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车前草花叶病毒外壳蛋白基因实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

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生物安全学报(中英文) 2024年

作者：李鑫李扬李辉李可王秀芬大连海关技术中心东港海关综合技术服务中心大连医科大学

【目的】建立一套适用于百合车前草花叶病毒（Plantago asiatica mosaic virus,Pl AMV）快筛的实时荧光实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】以Pl AMV为检测目标，在NCBI网站上Blast检索数据库中的Pl AMV以及相同寄主上常见的16种病毒的特... 详细信息

【目的】建立一套适用于百合车前草花叶病毒（Plantago asiatica mosaic virus,Pl AMV）快筛的实时荧光实时荧光RT-PCR检测方法。【方法】以Pl AMV为检测目标，在NCBI网站上Blast检索数据库中的Pl AMV以及相同寄主上常见的16种病毒的特异性基因外壳蛋白（coat protein,CP）序列信息，根据序列碱基替换的饱和性分析、系统发育树分析以及遗传距离分析结果，确定Pl AMV的特异性基因，以CP基因为靶标，设计特异性强的引物和探针，建立特异性实时荧光检测方法，验证引物特异性，测试反应的灵敏度，并对21份疑似感染Pl AMV的百合样品测试检测效果。【结果】确定CP基因作为Pl AMV检测的特异性基因，设计2组特异性引物和探针，利用疑似感染Pl AMV的百合样品进行检测效果验证，建立了2套快筛的Pl AMV实时荧光RT-PCR检测体系，检出限达到1 pg·μL-1,2组引物和探针均检测出21份阳性样品，检出率均为100%,2组引物和探针的扩增效率相近。【结论】建立的实时荧光RT-PCR反应体系可特异性定量检测Pl AMV，并可应用于口岸样品进行快速、准确的筛查，为加强对Pl AMV的分析与管控，制定全面系统的控制措施提供了技术支持。

关键词：车前草花叶病毒外壳蛋白实时荧光

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4种入侵性雀麦属种子的形态鉴定

生物安全学报（中英文） 2024年第2期33卷 148-153页

作者：徐瑛赵雷张吉红虞赟方亦午宁波海关技术中心浙江宁波315192 宁波检验检疫科学技术研究院浙江宁波315192 福州海关技术中心福建福州350001

【目的】不实雀麦、硬雀麦、双雄雀麦和旱雀麦因具危害性已被公认为入侵性杂草,其种子(小花)常随进境农产品进入中国,由于外观形态较为接近易引起混肴,需对其进行进一步研究并建立鉴定方法。【方法】使用光学显微镜和扫描电镜对4种雀麦... 详细信息

【目的】不实雀麦、硬雀麦、双雄雀麦和旱雀麦因具危害性已被公认为入侵性杂草,其种子(小花)常随进境农产品进入中国,由于外观形态较为接近易引起混肴,需对其进行进一步研究并建立鉴定方法。【方法】使用光学显微镜和扫描电镜对4种雀麦小花的小穗轴、基盘、内稃、外稃等外部结构进行形态学观察和比对。【结果】不实雀麦外稃脉纹呈脊状排列;旱雀麦内稃脊具长毛被,小穗轴疤痕面明显塌陷;硬雀麦小穗轴和基盘疤痕明显拉长等宏观特征可用于种间区别。在微形态方面可通过内外稃冠细胞分布密度进行区别。【结论】结合宏观和微形态特征的鉴定方法可用于4种雀麦属杂草种子的快速识别。

关键词：雀麦属入侵种小花鉴定

马病毒性动脉炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2024年第2期46卷 159-163页

作者：梁歆歆王科珂蒋刚强徐军陈凯云王艳肖媛媛白梅花刘东石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 乌鲁木齐海关技术中心新疆乌鲁木齐830063 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心上海200120 喀什海关技术中心新疆喀什844099

为建立检测马病毒性动脉炎病毒(EAV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究针对EAV ORF7基因序列设计引物及探针,并对其反应体系进行优化,建立标准曲线,结果显示,EAV荧光定量RT-PCR方法在退火温度为61℃、引物和探针终浓度均为0.6μmol/L的... 详细信息

为建立检测马病毒性动脉炎病毒(EAV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究针对EAV ORF7基因序列设计引物及探针,并对其反应体系进行优化,建立标准曲线,结果显示,EAV荧光定量RT-PCR方法在退火温度为61℃、引物和探针终浓度均为0.6μmol/L的反应条件下效果最优;质粒标准品体外转录的cRNA在1.6×10^(7)拷贝/μL~1.6×10^(2)拷贝/μL时与Ct值之间呈现良好的线性关系,标准曲线方程为y=-2.68x+32.88,R^(2)=0.9927,初步建立了EAV荧光定量RT-PCR方法。采用该方法检测EAV、马焦虫、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马流感病毒,结果显示,该方法仅能特异性检测到EAV,其他病原检测均为阴性,该方法特异性强;将体外转录合成的质粒标准品cRNA 10倍倍比稀释后利用该方法检测,结果显示该方法最低检测限为1.6×10^(2)拷贝/μL,灵敏性高;重复性试验结果显示,该方法组内及组间变异系数均小于2.0%,重复性好。采用本实验建立的荧光定量RT-PCR方法和文献发表的EAV荧光定量RT-PCR方法分别对234份临床样品进行检测,两者的阳性检出率均为14.1%(33/234),两种方法的符合率为100%。本研究建立的荧光定量RT-PCR检测方法为马病毒性动脉炎的防控提供了新的技术手段和思路。

关键词：马病毒性动脉炎 ORF7基因荧光定量RT-PCR

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全自动间断化学分析仪测定食品中的二氧化硫

食品科技 2024年第6期49卷 322-327页

作者：林妮林起辉张建莹杨丽丹张诗华潘清陈润梅深圳海关食品检验检疫技术中心广东深圳518000

文章研究了甲醛吸收、盐酸副玫瑰苯胺显色的全自动间断化学分析仪测定食品中二氧化硫含量的方法。经过甲醛缓冲溶液处理的样品,释放出的二氧化硫会被甲醛溶液吸收并形成稳定的羟甲基磺酸衍生物;通过加入氢氧化钠促使衍生物分解,进而释... 详细信息

文章研究了甲醛吸收、盐酸副玫瑰苯胺显色的全自动间断化学分析仪测定食品中二氧化硫含量的方法。经过甲醛缓冲溶液处理的样品,释放出的二氧化硫会被甲醛溶液吸收并形成稳定的羟甲基磺酸衍生物;通过加入氢氧化钠促使衍生物分解,进而释放出二氧化硫;盐酸副玫瑰苯胺与释放的二氧化硫发生反应,生成蓝紫色络合物,在550 nm处用全自动间断化学分析仪测定食品中的二氧化硫。对该方法的检出限、定量限、线性、准确性、重复性等进行分析,结果表明:该方法的检出限为2 mg/kg,定量限为5 mg/kg,在0.0~20.0 mg/L范围内吸光度与二氧化硫含量呈良好的线性关系(r=0.999),相对标准偏差小于5%(n=6),与国标方法相比无显著性差异,测定有证标准物质的测定值在标准参考值范围内。建立的分析方法自动化程度高,准确、灵敏、精密,操作简便快速,同时避免汞的毒性和污染,能满足大批量食品中二氧化硫含量的测定。

关键词：全自动间断化学食品二氧化硫甲醛吸收盐酸副玫瑰苯胺显色

马链球菌兽疫亚种荧光定量PCR检测方法的建立及在入境马匹回顾性检测分析中的应用

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1735-1742页

作者：胡雨桐周学慧赵梦茹陈翔吴晓薇赵治国王艳赵光伟西南大学动物医学院重庆荣昌402460 上海海关上海200135 广州海关技术中心广东广州510623 呼和浩特海关技术中心内蒙古呼和浩特010010

为建立一种针对马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subspecies zooepidemicus,SEZ)快速、特异、敏感的检测方法,并了解SEZ在入境我国马匹中的感染情况,试验首先根据SEZ标准菌株(ATCC 43079)的保守基因comB设计合成特异性引物,经PCR... 详细信息

为建立一种针对马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subspecies zooepidemicus,SEZ)快速、特异、敏感的检测方法,并了解SEZ在入境我国马匹中的感染情况,试验首先根据SEZ标准菌株(ATCC 43079)的保守基因comB设计合成特异性引物,经PCR扩增后构建pMD19-T-comB重组质粒,以此为标准品模板建立基于SYBR GreenⅠ染料的荧光定量PCR检测方法(quantitative PCR,qPCR);进而利用所建方法对2018―2023年由荷兰、比利时、日本、德国、阿根廷和新西兰等6个国家入境我国口岸的477份马血清样本进行SEZ感染情况的检测分析。结果发现本试验所建立的qPCR检测方法特异性良好,仅对SEZ存在特异性扩增;敏感性试验表明该方法最低检测量为4.58×10^(1)copies/μL;重复性试验检测结果显示批内重复性变异系数均小于0.5%,批间重复性变异系数均低于3.0%,表明重复性良好,稳定性高。回顾性检测分析显示2018年荷兰入境的共40份样本均为阴性(0/40);2019年比利时入境样本中检测到1份阳性(1/20),日本和德国入境样本均为阴性(0/36);2021年日本样本中3份为阳性(3/34),阿根廷1份为阳性(1/20),荷兰均为阴性(0/40);2022年荷兰76份样本均为阴性(0/76);2023年荷兰126份样本检出阳性样本5份(5/126),新西兰88份样本中检出阳性1份(1/88)。总计阳性样本11份,阳性率为2.31%(11/477),总体阳性率较低。结果说明,成功建立了用于检测SEZ的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,其对我国出入境、口岸部门的快速检疫以及该病的流行病学调查等工作提供了必要的技术支撑。

关键词：马链球菌兽疫亚种荧光定量PCR SYBR GreenⅠ 马

基于RAA-CRISPR/Cas13a的口蹄疫病毒检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2024年

作者：蒋静林颖峥蔡一村冯之航王艳郁蕾熊炜李树清李健薛俊欣张强上海海关动植物与食品检验检疫技术中心

CRISPR/Cas核酸检测技术是新一代生物病原体核酸检测技术，具有灵敏度高、特异性强、准确快速的优点，结合RAA等温扩增技术，可以放大检测的灵敏度。本研究通过对FMDV全基因全序列比对，设计两套引物和相应crRNA针对7个不同血清型FMDV... 详细信息

CRISPR/Cas核酸检测技术是新一代生物病原体核酸检测技术，具有灵敏度高、特异性强、准确快速的优点，结合RAA等温扩增技术，可以放大检测的灵敏度。本研究通过对FMDV全基因全序列比对，设计两套引物和相应crRNA针对7个不同血清型FMDV。样品核酸经RAA扩增后，加入CRISPR/Cas13a体系进行反应，检测荧光信号，建立了口蹄疫病毒RAA-CRISPR/Cas13a新型分子生物学检测方法，对其灵敏性、特异性和一致性进行了检测。研究结果显示，本研究建立的方法对RAA检测有放大作用，方法灵敏度达到102拷贝/μL，且特异性强。对临床样本开展检测，结果与标准荧光RT-PCR检测结果几乎完全一致。本研究建立的RAA-CRISPR/Cas13a方法可以特异性检测口蹄疫7个血清型毒株，方法灵敏度较高、重复性好，可以丰富FMDV的现有检测手段。

关键词：口蹄疫病毒快速检测 RAA Cas13a

镍钴物料的来源分析及进口可用做原料的可行性探讨

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冶金分析 2024年第6期44卷 49-56页

作者：余淑媛王刚徐勤任聪孙乐纯冯均利深圳海关工业品检测技术中心深圳市检验检疫科学研究院蛇口海关

对一例申报为“镍钴物料”的进口货物进行多技术联用表征，通过分析确认其来源属性，并对其是否可用作原料的可行性进行了探讨，结果为进口监管提供了技术支撑。采用X射线荧光光谱分析、碳硫分析、顶空气相色谱质谱分析、裂解气相色谱... 详细信息

对一例申报为“镍钴物料”的进口货物进行多技术联用表征，通过分析确认其来源属性，并对其是否可用作原料的可行性进行了探讨，结果为进口监管提供了技术支撑。采用X射线荧光光谱分析、碳硫分析、顶空气相色谱质谱分析、裂解气相色谱质谱分析、X射线衍射分析、电镜能谱分析、电位滴定分析、原子吸收光谱分析、热重分析、感观检测等多种技术手段进行测试，并与相关文献资料对比进行溯源分析，对样品进行微观形貌、元素组成、物相组成、毒害物质、有机物等特征的分析。结果表明：样品主要为镍钴锰酸锂三元材料，还含有少量金属铝屑、单质碳以及有机物，具有锂离子电池正极片的组成特征，结合样品的外观和组成特征，确认样品是锂离子电池正极片的回收粉料。

关键词：镍钴物料电池回收料多技术表征来源分析

世界动物卫生组织One Health总体框架及最新关注方向

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动物医学进展 2024年第4期45卷 121-125页

作者：耿庆华廖立珊李修平林茜茜吴江孙洁刘荭沈阳海关技术中心辽宁沈阳110016 深圳市检验检疫科学研究院深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518000 济宁海关综合服务技术中心山东济宁272000 兰州海关甘肃兰州730000

近年来,人兽共患病在全球越来越多的地方影响人类和动物的健康。在此背景下,由联合国粮食及农业组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)和世界动物卫生组织(WOAH)三方国际组织提出了“One Health”的概念。2021年底,FAO、WOAH、WHO和联合国环境... 详细信息

近年来,人兽共患病在全球越来越多的地方影响人类和动物的健康。在此背景下,由联合国粮食及农业组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)和世界动物卫生组织(WOAH)三方国际组织提出了“One Health”的概念。2021年底,FAO、WOAH、WHO和联合国环境规划署(UNEP)共同成立了One Health高级别委员会(One Health High Level Expert Panel,OHHLEP),并将“One Health”重新定义。论文就“One Health”的概念、提出的背景、重要发展进程、总体框架和协调机制以及未来应用展望进行了全面的介绍和阐述,为我国进一步深入了解“One Health”理念,实践并更好地应用“One Health”方法,从而解决我国人兽共患病、抗生素耐药等对人类、动物和环境危害严重的问题提供思路和参考。

关键词： One health 发展进程总体框架协调机制未来应用

食品安全检验方法国家标准与国际标准的协调性

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中国食品安全

中国食品安全 2024年第2期 85-91页

作者：梁成珠吕宁中国海关科学技术中心青岛海关技术中心

本文研究了发达国家、地区和国际组织食品检验方法标准体系,总结了我国食品安全检验方法标准体系存在的问题,同时开展典型的食品安全检验方法国家标准与国际对应标准的可比性研究,通过分析食品安全检验方法国家标准与国际标准的协调性,... 详细信息

本文研究了发达国家、地区和国际组织食品检验方法标准体系,总结了我国食品安全检验方法标准体系存在的问题,同时开展典型的食品安全检验方法国家标准与国际对应标准的可比性研究,通过分析食品安全检验方法国家标准与国际标准的协调性,提出了适合我国国情的食品安全检验方法标准体系建设建议,为我国食品安全检验方法标准制修订提供技术支持,也为我国检验方法标准转化为国际标准提供了参考。

关键词：食品安全检验方法体系建设协调性