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含种子细胞的丝素组织工程神经移植物修复大鼠脊髓损伤

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解剖学报 2015年第5期46卷 596-601页

作者：刘晓东薛成斌鞠前前杨晓华秦建兵田美玲吕广明南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的探讨体外构建含种子细胞的蚕丝丝素组织工程神经移植物（TENGs）的方法,评价其对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法分离大鼠皮肤前体细胞并向施万细胞诱导分化,S-100免疫荧光染色鉴定。将皮肤前体细胞诱导分化的施万细胞（SKP-SCs）... 详细信息

目的探讨体外构建含种子细胞的蚕丝丝素组织工程神经移植物（TENGs）的方法,评价其对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法分离大鼠皮肤前体细胞并向施万细胞诱导分化,S-100免疫荧光染色鉴定。将皮肤前体细胞诱导分化的施万细胞（SKP-SCs）作为种子细胞,联合蚕丝丝素神经导管和纤维支架共培养。共培养7d后将蚕丝丝素TENGs置入大鼠背侧T8-T10半横断损伤的脊髓中,于术后不同时间点利用BBB评分观察行为学的变化,术后8周取材,切片,免疫荧光染色观察脊髓损伤修复情况以及种子细胞的存活情况。结果相差显微镜下体外培养的SKP-SCs大部分细胞形态呈双极或3极,免疫荧光染色显示,SKP-SCs呈S-100阳性,将SKP-SCs与蚕丝丝素支架材料共培养,蚕丝丝素支架表面均匀贴附大量的细胞,生长状态良好。将该移植物移植入大鼠T8-T10半横断损伤脊髓处,术后BBB评分显示,从4周起至8周均优于对照组,且结果具有统计学差异;术后8周时取材切片仍能观察到大鼠体内有大量种子细胞存活。结论含种子细胞的蚕丝丝素组织工程神经移植物对于修复大鼠脊髓损伤具有一定的促进作用。

关键词：中枢神经系统组织工程施万细胞丝素蛋白脊髓损伤免疫荧光大鼠

PKCγ免疫反应定位小鼠皮质脊髓束的实验研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2008年第3期17卷 269-273页

作者：吕广明栗卓吴辉群韩笑季达峰刘苏南通大学医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的探讨显示皮质脊髓束在成年小鼠脑和脊髓中定位分布的简便有效方法。方法运用蛋白激酶Cγ(PKCγ)免疫组织化学染色法,观察成年ICR小鼠脑和脊髓中皮质脊髓束的定位和分布情况。结果PKCγ免疫阳性产物分布于大脑运动皮层第V层锥体细胞... 详细信息

目的探讨显示皮质脊髓束在成年小鼠脑和脊髓中定位分布的简便有效方法。方法运用蛋白激酶Cγ(PKCγ)免疫组织化学染色法,观察成年ICR小鼠脑和脊髓中皮质脊髓束的定位和分布情况。结果PKCγ免疫阳性产物分布于大脑运动皮层第V层锥体细胞胞体和轴突中,锥体细胞的阳性纤维经内囊、中脑大脑脚底、脑桥基底部、下行至延髓锥体中。在延髓下段,PKCγ阳性纤维经锥体交叉后进入对侧脊髓灰质后联合背侧,形成背侧皮质脊髓束,在脊髓白质的后索腹侧深层下行,至骶髓3-4节段以下逐渐消失。在整个脊髓前索和外侧索中未见有PKCγ阳性纤维。结论PKCγ特异地表达于脊髓后索皮质脊髓束中,提示PKCγ免疫组织化学法是一种显示和观察皮质脊髓束精确定位的有效方法。

关键词：皮质脊髓束蛋白激酶Cγ 脊髓免疫组织化学小鼠

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壳聚糖支架与神经干细胞生物相容性的研究

神经解剖学杂志 2007年第5期23卷 506-510页

作者：衣昕金国华田美玲秦建兵毛伟峰黄镇谭雪锋南通大学医学院解剖学教研室神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室南通226001

为探讨壳聚糖多孔支架与神经干细胞(NSCs)的生物相容性,应用冷冻干燥技术制备壳聚糖多孔支架,将神经干细胞克隆球接种于壳聚糖支架载体上,分为NSCs+支架组和NSCs+支架+NGF组。培养2周后冰冻切片,行Nissl染色及微管相关蛋白-2(MAP-2)、... 详细信息

为探讨壳聚糖多孔支架与神经干细胞(NSCs)的生物相容性,应用冷冻干燥技术制备壳聚糖多孔支架,将神经干细胞克隆球接种于壳聚糖支架载体上,分为NSCs+支架组和NSCs+支架+NGF组。培养2周后冰冻切片,行Nissl染色及微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)免疫组化染色来检测NSCs的分化,并进行MAP-2阳性细胞计数、胞体面积、细胞周长的图像处理和统计分析。结果显示:壳聚糖支架孔隙率为90%,支架孔径为50～350μm。NSCs可以在壳聚糖支架上存活、迁移并分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。NSCs+支架+NGF组的MAP-2阳性细胞数明显多于NSCs+支架组,且胞体较大,突起较多且长。上述结果提示,壳聚糖支架与NSCs具有良好的生物相容性,外源性的NGF能够促进壳聚糖支架中的NSCs向神经元分化。

关键词：壳聚糖多孔支架神经干细胞神经生长因子生物相容性分化

体外模拟海马神经再生微环境下的NSCs增殖和向神经元分化

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神经解剖学杂志 2012年第6期28卷 573-577页

作者：秦建兵金国华朱培培李浩明田美玲杨伟伟南通大学医学院人体解剖学系神经生物学研究所江苏省神经再生重点实验室南通226001

目的:探讨用切割穹窿海马伞海马提取液在体外模拟体内海马神经再生微环境下,对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和向神经元分化的影响。方法:分别制备正常侧和切割穹窿海马伞侧海马提取液。实验分为对照组、正常组和切割组,... 详细信息

目的:探讨用切割穹窿海马伞海马提取液在体外模拟体内海马神经再生微环境下,对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和向神经元分化的影响。方法:分别制备正常侧和切割穹窿海马伞侧海马提取液。实验分为对照组、正常组和切割组,分别在海马NSCs中加入DMEM/F12培养基、含正常侧海马提取液及切割侧海马提取液的DMEM/F12培养基。用WST-8和Ki67/Sox2免疫荧光检测NSCs的增殖,用DCX免疫荧光检测NSCs向神经元的分化情况。结果:切割组与正常组及对照组相比,WST-8检测OD450比值明显增高(P神经再生微环境,可以促进海马NSCs的增殖和向神经元的分化。

关键词：神经干细胞切割海马伞海马提取液大鼠

脑源性神经营养因子通过PI3K/Akt信号通路促进大鼠坐骨神经再生修复的研究

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中国医科大学学报 2023年第1期52卷 51-56页

作者：李想毕佳璇孙秋霞于润泽贾斯祺付秀美承德医学院基础医学院人体解剖学教研室河北承德067000 河北省神经损伤与修复重点实验室河北承德067000

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)促进坐骨神经再生修复的作用及其机制。方法选取10只SPF级雄性SD大鼠制备脱细胞神经移植物(ANA)。取5只大鼠设为正常(N)组。另取20只大鼠建立坐骨神经损伤模型,然后再随机分为模型(M)组、ANA组、LY29... 详细信息

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)促进坐骨神经再生修复的作用及其机制。方法选取10只SPF级雄性SD大鼠制备脱细胞神经移植物(ANA)。取5只大鼠设为正常(N)组。另取20只大鼠建立坐骨神经损伤模型,然后再随机分为模型(M)组、ANA组、LY294002(LY)组、溶剂对照(LYC)组。M组不再处理,其余3组均桥接ANA于损伤神经的两断端处,LY组和LYC组分别于桥接术后第2日腹腔注射LY294002或DMSO(2.0 ng·mL^(-1)·kg^(-1)),连续注射4周。测定各组大鼠运动神经传导速度(MNCV)和胫前肌湿重比率,尼氏染色观察各组大鼠脊髓前角运动神经元的形态结构,免疫荧光染色和Western blotting法检测脊髓内BDNF和p-Akt1蛋白的表达。结果与M组比较,ANA组大鼠MNCV和胫前肌湿重比率明显升高(P 神经再生修复的作用。

关键词： BDNF PI3K/Akt信号通路脊髓坐骨神经损伤

切割穹隆海马伞海马提取液促进放射状胶质细胞增殖和向神经元分化

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解剖学报 2011年第6期42卷 721-725页

作者：秦建兵金国华李浩明施金洪田美玲谭雪锋张新化邹琳清南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的探讨海马微环境的变化对体外培养的放射状胶质细胞增殖和分化的影响。方法本实验在成功制备正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液的基础上,分别使用正常侧和切割侧海马提取液,观察其在体外培养的放射状胶质细胞增殖和分化过程中所起... 详细信息

目的探讨海马微环境的变化对体外培养的放射状胶质细胞增殖和分化的影响。方法本实验在成功制备正常侧和切割穹隆海马伞侧海马提取液的基础上,分别使用正常侧和切割侧海马提取液,观察其在体外培养的放射状胶质细胞增殖和分化过程中所起的作用。结果在放射状胶质细胞增殖阶段,切割组与正常组及对照组相比,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的增殖细胞比例明显提高(P神经元数量明显增多(P神经元的分化有明显促进作用,提示海马微环境对海马放射状胶质细胞的增殖和分化有重要影响。

关键词：放射状胶质细胞神经元海马海马提取液海马微环境细胞培养免疫荧光大鼠

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成年小鼠海马结构的三维重建

解剖学报 2010年第3期41卷 458-461页

作者：吴辉群蒋葵胡钰琛熊旭东白龙翔耿兴云吕广明董建成南通大学医学院医学信息学教研室南通大学数字医学研究所江苏南通226001 南通大学医学院人体解剖学教研室江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的利用三维重建工具软件对小鼠大脑、海马结构进行三维重建,并对重建的图像进行观察和测量。方法获取小鼠大脑连续冷冻Nissl染色切片,进行图像预处理后,构建三维重建数据集。利用PhotoshopCS3软件对小鼠大脑冠状切片海马结构的不同区... 详细信息

目的利用三维重建工具软件对小鼠大脑、海马结构进行三维重建,并对重建的图像进行观察和测量。方法获取小鼠大脑连续冷冻Nissl染色切片,进行图像预处理后,构建三维重建数据集。利用PhotoshopCS3软件对小鼠大脑冠状切片海马结构的不同区域填充不同的颜色。然后,利用3D-DOCTOR 4.0软件分别对上述连续切片图像进行配准、分割和三维重建,并对重建的脑及海马结构进行观察。结果利用小鼠脑连续冷冻Nissl染色切片图像可以对小鼠海马结构进行三维重建,并能立体观察海马下托、CA1、CA2、CA3、CA4区和齿状回等结构。结论利用小鼠脑的连续冷冻Nissl染色切片可以对小鼠脑及海马结构进行三维重建。

关键词：海马结构连续切片 3D-DOCTOR 三维重建小鼠

大鼠创伤性脑损伤后海马齿状回中脑脂结合蛋白的表达变化

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解剖学报 2011年第6期42卷 746-750页

作者：毛伟峰金国华衣昕秦建兵田美玲南通大学医学院人体解剖学系江苏省神经再生重点实验室江苏南通226001

目的观察大鼠创伤性脑损伤(TBI)后不同时间点海马结构齿状回中脑脂结合蛋白(BLBP)的表达变化。方法将72只SD大鼠随机分为脑损伤组、假手术组和空白对照组,制备大鼠颅脑液压损伤模型,伤后1、3、7、14d分别行海马组织Western blotting和B... 详细信息

目的观察大鼠创伤性脑损伤(TBI)后不同时间点海马结构齿状回中脑脂结合蛋白(BLBP)的表达变化。方法将72只SD大鼠随机分为脑损伤组、假手术组和空白对照组,制备大鼠颅脑液压损伤模型,伤后1、3、7、14d分别行海马组织Western blotting和BLBP、波形蛋白(Vimentin)免疫荧光双标检测。结果 Western blotting结果显示,伤后1d BLBP蛋白含量相对于空白对照组下降(P神经再生和神经功能恢复有关。

关键词：创伤性脑损伤齿状回放射状胶质细胞脑脂结合蛋白波形蛋白免疫印迹法免疫荧光大鼠

神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ配体在大鼠周围神经损伤后的表达变化

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解剖学杂志 2007年第3期30卷 307-312页

作者：严美娟陈梦玲沈爱国程纯夏春林苏州大学解剖学教研室暨神经细胞生物学研究室苏州215123 南通大学江苏省神经再生重点实验室

目的:探讨周围神经损伤后神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ配体(carboxy temlinal PDZ ligand of neuronal nitric oxide synthase,CAPON)的表达变化与定位。方法:利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQPCR)、原位杂交与间接免疫荧光相结合的方法,研究大鼠坐骨神经损伤后CAPON mRNA表达变化及其定位。结果:CAPON mRNA主要分布在正常和损伤坐骨神经的雪旺细胞(Schwann cells,SCs)中,损伤后表达增多,分别在神经夹伤后2周以及切断后1周的近、远侧断端中出现表达高峰。原代培养的SCs中也检测到CAPON的表达,其mRNA分布在核周胞质区域。结论:周围神经损伤后引起CAPON mRNA表达上调,增殖的SCs中表达CA- PON可能对神经损伤后冉生修复发挥一定作用。

关键词：周围神经创伤和损伤神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ配体雪旺细胞大鼠