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昆虫杆状病毒表达载体系统在疫苗研究中的应用进展

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生物工程学报 2019年第4期35卷 577-588页

作者：荣芮李婷婷张玉云顾颖夏宁邵李少伟厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102

昆虫杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)已成功应用于多种蛋白的表达,并为疫苗开发提供了充足的原材料。相比其他表达系统,BEVS具有许多优势:杆状病毒专一寄生于无脊椎动物,安全性高;重组蛋白表达水平高... 详细信息

昆虫杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)已成功应用于多种蛋白的表达,并为疫苗开发提供了充足的原材料。相比其他表达系统,BEVS具有许多优势:杆状病毒专一寄生于无脊椎动物,安全性高;重组蛋白表达水平高;可对重组蛋白进行正确折叠和翻译后修饰,获得具有生物活性的蛋白;适应于多基因表达如病毒样颗粒(Virus-like particle)的复杂设计;适用于大规模无血清培养等。为了更好地理解BEVS在疫苗研究中的应用前景,文中将从BEVS的发展及其在疫苗研究中的应用等方面进行综述。

关键词：杆状病毒昆虫细胞蛋白表达疫苗病毒样颗粒

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单分子免疫检测技术研究进展

中国生物工程杂志 2021年第4期41卷 47-54页

作者：张雪洁汤家宝李廷栋葛胜祥厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心医用生物制品省部共建协同创新中心厦门361102

早诊断、早发现、早治疗是提升肿瘤患者生存率的主要手段。临床常用的免疫学检测方法如酶联免疫吸附法、化学发光法等,其检测灵敏度多限制在10^(-14)~10^(-12)mol/L,无法满足早期诊断的需求。单分子免疫检测法,可将待检测分子限制在极... 详细信息

早诊断、早发现、早治疗是提升肿瘤患者生存率的主要手段。临床常用的免疫学检测方法如酶联免疫吸附法、化学发光法等,其检测灵敏度多限制在10^(-14)~10^(-12)mol/L,无法满足早期诊断的需求。单分子免疫检测法,可将待检测分子限制在极小空间范围内(nL以下),对检测信号进行绝对计数,从而实现痕量(可达10^(-18)mol/L)标志物的检测。这一超高灵敏度技术实现的关键在于将检测范围限制在极小体积内。经过数十年发展,不论是物理隔离还是利用纳米孔,抑或通过改进显微镜性能,均可在极小体积内(10^(-21)L)对信号进行检测。目前基于微阵列的SimoA检测系统已成为单分子免疫检测的金标准,Quanterix公司基于此开发的HD-1分析仪已进入市场应用。基于微液滴的单分子免疫检测技术主要限于实验室,但具有床旁检测的优势。重点介绍了基于物理隔离形式如微阵列和微液滴的单分子免疫检测进展,为进一步开发超高灵敏度检测方法并促进未来临床应用提供理论基础。

关键词：单分子免疫检测微阵列微液滴

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HIV-1 Env三聚体抗原改造研究进展

生物工程学报 2020年第1期36卷 25-32页

作者：沈鸿霖张芝晴李少伟顾颖厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102

HIV-1疫苗研发是当前艾滋病研究的一大热点,其病毒表面包膜糖蛋白Env三聚体介导病毒与细胞融合,是HIV-1疫苗研究的重要靶点。因此,设计并在体外表达类天然Env三聚体对HIV-1疫苗的研发具有重要的意义。近年来,Env三聚体研究取得了显著的... 详细信息

HIV-1疫苗研发是当前艾滋病研究的一大热点,其病毒表面包膜糖蛋白Env三聚体介导病毒与细胞融合,是HIV-1疫苗研究的重要靶点。因此,设计并在体外表达类天然Env三聚体对HIV-1疫苗的研发具有重要的意义。近年来,Env三聚体研究取得了显著的进展。SOSIP、NFL2P、UFO等抗原改造方法实现了类天然Env三聚体的体外表达,逐步解决了改造抗原产量低、结构不稳定等问题,且表达的Env三聚体抗原能在动物免疫中诱导机体产生较高的中和抗体水平。Env三聚体改造方法促进了HIV-1疫苗的研究。文中综述了SOSIP、NFL2P、UFO三种HIV-1 Env三聚体抗原改造方法,对比各个改造方法优缺点,并结合自身工作提出相关建议,为后续HIV-1抗原的相关设计提供指导。

关键词：人类免疫缺陷病毒I型 Env三聚体抗原设计中和抗体

浙江省≥60岁人群新冠疫苗接种意愿和影响因素

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中华疾病控制杂志 2022年第5期26卷 611-614页

作者：廖雨婷杨娟黄守杰苏迎盈厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102

目的了解浙江省≥60岁人群新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)的接种意愿及其影响因素。方法2020年9月1日—2020年11月30日采用分层抽样法对浙江省≥60岁人群进行问卷调查,收集基本信息、接种意愿、COVID-19风险意识等信息,采用χ^(2)检验... 详细信息

目的了解浙江省≥60岁人群新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)的接种意愿及其影响因素。方法2020年9月1日—2020年11月30日采用分层抽样法对浙江省≥60岁人群进行问卷调查,收集基本信息、接种意愿、COVID-19风险意识等信息,采用χ^(2)检验比较各组接种意愿率的差异,并用多因素Logistic回归分析模型分析接种意愿的影响因素。结果共1858名≥60岁老年人完成调查,其新冠疫苗免费接种、自费接种的意愿率分别为88.3%和66.1%。多因素Logistic回归分析模型显示,对于免费接种,居住在乡村(OR=1.6,95%CI:1.2~2.2)、无外出(OR=1.6,95%CI:1.1~2.3)、听说过COVID-19(OR=3.7,95%CI:2.4~5.8)、认为COVID-19会造成严重后果(OR=2.3,95%CI:1.6~3.5)的老年人接种意愿更高。愿意自费接种的主要原因是认同新冠疫苗的安全性和有效性;不愿意自费接种的原因主要包括新冠疫苗需要收费和担心新冠疫苗的不良反应。结论浙江省≥60岁人群新冠疫苗免费接种意愿较高,但仍应加强关于新冠疫苗知识的宣传教育,并落实全民免费接种政策,以增强该人群接种疫苗的依从性。

关键词：新型冠状病毒疫苗老年人接种意愿影响因素

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新型冠状病毒肺炎长期健康损害的研究进展

病毒学报 2023年第2期39卷 509-516页

作者：陈祺胡潇文黄兴成黄悦吴婷厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门大学分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门大学公共卫生学院厦门361102

新型冠状病毒感染者在康复后可能会出现长期且持续的症状,受累器官系统广泛,给感染者造成健康损害。新型冠状病毒仍可能在全球范围内持续流行且免疫逃逸突变株不断出现,新冠肺炎后综合征已成为人类与新冠病毒抗衡道路上的又一重要挑战... 详细信息

新型冠状病毒感染者在康复后可能会出现长期且持续的症状,受累器官系统广泛,给感染者造成健康损害。新型冠状病毒仍可能在全球范围内持续流行且免疫逃逸突变株不断出现,新冠肺炎后综合征已成为人类与新冠病毒抗衡道路上的又一重要挑战。本文对新冠肺炎长期健康损害的发生风险、临床表现及影响因素进行综述,以期为新冠肺炎后综合征的管理及疫情防控策略制定提供参考。

关键词：新型冠状病毒新型冠状病毒肺炎长期健康损害临床表现疾病负担

人CD4胞外区蛋白在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达纯化及性质鉴定

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中国免疫学杂志 2018年第8期34卷 1201-1205页

作者：乔佳明张芝晴张振勇李少伟夏宁邵顾颖厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102

目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表... 详细信息

目的:通过条件优化实现人CD4蛋白胞外区在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的高效表达,并对纯化获得的人CD4蛋白胞外区进行抗原性与免疫原性分析。方法:通过选择人CD4分子胞外片段构建重组杆状病毒(p Ac-CD4),然后感染昆虫细胞进行蛋白的表达,采用镍离子亲和层析纯化。运用SDS-PAGE、Western blot、体积排阻色谱、ELISA、SPR法等分析纯化得到目的蛋白的理化性质和抗原性。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠,监测小鼠免疫血清的抗体生成。结果:经纯化可获得纯度90%以上的人CD4蛋白,每升细胞培养液最终可获得11.2 mg的目的蛋白,且该人CD4胞外区蛋白具有良好的抗原性。小鼠血清监测结果显示人CD4蛋白能有效刺激机体产生免疫应答,显示其具有良好的免疫原性。结论:本研究通过杆状病毒-昆虫细胞系统进行高效表达,获得抗原性和免疫原性良好的人CD4胞外区蛋白,为HIV受体和感染的研究奠定基础。

关键词：杆状病毒-昆虫细胞表达系统人CD4 免疫

HIV-1 CAP2NC蛋白的表达及体外自组装

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生物工程学报 2018年第4期34卷 586-593页

作者：白诗梦张芝晴乔佳明沈鸿霖黄芳高双全李少勇李少伟夏宁邵顾颖厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102

构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2N... 详细信息

构建并表达HIV-1 CAP2NC蛋白,探索其体外自组装条件。通过PCR技术扩增HIV-1(NL4-3毒株)CAP2NC基因片段,并将其连接到原核表达载体pTO-T7,获得重组质粒pTO-T7-CAP2NC,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经疏水层析纯化后获得重组蛋白CAP2NC。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白CAP2NC可在大肠杆菌可溶高效表达,经纯化后纯度约为95%。ELISA检测表明重组蛋白CAP2NC可被HIV-1衣壳蛋白特异性单克隆抗体识别,具有较好反应活性。重组蛋白透析后在非原性SDS-PAGE中呈现为多种聚体形式。分子筛排阻层析分析CAP2NC蛋白透析后可进行组装,负染电镜进一步观察显示CAP2NC蛋白在RNA存在条件下,可形成空心管状颗粒,其形态结构与HIV-1病毒衣壳体外自组装形成的类似。上述结果表明HIV-1 CAP2NC蛋白具有体外自组装的性质,为进一步在体外研究非成熟病毒样颗粒结构奠定基础。

关键词： HIV-1 CAP2NC蛋白自组装

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乙戊型肝炎病毒重叠感染的研究进展

病毒学报 2019年第2期35卷 318-322页

作者：余小娟潘莉莉苏迎盈吴婷黄守杰厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102

戊型肝炎(简称"戊肝")是发展中国家发病率最高的急性病毒性肝炎,疾病负担较重,近年来发达国家也出现越来越多散发的本土病例。我国慢性乙型肝炎(简称"慢乙肝")人群基数大,慢乙肝患者重叠感染戊肝病毒之后,可加重患者病情,增加肝硬化、... 详细信息

戊型肝炎(简称"戊肝")是发展中国家发病率最高的急性病毒性肝炎,疾病负担较重,近年来发达国家也出现越来越多散发的本土病例。我国慢性乙型肝炎(简称"慢乙肝")人群基数大,慢乙肝患者重叠感染戊肝病毒之后,可加重患者病情,增加肝硬化、肝衰竭以及死亡的发生风险。本文拟对乙型肝炎病毒重叠感染戊肝病毒的流行病学特征、临床特征及预防措施进行综述。

关键词：戊型肝炎(HE) 戊型肝炎病毒(HEV) 慢性乙型肝炎(CHB) 乙型肝炎病毒(HBV) 重叠感染

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呼吸道黏膜免疫和呼吸道黏膜疫苗研究进展

中国疫苗和免疫 2022年第1期28卷 121-127页

作者：尹一凡林敏强宏生郑子峥厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室/国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心/厦门大学公共卫生学院福建厦门361102

呼吸道黏膜免疫系统是机体抵御空气传播病原体的第一道防线。本文总结了黏膜免疫相关的呼吸道黏膜上皮细胞组成和局部黏膜免疫应答过程,探讨了黏膜免疫的优势和呼吸道黏膜疫苗研发面临的挑战。

关键词：呼吸道黏膜黏膜免疫呼吸道黏膜疫苗