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Cys_(2)-His_(2)型锌指蛋白安全运输近红外荧光蛋白进入哺乳动物细胞

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南开大学学报（自然科学版） 2024年第4期57卷 56-60页

作者：庞晓楠李世汉贾子瑄佟玉玺刘佳陈喜文陈德富南开大学生命科学学院遗传学和细胞生物学系天津300071 上海科技大学免疫化学研究所上海201210 南开大学生命科学学院生物化学与分子生物学系天津300071

细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)是一类能够运输核酸、蛋白及化学药物进入细胞内的短肽.Cys_(2)-His_(2)型锌指蛋白(zinc finger protein, ZFP)具有穿膜肽功能,但其转运的目标分子在细胞内的分布及其对细胞活力的影响尚未... 详细信息

细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)是一类能够运输核酸、蛋白及化学药物进入细胞内的短肽.Cys_(2)-His_(2)型锌指蛋白(zinc finger protein, ZFP)具有穿膜肽功能,但其转运的目标分子在细胞内的分布及其对细胞活力的影响尚未见报道.将ZFP与近红外荧光蛋白iRFP682融合表达并评估其通过哺乳动物细胞膜的特性.结果发现,ZFP介导的iRFP682能够进入哺乳动物细胞并定位于细胞核.随着ZFP个数的增加,细胞内的荧光信号强度随之增强,且ZFP作为穿膜肽未对哺乳动物细胞活力产生影响.ZFP介导的细胞穿膜过程与细胞种类不存在相关性,并有望应用于活体成像研究.

关键词： Cys_(2)-His_(2)型锌指蛋白细胞穿膜肽穿膜效率 iRFP682 哺乳动物细胞

Sal-miR-58通过HAX1介导胶质瘤细胞放射敏感性的作用及机制研究

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中华放射肿瘤学杂志 2024年第8期33卷 746-752页

作者：王国辉葛鸿瑶杜振宇杨高山天津市第一中心医院放疗科天津300000 河北中医药大学基础医学院生物化学与生物学教研室石家庄050200

目的探讨丹参来源的Sal-miR-58对人胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响及其分子机制。方法分别采用体外合成的不同浓度的miR-Ctl和Sal-miR-58模拟物处理胶质瘤U251细胞,再给予X线照射。MTT检测Sal-miR-58对U251细胞活力的影响。Hoechst333... 详细信息

目的探讨丹参来源的Sal-miR-58对人胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响及其分子机制。方法分别采用体外合成的不同浓度的miR-Ctl和Sal-miR-58模拟物处理胶质瘤U251细胞,再给予X线照射。MTT检测Sal-miR-58对U251细胞活力的影响。Hoechst33342/碘化丙啶(PI)双染检测Sal-miR-58对照射后胶质瘤U251细胞凋亡的影响。2'',7''-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测Sal-miR-58联合照射对肿瘤细胞活性氧含量的影响。克隆形成实验检测Sal-miR-58联合照射对U251细胞放射敏感性的影响。蛋白质印迹法检测Sal-miR-58调控抗凋亡蛋白造血细胞特异性蛋白1-相关蛋白X-l(HAX1)及凋亡标志蛋白B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、活化的胱天蛋白酶(Cleaved-Caspase)9、Cleaved-Caspase 3的表达情况。多组间比较行单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。结果Sal-miR-58能加重照射后U251细胞增殖的抑制(P<0.05)。Sal-miR-58促进U251细胞凋亡,并且增加照射后U251细胞活性氧的产生(P<0.05)。克隆形成实验显示,Sal-miR-58增加U251细胞放射敏感性,放射增敏比为1.43。蛋白质印迹法结果显示,Sal-miR-58抑制放射诱导的U251细胞HAX1表达,且Sal-miR-58能通过阻抑HAX1表达进而抑制Bcl-2表达,促进Caspase 9及Caspase 3的活化。结论Sal-miR-58具有增强U251细胞放射敏感性的作用,其可能机制是Sal-miR-58通过下调射线诱导的HAX1表达,促进肿瘤细胞的凋亡。

关键词：微RNAs,丹参来源 HAX1基因放射敏感性人胶质瘤

低叶酸和维甲酸诱导神经管畸形小鼠模型胎脑的转录物组学分析

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第5期40卷 638-646页

作者：曹志华谷小龙解琪李建婷方爱莉刘志贞山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室出生缺陷与细胞再生山西省重点实验室太原030001 煤炭环境致病与防治教育部重点实验室太原030001 山西医科大学第三医院(山西白求恩医院山西医学科学院同济山西医院)麻醉科太原030000

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一类中枢神经系统相关的重大出生缺陷型疾病。随着孕龄期妇女叶酸增补政策的推广,其发病率逐年下降致临床标本不易获取,因此,建立可靠的动物模型来研究NTDs的致病机制尤为重要。本研究分别通过... 详细信息

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一类中枢神经系统相关的重大出生缺陷型疾病。随着孕龄期妇女叶酸增补政策的推广,其发病率逐年下降致临床标本不易获取,因此,建立可靠的动物模型来研究NTDs的致病机制尤为重要。本研究分别通过低叶酸联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)建立的诱导NTDs小鼠模型和维甲酸(retinoic acid,RA)诱导建立的NTDs小鼠模型,对NTDs胎鼠脑组织进行转录物组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)并分析差异表达谱,最后,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)进行结果验证。结果显示,低叶酸联合MTX诱导的胎鼠NTDs发生率为21.7%;RA诱导的胎鼠出现了强烈的致畸现象,畸形率为73.2%。相比正常胎鼠,低叶酸联合MTX诱导的NTDs小鼠组筛选出1443个差异表达基因(differentially expression genes,DEGs);RA诱导NTDs小鼠组筛选出3070个DEGs。对DEGs进行生物信息学分析,GO富集显示,上调基因主要参与前后轴发育、区域化和模式分化过程等生物学过程;KEGG富集显示,上调基因与心肌收缩、心肌病、神经活性配体-受体相互作用等信号通路相关。对2种模型鼠的DEGs进行Veen交集分析,结果显示,共有132个DEGs在2组模型中显著上调,其中包括Hox基因家族。通过RT-qPCR进行验证,发现与RNA-seq的结果一致。本研究对2种NTDs小鼠胎脑进行RNA-seq和差异表达谱分析,发现Hox的异常表达可能导致了NTDs的发生,为后续发病机制的研究提供了探索与思考。

关键词：神经管畸形转录物组测序叶酸维甲酸同源盒基因

中药缓溃乐对溃疡性结肠炎小鼠HPA轴和5-HT信号通路相关分子的影响

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现代生物医学进展 2024年第4期24卷 617-623页

作者：木艾塔尔·艾斯卡尔阿依孜木姑·阿卜杜外力马依热·努尔买卖提朱稷蔚文滔潘文涛王汉铭卡思木江·阿西木江新疆医科大学新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学动物实验中心新疆乌鲁木齐830001 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830017 新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830017

目的:探讨中药缓溃乐(HKL)对溃疡性结肠炎小鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴以及5-羟色胺(5-HT)信号通路相关关键分子的影响。方法:C57BL/6小鼠(38只)随机分成HKL干预组(HKL组)、5-氨基水杨酸干预组(5-ASA组)、溃疡性结肠炎模型组(UC组)和正常... 详细信息

目的:探讨中药缓溃乐(HKL)对溃疡性结肠炎小鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴以及5-羟色胺(5-HT)信号通路相关关键分子的影响。方法:C57BL/6小鼠(38只)随机分成HKL干预组(HKL组)、5-氨基水杨酸干预组(5-ASA组)、溃疡性结肠炎模型组(UC组)和正常组。前三组小鼠用2%葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)干预7天,构建小鼠UC模型,同时分别用HKL、5-ASA和蒸馏水灌胃干预14天。每天观察动物一般状态、粪便性状。在干预结束后采集血清和结肠组织,采用HE染色法评价各组小鼠结肠组织完整性、损伤或愈合程度。酶联免疫吸附法测定血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质醇(CORT)、5-羟色胺(5-HT)、犬尿氨酸(KYN)和色氨酸(TRP)的含量;RT-qPCR法检测结肠组织中5-羟色胺转运蛋白(SERT)和色氨酸羟化酶I(TPH1)的m RNA水平。结果:HKL和5-ASA组小鼠结肠组织损伤部分恢复。UC小鼠血清ACTH、KYN、TRP和5-HT含量显著高于正常组(P分子的表达产生影响。

关键词：溃疡性结肠炎 HPA轴 5-HT信号通路中药缓溃乐

学术文献在生物化学《氨的代谢》教学中的应用

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继续医学教育 2024年第5期38卷 119-122页

作者：马艳华扈瑞平邓秀玲薛慧婷薛昕徐宋瑶内蒙古医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室内蒙古呼和浩特010000 内蒙古医科大学基础医学院生物化学与遗传学实验室内蒙古呼和浩特010000

生物化学是医学类专业的必修基础课,在理论与实验教学中注重培养学生的科研能力,符合“新医科”背景下对创新医学人才教育培养的要求,对于提高学生学习效果及培养专业能力十分重要。科研工作的基础是学术文献,查阅文献是学生科研能力提... 详细信息

生物化学是医学类专业的必修基础课,在理论与实验教学中注重培养学生的科研能力,符合“新医科”背景下对创新医学人才教育培养的要求,对于提高学生学习效果及培养专业能力十分重要。科研工作的基础是学术文献,查阅文献是学生科研能力提高的重要途径,阅读学术文献能够帮助学生迅速积累并扩大知识面,追踪专业发展前沿动态。文章以生物化学《氨的代谢》教学内容为例,将学术文献应用于“课前”“课中”和“课后”的教学环节中,在教学中融入学科前沿知识,提升教学效果,旨在探讨以提升科研能力为导向的生物化学教学策略,以期为其他课程教学提供新的思路及路径。

关键词：生物化学科研能力学术文献氨的代谢教学策略文献查阅

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文献阅读在分子生物学实验技术教学中的应用

继续医学教育 2024年第6期38卷 138-141页

作者：岳金金杨菁李宗泽王顺张秀梅锦州医科大学生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121000

分子生物学实验技术是基础医学专业学生进行科研接触到的最前沿学科之一,对于该专业学生科研思维的培养,学习前沿的医学理论、实验技术和科研知识起到至关重要的作用。为加强对实验教学中理论知识的理解,提高教学质量,本研究通过文献的... 详细信息

分子生物学实验技术是基础医学专业学生进行科研接触到的最前沿学科之一,对于该专业学生科研思维的培养,学习前沿的医学理论、实验技术和科研知识起到至关重要的作用。为加强对实验教学中理论知识的理解,提高教学质量,本研究通过文献的选取、检索、研读、汇报和讨论5个步骤进行开展学习,班级内部分组汇报讨论后教师进行打分评价总结,结合实际教学时涉及的实验内容,搭配研究前沿的论文,将前沿的实验方法和理论融入实际教学中,达到充分提高学生的自主学习能力,培养学生的科研思维,提高学生学习兴趣的目的。

关键词：分子生物学实验技术基础医学文献阅读讨论式教学实验教学科研

铁死亡抑制因子KIF20A对食管癌细胞生物学行为及铁死亡的影响

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昆明医科大学学报 2024年第2期45卷 49-56页

作者：热则耶·麦麦提祖农李秀娟刘玲李卉新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院中心实验室新疆乌鲁木齐830000

目的探讨驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及对Eca109细胞生物学行为和铁死亡的影响。方法通过生物信息学分析预测KIF20A在ESCC中的表达。构建KIF20A敲低/过表达Eca109... 详细信息

目的探讨驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及对Eca109细胞生物学行为和铁死亡的影响。方法通过生物信息学分析预测KIF20A在ESCC中的表达。构建KIF20A敲低/过表达Eca109细胞系,实验分组:对照组,KIF20A敲低组,KIF20A过表达组。通过CCK-8法,Transwell侵袭实验,细胞划痕实验检测KIF20A对Eca109细胞增殖,迁移能力的影响。采用RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导建立铁死亡应激模型,检测谷胱甘肽(glutathione,GSH),丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果和对照组比较,KIF20A敲低组细胞增殖活力降低(P<0.05),KIF20A过表达组细胞增殖活力增加(P<0.05)。与对照组比较,KIF20A敲低组细胞侵袭及迁移能力降低(P<0.05),KIF20过表达组细胞侵袭及迁移能力增加(P<0.05)。RSL3诱导处理后,KIF20A敲低组细胞裂解液中GSH含量低于对照组(P<0.05),MDA含量高于对照组(P<0.05);KIF20A过表达组细胞结果与之相反。结论KIF20A在ESCC中高表达,其在Eca109细胞中发挥着促进增殖、侵袭、迁移及抑制铁死亡的作用。

关键词：铁死亡驱动蛋白家族成员20A 食管鳞状细胞癌 RAS选择性致死化合物3

腓骨固定在胫腓骨关节外骨折中治疗效果的Meta分析

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中国骨伤 2024年第1期37卷 74-80页

作者：丛琳琳蒋品品郭华汪航车先达王春芳李文晋李鹏翠山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原030001 山西医科大学第二医院骨与软组织损伤修复山西省重点实验室山西太原030001 山西医科大学第二医院骨科山西太原030001 山西医科大学山西太原030001 山西医科大学实验动物中心山西太原030001 山西医科大学第二临床医学院口腔科山西太原030001

目的:通过Meta分析比较腓骨固定在胫腓骨关节外骨折中的作用及重要性。方法:通过对中国知网、维普、万方、The Cochrane Library、Web of science、Pubmed等数据库关于固定腓骨与否对胫腓骨关节外骨折治疗疗效比较的相关文献进行检索,... 详细信息

目的:通过Meta分析比较腓骨固定在胫腓骨关节外骨折中的作用及重要性。方法:通过对中国知网、维普、万方、The Cochrane Library、Web of science、Pubmed等数据库关于固定腓骨与否对胫腓骨关节外骨折治疗疗效比较的相关文献进行检索,检索时间为2012年1月至2022年2月,使用RevMan 5.3软件进行统计分析。对腓骨固定组与不固定组的复位不良率、旋转畸形率、内翻或外翻畸形率、前或后发畸形率、不愈合率、术后感染率、二次手术率及手术时间进行比较。结果:共纳入11篇文献,6篇随机对照研究和5篇病例对照研究,有8篇为高质量文献,共813例患者,其中腓骨固定治疗383例,未固定腓骨430例。Meta分析结果显示,与未固定腓骨相比,治疗胫腓骨关节外骨折时固定腓骨可以降低术后旋转畸形率[RR=0.22,95%CI(0.10,0.45),P0.05)。结论:在治疗胫腓骨关节外骨折时腓骨固定组相较于不固定组在防止旋转畸形和内翻或外翻畸形以及促进愈合方面更具优势。

关键词：胫骨腓骨骨折固定 Meta分析

小檗碱对多囊卵巢综合征小鼠卵丘扩展的作用及机制研究

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中国医药导报 2024年第13期21卷 1-6页

作者：夏晴王大勇葛方亮郑菲菲赵雪叶可刘璐璐刘雁峰北京中医药大学东直门医院妇科北京100700 哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的探索小檗碱(Ber)对多囊卵巢综合征小鼠卵丘扩展的作用及机制。方法选取育龄21~25 d的SPF级雌性C57BL/6小鼠28只,按照随机数字表法将其分为对照组、PCOS组、Ber低剂量组、Ber高剂量组,各7只。对照组皮下注射等体积玉米油溶剂,PCOS... 详细信息

目的探索小檗碱(Ber)对多囊卵巢综合征小鼠卵丘扩展的作用及机制。方法选取育龄21~25 d的SPF级雌性C57BL/6小鼠28只,按照随机数字表法将其分为对照组、PCOS组、Ber低剂量组、Ber高剂量组,各7只。对照组皮下注射等体积玉米油溶剂,PCOS组、Ber低剂量组、Ber高剂量组均皮下注射脱氢表雄酮(6 mg/100 g,溶于玉米油溶剂),连续21 d。以小鼠出现动情周期紊乱为PCOS模型构建成功标准。随后连续28 d,Ber低剂量组灌胃200 mg/kg Ber,Ber高剂量组灌胃400 mg/kg Ber,PCOS组灌胃等剂量的生理盐水。向各组小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素及人绒毛膜促性腺激素,于输卵管壶腹部获取卵丘卵母细胞复合物(COC),体外培养0、6 h观察小鼠卵丘扩展情况。免疫组织化学检测各组小鼠卵丘颗粒细胞中FTO蛋白表达水平。向人颗粒细胞瘤样细胞系(KGN细胞)中转染PC3.1质粒(PC3.1组)及PC3.1-FTO质粒(PC3.1-FTO组),免疫荧光检测两组细胞中透明质酸合成酶2(HAS2)表达水平。向KGN细胞中转染NC si RNA(NC组)及FTO si RNA(si FTO组),免疫荧光检测两组细胞中HAS2表达水平。结果与对照组比较,PCOS组小鼠动情周期失去周期性变化。提示PCOS小鼠模型构建成功。与PCOS组比较,Ber低剂量组小鼠动情周期逐渐恢复,Ber高剂量组小鼠动情周期仍失去周期性变化。与对照组比较,PCOS组小鼠COC卵丘细胞分布更致密,卵丘扩展受阻。与PCOS组比较,Ber低、高剂量组小鼠COC卵丘细胞分布更松散,卵丘扩展受阻明显改善。与对照组比较,PCOS组卵丘颗粒细胞中FTO表达水平升高(P<0.05)。与PCOS组比较,Ber低、高剂量组卵丘颗粒细胞中FTO表达水平均降低(P<0.05)。与PC3.1组比较,PC3.1-FTO组KGN细胞中HAS2表达水平降低(P<0.05)。与NC组比较,si FTO组KGN细胞中HAS2表达水平升高(P<0.05)。结论 Ber可能通过降低卵丘颗粒细胞中FTO表达水平,诱发HAS2表达水平升高,从而改善PCOS卵丘扩展状态。

关键词：多囊卵巢综合征脂肪质量和肥胖相关基因卵丘扩展透明质酸合成酶2