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研究生免疫学思政教学案例库建设的探索与实践

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：方亮陈丽华空军军医大学基础医学院免疫学教研室

免疫学是生物学和医学领域的支柱性学科，对于生物学、医学、药学、生物技术等相关领域的研究生来说，免疫学也是一门专业必修课程。随着新时代党和国家对高等教育提出的新要求，课程思政成为加强高校人才培养和思想政治教育的新举措和... 详细信息

免疫学是生物学和医学领域的支柱性学科，对于生物学、医学、药学、生物技术等相关领域的研究生来说，免疫学也是一门专业必修课程。随着新时代党和国家对高等教育提出的新要求，课程思政成为加强高校人才培养和思想政治教育的新举措和新方向。近年来我校研究生免疫学教学在思政改革方面取得了一定的进展和成绩，完成了思政教学案例库的建设。在建设过程中，我们以学科专业知识为主线，通过将思政内容系统化和分类化，创新性的凝练出包含多个类别的思政案例库。通过对案例库的使用，我们在研究生免疫学教学中有效解决了专业知识和思想政治教育较难融合这一关键问题，为教师提供有力的支持，同时提升了专业课程的教学效果，协助达成“立德树人，为战育人”的教学目标。

关键词：免疫学思政教学案例库

基于O-PIRTAS翻转课堂探讨我校《免疫与感染基础》模块教学新模式

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：刘赫张惠马宏炜吕欣雷迎峰王芳张芳琳程林峰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室

《医学微生物学》和《医学免疫学》是我校《免疫与感染基础》模块化教学中的重要组成部分。其中，《细菌的感染与免疫》是连接《医学微生物学》与《医学免疫学》的桥梁章节。该章节主要介绍致病菌如何侵入机体导致感染，以及机体免疫系... 详细信息

《医学微生物学》和《医学免疫学》是我校《免疫与感染基础》模块化教学中的重要组成部分。其中，《细菌的感染与免疫》是连接《医学微生物学》与《医学免疫学》的桥梁章节。该章节主要介绍致病菌如何侵入机体导致感染，以及机体免疫系统如何抵抗细菌感染，通过学习可以帮助学生构建“感染-免疫”知识框架。然而，该章节内容庞杂，课程时长有限，传统教学模式难以帮助学生理清知识脉络，教学效果较差，急需进行变革。作者以《细菌的感染与免疫》章节为例，探讨基于通用教学环节(O-PIRTAS)翻转课堂模式下的《免疫与感染基础》模块教学改革，为后续教学改革提供宝贵的经验。

关键词： O-PIRTAS翻转课堂细菌的感染与免疫教学设计教学模式

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乳酸调控巨噬细胞功能促进登革病毒2型感染

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 396-405页

作者：胡欢覃燕春黄贞植周璐吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室安顺550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室安顺550025

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨... 详细信息

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs,流式细胞术检测F4/80+CD11b+细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的mRNA表达水平,比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响,qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)及ISG56的mRNA表达水平,流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。结果BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI=3)感染BMDMs后,GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高,在24 h降低(P0.05)。结论本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染,该现象与细胞M2型极化有关。

关键词：乳酸巨噬细胞登革病毒病毒复制 M2型极化干扰素信号通路

核苷酸结合寡聚结构域样受体（NLR）在免疫代谢中的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：杨紫薇孙雯洁丁亚鑫马瑞雪吕云华刘梓谕侯诗源刘蓉蓉吴兴安空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西北大学生命科学学院基础医学院微生物学教研室空军军医大学基础医学院细胞生物学教研室

固有免疫中的核苷酸结合寡聚结构域样受体（NLR）家族对免疫功能的发挥起着至关重要的作用。含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3（NLRP3）、核苷酸结合寡聚结构域样受体X1（NLRX1）和含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域... 详细信息

固有免疫中的核苷酸结合寡聚结构域样受体（NLR）家族对免疫功能的发挥起着至关重要的作用。含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3（NLRP3）、核苷酸结合寡聚结构域样受体X1（NLRX1）和含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3（NLRC3）是NLR家族中的关键成员，它们与免疫代谢之间的关联成为了研究的新焦点。NLRP3的激活可促进炎性体的组装，导致白细胞介素1β（IL-1β）的激活，进而引发炎症反应。NLRC3则能抑制核因子κB（NF-κB）和干扰素基因刺激物/ TANK结合激酶1（STING/TBK1）信号通路的激活，以及炎性体的形成，进而调控免疫反应。而NLRX1则通过调节I型干扰素、NF-κB信号传导以及自噬等过程，对免疫应答进行精细调控。这些NLR成员不仅参与病原体的识别，更与免疫代谢的调控密切相关。对NLR家族的深入研究将有助于揭示免疫代谢的奥秘，为疾病的治疗提供新的思路。

关键词：免疫代谢核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR) 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 含CRAD结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRC3) 核苷酸结合寡聚结构域样受体X1(NLRX1) 综述

小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 447-454页

作者：薛潘董阳超武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表... 详细信息

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。

关键词：寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达单克隆抗体

小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 62-68页

作者：武福星董阳超张剑薛潘袁若栋陈洋元航李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 详细信息

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

关键词：西方马脑炎病毒(WEEV) E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) 原核表达单克隆抗体(mAb)

CD226在小鼠小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 1-6页

作者：羊璐马菁昌刘懿天王婷婷王玉玲庄然张正祥延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS... 详细信息

目的观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠肠炎模型,观察CD226在ILC3上表达的变化情况。结果小鼠小肠ILC1和ILC3均表达CD226;肠炎模型中ILC3所占比例降低,但CD226在ILC3上的表达水平升高。结论小鼠小肠表达CD226,DSS诱导的肠炎模型中虽然ILC3比例降低,但CD226在ILC3的表达增加。

关键词： 3型固有淋巴样细胞(ILC3) CD226 黏膜免疫肠道

靶向髓源性抑制细胞的叶酸循环增强肿瘤免疫治疗效果研究

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上海交通大学学报(医学版) 2024年

作者：何蕊颜克鹏王静上海交通大学基础医学院免疫学与微生物学系上海市免疫学研究所

目的·探究叶酸循环代谢对髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）免疫抑制作用的调控机制。方法·在C57BL/6小鼠骨髓细胞的培养体系中加入细胞因子粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor,G-CS... 详细信息

目的·探究叶酸循环代谢对髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）免疫抑制作用的调控机制。方法·在C57BL/6小鼠骨髓细胞的培养体系中加入细胞因子粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6），体外诱导MDSCs。利用流式细胞仪检测诱导MDSCs的程序性死亡受体配体1 （programmed deathligand 1,PD-L1）表达水平和活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生水平。采用磁珠分选出小鼠脾脏CD8+T细胞并用Celltrace violet或CFSE标记，再与MDSCs共培养，72 h后用流式细胞术检测CD8+T细胞增殖情况。通过实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR）检测MDSCs中叶酸循环相关代谢酶的表达水平。采用叶酸循环代谢酶亚甲基四氢叶酸脱氢酶2 （methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2,MTHFD2）抑制剂DS18561882（DS18）和叶酸拮抗剂培美曲塞（Pemetrexed）处理MDSCs，并用流式分析检测MDSCs产生ROS和线粒体ROS的水平。将DS18或培美曲塞处理后的MDSCs与磁珠分选出来并用Celltrace violet或CFSE标记的CD8+T细胞共培养，72 h后用流式细胞术检测CD8+T细胞增殖情况。利用RNA测序（RNA-seq）检测DS18和培美曲塞处理后MDSCs在转录组水平的变化。建立小鼠结肠癌（mouse colon cancer cells,MC38）和Lewis肺癌（Lewis lung carcinoma,LLC）皮下瘤模型。造模后第10天开始，采用Isotype抗体、抗CD8单抗（1 mg/kg，清除CD8+T细胞）、培美曲塞以及抗CD8单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠；利用Isotype抗体、抗Gr1单抗（1.25 mg/kg，清除MDSCs）、培美曲塞以及抗Gr1单抗联合培美曲塞处理MC38荷瘤小鼠；分别给予MC38和LLC荷瘤小鼠培美曲塞（50 mg/kg）、抗PD-1单克隆抗体（250μg/kg）以及培美曲塞联用抗PD-1单克隆抗体治疗；第14天收集小鼠肿瘤组织，记录肿瘤大小，绘制肿瘤生长曲线。结果·流式结果显示诱导后的骨髓细胞PD-L1的表达升高，ROS的产生也增加，且明显抑制CD8+T细胞的增殖。qPCR结果显示MDSCs中叶酸循环相关代谢酶MTHFD2等表达升高。给予DS18和培美曲塞处理MDSCs会影响MDSCs的累积，抑制MDSCs的ROS产生，并解除对CD8 T细胞的免疫抑制。RNA-seq结果表明2种叶酸循环抑制剂处理后，与MDSCs分化相关基因S100钙结合蛋白a8 （S100 calcium binding protein a8,S100a8）等下调，与MDSCs抑制功能相关基因如与ROS产生有关的基因细胞色素b-245β链（cytochrome b-245beta chain,Cybb）等也有所下调。与对照组相比，培美曲塞处理组的小鼠肿瘤生长明显受到抑制。与培美曲塞处理组相比，抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展加剧；与抗CD8单抗处理组相比，抗CD8单抗联合培美曲塞处理组肿瘤进展受到限制。清除MDSCs能显著抑制肿瘤生长，然而在清除MDSCs的荷瘤小鼠中，培美曲塞的抗肿瘤作用显著低于培美曲塞单独处理的小鼠。与抗PD-1抗体单独治疗相比，培美曲塞联用抗PD-1抗体治疗组的肿瘤生长限制更为显著。结论·培美曲塞依赖CD8+T细胞发挥抗肿瘤作用，并通过重编程MDSCs为抗肿瘤表型，进一步阻碍肿瘤生长。通过调控MDSCs叶酸循环阻断其免疫抑制能力，可增强免疫检查点阻断剂治疗肿瘤效果。

关键词：髓源性抑制细胞叶酸循环亚甲基四氢叶酸脱氢酶2 培美曲塞肿瘤免疫治疗

KRT6A调控胰腺导管腺癌细胞生物学行为的作用及作为诊断与预后判断靶标的研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第5期31卷 462-468页

作者：王浩泽杨轩陈昕苑顾炎海军军医大学基础医学院免疫学教研室暨免疫与炎症全国重点实验室上海200433

目的:通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A(KRT6A)对胰腺导管腺癌(PDAC)诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC细胞PANC1增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:通过GEPIA平台整合TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库与GTEx(... 详细信息

目的:通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A(KRT6A)对胰腺导管腺癌(PDAC)诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC细胞PANC1增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:通过GEPIA平台整合TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库与GTEx(Genotype-Tissue)数据库中的数据,分析KTRT6A在PDAC组织中的表达情况,并通过CIBERSORT工具分析KRT6A表达与PDAC组织中免疫细胞浸润的关系,然后通过GSEA方法研究与KRT6A基因表达相关的肿瘤信号通路。选取长海医院病理科保存的60例PDAC组织与癌旁组织标本进行免疫组化分析,验证KRT6A在肿瘤组织中表达情况;通过干扰RNA敲减PANC1细胞中KRT6A的表达,采用CCK-8实验以及流式细胞术检测敲减KRT6A对细胞的增殖、凋亡的影响。结果:利用TCGA与GTEx数据库数据分析发现,KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,且与患者较差的生存期存在关联(P=0.015)。利用CIBERSORT软件以及GSEA分析发现,KRT6A高表达的PDAC组织中M2型巨噬细胞浸润性升高(P=0.034),且与Wnt通路(NES:1.7359272,P免疫组化结果进一步验证了KRT6A在PDAC组织中呈高表达(P<0.001)。增殖和凋亡实验发现,干扰KRT6A能够显著抑制PANC1细胞的增殖(P<0.05)以及凋亡(P<0.001)。结论:KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,敲减其表达能够抑制PANC1细胞的增殖和凋亡,具有作为PDAC诊断与预后判断新靶标的潜力。

关键词：胰腺导管腺癌 KRT6A基因 PANC1细胞增殖凋亡诊断预后