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基于粪便代谢组学与燥性相关性探究岭南特色饮片制枳壳的炮制缓燥作用

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中国中药杂志 2023年第1期48卷 82-95页

作者：黄莹莹杨婷王琪琪龙江玲李沁如徐启键黄爱华汪金玉夏荃广州中医药大学中药学院广东广州510006

该研究采用非靶向代谢组学与相关性分析方法,比较生、制枳壳对健康大鼠的粪便内源性代谢差异,初步探究岭南特色饮片制枳壳炮制缓燥的作用机制。将18只SD大鼠随机分为空白组(C组)、生枳壳组(RAF组,10 g·kg^(-1))、制枳壳组(PAF组,10 g·... 详细信息

该研究采用非靶向代谢组学与相关性分析方法,比较生、制枳壳对健康大鼠的粪便内源性代谢差异,初步探究岭南特色饮片制枳壳炮制缓燥的作用机制。将18只SD大鼠随机分为空白组(C组)、生枳壳组(RAF组,10 g·kg^(-1))、制枳壳组(PAF组,10 g·kg^(-1)),灌胃7 d后,比较生、制枳壳对大鼠饮水量、粪便含水率、唾液分泌量、颌下腺水通道蛋白5(AQP5)、血管活性肠肽(VIP)、5-羟色胺(5-HT)以及结肠水通道蛋白3(AQP3)、VIP、5-HT等燥性相关指标的影响。采用LC-MS技术对各组粪便样本进行测定,利用多元统计分析结合Pearson相关系数进行模式分析,筛选制枳壳炮制缓燥的差异代谢物及相关代谢通路。结果表明生、制枳壳均有一定的燥性,生枳壳的燥性更为明显,而制枳壳能有效降低饮水量、粪便含水率、结肠AQP3、VIP、5-HT水平;升高唾液分泌量、颌下腺AQP5、VIP、5-HT的含量,缓和一定的燥性。经粪便代谢组学分析,生枳壳组与制枳壳组分别有99、58个与燥性相关的代谢物,其中有16个代谢物对制枳壳缓和燥性有显著的贡献。通路分析显示,制枳壳缓和燥性的作用机制可能与调节核黄素代谢,嘌呤代谢,精氨酸生物合成,嘧啶代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,视黄醇代谢等通路有关。该研究提示制枳壳炮制后可能通过影响机体代谢水平从而缓和燥性,为进一步阐明制枳壳的炮制作用机制提供了新的依据。

关键词：枳壳制枳壳粪便代谢组学燥性炮制机制

马铃薯根系分泌物对肉桂酸胁迫下穿心莲幼苗的化感效应研究

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广西植物 2024年

作者：郑健云洪林兰顾元钦黄瑾胡静雯丁妹杜勤广州中医药大学中药学院

为探明马铃薯-穿心莲轮作系统中马铃薯根系分泌物对酚酸类化感物质的影响机制，验证马铃薯-穿心莲轮作模式的可行性，该研究以穿心莲种子为材料，探究马铃薯根系分泌物对肉桂酸胁迫下穿心莲种子萌发、根边缘细胞形态和根尖抗氧化酶活性... 详细信息

为探明马铃薯-穿心莲轮作系统中马铃薯根系分泌物对酚酸类化感物质的影响机制，验证马铃薯-穿心莲轮作模式的可行性，该研究以穿心莲种子为材料，探究马铃薯根系分泌物对肉桂酸胁迫下穿心莲种子萌发、根边缘细胞形态和根尖抗氧化酶活性的影响。结果表明：(1)在0.4 mmol·L-1肉桂酸胁迫下，添加不同浓度的马铃薯根系分泌物，均能够促进穿心莲种子各萌发指标化感效应指数的提升，以分泌物浓度为25 mg·mL-1的促进效果最佳。(2)相较于肉桂酸处理组，添加马铃薯根系分泌物显著提高了穿心莲根边缘细胞的数量和活率，降低了凋亡率和黏胶层厚度(P<0.05)。(3)马铃薯根系分泌物处理后，穿心莲根尖超氧化物歧化酶、过氧化物酶活、过氧化氢酶活性、丙二醛含量均显著下降，根系活力显著上升(P<0.05)。综上表明，马铃薯根系分泌物通过减轻穿心莲根边缘细胞的化感胁迫，降低幼苗根尖氧化损伤程度的方式提高了穿心莲萌发与幼苗时期对肉桂酸的耐受能力，缓解肉桂酸对穿心莲幼苗生长的化感抑制作用。该研究结果为马铃薯-穿心莲轮作模式的合理性提供了理论依据。

关键词：穿心莲马铃薯根系分泌物化感作用根边缘细胞肉桂酸轮作

古方黄芪散调控AMPK/mTOR自噬信号通路改善肝脏脂肪变性的机制

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中国实验方剂学杂志 2023年第10期29卷 21-30页

作者：冯雯敏苏安宇黄小玲王春怡广州中医药大学中药学院广州510006

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨古方黄芪散调节自噬减轻小鼠肝脏脂肪变性改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法:通过数据库收集黄芪散主要化学成分及NAFLD相关靶点,对交集靶点进... 详细信息

目的:基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,探讨古方黄芪散调节自噬减轻小鼠肝脏脂肪变性改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法:通过数据库收集黄芪散主要化学成分及NAFLD相关靶点,对交集靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析、构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行体内实验验证。雄性C57BL/6J小鼠60只,适应性喂养1周后随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1))、黄芪散低、高剂量组(0.5、1 g·kg^(-1),每组12只。采用高脂饮食(HFD)诱导小鼠NAFLD模型,造模的同时灌胃给药13周,每天1次。通过检测随机血糖、血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和肝脏中TG含量;称量肝脏湿重并计算肝指数;采用苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色、透射电子显微镜(TEM)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)对C57BL/6J小鼠进行动物体内药效验证和机制探讨。结果:通过网络药理学分析,结合前期研究基础,预测黄芪散可能通过AMPK/mTOR自噬信号通路改善NAFLD。体内实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠随机血糖、体质量、血清中TC、LDL-C和NEFA、肝脏湿重、肝指数和肝脏TG含量显著升高(P<0.01),小鼠肝脏增大,HE染色可见小鼠肝脏脂滴(LDs)大量空泡化,油红O染色显示肝细胞脂肪堆积,透射电镜未见明显自噬体和自噬溶酶体,微管相关蛋白1轻链3(LC3)A、LC3B、AMPKα1 mRNA表达和AMPK、磷酸化(p)-AMPK、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下调(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ、p-mTOR蛋白水平显著上调(P<0.01)。与模型组比较,黄芪散低、高剂量组小鼠体质量、肝脏湿重、血清TG、NEFA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),HE染色和油红O染色显示肝脏病理改变得到改善,肝脏透射电镜可见少量自噬溶酶体和自噬小体;黄芪散低剂量组肝指数显著降低(P<0.01),黄芪散高剂量组随机血糖、血清TC水平、肝脏TG含量明显降低(P<0.05);Western blot和Real-time PCR结果显示,黄芪散低、高剂量组LC3A、LC3B mRNA和LC3Ⅱ/Ⅰ、p-AMPK、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著上调(P<0.01),p62 mRNA和p62、p-mTOR蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪散可能通过AMPK/mTOR信号通路促进自噬和恢复自噬通量,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

关键词：黄芪散非酒精性脂肪肝网络药理学腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 自噬

桦木酸通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及自噬

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中国实验方剂学杂志 2022年第14期28卷 99-106页

作者：卓清缘陈美先王羚郦广州中医药大学中药学院广州510006

目的:研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,确定最佳给药时间及给药浓度,用于后... 详细信息

目的:研究桦木酸对人结肠癌细胞SW620凋亡和自噬的影响及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的调控作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,确定最佳给药时间及给药浓度,用于后续实验;设置空白组、桦木酸低、中、高浓度组。采用苏木素-伊红(HE)染色观察桦木酸对SW620细胞形态的影响。采用Annexin-V/碘化丙啶(PI)双染法检测SW620细胞凋亡率。分别采用Hoechst33258染色及细胞自噬染色(MDC)观察细胞凋亡和自噬体发生情况。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3),微管相关蛋白Ⅰ轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬关键分子酵母Atg6同系物-1(Beclin-1)、p62、磷酸化(p)-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果:桦木酸以浓度、时间依赖性的方式抑制SW620、HT29、HCT116细胞的活性;与桦木酸给药24 h比较,W620、HT29、HCT116细胞给药48 h细胞活性明显降低(P<0.05,P<0.01),给药48 h的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),其中SW620细胞给药48 h的IC;最小。HE染色、Hoechst33258染色显示,桦木酸组可见浓度依赖性细胞凋亡;MDC染色可见细胞自噬体数量增加。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与空白组比较,桦木酸低、中、高浓度组Bax、Caspase-9、cleaved Caspase-3、LC3Ⅱ蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),桦木酸中、高浓度组Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.01);桦木酸低、中、高浓度组p62、p-Akt、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:桦木酸对SW620细胞活性有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路从而诱导人结肠癌细胞SW620的凋亡及自噬有关。

关键词：桦木酸磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路结肠癌细胞 SW620 凋亡自噬

柴胡疏肝散中色氨酸-2,3-双加氧酶抑制剂的筛选及抗抑郁药效研究

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中草药 2023年第9期54卷 2812-2821页

作者：吴萍洲梁晓霞王术玲广州中医药大学中药学院广东广州510000

目的筛选柴胡疏肝散中抑制色氨酸-2,3-双加氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase,TDO)表达的活性组分,探寻其抗抑郁药效作用。方法双荧光素酶报告基因法检测化合物对TDO表达的影响;分子对接虚拟评价化合物与TDO的结合能力,TDO过表达人肝癌He... 详细信息

目的筛选柴胡疏肝散中抑制色氨酸-2,3-双加氧酶(tryptophan-2,3-dioxygenase,TDO)表达的活性组分,探寻其抗抑郁药效作用。方法双荧光素酶报告基因法检测化合物对TDO表达的影响;分子对接虚拟评价化合物与TDO的结合能力,TDO过表达人肝癌HepG2细胞株检测其抑制活性;制备柴胡疏肝散各单味药的含药血清,验证抑制TDO的显效药味;将吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)过表达慢病毒感染人源结肠癌Caco-2细胞,检测活性组分的IDO抑制活性。采用三联一复合应激法构建抑郁样小鼠模型,通过行为学观察、LC-MS/MS检测血浆中犬尿氨酸含量、Western blotting和qRT-PCR检测TDO、IDO表达等技术评价活性组分的抗抑郁作用。结果双荧光素酶报告基因法筛选出芍药苷、橙皮苷、辛弗林、刺芒柄花苷均可抑制TDO表达(P<0.05、0.01);分子对接发现上述4种化合物对TDO有亲和性;过表达细胞株证实芍药苷可抑制TDO和IDO的表达(P<0.01、0.001),刺芒柄花苷选择性抑制TDO表达(P<0.001);抑郁样小鼠在给予芍药苷、刺芒柄花苷或两药联用后,糖水偏嗜显著升高(P<0.001),悬尾不动时间明显减少(P<0.001),游泳不动时间明显减少(P<0.05、0.001),自主活动显著增多,TDO表达明显降低(P<0.05、0.01),血中犬尿氨酸含量显著减少(P<0.05)。结论芍药苷和刺芒柄花苷均可通过抑制TDO表达发挥抗抑郁作用。

关键词：柴胡疏肝散色氨酸2,3-双加氧酶抑制作用芍药苷刺芒柄花苷抑郁症

海绵共附生真菌Aspergillus giganteus MA 46-5吲哚喹唑啉类生物碱成分

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中山大学学报（自然科学版）（中英文） 2023年第4期62卷 83-92页

作者：周逢国蒋伟欣卢欢陈乐怡林昕历何璐萍何细新张翠仙广州中医药大学中药学院广东广州510006

对1株富产吲哚喹唑啉类生物碱(IQAs)的海绵共附生真菌Aspergillus giganteus MA 46-5的IQAs类成分进行了研究。根据IQAs的结构特征,在TLC、LC-MS和GNPS(global natural products social molecular networking)技术的共同指导下,从大米培养基的乙酸乙酯部位分离得到10个IQAs类生物碱。通过NMR、HR-ESI-MS、OR和CD等方法并结合文献比对鉴定其分别为:tryptoquivaline(1)、nortryptoquivaline(2)、deoxytryptoquivaline(3)、deoxynortryptoquivaline(4)、aspertoryadin C(5)、aspertoryadin G(6)、quinadoline A(7)、fiscalin E (8)、quinadoline B(9)和prelapatin B(10)。8和10为首次从Aspergillus属中得到,2、4~7为首次从Aspergillus giganteus中分离得到。

关键词：海绵共附生真菌 Aspergillus giganteus MA 46-5 吲哚喹唑啉类生物碱

四逆散调控GSK-3β/A20/C/EBPβ抑制小胶质细胞激活改善抑郁模型小鼠抑郁样行为

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 16-23页

作者：陈虹云杨东英廖回庆曾妍妍潘琳可白莎莎邓迪史亚飞张荣杨蕾广州中医药大学中药学院广州510006

目的:探讨四逆散通过调控糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3(A20)/CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)抑制小胶质细胞激活发挥抗抑郁作用。方法:将72只雄性C57/6J小鼠随机分出正常组、模型组、氟西汀组(5.0 mg·kg^(-... 详细信息

目的:探讨四逆散通过调控糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3(A20)/CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)抑制小胶质细胞激活发挥抗抑郁作用。方法:将72只雄性C57/6J小鼠随机分出正常组、模型组、氟西汀组(5.0 mg·kg^(-1))、四逆散低、中、高剂量组(4.9、9.8、19.6 g·kg^(-1)),每组12只。适应性喂养1周后,采用慢性不可预知温和应激(CUMS)建立抑郁模型,第5周开始进行药物治疗4周。第9周进行行为学实验,包括蔗糖偏好实验、旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮质白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、一氧化氮合酶(iNOS)炎症蛋白的表达水平和GSK-3β、A20、C/EBPβ的表达水平。利用免疫荧光法检测皮质小胶质细胞的M1型极化标志物离子钙结合衔接分子1(Iba1)和巨噬细胞抗原(CD68)的荧光表达。结果:CUMS造模8周后,与正常组比较,模型组小鼠蔗糖偏好率显著降低(P<0.01),旷场实验中央区域活动显著减少(P<0.01),在高架十字迷宫实验开臂区域的活动明显减少(P<0.05),强迫游泳的不动时间显著增加(P<0.01);炎症蛋白IL-1β、IL-6、iNOS的表达水平显著升高(P<0.01),Iba1和CD68的荧光共定位的指数升高(P<0.05);GSK-3β蛋白表达水平升高(P<0.05),C/EBPβ蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。药物干预4周后,与模型组比较,四逆散组小鼠糖水偏好率显著提高(P<0.01),旷场实验和高架十字迷宫实验中在中央区域和开臂区域的活动明显增加(P<0.05),四逆散中、高剂量组小鼠在强迫游泳实验中不动时间显著减少(P<0.01);IL-1β、IL-6、iNOS的蛋白表达水平明显下降(P<0.05),四逆散高剂量组Iba1和CD68的荧光共定位的指数明显下降(P<0.05);四逆散中、高剂量组GSK-3β、C/EBPβ的蛋白表达水平显著下降(P<0.01),A20的蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:四逆散抗抑郁作用与调控GSK-3β/A20/C/EBPβ蛋白的表达,抑制小胶质细胞M1型激活有关。

关键词：抑郁症慢性不可预知温和应激(CUMS) 小胶质细胞四逆散神经炎症

6-姜烯酚介导Hedgehog/Gli1通路对三阴性乳腺癌细胞侵袭及迁移作用机制

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中国药理学通报 2022年第3期38卷 373-379页

作者：林嘉怡柯乔丹吴锦如李梦杰黄霞胡晨霞广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的研究Hedgehog(Hh)通路转录因子Gli1表达及6-姜烯酚介导Hh/Gli1通路对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及分子机制。方法应用慢病毒建立过表达Gli1基因MDA-MB-231稳转细胞株;qRT-PCR及Western blot实验验证Gli... 详细信息

目的研究Hedgehog(Hh)通路转录因子Gli1表达及6-姜烯酚介导Hh/Gli1通路对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响及分子机制。方法应用慢病毒建立过表达Gli1基因MDA-MB-231稳转细胞株;qRT-PCR及Western blot实验验证Gli1过表达效率;CCK-8和EdU实验检测Gli1表达及6-姜烯酚对细胞活力的影响;细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测Hh通路相关基因蛋白表达水平。结果成功建立MDA-MB-231-Gli1过表达稳转细胞株,当Gli1基因过表达时,细胞侵袭迁移能力明显提高,MDA-MB-231细胞中Hh通路基因Gli1,EMT标志基因Vimentin及Hippo通路基因YAP、TEAD4表达升高;应用Hh/Gli通路抑制剂Gant61抑制Gli1表达时,增殖、侵袭、迁移能力降低。应用6-姜烯酚处理细胞其增殖及侵袭迁移能力减弱,且Hh通路基因Gli1、Vimentin、YAP、TEAD4蛋白表达降低。结论Gli1基因能促进MDA-MB-231细胞侵袭迁移能力;6-姜烯酚能够通过Hedgehog信号通路抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力,转录因子Gli1可能是其作用靶点之一。

关键词： 6-姜烯酚三阴性乳腺癌 Hedgehog信号通路 Gli1 侵袭迁移

基于AHP-熵权法结合正交试验设计优选岭南特色饮片制枳壳的发酵工艺及发酵前后成分对比研究

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中草药 2022年第20期53卷 6443-6450页

作者：杨婷黄莹莹方杨冰龙江玲李沁如徐启键黄爱华张英夏荃广州中医药大学中药学院广东广州510006

目的建立枳壳发酵品中多个成分的含量测定方法,优化岭南特色饮片制枳壳的发酵工艺,并比较枳壳发酵前后的成分变化。方法通过UHPLC测定枳壳发酵品中特征成分含量,在单因素实验的基础上,采用正交试验法考察发酵温度、发酵时间、发酵湿... 详细信息

目的建立枳壳发酵品中多个成分的含量测定方法,优化岭南特色饮片制枳壳的发酵工艺,并比较枳壳发酵前后的成分变化。方法通过UHPLC测定枳壳发酵品中特征成分含量,在单因素实验的基础上,采用正交试验法考察发酵温度、发酵时间、发酵湿度等影响因素,以枳壳发酵品中的10种特征黄酮类成分(包括黄酮苷及苷元)的含量和发酵品的外观性状作为指标,采用层次分析法(analytic hierarchy process,AHP)结合熵权法对这些指标设置不同的权重,并计算复合评分来优选其发酵工艺。结果枳壳的最佳发酵工艺为浸泡时间4 h,发酵时间48 h,发酵温度37℃,发酵湿度90%;枳壳发酵后,黄酮苷类成分的含量下降,黄酮单糖苷和苷元类成分的含量均大幅度增加。结论建立的UHPLC多成分含量测定方法操作简单、准确,优选的枳壳发酵工艺简便、稳定可行,可规范枳壳的发酵工艺,为制枳壳的工业化生产奠定基础。

关键词：枳壳制枳壳中药发酵工艺优化圣草次苷新北美圣草苷芸香柚皮苷柚皮苷橙皮苷新橙皮苷橙皮素-7-O-葡萄糖苷枸橘苷柚皮素橙皮素