.681、0.990、0.703和0.930(P<0.01)。NGAL和Urea联合诊断AKI的灵敏度和特异性分别是81.9%和61.1%,诊断CKD的灵敏度和特异性分别是62.7%和80.0%。结论:血清NGAL可作为急、慢性肾损伤的指标,联合其他生物标志物在急、慢性肾损伤中也有一定的临床应用价值。

关键词：中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白生物标志物急性肾损伤慢性肾脏病

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喹诺酮类耐药肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶突变和外排泵表达

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中国抗生素杂志 2024年

作者：易星驰张利霞李宏雨王曼卿包头医学院第一附属医院检验科

目的探究喹诺酮类耐药肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶突变和外排泵基因表达发生率，并与喹诺酮类药物左氧氟沙星(levofloxacin,LVX)的耐药相关性。方法收集2022年7月—2023年6月临床分离的67株屎肠球菌与17株粪肠球菌。用琼脂稀释法测定肠球菌... 详细信息

目的探究喹诺酮类耐药肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶突变和外排泵基因表达发生率，并与喹诺酮类药物左氧氟沙星(levofloxacin,LVX)的耐药相关性。方法收集2022年7月—2023年6月临床分离的67株屎肠球菌与17株粪肠球菌。用琼脂稀释法测定肠球菌对LVX的最低抑菌浓度，并用PCR扩增外排泵基因emeA、efrA、efmA和Ⅱ型拓扑异构酶gyrA与parC基因，并对gyrA和parC基因进行测序分析。结果屎肠球菌LVX耐药率为89.6%(60/67)，有61株发生gyrA突变，62株发生parC突变。粪肠球菌LVX耐药率为32.9%(6/17)，有8株发生gyrA突变，10株发生parC突变。而总体外排泵检出率efmA基因(59, 70.2%)、efrA(53,63.1%)、emeA(24, 28.6%)，共同表达主要发生在efmA+efrA/B(30, 35.7%)，而3种外排泵PCR同步扩增为14.3%(12/84)。结论 Ⅱ型拓扑异构酶gyrA与parC碱基突变在耐喹诺酮类肠球菌株中非常普遍，并为肠球菌对喹诺酮类药物耐药的主要机制，而外排泵基因的检出率提示该地区肠球菌耐药由外排泵基因引起的可能性。

关键词：喹诺酮类药物 gyrA和parC基因耐药性外排泵

利福平降低hvKP毒力的机制及联合CRO的体内外抗菌活性研究

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中国抗生素杂志 2024年第8期49卷 903-910页

作者：张宗伟张诗萌温海楠王惠张盼梁悦怡谢守军承德医学院附属医院南区检验科承德067000

目的探索利福平(RFP)降低高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)荚膜合成的抗毒力能力及其与头孢曲松(CRO)联合用药的体内外抗菌效果。方法在2021年承德医学院附属医院分离的肺炎克雷伯菌中筛选出4株符合hvKP判定标准的临床菌株,使用PCR方法测定... 详细信息

目的探索利福平(RFP)降低高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)荚膜合成的抗毒力能力及其与头孢曲松(CRO)联合用药的体内外抗菌效果。方法在2021年承德医学院附属医院分离的肺炎克雷伯菌中筛选出4株符合hvKP判定标准的临床菌株,使用PCR方法测定菌株的荚膜血清型,并使用多位点序列分型方法对菌株进行基因分型。采用荚膜多糖定量、墨汁染色、荧光定量PCR等方法分析RFP作用前后hvKP菌株荚膜含量、荚膜直径以及荚膜相关基因表达量的变化。在此基础上检测RFP与CRO联合用药的体外抗菌效果,并建立大蜡螟感染模型,分析二者联合使用的体内抗菌疗效。结果在筛选的4个hvKP菌株中,10号和35号菌株均为K1-ST23型,12号菌株为K57-ST592型,96号菌株为K5-ST485型。1/4 MIC浓度的RFP可以在不明显影响细菌生长的情况下显著降低荚膜多糖含量(P<0.05),减小荚膜直径(P<0.001)并下调荚膜合成相关基因的转录水平(P<0.001)。4个菌株RFP和CRO联合药敏试验结果FIC指数均表现为协同或部分协同效应,且hvKP感染后的大蜡螟幼虫经CRO+1/4MIC RFP治疗后,生存率明显高于CRO单药治疗时的生存率(P<0.05)。结论利福平具有抑制hvKP荚膜合成的抗毒力能力并可通过减少黏液生成增强药物渗透性而提高抗菌药物疗效。

关键词：高毒力肺炎克雷伯菌利福平抗毒力联合用药

E3泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白调控RLR信号通路抑制肠道病毒71型复制

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第8期44卷 706-712页

作者：杨歆煜臧利超彭阳蒋丽娟马锦洪史伟峰周围苏州大学附属第三医院医学检验科常州213003 宁波大学附属第一医院临床检验科宁波315010

目的探讨斑点型锌指结构蛋白[speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein)protein,SPOP]在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法免疫共沉淀分析SPOP对EV71非结构蛋白2A蛋白酶(2Apro)泛素化水平的影响,Western blot检测干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平,过表达或敲低细胞中SPOP后感染EV71,RT-qPCR分析IFN-β转录水平,RT-qPCR和Western blot检测EV71结构蛋白VP1的转录水平及蛋白质水平。结果过表达HA-SPOP后感染EV71,发现EV71感染RD细胞受抑,同时EV71-2Apro的泛素水平呈HA-SPOP梯度依赖增多。转染shSPOP质粒进行内源性SPOP敲低后,黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、接头蛋白线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)水平呈剂量依赖地减少,而转染HA-SPOP质粒后,MDA5、MAVS、p-IRF3蛋白质水平呈剂量依赖地增加。SPOP高、低表达促进或降低EV71感染的细胞表达IFN-βmRNA,同时抑制和增加VP1在mRNA或蛋白质水平表达。结论SPOP可提高EV71-2Apro的泛素化水平从而促进2Apro降解,推测SPOP可通过抑制2Apro对视黄酸诱导基因蛋白-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体(RLR)信号通路中关键分子MAVS和MDA5的降解,从而上调IRF3磷酸化水平促进IFN-β释放,最终活化宿主细胞抗病毒固有免疫抑制EV71复制。

关键词：斑点型锌指结构蛋白肠道病毒71型 RLR信号通路

加味芍药甘草汤含药血清对子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞迁移、侵袭和血管生成的影响

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中药药理与临床 2024年

作者：温小慧刘学红黄诗雅李坤寅关永格广州中医药大学第三临床医学院广州中医药大学第三附属医院

目的：通过体外实验探讨加味芍药甘草汤对子宫腺肌病（Adenomyosis，AM）异位子宫内膜间质细胞（Endometrial stromal cells，EScs）的迁移、侵袭和血管生成过程的影响。方法：原代收集、培养并分离EScs，利用细胞免疫组化法进行细胞鉴... 详细信息

目的：通过体外实验探讨加味芍药甘草汤对子宫腺肌病（Adenomyosis，AM）异位子宫内膜间质细胞（Endometrial stromal cells，EScs）的迁移、侵袭和血管生成过程的影响。方法：原代收集、培养并分离EScs，利用细胞免疫组化法进行细胞鉴定，通过Transwell迁移、侵袭实验检测加味芍药甘草汤对EScs迁移、侵袭能力的影响，通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测EScs中血管生成相关因子mRNA的表达，通过免疫荧光标记细胞中微血管密度（Microvascular density，MVD）。结果：收集、培养并分离的6例人AM原代细胞均为EScs。与空白对照组相比，1.69 g/kg加味芍药甘草汤10%含药血清组和地诺孕素组的细胞迁移和侵袭能力均显著降低（P<0.01），加味芍药甘草汤10%含药血清组Vegf、Hif-1α、Pdgf、Ang、Fgf1和Fgf2的mRNA表达明显下调（P<0.05或P<0.01），MVD免疫荧光明显降低（P<0.05），地诺孕素组Vegf、Pdgf、Ang和Fgf1的mRNA表达明显下调（P<0.05或P<0.01）；与正常对照血清组相比，加味芍药甘草汤10%含药血清组和地诺孕素组的细胞迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05或P<0.01），加味芍药甘草汤10%含药血清组Fgf1和Fgf2的mRNA表达明显下调（P<0.05），地诺孕素组Ang的mRNA表达明显下调（P<0.05）。结论：所获细胞为EScs，加味芍药甘草汤含药血清可以限制EScs的迁移、侵袭能力，抑制血管生成相关因子的表达。

关键词：加味芍药甘草汤子宫腺肌病迁移侵袭血管生成

骨质疏松症的表观遗传学机制及中药干预作用的研究

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中国骨质疏松杂志 2024年第10期30卷 1513-1517,1523页

作者：张宇楷田瀚张银银钟业霖熊诗硕李启活郭海威黄宏兴李颖广州中医药大学第三临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第三附属医院广东广州510378

骨质疏松症是以骨骼微环境中成骨细胞活性降低,骨髓脂肪过度发育以及破骨细胞过度活化为特征的代谢性骨疾病。骨质疏松症发生与多种遗传基因的调控有关,表观遗传学机制发挥重要作用。目前已有多项实验表明中医药通过影响表观遗传机制进... 详细信息

骨质疏松症是以骨骼微环境中成骨细胞活性降低,骨髓脂肪过度发育以及破骨细胞过度活化为特征的代谢性骨疾病。骨质疏松症发生与多种遗传基因的调控有关,表观遗传学机制发挥重要作用。目前已有多项实验表明中医药通过影响表观遗传机制进而影响骨质疏松症的发生发展。笔者通过对相关文献进行综述,对表观遗传学机制与骨质疏松症的关系以及中医药干预表观遗传学机制防治骨质疏松的研究进行总结性梳理,以期为临床中医药治疗骨质疏松提供一定的思路及借鉴。

关键词：骨质疏松症表观遗传学中药

壮骨强肌方对去势大鼠骨密度及IL-17的影响

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中国骨质疏松杂志 2024年第1期30卷 62-69页

作者：东智卓玛杨彬彬林适唐子佳吴建军谭国志杨昊霖赵瑞杨东升钟业霖万雷黄宏兴广州中医药大学第三临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第三附属医院广东广州510378

目的探讨壮骨强肌方对去卵巢大鼠骨密度及IL-17的影响。方法30只SPF级6月龄雌性SD大鼠按随机数字表分为Sham组(假手术组,n=9)和模型组(n=21),模型组予以双侧输卵管结扎并卵巢切除,Sham组切除卵巢周围等体积脂肪组织,12周后两组各随机抽... 详细信息

目的探讨壮骨强肌方对去卵巢大鼠骨密度及IL-17的影响。方法30只SPF级6月龄雌性SD大鼠按随机数字表分为Sham组(假手术组,n=9)和模型组(n=21),模型组予以双侧输卵管结扎并卵巢切除,Sham组切除卵巢周围等体积脂肪组织,12周后两组各随机抽取3只大鼠检测腰椎骨密度验证造模。造模成功后,将模型组大鼠按照随机数字表分为OVX组(模型对照组)、ZGQJ组(壮骨强肌方组)和Alen组(阿仑膦酸钠组),每组6只。ZGQJ组予以壮骨强肌方,Alen组予以阿仑膦酸钠,OVX组和Sham组大鼠予以等体积生理盐水,均灌胃给药,连续给药12周后取材。DEXA检测腰椎骨密度、Micro-CT检测胫骨骨小梁微结构、股骨HE染色、血清IL-17检测、胫骨IL-17免疫荧光染色,脾脏HE及IL-17免疫组化染色。结果与OVX组比较,ZGQJ组与Alen组腰椎BMD增高(P<0.05),ZGQJ组与Alen组胫骨BV/TV、Tb.N及***增高(P<0.05)且***降低(P<0.05),ZGQJ组与Alen组股骨HE染色骨小梁面积增多(P<0.05),ZGQJ组与Alen组血清Elisa检测IL-17水平降低(P<0.05),ZGQJ组胫骨免疫荧光染色IL-17表达降低(P<0.05),ZGQJ组脾脏HE染色组织病理结构改善,ZGQJ组脾脏指数提高(P<0.05),ZGQJ组脾脏免疫组化染色IL-17表达降低(P<0.05)。结论中药壮骨强肌方具有提高去卵巢大鼠腰椎骨密度、改善胫骨及股骨骨小梁结构、降低IL-17表达及改善脾脏免疫功能的作用。

关键词：去卵巢大鼠壮骨强肌方白细胞介素-17 脾免疫骨密度

胫骨平台下低密度区骨量及体积对下肢力线影响的有限元分析

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中国修复重建外科杂志 2024年第6期38卷 734-741页

作者：韩龙飞林天烨何敏聪何晓铭詹芝玮陆舜曾子俊林锟田佳庆侯文渊魏腾飞魏秋实广州中医药大学第三临床医学院广州510405 广东省中医骨伤研究院广州510378 广州中医药大学第三附属医院关节中心广州510378 中医证候全国重点实验室/骨科广州中医药大学第三附属医院广州510378

目的采用有限元分析胫骨平台下低密度区骨量及体积对下肢力线的影响,为临床上胫骨平台下骨量减少的膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者预防下肢力线内移合并膝关节内翻提供力学证据。方法选取1名健康成人为研究对象,获取其X... 详细信息

目的采用有限元分析胫骨平台下低密度区骨量及体积对下肢力线的影响,为临床上胫骨平台下骨量减少的膝关节骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)患者预防下肢力线内移合并膝关节内翻提供力学证据。方法选取1名健康成人为研究对象,获取其X线片和CT影像数据并导入Mimics 21.0软件,重建完整膝关节模型及3个体积相等、形态不同的胫骨平台下低密度区模型,导入Solidworks 2023软件中进行模型装配、验证。分别构建胫骨平台下低密度区骨量减少22%、33%、44%、55%、66%的5个KOA有限元模型及骨量减少66%的低密度区模型等比例缩放81%、90%、100%、110%、121%的5个KOA有限元模型。根据生理状态下人体下肢负荷情况,胫、腓骨远端设置完全固定,在股骨头表面主要负重区施加沿下肢力线方向、大小为1860 N的轴向压强载荷,利用有限元分析软件Abaqus 2022计算分析胫骨平台内侧最大应力及胫骨皮质骨、松质骨最大位移,进而预测下肢力线改变趋势。结果构建的KOA模型符合下肢正常解剖结构。在相同边界条件、相同载荷情况下,随着胫骨平台下低密度区骨量逐渐减少,以及胫骨平台下低密度区体积逐渐增大,胫骨内侧平台最大应力及胫骨皮质骨、松质骨最大位移均随之增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论胫骨平台下出现低密度区提示膝内翻及下肢力线内移可能性增加,且低密度区体积和骨量减少程度是关键促发因素,可指导临床医生提前预防,避免膝内翻发生。

关键词：膝关节骨关节炎下肢力线低密度区膝内翻有限元分析

Beclin 1基因突变对成骨细胞自噬-凋亡表达的影响

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中国骨质疏松杂志 2024年第6期30卷 790-795,812页

作者：赵瑞林燕平黄佳纯杨昊霖黄宏兴张志海万雷李颖杨志杰吴建军陈桐莹广州中医药大学第三临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第三附属医院广东广州510378

目的观察Beclin 1野生型、突变型质粒对成骨细胞自噬-凋亡表达的影响。方法采用原代分离培养的大鼠颅骨成骨细胞,构建Beclin 1突变型质粒转染成骨细胞(MUT)和野生型质粒转染成骨细胞(WT),使用自噬激活剂rapamycin(Rapa)、自噬抑制剂Baf-... 详细信息

目的观察Beclin 1野生型、突变型质粒对成骨细胞自噬-凋亡表达的影响。方法采用原代分离培养的大鼠颅骨成骨细胞,构建Beclin 1突变型质粒转染成骨细胞(MUT)和野生型质粒转染成骨细胞(WT),使用自噬激活剂rapamycin(Rapa)、自噬抑制剂Baf-A1(Baf)和Beclin1/Bcl2结合抑制剂mifepristone(Mif)干预细胞,分为NC组、Beclin1 WT组、Beclin1 WT+Baf-A1组、Beclin1 WT+mif组、Beclin1 Mut组、Beclin1 Mut+Rapa组。使用免疫共沉淀检测Beclin1-Bcl2复合物结合水平,通过MDC染色、溶酶体染色、流式检测、线粒体膜电位检测、Hoechest染色、免疫荧光、WB分别检测成骨细胞的自噬和凋亡表达情况。结果免疫共沉淀检测:与NC组相比,MUT组中Beclin1-Bcl2复合物水平显著降低(P<0.05);MDC染色显示:相对于NC组,WT细胞中溶酶体染色明显增加;细胞凋亡方面:与NC组相比,WT组、WT+Mif组细胞凋亡率显著上升,MUT细胞凋亡率低于WT细胞,比较差异具有统计学意义;JC-1检测显示:与NC组相比,WT细胞的线粒体跨膜电位异常改变,而MUT细胞样本的跨膜电位表达活跃。结论①Beclin 1的过表达可以抑制Beclin 1-Bcl2复合物的生成;②Beclin 1是参与自噬的重要基因,适度的Bcilin 1表达有利于维持细胞群的代谢平衡,Beclin 1的过表达对细胞自噬无明显影响;③Beclin 1过表达能抑制成骨细胞凋亡。

关键词： Beclin 1 骨代谢成骨细胞自噬细胞凋亡