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新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 108-118页

作者：周巧刘健万磊朱艳齐亚军胡月迪安徽中医药大学第二附属医院安徽合肥230061 安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学安徽合肥230012

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502... 详细信息

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

关键词： miR-502-5p 骨关节炎新风胶囊炎症细胞外基质

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基于Mas/PKA/CREB通路探讨颈椎横突尖针刺法治疗后循环缺血性眩晕模型大鼠的作用机制

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北京中医药大学学报 2024年第2期47卷 288-296页

作者：欧小燕柳刚杨丽芳文林月汪生志李娜杨骏张闻东安徽中医药大学研究生院合肥230031 安徽中医药大学第二附属医院安徽中医药大学第一附属医院

目的基于Mas原癌基因(Mas)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)通路探讨颈椎横突尖针刺法对后循环缺血性眩晕(PCIV)模型大鼠的作用机制。方法将32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组、电针组,... 详细信息

目的基于Mas原癌基因(Mas)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)通路探讨颈椎横突尖针刺法对后循环缺血性眩晕(PCIV)模型大鼠的作用机制。方法将32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组、电针组,每组各8只。除假手术组外,其余各组大鼠均结扎右侧颈总动脉(CCA)和锁骨下动脉(SCA)建立PCIV模型,假手术组仅剥离右侧CCA和SCA。尼莫地平组大鼠灌胃尼莫地平混悬液(12 mg/kg);电针组大鼠于第2颈椎(C2)、第4颈椎(C4)、第6颈椎(C6)横突尖针刺,于双侧C2、C6进行电针治疗,20 min/次;假手术组和模型组不予任何干预措施,连续14 d。观察各组大鼠右侧前庭神经核脑血流量、脑血流量下降率及跳台躲避时间,采用TUNEL染色法观察右侧脑干前庭神经核细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测右侧脑干前庭神经核Mas、蛋白激酶A⁃C亚基同工型a(PKA⁃Ca)、CREB、磷酸化CREB(p⁃CREB)、B细胞淋巴瘤(Bcl)⁃2和Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达情况。结果干预前,与假手术组对比,其余3组大鼠右侧前庭神经核脑血流量下降、右侧前庭神经核脑血流下降率升高(均P<0.05),提示造模成功。干预后,与假手术组比较,模型组大鼠右侧前庭神经核脑血流量降低、右侧前庭神经核脑血流下降率升高、右侧脑干前庭神经核细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平升高,Bcl⁃2、Mas、PKA⁃Ca、p⁃CREB/CREB蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,电针组和尼莫地平组大鼠右侧前庭神经核脑血流量升高、右侧前庭神经核脑血流下降率降低、跳台躲避时间缩短、右侧脑干前庭神经核细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平降低,Bcl⁃2、Mas、PKA⁃Ca、p⁃CREB/CREB蛋白表达水平升高(均P<0.05);与尼莫地平组比较,电针组大鼠右侧前庭神经核脑血流量升高、右侧前庭神经核脑血流下降率降低、跳台躲避时间缩短、右侧脑干前庭神经核细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平降低,Bcl⁃2、Mas、PKA⁃Ca、p⁃CREB/CREB蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论颈椎横突尖针刺法能够有效抑制PCIV大鼠前庭神经核的细胞凋亡,其机制可能与改善前庭神经核脑血流量、激活Mas/PKA/CREB信号通路后调控相关蛋白抑制前庭神经核细胞的凋亡相关。

关键词：颈椎横突尖针刺后循环缺血眩晕细胞凋亡 Mas原癌基因/蛋白激酶A/环磷腺苷效应元件结合蛋白通路大鼠

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对比文化学视域下中西医文本语言特征研究

外语电化教学 2024年第4期 91-96页

作者：朱家胜吴怡洁安徽中医药大学

该研究基于自建中西医文本汉英可比专用语料库,借助对比文化学理论,对中西医文本语言特征进行了对比。研究发现:中西医文本在词汇—语义系统、词组—成语系统和句法—篇章系统等方面存在显著差异,这些差异体现了中西医文化在哲学基础、... 详细信息

该研究基于自建中西医文本汉英可比专用语料库,借助对比文化学理论,对中西医文本语言特征进行了对比。研究发现:中西医文本在词汇—语义系统、词组—成语系统和句法—篇章系统等方面存在显著差异,这些差异体现了中西医文化在哲学基础、对人体与疾病的认识方式、治疗理念、价值观、思维逻辑和表达方式上的不同。这一发现有利于中西医两种文明的相互借鉴,促进中西医交流和融合。

关键词：对比文化学中西医文本语言特征文化

新风胶囊通过结合Wnt5a经Wnt/β-catenin信号通路抑制类风湿性关节炎

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中国临床药理学与治疗学 2024年第10期 1134-1145页

作者：黄玉蓉彭艳慧王冰缪成贵王校安徽中医药大学

目的：本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎（RA）潜在的诊断和治疗靶点，新风胶囊（XFC）如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法：在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因... 详细信息

目的：本研究将探讨Wnt5a是否可以作为类风湿性关节炎（RA）潜在的诊断和治疗靶点，新风胶囊（XFC）如何通过Wnt5a/β-catenin信号通路改善RA。方法：在体内Adjuvant arthritis(AA)大鼠模型中采用ELISA和RT-qPCR检测炎症因子和病理基因研究XFC对AA大鼠疗效，RT-qPCR检测验证XFC调控通过网络药理学预测的核心基因和关键通路。在体外原代AA成纤维样滑膜细胞（FLS）中采用RT-qPCR、Western blot和免疫荧光等方法研究XFC对Wnt/β-catenin通路的调节机制。结果：XFC显著下调AA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀，抑制AA大鼠关节炎症。XFC降低AA大鼠外周血中炎症因子TNF-α和IL-1水平，抑制AA大鼠关节滑膜和AA FLS中病理基因MMP3和fibronectin水平。网络药理学预测出Wnt通路与XFC治疗RA高度相关。细胞水平上，含XFC血清抑制Wnt通路相关基因β-catenin、CCND1和c-Myc的表达。分子对接结果显示XFC关键成分与Wnt5a的结合能力强，在AA FLS中Wnt5a过表达（Wnt5a-ove）干扰了XFC的作用。结论：Wnt5a在AA FLS和RA FLS中表达明显升高，XFC通过与Wn5a结合，抑制Wnt/β-catenin信号通路活化改善RA，为XFC改善RA提供新的治疗机制。

关键词：类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞新风胶囊 Wnt5a Wnt/β-catenin信号通路

黄芪多糖通过Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路诱导卵巢癌细胞铁死亡

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中国中药杂志 2024年

作者：张永跟颜小飞刘锋郝文哲蔡玥刘莹刘兰林李学军安徽中医药大学安徽中医药大学第二附属医院

该研究主要探讨中药黄芪多糖（Astragalus polysaccharides，APS）调控核转录因子E2相关因2（Nrf2）/小鼠溶质载体家族7成员11（SLC7A11）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）信号通路诱导卵巢癌细胞（Caov-3细胞、SKOV3细胞）铁死亡的作用机... 详细信息

该研究主要探讨中药黄芪多糖（Astragalus polysaccharides，APS）调控核转录因子E2相关因2（Nrf2）/小鼠溶质载体家族7成员11（SLC7A11）/谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）信号通路诱导卵巢癌细胞（Caov-3细胞、SKOV3细胞）铁死亡的作用机制。将Caov-3和SKOV3细胞分为对照（Vehicle）组、APS组、谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂（RSL3）组、APS+RSL3组，干预48 h后观察各组细胞的活性和形态。cell counting kit-8（CCK-8）法检测细胞半数抑制浓度(IC50)；克隆形成实验和EdU实验检测细胞增殖情况；生化试剂检测Caov-3细胞内脂质活性氧（L-ROS）、丙二醛（MDA）、二价铁离子(Fe2+)、谷胱甘肽（GSH）；透射电镜观察Caov-3细胞线粒体的形态变化；通过生物信息学分析筛选出APS作用卵巢癌细胞潜在的目标基因；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测Nrf2、SLC7A11和GPX4蛋白和mRNA的表达水平。结果显示，APS能有效抑制卵巢癌细胞活性与增殖，显著升高 L-ROS、MDA、Fe2+水平（P<0.001），同时显著降低GSH水平（P<0.001）；电镜下观察到Caov-3细胞线粒体明显变小，双层膜密度明显增加，线粒体嵴基本消失，外层线粒体膜破裂，APS+RSL3效果更加明显；生物信息学分析筛选出APS作用卵巢癌细胞潜在目标基因分别是Nrf2、SLC7A11、GPX4；APS能降低Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白和mRNA的表达（P<0.01），APS+RSL3降低效果更明显（P<0.001）。结果表明，APS可诱导卵巢癌细胞铁死亡，其机制可能与APS通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路，诱导卵巢癌细胞铁死亡相关，为APS治疗卵巢癌提供了实验基础。

关键词：黄芪多糖 Nrf2/SLC7A11/GPX4通路卵巢癌细胞铁死亡

人参皂苷Rg_(1)通过IRE1-JNK-CHOP通路抑制自噬改善OGD/R诱导的PC12细胞损伤

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2745-2753页

作者：李雨晴魏梁丽袁雨琪杨子腾汪宁蔡标汪光云安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012

探讨人参皂苷Rg_(1)(ginsenoside Rg_(1),GRg_(1))对氧糖剥夺/复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠嗜铬细胞瘤(rat adrenal pheochromocytoma,PC12)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)-c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)-C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)信号通路有关。在PC12细胞中建立OGD/R模型,将PC12细胞随机分组为对照组、模型组、OGD/R+GRg_(1)(0.1、1、10μmol·L^(-1))组,OGD/R+GRg_(1)+雷帕霉素(rapamycin,自噬激动剂)组、OGD/R+GRg_(1)+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA,自噬抑制剂)组、OGD/R+GRg_(1)+衣霉素(tunicamycin,内质网应激激动剂)组、OGD/R+GRg_(1)+4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA,内质网应激抑制剂)组、OGD/R+GRg_(1)+3,5-二溴水杨醛(3,5-dibromosalicylaldehyde,DBSA,IRE1抑制剂)组。除对照组外,其他组都进行OGD/R处理,即氧糖剥夺6 h再复氧6 h。MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡情况,MDC法检测细胞自噬体的荧光强度。Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、p62和通路相关蛋白IRE1、p-IRE1、JNK、p-JNK、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CHOP的表达情况。结果显示,与模型组相比,0.1、1、10μmol·L^(-1)GRg_(1)剂量依赖性地提高了PC12细胞的活力,降低了自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ和通路相关蛋白p-IRE1、p-JNK、GRP78、CHOP表达,降低了细胞凋亡率和MDC荧光强度,同时也增加了p62蛋白表达。而分别干预自噬和内质网应激后,与OGD/R+GRg_(1)(10μmol·L^(-1))组相比,OGD/R+GRg_(1)+rapamycin组和OGD/R+GRg_(1)+tunicamycin组细胞凋亡率和MDC荧光强度增加,自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ和通路相关蛋白p-IRE1、p-JNK、GRP78、CHOP表达增加,细胞相对存活率和p62蛋白表达降低。3-MA、4-PBA和DBSA则发挥了相反作用。综上所述,GRg_(1)可能通过IRE1-JNK-CHOP通路抑制自噬而改善OGD/R诱导PC12细胞的损伤。

关键词：人参皂苷Rg_(1)(GRg_(1)) 氧糖剥夺/复氧(OGD/R) 内质网应激自噬 IRE1-JNK-CHOP

黄蒲通窍胶囊改善Wilson病铜负荷大鼠的认知损害:基于抑制内质网应激介导的凋亡途径

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南方医科大学学报 2024年第3期44卷 447-454页

作者：张笑颜王谢王杰邵楠蔡标谢道俊安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一临床医学院安徽合肥230012 安徽中医药大学护理学院安徽合肥230012 安徽中医药大学第一附属医院脑病中心安徽合肥230031

目的探究黄蒲通窍胶囊(HPTQ)对Wilson病(WD)铜负荷大鼠模型的神经保护作用及其可能的作用机制。方法SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、黄蒲通窍胶囊低剂量组(HPTQ-L,0.47 g/kg)、黄蒲通窍胶囊中剂量组(HPTQ-M,1.41 g/kg)、黄蒲通窍胶... 详细信息

目的探究黄蒲通窍胶囊(HPTQ)对Wilson病(WD)铜负荷大鼠模型的神经保护作用及其可能的作用机制。方法SD大鼠随机分为6组:对照组、模型组、黄蒲通窍胶囊低剂量组(HPTQ-L,0.47 g/kg)、黄蒲通窍胶囊中剂量组(HPTQ-M,1.41 g/kg)、黄蒲通窍胶囊高剂量组(HPTQ-H,4.23 g/kg)、青霉胺组(PCA,0.09 g/kg),10只/组。通过含铜(1 g/kg)饲料、含铜(0.185%)水喂养12周构建WD铜负荷大鼠模型,铜离子(Cu)测定试剂盒检测肝铜、24 h尿铜水平;Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆能力;HE染色法观察海马组织CA1区神经元形态学改变;TUNEL染色观察海马组织CA1区神经元凋亡水平;免疫荧光法检测内质网应激(ERS)标志蛋白GRP78的表达情况;RT-qPCR和Western blot法检测GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组肝铜及24 h尿铜水平明显升高(P<0.01);学习记忆能力明显减弱(P<0.01);CA1区海马神经元出现损伤;TUNEL阳性神经元数量增多(P<0.01);GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,HPTQ各组及PCA组肝铜水平降低、24 h尿铜水平升高(P<0.01);学习记忆能力改善(P<0.01,P<0.05);海马神经元损伤减轻;TUNEL阳性神经元数量减少(P<0.01);GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论HPTQ对WD铜负荷大鼠模型具有神经保护作用,其机制可能与抑制ERS介导的凋亡途径有关。

关键词： Wilson病黄蒲通窍胶囊认知损害内质网应激凋亡

艾灸对慢性心力衰竭大鼠PTEN/mTOR信号通路和心肌纤维化的影响

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北京中医药大学学报 2024年第4期47卷 562-569页

作者：宫甜甜高兵朱玲李澜纵艳平胡婧王茎安徽中医药大学针灸推拿学院合肥230031 安徽中医药大学中医学院安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室新安医学与中医药现代化研究所

目的观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌病理形态、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响,探讨艾灸减轻CHF大鼠心肌纤维化的可能机制。方法60... 详细信息

目的观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌病理形态、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响,探讨艾灸减轻CHF大鼠心肌纤维化的可能机制。方法60只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组(10只)和手术组(50只),手术组结扎大鼠左冠状动脉复制CHF模型。40只造模成功的大鼠按随机数字表法分为模型组、艾灸组、bpV(phen)组、艾灸+bpV(phen)组,每组10只。正常组、模型组不给予任何干预;艾灸组用定制艾条悬灸大鼠背部双侧“肺俞”“心俞”,每穴30 min,每日1次;bpV(phen)组腹腔注射bpV(phen)溶液(0.15 mg/kg),每周2次;艾灸+bpV(phen)组在bpV(phen)组的基础上,按艾灸组操作。干预4周。观察大鼠摄食、活动等一般情况;HE染色观察心肌细胞形态学变化;Masson染色观察心肌纤维化情况;超声心动检测射血分数(EF)、缩短分数(FS);实时荧光PCR法检测心肌组织PTEN、mTOR mRNA表达;蛋白质印迹法检测心肌组织PTEN、mTOR、α-SMA蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞形态改变,心肌纤维结构严重损伤,EF、FS,以及mTOR mRNA和蛋白表达明显降低,PTEN、α-SMA蛋白表达及PTEN mRNA表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,艾灸组、bpV(phen)组、艾灸+bpV(phen)组心肌超微结构损伤减轻,EF、FS,以及mTOR mRNA和蛋白表达明显升高,α-SMA蛋白表达明显降低,PTEN mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。与艾灸+bpV(phen)组比较,艾灸组、bpV(phen)组心肌超微结构损伤较重,EF、FS,以及mTOR mRNA和蛋白表达明显降低,α-SMA蛋白表达明显升高,PTEN mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论艾灸可以改善CHF大鼠心肌细胞病理形态和功能,减轻心肌纤维化,其机制可能与下调PTEN表达、进而上调mTOR表达有关。

关键词：艾灸慢性心力衰竭第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路心肌纤维化大鼠

运脾化浊方对Wilson病铜稳态影响及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 140-148页

作者：陶庄汪美霞康帅王飞周佳锋贾淑培胡雅杨文明安徽中医药大学第一附属医院合肥230031 安徽中医药大学研究生院合肥230038

目的:观察运脾化浊方对Wilson病(WD)铜稳态影响的临床作用特点,分析验证其作用机制,为临床有效方药的应用提供进一步的证据支持。方法:将2023年01月至2023年12月安徽中医药大学第一附属医院符合入组标准的60例WD患者分为观察组(30例)和... 详细信息

目的:观察运脾化浊方对Wilson病(WD)铜稳态影响的临床作用特点,分析验证其作用机制,为临床有效方药的应用提供进一步的证据支持。方法:将2023年01月至2023年12月安徽中医药大学第一附属医院符合入组标准的60例WD患者分为观察组(30例)和对照组(30例),对照组予常规排铜保肝治疗,观察组在常规治疗的基础上加用运脾化浊方治疗,共治疗4个疗程(32 d)。观察治疗前后两组患者铜生化指标(血清游离铜、铜蓝蛋白、铜氧化酶、血清铜、血清铜锌比、24 h尿铜、24 h尿锌、24 h尿铜锌比)、中医证候积分、临床有效率水平。利用网络药理学及分子对接技术,构建“疾病-中药-活性成分-核心靶点”相互作用网络图和PyMOL可视化分析图,分析验证其作用机制。结果:①与本组治疗前比较,治疗后观察组患者中医证候积分明显下降(P中医证候积分下降水平明显低于对照组(P中医证候积分、提高临床有效率,通过作用于多个关键靶点、多条信号通路发挥调节WD铜稳态的作用。

关键词：肝豆状核变性中医药运脾化浊方铜稳态临床疗效作用机制