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基于NF-κB信号通路探讨参附注射液对糖尿病大鼠心脏保护作用的机制

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中药材 2024年 1-6页

作者：孙晗孙雅楠谌治安刘智长春中医药大学临床医学院药理学教研室

目的:基于NF-κB信号通路探讨参附注射液对糖尿病大鼠心脏的保护作用机制。方法:50只SPF级雄性SD大鼠采用随机数表法将大鼠分为正常对照组、模型组、二甲双胍组及参附注射液低、高剂量组,采用腹腔注射链脲佐菌素联合高脂饲料喂养制备糖... 详细信息

目的:基于NF-κB信号通路探讨参附注射液对糖尿病大鼠心脏的保护作用机制。方法:50只SPF级雄性SD大鼠采用随机数表法将大鼠分为正常对照组、模型组、二甲双胍组及参附注射液低、高剂量组,采用腹腔注射链脲佐菌素联合高脂饲料喂养制备糖尿病模型,通过检测大鼠空腹血糖确保造模成功。检测大鼠心脏指数、血糖、血脂水平;HE染色法观察大鼠心肌组织病理学变化;ELISA法检测大鼠血清CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,免疫荧光染色法检测NF-κB蛋白表达,RT-PCR、Western Blot检测大鼠心肌组织NF-κB P65、Bcl-2、Bax、Caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱、心肌细胞肥大、局部炎性细胞浸润,心肌损伤严重;心肌组织中NF-κB阳性表达升高,血清CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平及心肌细胞凋亡率显著升高,心肌组织Bcl-2 m RNA及蛋白表达显著降低,NF-κB、Bax、Caspase-3 m RNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠心肌损伤减轻;心肌组织中NF-κB阳性表达及血清CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和心肌细胞凋亡率显著降低,心肌组织Bcl-2 m RNA及蛋白表达显著升高,NF-κB、Bax、Caspase-3 m RNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:参附注射液对糖尿病大鼠心脏具有保护作用,能抑制细胞凋亡、减轻炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。

关键词：参附注射液糖尿病 NF-κB信号通路炎症凋亡

黄芩清热除痹胶囊调控p53/p21信号通路延缓骨关节炎大鼠软骨细胞衰老的机制研究

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中国中药杂志 2024年第12期49卷 3330-3339页

作者：周巧刘健朱艳汪元王桂珍万磊黄旦郭锦晨齐亚军胡月迪安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学第二附属医院安徽合肥230061 安徽中医药大学安徽合肥230012

探讨黄芩清热除痹胶囊(HQC)调控肿瘤抑制蛋白53(tumor protein p53,p53)/细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A,p21)通路延缓骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞衰老的机制。碘乙酸钠(MIA)联合外界风湿热环境刺... 详细信息

探讨黄芩清热除痹胶囊(HQC)调控肿瘤抑制蛋白53(tumor protein p53,p53)/细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A,p21)通路延缓骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞衰老的机制。碘乙酸钠(MIA)联合外界风湿热环境刺激,诱导OA大鼠风湿热痹模型,分为正常(Con)组,OA模型(MIA)组,OA模型+风湿热刺激模型(MIA-M)组,MIA-M+HQC低(MIA-M+HQC-L)、中(MIA-M+HQC-M)、高(MIA-M+HQC-H)剂量组,MIA-M+氨基葡萄糖(MIA-M+GS)组,模型制备后灌胃30 d,苏木素-伊红(HE)和番红O固绿(SO)染色观察软骨病理变化,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-1β和IL-6的表达,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和周期,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测基质降解酶13(MMP13)、聚蛋白多糖酶5(ADAMTS-5)、Ⅱ型胶原(COLⅡ)和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA的表达,蛋白免疫印迹(WB)检测p53/p21通路、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(p16)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)蛋白的表达。Con组大鼠关节软骨表面光滑平整,潮线光滑平整;MIA组和MIA-M组软骨层破坏明显,软骨基质减少,MIA-M组情况更严重。HQC高剂量组和MIA-M+GS组软骨表面基本完整,分层清晰。与MIA-M+HQC-H组相比,低、中剂量Mankin′s评分较高,MIA-M+GS组变化不明显。与Con组相比,MIA和MIA-M组软骨细胞G_1的比例升高,S期、G_2期比例下降,细胞凋亡率增加;与MIA-M组相比,HQC各剂量组以浓度依赖的方式抑制细胞凋亡,促进增殖;与MIA-M+HQC-H组相比,高剂量较中、低剂量作用更显著,与MIA-M+GS组相比差异无统计学意义。与Con组相比,MIA和MIA-M组IL-1β和IL-6升高,MMP13和ADAMTS-5 mRNA水平升高,p53、p21、p16和Bax蛋白升高,COLⅡ、TGF-β mRNA水平下降;与MIA-M组相比,HQC和GS药物干预后IL-1β和IL-6下降,MMP13和ADAMTS-5 mRNA、p53、p21、Bax和p16蛋白水平下降,Bcl-2升高;与MIA-M+HQC-H组相比,这些指标改善优于HQC低、中剂量组,与MIA-M+GS组差异不明显。HQC延缓MIA诱导的OA大鼠软骨细胞衰老,抑制炎症反应和细胞外基质(ECM)降解,其机制可能与抑制p53/p21通路有关。

关键词：黄芩清热除痹胶囊骨关节炎风湿热模型细胞衰老 p53/p21

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 108-118页

作者：周巧刘健万磊朱艳齐亚军胡月迪安徽中医药大学第二附属医院安徽合肥230061 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学安徽合肥230012

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502... 详细信息

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

关键词： miR-502-5p 骨关节炎新风胶囊炎症细胞外基质

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黄蒲通窍胶囊改善Wilson病铜负荷大鼠的认知损害:基于抑制内质网应激介导的凋亡途径

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南方医科大学学报 2024年第3期44卷 447-454页

作者：张笑颜王谢王杰邵楠蔡标谢道俊安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一临床医学院安徽合肥230012 安徽中医药大学护理学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一附属医院脑病中心安徽合肥230031

目的探究黄蒲通窍胶囊(HPTQ)对Wilson病(WD)铜负荷大鼠模型的神经保护作用及其可能的作用机制。方法SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、黄蒲通窍胶囊低剂量组(HPTQ-L,0.47 g/kg)、黄蒲通窍胶囊中剂量组(HPTQ-M,1.41 g/kg)、黄蒲通窍胶... 详细信息

目的探究黄蒲通窍胶囊(HPTQ)对Wilson病(WD)铜负荷大鼠模型的神经保护作用及其可能的作用机制。方法SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、黄蒲通窍胶囊低剂量组(HPTQ-L,0.47 g/kg)、黄蒲通窍胶囊中剂量组(HPTQ-M,1.41 g/kg)、黄蒲通窍胶囊高剂量组(HPTQ-H,4.23 g/kg)、青霉胺组(PCA,0.09 g/kg),10只/组。通过含铜(1 g/kg)饲料、含铜(0.185%)水喂养12周构建WD铜负荷大鼠模型,铜离子(Cu)测定试剂盒检测肝铜、24 h尿铜水平;Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆能力;HE染色法观察海马组织CA1区神经元形态学改变;TUNEL染色观察海马组织CA1区神经元凋亡水平;免疫荧光法检测内质网应激(ERS)标志蛋白GRP78的表达情况;RT-qPCR和Western blot法检测GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组肝铜及24 h尿铜水平明显升高(P<0.01);学习记忆能力明显减弱(P<0.01);CA1区海马神经元出现损伤;TUNEL阳性神经元数量增多(P<0.01);GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,HPTQ各组及PCA组肝铜水平降低、24 h尿铜水平升高(P<0.01);学习记忆能力改善(P<0.01,P<0.05);海马神经元损伤减轻;TUNEL阳性神经元数量减少(P<0.01);GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论HPTQ对WD铜负荷大鼠模型具有神经保护作用,其机制可能与抑制ERS介导的凋亡途径有关。

关键词： Wilson病黄蒲通窍胶囊认知损害内质网应激凋亡

巨噬细胞在慢性阻塞性肺疾病发展及治疗中的研究进展

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临床肺科杂志 2024年第2期29卷 293-297页

作者：王蕾王桐生王雅娟安徽中医药大学药理学教研室安徽合肥230012

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以呼吸气流受阻为主要特征的慢性气道炎症性疾病,是全球发病率高、死亡率高的慢性呼吸系统疾病。COPD病因复杂,其病理过程涉及多种免疫细胞及炎症因子。巨噬细胞是... 详细信息

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以呼吸气流受阻为主要特征的慢性气道炎症性疾病,是全球发病率高、死亡率高的慢性呼吸系统疾病。COPD病因复杂,其病理过程涉及多种免疫细胞及炎症因子。巨噬细胞是呼吸道中最具代表性的免疫细胞,可从周围组织接收刺激,通过表型变化来发挥促炎和抗炎的双重作用,在COPD的发生发展过程中起着重要作用。本文将从巨噬细胞极化及其调节角度阐述其在COPD发生进展中的重要作用,为COPD的治疗提供新的作用靶点,为临床防治COPD提供参考。

关键词：慢性阻塞性肺病巨噬细胞极化

新风胶囊通过结合Wnt5a经Wnt/β-catenin信号通路抑制类风湿性关节炎

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中国临床药理学与治疗学 2024年第10期 1134-1145页

作者：黄玉蓉彭艳慧王冰缪成贵王校安徽中医药大学

目的：本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎（RA）潜在的诊断和治疗靶点，新风胶囊（XFC）如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法：在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因... 详细信息

目的：本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎（RA）潜在的诊断和治疗靶点，新风胶囊（XFC）如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法：在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因研究XFC对AA大鼠疗效，RT-qPCR检测验证XFC调控通过网络药理学预测的核心基因和关键通路。在体外原代AA成纤维样滑膜细胞（FLS）中采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光等方法研究XFC对Wnt/β-catenin通路的调节机制。结果：XFC显著下调AA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀，抑制AA大鼠关节炎症。XFC降低AA大鼠外周血中炎症因子TNF-α和IL-1水平，抑制AA大鼠关节滑膜和AA FLS中病理基因MMP3和fibronectin水平。网络药理学预测出Wnt通路与XFC治疗RA高度相关。细胞水平上，含XFC血清抑制Wnt通路相关基因β-catenin、CCND1和c-Myc的表达。分子对接结果显示XFC关键成分与Wnt5a的结合能力强，在AA FLS中Wnt5a过表达（Wnt5a-ove）干扰了XFC的作用。结论：Wnt5a在AA FLS和RA FLS中表达明显升高，XFC通过与Wn5a结合，抑制Wnt/β-catenin信号通路活化改善RA，为XFC改善RA提供新的治疗机制。

关键词：类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞新风胶囊 Wnt5a Wnt/β-catenin信号通路

映山红花总黄酮促进大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性H_(2)S的关系

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 865-872页

作者：仲美静陈硕陈志武安徽医科大学基础医学院药理教研室安徽合肥230032 安徽中医药大学科研技术中心安徽合肥230038

目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方... 详细信息

目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方法检测细胞增殖、迁移、成管及H_(2)S含量和钙离子荧光强度,包括CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法、基质胶成管、H_(2)S试剂盒及钙离子荧光探针法。结果在单独培养的大鼠脑血管内皮细胞上,H_(2)S供体NaHS(200μmol·L^(-1))和TFR(90、270、810 mg·L^(-1))对大鼠脑血管内皮细胞的增殖、迁移、成管及[Ca^(2+)]i荧光强度都有明显的促进作用。而VEGFR_(2)阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可抑制TFR的促进内皮细胞增殖、迁移和形成血管及[Ca^(2+)]i荧光强度;在与海马神经元共培养的大鼠脑血管内皮细胞上,TFR显著地升高共培养中H_(2)S含量,并被CBS抑制剂AOAA(200μmol·L^(-1))抑制。与此同时,TFR明显地促进共培养中大鼠脑血管内皮细胞的形成血管作用,并可被AOAA和VEGFR_(2)阻断剂SU5416显著地抑制。结论TFR在体外可通过VEGFR_(2)升高[Ca^(2+)]i来促进脑血管内皮细胞形成血管,并可通过诱导神经元中CBS生成H_(2)S作用于大鼠脑血管内皮细胞的VEGFR_(2)来促进血管形成。

关键词：硫化氢海马神经元细胞大鼠脑血管内皮细胞增殖迁移成管映山红花总黄酮

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芡实壳提取物的抗氧化活性及对口腔溃疡模型大鼠的治疗作用

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 787-794页

作者：王琼许凤清邓梦云任梦婷王桐生吴德玲安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药研究与开发安徽省重点实验室安徽合肥230012 安徽中医药大学中药饮片制造新技术安徽省重点实验室安徽合肥230012

目的研究芡实壳对口腔溃疡模型大鼠的防治作用及其潜在作用机制。方法分别以福林酚法、硝酸铝比色法测定芡实壳-萃取物中多酚、黄酮含量;以DPPH·、ABTS^(+)·、·OH和·O_(2)4种自由基清除实验评价体外抗氧化活性;冰醋酸灼伤法建立口... 详细信息

目的研究芡实壳对口腔溃疡模型大鼠的防治作用及其潜在作用机制。方法分别以福林酚法、硝酸铝比色法测定芡实壳-萃取物中多酚、黄酮含量;以DPPH·、ABTS^(+)·、·OH和·O_(2)4种自由基清除实验评价体外抗氧化活性;冰醋酸灼伤法建立口腔溃疡大鼠模型。采用酶联免疫法检测血清中氧化因子水平;HE染色观察溃疡黏膜组织病理变化;Western blot方法检测溃疡黏膜组织中Keap1、Nrf2、Nes-Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果乙酸乙酯萃取物中多酚、黄酮含量为306.74±1.04 mg/g、23.43±0.61 mg/g,其清除DPPH·、ABTS^(+)·自由基的IC50分别是3.42±0.97µg/mL、3.32±0.90µg/mL(P<0.01);乙酸乙酯组能明显改善模型动物口腔黏膜损伤,提高血清中CAT水平、降低MDA水平(P<0.01),显著增加血清中NEs-Nrf2(P<0.01)以及HO-1(P<0.05)蛋白表达量、降低Keap1(P<0.01)蛋白表达量显著。结论芡实壳提取物对口腔溃疡有一定治疗作用,其作用机制可能是通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路。

关键词：芡实壳抗氧化活性口腔溃疡 Nrf2 HO-1 Keap1

桃红四物汤对大脑中动脉闭塞大鼠lncRNA表达的影响

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中国药理学通报 2024年第3期40卷 582-591页

作者：张丽娟费长义余超薛苏君李雨朦李静静潘凌宇段贤春彭代银安徽中医药大学第一附属医院药学部安徽合肥230031 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

目的研究中药复方桃红四物汤(Tao Hong Si Wu decoction,THSWD)治疗大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达,并确定THSWD治疗MCAO大鼠可能的分子机制。方法从对照组、MCAO组和MCAO+THSWD组各获得3个大脑半球组织。采用RNA测序技术鉴定三组中的lncRNA基因表达。鉴定了THSWD调节的lncRNA基因,然后构建了THSWD调节的lncRNA-mRNA网络。通过MCODE插件鉴定lncRNA-mRNA网络的模块。基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书数据库(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)用于分析富集的生物功能和信号通路。鉴定了THSWD调节的lncRNA的顺式和反式调控基因。采用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)验证lncRNA。分子对接用于验证lncRNA-mRNA网络靶点和通路相关蛋白结合能力。结果在MCAO大鼠中,THSWD共调节了302个lncRNA。生物信息学分析表明,一些核心lncRNA可能在THSWD治疗MCAO大鼠中发挥重要作用,此外,我们进一步发现THSWD可能也通过lncRNA-mRNA网络以及网络富集的补体和凝血级联反应等多通路治疗MCAO大鼠。分子对接结果表明,THSWD活性化合物没食子酸和苦杏仁苷与蛋白质靶点具有一定的结合能力。结论THSWD可以通过调节lncRNA保护MCAO大鼠脑损伤,为THSWD治疗缺血性中风提供了新见解。

关键词：桃红四物汤大脑中动脉闭塞长链非编码RNA lncRNA-mRNA网络生物信息学分子对接