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利用CRISPR/Cas9技术建立STAT1敲除细胞系及其功能验证

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病毒学报 2024年第3期40卷 519-527页

作者：张俊梅王芳应旗康冯文杰古天乐吴兴安空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 延安大学生命科学学院延安716000

信号转导和转录活化因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)是干扰素信号通路中的关键分子,在对抗病毒和其他病原体的免疫反应中发挥重要作用,构建STAT1敲除细胞系有助于研究其在病毒感染过程中的作用与机制... 详细信息

信号转导和转录活化因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)是干扰素信号通路中的关键分子,在对抗病毒和其他病原体的免疫反应中发挥重要作用,构建STAT1敲除细胞系有助于研究其在病毒感染过程中的作用与机制。本研究利用CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9)基因编辑技术构建STAT1基因敲除细胞系。首先构建STAT1基因特异性打靶载体,后通过慢病毒转导人非小细胞肺癌细胞系(Human non-small cell lung cancer cells,A549),嘌呤霉素筛选稳定转导的细胞后进行单克隆化,最后对获取的单克隆细胞在分子水平上进行敲除及敲除回补验证,成功构建一株STAT1基因敲除(STAT1 gene knockout,STAT1-KO)的A549细胞,且该细胞系可维持正常细胞活性与增殖能力。以汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)感染验证,发现在该细胞系中病毒复制水平明显升高。本研究成功构建了一株STAT1-KO A549细胞,可为抗病毒药物和干扰素信号通路研究提供有力工具。

关键词：信号转导和转录活化因子1 CRISPR/Cas9 基因敲除汉滩病毒

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军团菌野生株与胞内分离株全菌蛋白比较

热带医学杂志 2024年第10期 1384-1387+1399+1498页

作者：余泽英韩蓉陈建平成都医学院基础医学院病原生物学教研室四川大学华西基础医学与法医学院病原生物系

目的采用蛋白质组学方法，探索军团菌自然水体株与胞内分离株蛋白表达的差异。方法将菌株CD-5感染巨噬细胞16 h后裂解细胞分离军团菌，并命名为CD-5'。将CD-5和CD-5'分别用培养基培养后提取全菌蛋白，蛋白定量后通过SDS电泳和Western ... 详细信息

目的采用蛋白质组学方法，探索军团菌自然水体株与胞内分离株蛋白表达的差异。方法将菌株CD-5感染巨噬细胞16 h后裂解细胞分离军团菌，并命名为CD-5'。将CD-5和CD-5'分别用培养基培养后提取全菌蛋白，蛋白定量后通过SDS电泳和Western blot探索存在差异后，采用双向电泳联合MALDI-TOF-TOF质谱深入研究。结果 CD-5全菌蛋白双向电泳图上获得214个蛋白点，CD-5'获得256个蛋白点，二者之间共有96个差异蛋白点。CD-5与CD-5'相比，CD-5有32个蛋白表达上调（编号：A01-A32）,CD-5'有64个蛋白表达上调（编号：B01-B64）。对9个具有显著差异蛋白点进行酶解质谱分析，鉴定结果：A22为β-内酰胺酶，A23为苹果酸脱氢酶，A30为核苷酸绑定蛋白，A31为核糖体再循环因子，A32为假想蛋白，B03为30 s核糖体蛋白S1,B17为四型分泌系统蛋白Dot,B23为延伸因子-G片段，B62为烷基过氧化氢复原酶C亚基蛋白。结论胞内外军团菌蛋白表达具有差异，这些蛋白可能在军团菌生理、致病、毒力方面起到一定作用。

关键词：军团菌水体胞内全菌蛋白

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拐枣提取物的活性成分及肠道菌群调节作用

中国测试 2024年

作者：蒙紫鑫陈峥宏吴道艳贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州省病原生物学特色重点实验室

拐枣富含多酚，本课题研究了拐枣甲醇提取物的活性成分和益生功能，为拐枣甲醇提取物的开发利用提供参考价值。利用气相色谱/质谱（GC/MS）和高效液相色谱（HPLC）技术结合体外发酵模型，对拐枣甲醇提取物的活性成分及肠道菌群调节作用... 详细信息

拐枣富含多酚，本课题研究了拐枣甲醇提取物的活性成分和益生功能，为拐枣甲醇提取物的开发利用提供参考价值。利用气相色谱/质谱（GC/MS）和高效液相色谱（HPLC）技术结合体外发酵模型，对拐枣甲醇提取物的活性成分及肠道菌群调节作用进行分析测试。结果表明，在拐枣甲醇提取物中检测到7-羟基-4-甲氧基甲基香豆素、(4-溴-2-氯苯氧基)乙酸、胸苷、西伯利亚远志糖A6等主要化学组分；定量检测到可增强拐枣甲醇提取物抗氧化能力的没食子酸、阿魏酸、香草酸、儿茶素等酚类物质。拐枣甲醇提取物可促进肠道益生菌的增殖，提高肠道菌群代谢物短链脂肪酸（SCFAs）的含量。综上，拐枣甲醇提取物具有多种活性成分，对肠道菌群有调节作用，研究结果有望挖掘其在肠道健康和产品开发领域的应用潜力。

关键词：拐枣活性成分多酚肠道菌群短链脂肪酸

RNA及翻译后修饰在肠道病毒感染与致病中的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 453-459页

作者：薛晓玲罗震王誉雅陈邦涛陶晓莉锦州医科大学基础医学院病原生物学系锦州121001 暨南大学病原微生物研究院广州510632 中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所模式动物研究室北京100082 重庆大学附属三峡医院皮肤科重庆404000

肠道病毒(enterovirus,EV)是一群病原体结构及致病机制高度相似但可引起人类多种疾病的重要RNA病毒,目前仍严重威胁着人类健康。EV与宿主互作中发生的生物学事件是学术界探究EV致病机制及开发相关防治策略始终绕不开的核心主题。由于组... 详细信息

肠道病毒(enterovirus,EV)是一群病原体结构及致病机制高度相似但可引起人类多种疾病的重要RNA病毒,目前仍严重威胁着人类健康。EV与宿主互作中发生的生物学事件是学术界探究EV致病机制及开发相关防治策略始终绕不开的核心主题。由于组学技术的更新,EV及宿主的RNA修饰和蛋白质翻译后修饰(post-translational modifications,PTM)在近些年得到广泛关注并取得了部分成果,为精准靶向各修饰开发防治EV相关疾病的策略带来了新曙光。本文就EV-宿主互作中相关RNA修饰及蛋白PTM的研究进展进行概述,以期增强对EV感染与致病机制的理解并为临床转化研究提供有益参考。

关键词：肠道病毒 RNA修饰蛋白质翻译后修饰

572例宫颈癌远处转移患者的转移特征及生存分析:以医院为基础的真实世界研究

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中国癌症杂志 2024年第4期34卷 361-367页

作者：沈洁冯小双温灏周昌明莫淼王泽洲袁晶吴小华郑莹复旦大学附属肿瘤医院肿瘤预防部复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤妇科复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032

背景与目的:让宫颈癌患者获得有效的治疗是全球消除宫颈癌的策略之一。本文通过分析以医院登记为基础的宫颈癌发生远处转移患者的转移特征及转移后生存情况,为改善宫颈癌患者的生存情况并最终消除宫颈癌提供真实世界的科学证据。方法:... 详细信息

背景与目的:让宫颈癌患者获得有效的治疗是全球消除宫颈癌的策略之一。本文通过分析以医院登记为基础的宫颈癌发生远处转移患者的转移特征及转移后生存情况,为改善宫颈癌患者的生存情况并最终消除宫颈癌提供真实世界的科学证据。方法:基于复旦大学附属肿瘤医院2008—2017年确诊并接受治疗的宫颈癌患者,纳入初诊时已发生远处转移或者随访过程中发生远处转移的宫颈癌患者共572例,通过患者复诊病史资料、电话随访及死因数据链接等方式收集生存信息。研究起始时间为转移发生时间,随访统计时间截至2020年11月1日。应用Kaplan-Meier法绘制总体及不同转移部位的生存曲线,并估计不同转移部位的中位生存时间及1、3和5年总生存(overall survival,OS)率。结果:随访中位时间为38.93个月,期间共发生全死因死亡348例。72.55%为单一部位转移,27.45%为多发性转移。在所有转移部位中,肺转移比例最高(41.26%),其次为骨转移(15.21%),肝转移占11.54%,位列第3位。发生转移后,1、3和5年的OS率分别为62.29%(95%CI:62.25~62.33)、33.13%(95%CI:33.08~33.18)和23.42%(95%CI:23.37~23.47)。单一部位转移中,转移至肺后的1年OS率最高(72.52%),3和5年各个部位转移后的OS差异不显著。结论:宫颈癌最易发生远处转移的部位依次为肺、骨和肝,远处转移发生后患者的生存情况较差,规范和完善远处转移后的诊疗体系,可望改善患者的生存情况。

关键词：宫颈癌转移生存率医院登记

静息与感染状态下巨噬细胞和经典树突状细胞的发育及功能研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第6期40卷 556-560页

作者：张蕾崔洁梁尹攀张欢欢伊淑莹山东第一医科大学临床与基础医学院(基础医学研究所)生物化学与分子生物学系山东济南250062

巨噬细胞(MAC)和经典树突状细胞(cDC)是免疫防御的首要防线,在先天免疫和适应性免疫中扮演着重要角色,它们具有高度组织特异性,能够精确的适应环境变化。MAC在维持组织稳态和免疫监视方面发挥作用,而cDC作为最有效的抗原提呈细胞,在免... 详细信息

巨噬细胞(MAC)和经典树突状细胞(cDC)是免疫防御的首要防线,在先天免疫和适应性免疫中扮演着重要角色,它们具有高度组织特异性,能够精确的适应环境变化。MAC在维持组织稳态和免疫监视方面发挥作用,而cDC作为最有效的抗原提呈细胞,在免疫应答中起关键作用。这两种细胞类型之间也存在相似性和相互联系,MAC和cDC都能识别病原体和组织损伤,它们通过分泌细胞因子激活其他先天免疫细胞,并通过与T细胞的相互作用启动或调节适应性免疫。本文总结了静息与感染过程中MAC及cDC的发育及功能的研究进展,阐述了它们在免疫系统中的关系和相互作用,为疾病的深入研究提供了理论基础。

关键词：巨噬细胞树突状细胞炎症免疫训练免疫耐受综述

介导疫苗递送的可溶性微针制备技术相关研究进展

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微生物学免疫学进展 2024年第3期52卷 97-101页

作者：仲崇瑶(综述) 王培刚(审校) 首都医科大学基础医学院病原生物学系微生物教研室北京100069

微针(microneedles, MNs)由具有纳米级别针头的微型阵列组成,能够将疫苗输送至皮下,在诱导细胞产生强烈免疫应答的同时不损害神经和血管,避免产生疼痛,是有潜力的经皮免疫技术。MNs由针尖与基底组成,种类包括固体微针(solid microneedle... 详细信息

微针(microneedles, MNs)由具有纳米级别针头的微型阵列组成,能够将疫苗输送至皮下,在诱导细胞产生强烈免疫应答的同时不损害神经和血管,避免产生疼痛,是有潜力的经皮免疫技术。MNs由针尖与基底组成,种类包括固体微针(solid microneedles, SMNs)、涂层微针(coated microneedles, CMNs)、可溶性微针(dissolving microneedles, DMNs)等。其中,DMNs由可生物降解的聚合物在模具中干燥制成,整根针均可负载药物。将DMNs施用于皮肤,针头能够完全溶解于体内释放封装的抗原,且无利器残留,具有广阔的发展前景。现就能够介导疫苗递送的可溶性微针的结构、制作材料与方法等作一概述。

关键词：可溶性微针疫苗经皮给药免疫佐剂免疫效果

创建人体寄生虫学课程思政教学评价体系及其应用

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热带医学杂志 2024年第2期24卷 294-298页

作者：许静代馥虹夏超明苏州大学苏州医学院基础医学与生物科学学院病原生物学系江苏苏州215123

目的创建人体寄生虫学课程思政评价体系。方法以人体寄生虫学作为课程思政教学载体,以临床医学专业本科生为教学对象,设立实验班和平行对照班,针对课程思政评价体系的建设路径和体系构成开展实践研究。结果初步建立人体寄生虫学课程... 详细信息

目的创建人体寄生虫学课程思政评价体系。方法以人体寄生虫学作为课程思政教学载体,以临床医学专业本科生为教学对象,设立实验班和平行对照班,针对课程思政评价体系的建设路径和体系构成开展实践研究。结果初步建立人体寄生虫学课程思政教学评价体系,实践成效显著,实验班期末卷面成绩和总评成绩均明显高于平行对照班(t=2.692、3.256,P均<0.05)。结论成功构建人体寄生虫学课程思政教学评价体系,为构建具体可行的高校专业课课程思政教学效果评价体系提供了借鉴和参考。

关键词：人体寄生虫学思政教学评价体系

基于泛基因组学和消减蛋白质组学技术筛选金黄色葡萄球菌新型抗菌靶点及其药物的分子对接分析

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吉林大学学报（医学版） 2024年第4期50卷 970-977页

作者：谭锦莉黄丹廖婧阳朱刘冲刘文彬广东药科大学基础医学院病原生物学教研室广东广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的:应用泛基因组学和消减蛋白质组学技术从金黄色葡萄球菌基因组中筛选新抗菌靶点,为抗金黄色葡萄球菌药物的研发奠定基础。方法:在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中以金黄色葡萄球菌为关键词检索全基因组测序数据,收集50个测... 详细信息

目的:应用泛基因组学和消减蛋白质组学技术从金黄色葡萄球菌基因组中筛选新抗菌靶点,为抗金黄色葡萄球菌药物的研发奠定基础。方法:在美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库中以金黄色葡萄球菌为关键词检索全基因组测序数据,收集50个测序级别为Complete的菌株基因组数据。采用BPGA工具对基因组数据进行泛基因组分析获得金黄色葡萄球菌核心基因,采用消减蛋白质组学技术从中筛选获得潜在抗菌靶点,以潜在抗菌靶点为受体,采用LibDock软件从美国食品药品监督管理局(FDA)批准的药物库中筛选潜在的抗金黄色葡萄球菌药物,并采用分子对接技术分析药物和靶点的结合能力。结果:50个金黄色葡萄球菌基因组中共有14379个基因家族,其中1620个为核心基因。消减蛋白质组学分析,酪氨酸自激酶1335为潜在的抗金黄色葡萄球菌靶点。采用LibDock软件筛选出巴龙霉素、替诺福韦二吡呋酯和阿德福韦等9个化合物可能针对该靶点蛋白发挥抗金黄色葡萄球菌作用,分子对接结果显示靶点与化合物结合力良好。结论:酪氨酸自激酶可能是一种抗金黄色葡萄球菌潜在的靶点。

关键词：金黄色葡萄菌泛基因组分子对接消减蛋白质组

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