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低浓度猪链球菌溶血素诱导猪肾细胞凋亡方式研究

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农业生物技术学报 2024年第2期32卷 355-366页

作者：戴世馨赵勤徐魁牟欣然杜森焱伍锐文翼平黄小波颜其贵曹三杰四川农业大学动物医学院/猪病研究中心/国家级动物类实验教学示范中心/农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种危害严重的人畜共患病原菌，猪链球菌溶血素(suilysin, Sly)在猪链球菌的侵袭和致病中起关键作用，对多种类型的细胞具有毒性作用，但目前关于Sly的细胞毒性机制研究较少。为了探讨低浓度(0.3～0.6μ... 详细信息

猪链球菌(Streptococcus suis)是一种危害严重的人畜共患病原菌，猪链球菌溶血素(suilysin, Sly)在猪链球菌的侵袭和致病中起关键作用，对多种类型的细胞具有毒性作用，但目前关于Sly的细胞毒性机制研究较少。为了探讨低浓度(0.3～0.6μg/mL) Sly诱导猪肾细胞PK-15(porcine kidney-15)的死亡方式，本研究首先采用原核表达并纯化获得重组猪链球菌溶血素(recombinant suilysin, rSly)，通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放检测rSly对PK-15细胞的毒性作用，并针对4种常见程序性细胞死亡方式，利用qPCR、间接免疫荧光、Werstern blot和流式细胞术对rSly作用于PK-15细胞12及24 h诱导的细胞死亡方式进行验证。结果显示，成功表达具有较高溶血活性(溶血单位为214)的rSly毒素蛋白，确定其对PK-15细胞的毒性作用呈浓度依赖性，并且发现rSly作用PK-15细胞12和24 h均引起PK-15细胞凋亡相关基因—半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteine aspartic acid specific protease 3, Caspase 3)、Caspase 9的转录水平显著升高(P<0.05)，细胞凋亡率与r Sly浓度呈正相关，0.6μg/mL rSly作用PK-15细胞24 h，细胞凋亡率从9.35%增至49.9%；自噬关键基因—微管相关蛋白轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3β, LC3β)基因转录水平无明显变化且无自噬小体形成；焦亡关键基因—胃泌素D(gasdermin D,GSDMD)的转录水平无明显变化且GSDMD蛋白未发生明显切割；坏死性凋亡相关基因下调，且磷酸化混合系列蛋白激酶样结构域蛋白(phosphorylated mixed lineage kinase domain-like protein, p-MLKL)表达水平受到抑制。上述结果提示低浓度rSly诱导PK-15细胞死亡的方式主要是凋亡。本研究丰富了Sly毒性作用的细胞模型，有助于揭示参加猪链球菌感染发展的分子机制。

关键词：重组猪链球菌溶血素(rSly) 猪肾细胞(PK-15) 细胞毒性细胞死亡方式细胞凋亡

重组多杀性巴氏杆菌毒素介导FGFRL1诱导Hela细胞增殖研究

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农业生物技术学报 2024年第8期32卷 1899-1908页

作者：林忠森赵勤袁建林伍锐颜其贵文翼平黄小波杜森焱曹三杰四川农业大学动物医学院/猪病研究中心/国家级动物类实验教学示范中心/农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测站

成纤维细胞生长因子受体样因子1 (fibroblast growth factor receptor-like 1, FGFRL1)作为成纤维细胞生长因子受体家族成员，在调控细胞增殖、分化上起作用。多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin, PMT)是多杀性巴氏杆菌(P.... 详细信息

成纤维细胞生长因子受体样因子1 (fibroblast growth factor receptor-like 1, FGFRL1)作为成纤维细胞生长因子受体家族成员，在调控细胞增殖、分化上起作用。多杀性巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin, PMT)是多杀性巴氏杆菌(P. multocida, Pm)产生的重要毒力因子，属于一种促有丝分裂原蛋白，在多种细胞上引起细胞增殖，导致组织增生、占位，使其他正常组织细胞生存受限而死亡，但目前PMT引起促增殖作用的机制以及介导的因子均不清晰。前期CRISPR/Cas9全基因文库筛选发现FGFRL1提高了重组PMT (recombinant PMT, rPMT)蛋白染毒处理的Hela细胞存活率。为探究PMT在Hela细胞上的促增殖作用是否通过FGFRL1介导，本研究分别使用0、0.01、0.1、1.0μg/mL的rPMT蛋白处理正常及FGFRL1基因缺失的Hela细胞各48 h,CCK-8 (Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖率、Ed U-488标记法检测细胞DNA复制情况、划痕试验法检测增殖细胞的迁移率。结果显示，在rPMT浓度为0.1μg/mL处理48 h时，缺失FGFRL1的Hela细胞增殖显著下降(P<0.05)，而划痕恢复率与正常Hela细胞相比下降接近70%(P<0.05)。说明FGFRL1的缺失减弱了rPMT对Hela的促增殖作用。利用实时荧光定量PCR检测rPMT处理后Hela细胞磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3kinase/serine-threonine protein kinase, PI3K-AKT)通路上游因子变化水平、Western blot检测该通路关键激活因子AKT的磷酸化水平进行初步验证。结果显示：r PMT处理后PI3K-AKT通路上游因子转录水平显著升高(P<0.05)，缺失FGFRL1的Hela细胞AKT与磷酸化AKT水平极显著低于正常Hela细胞(P<0.01)，说明PI3K-AKT通路激活受到抑制。由此可以初步确认PMT可能通过FGFRL1靶向PI3K-AKT通路引起Hela细胞增殖。本研究丰富了PMT促增殖作用的理论基础，初步探索了PMT引起细胞增殖的通路激活方式，为进一步揭示PMT的促增殖作用提供参考。

关键词：成纤维细胞生长因子受体样因子1(FGFRL1) 重组多杀性巴氏杆菌毒素(rPMT) Hela细胞细胞增殖 PI3K-AKT通路

去势和热应激对筠连黄牛生产性能、瘤胃发酵和血液生化指标的影响

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中国农业大学学报 2024年第1期29卷 127-139页

作者：岳子奇姚小鹤王之盛胡瑞邹华围肖鉴鑫左之才彭全辉梁秀容邓文松王成左家学四川农业大学动物营养研究所/四川省牛低碳养殖与安全生产重点实验室成都611130 四川农业大学动物医学院成都611130 筠连县农业农村局四川宜宾645250 筠连县畜牧水产业发展服务中心四川宜宾645250 临沧市畜牧技术推广站云南临沧677099

为研究去势和热应激对筠连黄牛生产性能、瘤胃发酵和血液生化指标的影响,本研究选用18头16月龄、体重相近((292.35±28.71)kg)的不同去势程度筠连黄牛(全去势FCG、半去势HCG、假手术SOG),分为3组,每组6个重复,每个重复1头牛,根据试验期... 详细信息

为研究去势和热应激对筠连黄牛生产性能、瘤胃发酵和血液生化指标的影响,本研究选用18头16月龄、体重相近((292.35±28.71)kg)的不同去势程度筠连黄牛(全去势FCG、半去势HCG、假手术SOG),分为3组,每组6个重复,每个重复1头牛,根据试验期间牛舍温湿度指数(THI),分为热应激期(7、8月)和非热应激期(9月),分析去势和热应激对黄牛各指标的影响。结果表明:1)与非热应激期相比,热应激期牛舍THI、肉牛呼吸频率和直肠温度均显著提高(P<0.05)。2)去势和热应激均显著提高血清热休克蛋白70、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和雌二醇浓度(P<0.05),而睾酮、甲状腺素(T4)、胰岛素和游离脂肪酸浓度显著降低(P<0.05),且除血清葡萄糖、T4和LDL-C外,去势和热应激对其他血清指标存在显著互作效应(P<0.05)。3)全去势和热应激均显著降低肉牛平均日增重(ADG),且存在显著互作效应(P<0.05)。4)热应激期,去势显著降低粗蛋白、酸性洗涤纤维和钙表观消化率以及血清总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05),而热应激消除后,去势显著提高了T-AOC含量(P<0.05)。5)去势和热应激均显著提高瘤胃pH(P<0.05),显著降低氨态氮(NH3-N)、乙酸(AA)和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度(P<0.05),且去势和热应激对瘤胃pH、NH3-N、AA和TVFA浓度存在显著互作效应(P<0.05)。综上,公牛去势和热应激均会影响机体性激素分泌和养分表观消化率,从而降低生产性能,为热应激期肉牛饲养管理提供科学依据。

关键词：筠连黄牛热应激去势生产性能表观消化率血液生化指标

声波脉冲对奶牛生产性能及乳房炎影响初步研究

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南京农业大学学报 2024年

作者：王苏苏李涛丁宁王莹陈冰玉张威陈芷希徐俊杰时晓丽向小娥仲伟臣蔡亚非南京农业大学动物科技学院/江苏省奶牛生产性能测定中心/奶牛疾病诊断联合创新实验室广州海关技术中心南京农业大学动物科学类国家级实验教学示范中心上海方顺医疗器械有限公司

[目的]奶牛乳房炎是奶牛养殖过程中的高发疾病，本研究旨在对声波脉冲技术(acoustic pulse therapy， APT)治疗奶牛乳房炎的效果进行初步探究。[方法]根据致病菌和牛奶体细胞检测结果，选择江苏省某牧场临床乳房炎和亚临床乳房炎奶牛10... 详细信息

[目的]奶牛乳房炎是奶牛养殖过程中的高发疾病，本研究旨在对声波脉冲技术(acoustic pulse therapy， APT)治疗奶牛乳房炎的效果进行初步探究。[方法]根据致病菌和牛奶体细胞检测结果，选择江苏省某牧场临床乳房炎和亚临床乳房炎奶牛100头，其中临床乳腺炎奶牛共60头，包括APT治疗组20头，抗生素治疗组20头，APT和抗生素联合治疗组20头；亚临床乳腺炎（隐性乳房炎）奶牛20头采用APT治疗；20头的正常奶牛作为阴性对照组，根据对比试验，探究APT治疗奶牛乳房炎的效果。[结果]试验证明，当奶牛罹患乳房炎后，生产性能指标体细胞数显著升高（P0.05)；白细胞数目、中性粒细胞数目、淋巴细胞数目显著下降（P0.05)；亚临床组炎症因子IL-1β显著下降（P<0.05），炎症因子IL-6、IL-8显著降低（P<0.05），亚临床组糖皮质激素显著下降（P<0.05）。[结论]APT作为一种新的奶牛乳房炎治疗技术，可以有效治愈奶牛乳房炎，同时治疗期间没有产生奶量损失，可以缓解牧场的压力。

关键词：奶牛乳房炎 APT 产奶量

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一株猪流行性腹泻病毒强毒株的分离与鉴定

畜牧兽医学报 2024年第7期55卷 3049-3063页

作者：刘维哲罗成刚袁蓉廖艺杰文艺悯孙莹俞恩波曹三杰黄小波四川农业大学动物医学院猪病研究中心成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站成都611130 成都市畜禽遗传资源保护中心成都610081

为了掌握猪流行性腹泻病毒(PEDV)最新流行毒株的病原特征与致病性,开展了PEDV的分离与鉴定。将PEDV阳性病料样品接种Vero细胞连续盲传,分离PEDV流行毒株,并开展了分离毒株的培养特性、全基因组序列分析和仔猪致病性评价。结果显示:传至... 详细信息

为了掌握猪流行性腹泻病毒(PEDV)最新流行毒株的病原特征与致病性,开展了PEDV的分离与鉴定。将PEDV阳性病料样品接种Vero细胞连续盲传,分离PEDV流行毒株,并开展了分离毒株的培养特性、全基因组序列分析和仔猪致病性评价。结果显示:传至第3代(P3)分离出一株病毒,病毒在细胞上形成典型的“合胞体”样病变;电镜下病毒大小60~110 nm;P10到P35代滴度从10^(4.7)TCID_(50)·mL^(-1)升至10^(6.43)TCID_(50)·mL^(-1);CHN-SC2021(P5)基因组全长28014 bp(GenBank收录号:OM505025.1),与中国地区、欧美地区、亚洲其他国家毒株的相似性分别为99.16%~96.32%、99.01%~96.57%、98.94%~96.33%;系统进化树显示CHN-SC2021株与江西CH/JXJA/2017(MF375374.1)、河南CH/HNAY/2015(KT199103.1)、CH/HNKF-16(KY649107.1)毒株亲缘关系较近,属于GⅡa型毒株。S基因序列与参考毒株相似度在98.7%~93.4%。将CHN-SC2021病毒液以每头3 mL 10~5 TCID_(50)·mL^(-1)的剂量口服感染6日龄哺乳仔猪,12 h开始出现食欲不振,20 h时呕吐,24 h出现剧烈呕吐和黄色水样腹泻;剖检病变主要是胃肠臌气、空肠和回肠透明;组织病变显示各肠段均有不同程度的肠绒毛病变、脱落、结缔组织疏松、黏膜肌层与肌层间距增宽等;免疫组化结果显示小肠各段均有病毒,回肠中病毒最多。本研究分离获得一株GⅡa型的PEDV强毒株,有助于丰富我国PEDV的流行毒株信息及为临床防控提供参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒分离鉴定序列分析哺乳仔猪致病性

动物科学与动物医学虚拟仿真实验教学平台的建设与实践

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中国现代教育装备 2024年第1期 52-55页

作者：杨萍萍姜世金商营利袁朋徐瑞雪山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东农业大学动物科学与动物医学国家级实验教学示范中心山东泰安271018

实验教学是动物科学与动物医学专业人才培养的重要组成部分。为了突破生物安全、动物福利、教学成本、实验条件等对动物类实验教学的制约,山东农业大学动物科学与动物医学国家级实验教学示范中心根据教学需求构建虚拟仿真实验教学平台,... 详细信息

实验教学是动物科学与动物医学专业人才培养的重要组成部分。为了突破生物安全、动物福利、教学成本、实验条件等对动物类实验教学的制约,山东农业大学动物科学与动物医学国家级实验教学示范中心根据教学需求构建虚拟仿真实验教学平台,推动实验教学模式的创新与改革,激发了学生学习兴趣,提升了实验教学水平,实现了教学资源开放共享,提高了人才培养质量。

关键词：虚拟仿真实验教学动物科学动物医学

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鲫腹膜分布、组织学及光照对其影响研究

淡水渔业 2024年第4期54卷 32-38页

作者：毛天宇李明轩冯柯尧郑菲菲张亚倩孙艳红陈见祝东梅华中农业大学水产学院水产养殖国家级实验教学示范中心武汉430070 武汉市农业科学院武汉430345

腹膜在脊椎动物中普遍存在,由间皮细胞构成,通过结缔组织的支持作用形成的一层膜状组织,具有润滑、支持和保护等功能。鱼类有腹膜且分布有色素细胞,本研究选取常见经济鱼类鲫(Carassius auratus)为实验对象,采用组织学方法研究其腹膜分... 详细信息

腹膜在脊椎动物中普遍存在,由间皮细胞构成,通过结缔组织的支持作用形成的一层膜状组织,具有润滑、支持和保护等功能。鱼类有腹膜且分布有色素细胞,本研究选取常见经济鱼类鲫(Carassius auratus)为实验对象,采用组织学方法研究其腹膜分布及色素细胞形态特征,并探究光照条件对鲫腹膜色素细胞的影响。结果显示:(1)鲫腹膜呈黑色,腹腔腹壁内侧、心腹隔膜靠近腹腔一侧有明显分布,腹腔腹壁内侧黑色腹膜在腹腔上方延伸包裹性腺后相连覆于鳔下侧。(2)鲫腹膜黑色素细胞为黑色的树突状细胞。(3)鲫腹腔腹壁内侧腹膜的石蜡组织切片显示黑色素细胞连续分布形成黑色色素带,细胞核椭圆形、呈蓝紫色;扫描电镜下腹膜组织凹凸不平,由嵴组成多角形的网状结构;透射电镜下黑色素细胞有细胞核和黑素小体,黑素小体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个时期。(4)不同光照影响鲫腹腔腹壁内侧腹膜黑色素细胞的形态,光照组黑色素细胞胞体变大、分支变粗,呈色变深;黑暗组黑色素细胞胞体变小、分支变细长。本研究为鱼类腹膜系统研究提供理论参考。

关键词：鲫(Carassius auratus) 腹膜黑色素细胞电镜光照

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《动物营养学》混合式教学模式构建与实践

草业科学 2024年

作者：肖金玉袁民翁秀秀郭龙兰州大学草业科学国家级实验教学示范中心/草地农业科技学院兰州大学高等教育研究院

信息技术的快速发展，使线下与线上结合的混合式教学模式已成为高校教学发展的大趋势。为了紧跟时代发展，提高动物营养学教学质量，本研究基于超星学习通平台，进行教学模式构建与实践研究，将线下与线上结合的混合式教学模式，在动物... 详细信息

信息技术的快速发展，使线下与线上结合的混合式教学模式已成为高校教学发展的大趋势。为了紧跟时代发展，提高动物营养学教学质量，本研究基于超星学习通平台，进行教学模式构建与实践研究，将线下与线上结合的混合式教学模式，在动物营养学课程课前、课中和课后教学过程中应用，并通过调查问卷和访谈方式，评价效果。为进一步完善在线课程建设和混合式教学模式的改革提供借鉴。

关键词：动物营养学混合式教学模式构建实践

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声波脉冲治疗对奶牛生产性能及乳房炎的影响

南京农业大学学报 2024年第5期47卷 957-966页

作者：王苏苏李涛丁宁王莹邓子晗张威陈芷希徐俊杰时晓丽向小娥仲伟臣蔡亚非南京农业大学动物科技学院/江苏省奶牛生产性能测定中心/奶牛疾病诊断联合创新实验室江苏南京210095 广州海关技术中心广东广州510623 南京农业大学动物科学类国家级实验教学示范中心江苏南京210095 上海方顺医疗器械有限公司上海200032

[目的]奶牛乳房炎是奶牛养殖过程中的高发疾病,本研究旨在对声波脉冲技术(acoustic pulse therapy, APT)治疗奶牛乳房炎的效果进行初步探究。[方法]根据致病菌和牛奶体细胞检测结果,选择江苏省某牧场临床乳房炎和亚临床乳房炎奶牛100头... 详细信息

[目的]奶牛乳房炎是奶牛养殖过程中的高发疾病,本研究旨在对声波脉冲技术(acoustic pulse therapy, APT)治疗奶牛乳房炎的效果进行初步探究。[方法]根据致病菌和牛奶体细胞检测结果,选择江苏省某牧场临床乳房炎和亚临床乳房炎奶牛100头,其中临床乳房炎奶牛60头,分为APT治疗组20头、抗生素治疗组20头、APT和抗生素联合治疗组20头;亚临床乳房炎(隐性乳房炎)奶牛20头,采用APT治疗;20头健康奶牛作为阴性对照组。对比探究APT治疗奶牛乳房炎的效果。[结果]当奶牛罹患乳房炎后,生产性能指标牛奶中体细胞数显著升高(P0.05);白细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数显著下降(P0.05);亚临床组炎症因子IL-1β含量显著下降(P<0.05),IL-6和IL-8含量显著降低(P<0.05),糖皮质激素含量显著下降(P<0.05)。[结论]APT作为一种新的奶牛乳房炎治疗技术,可以有效治愈奶牛乳房炎,且没有引起产奶量损失。

关键词：奶牛乳房炎声波脉冲治疗(APT) 产奶量

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