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电针对肝部分切除术后小鼠肝再生的影响及Notch信号通路在其中的作用

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中华麻醉学杂志 2024年第7期44卷 843-849页

作者：喻美露张赛亚陈思琪王芬李莎胡虹钰田伟千南京中医药大学附属医院麻醉科南京210000 南京中医药大学附属南京中医院心内科南京210000

目的评价电针对肝部分切除术后小鼠肝再生的影响及Notch信号通路在其中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠36只,6周龄,体质量20~22 g。采用随机数字表法分为6组(n=6):假手术组(S组)、肝部分切除术组(PH组)、非穴位电针+肝部分切除术... 详细信息

目的评价电针对肝部分切除术后小鼠肝再生的影响及Notch信号通路在其中的作用。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠36只,6周龄,体质量20~22 g。采用随机数字表法分为6组(n=6):假手术组(S组)、肝部分切除术组(PH组)、非穴位电针+肝部分切除术组(NPH组)、肝部分切除术+Fli-06组(PH+F组)、穴位电针+肝部分切除术组(EPH组)和穴位电针+肝部分切除术+Fli-06组(EPH+F组)。除S组以外,其余组小鼠均接受肝部分切除术;PH+F组和EPH+F组术前2 d开始腹腔注射Fli-064.8 mg/kg,1次/d,直至小鼠处死,其余组注射等体积0.9%氯化钠溶液;EPH组术后即刻开始电针刺激,选择双侧足三里穴,连续波,频率2 Hz,强度1 mA,以后肢出现轻微颤动为度,每次15 min,1次/d,连续3 d。肝部分切除术后第2天时麻醉小鼠,眼球取血样,采用全自动生化分析仪测定血清ALT和AST浓度,ELISA法测定表皮生长因子(EGF)和肝细胞生长因子(HGF)浓度。随后处死小鼠取肝组织,计算肝质量/体质量比,免疫组织化学染色法检测肝脏Ki-67表达;Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、G1/S-物异性同期蛋白-D1(CCND1)、Notch胞内结构域(NICD)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;RT-PCR法检测Notch1、锯齿状典型Notch配体1(Jagged1)和Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)mRNA表达。结果与S组比较,PH组血清ALT、AST、EGF和HGF浓度升高,肝脏Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA表达和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD表达上调(P<0.05或0.01);与PH组比较,EPH组肝质量/体质量比、血清EGF和HGF浓度升高,血清ALT和AST浓度降低,肝脏Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA表达和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD、HIF-1α表达上调,PH+F组肝质量/体质量比、血清HGF浓度降低,血清ALT和AST浓度升高,肝脏Jagged1、Hes1 mRNA和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD、HIF-1α表达下调(P<0.05或0.01);与EPH组比较,EPH+F组肝质量/体质量比、血清EGF和HGF浓度降低,血清ALT和AST浓度升高,肝脏Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA和Ki-67、PCNA、CCND1、NICD和HIF-1α表达下调(P<0.05或0.01)。结论电针足三里穴促进肝部分切除术后小鼠肝再生,其机制可能与激活Notch信号通路有关。

关键词：电针肝切除术肝再生 Notch

超声测量胃窦横截面积指导脓毒症患者早期个体化肠内营养实施的应用价值分析

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中华急诊医学杂志 2024年第2期33卷 193-200页

作者：李探张潇月刘克琴曾浩唐振东邵龙刚南京中医药大学第二附属医院(江苏省第二中医院)急诊科南京210017 南京中医药大学南京210023

目的探索床旁超声测量胃窦横截面积(CSA)指导脓毒症患者的早期个体化肠内营养的价值。方法纳入2021年1月至2022年12月间南京中医药大学第二附属医院EICU和综合ICU收治的脓毒症患者各30例,EICU患者采用床旁超声测量胃窦CSA指导脓毒症患... 详细信息

目的探索床旁超声测量胃窦横截面积(CSA)指导脓毒症患者的早期个体化肠内营养的价值。方法纳入2021年1月至2022年12月间南京中医药大学第二附属医院EICU和综合ICU收治的脓毒症患者各30例,EICU患者采用床旁超声测量胃窦CSA指导脓毒症患者的早期肠内营养实施,综合ICU采用常规的营养治疗策略。统计分析CSA与脓毒症胃肠功能障碍患者发生喂养不耐受的相关性,绘制ROC曲线,获取最佳截断值;并分析与胃肠功能障碍的其他相关指标[胃肠功能障碍评分、SOFA评分、APACHEⅡ评分、腹内压(IAP)、血清前蛋白(PA)/白蛋白(Alb)]的相关性。对比两组患者不同策略的肠内营养实施后的炎症相关指标、营养状态指标、ICU住院天数等,分析不同策略的优劣性。结果两组患者的基线资料均衡可比;超声治疗组在第1天发现喂养不耐受的发生率(36.67%)显著高于常规治疗组(10.00%),经积极早期的个体化治疗,第3天发生率仅为10.00%,显著低于常规治疗组(40.00%);治疗至第5天,超声治疗组的相关功能评分(胃肠功能障碍评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分、IAP)、营养状态指标(5 d热卡达标率、PA、Alb)及炎症相关指标(WBC、PCT、hs-CRP)较入院时均显著改善,且优于常规治疗组,另外超声治疗组患者的ICU住院天数及误吸发生率更低(P<0.05);CSA与胃肠功能障碍评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分、IAP、PA、Alb均具有良好的相关性,相关系数分别为0.79、0.60、0.66、0.71、-0.67和-0.64,均P<0.05;CSA对喂养不耐受预测的ROC曲线显示AUC为0.828,95%CI为0.737~0.919,其预测喂养不耐受的最佳截断值为7.835 cm2,其敏感度和特异度分别为88.20%和71.80%。结论超声测量CSA能够早期、有效地发现脓毒症患者喂养不耐受,据此给予个体化的肠内营养实施策略,显著改善了患者的器官功能评分、营养状态及炎症指标,减少ICU的住院天数及误吸发生,与常规的评价指标有良好的相关性,且敏感度和特异度均较高,值得临床进一步推广。

关键词：脓毒症超声胃窦横截面积喂养不耐受胃肠道功能障碍个体化肠内营养实施

参麦注射液抑制化疗后白细胞减少的网络药理学分析及临床对照验证

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中国医院药学杂志 2024年

作者：孙程任发燕邵杰王俊壹李金昌谭喜莹南京中医药大学附属医院药学部南京中医药大学附属医院肿瘤科南京中医药大学附属医院检验科

目的：通过网络药理学和分子对接技术研究参麦注射液抑制化疗后白细胞减少的作用机制，并进行临床验证。方法：通过TCMSP和BATMAN-TCM数据库筛选参麦注射液中的化学成分，采用Swisstarget数据库筛选活性成分的作用靶点；利用疾病数据库... 详细信息

目的：通过网络药理学和分子对接技术研究参麦注射液抑制化疗后白细胞减少的作用机制，并进行临床验证。方法：通过TCMSP和BATMAN-TCM数据库筛选参麦注射液中的化学成分，采用Swisstarget数据库筛选活性成分的作用靶点；利用疾病数据库筛选白细胞减少的相关疾病靶点；取交集靶点后建立“药物-成分-靶点”网络，进行GO功能和KEGG通路富集分析；构建蛋白互作网络分析，选取关键靶点进行分子对接。选取2021 年6 月至2023 年6 月在江苏省中医院接受FOLFOX方案化疗的患者60 例，随机分为对照组和试验组，每组30 例。试验组化疗的同时予以参麦注射液，观察2 组给药后白细胞、中性粒细胞、肿瘤坏死因子、白细胞介素-6水平和人粒细胞刺激因子注射液对症处理率。结果：参麦注射液有效成分59 个，药物靶点674 个，白细胞减少相关疾病靶点1 394 个，交集靶点147 个；涉及GO功能776 个，KEGG通路158 条，主要包括癌症通路、AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路等；PPI网络分析筛选出AKT1、TNF、IL-6等核心靶蛋白，将核心靶点与反向筛选的4 个活性成分进行分子对接。临床对照验证结果显示相较于对照组，试验组患者化疗后的白细胞、中性粒细胞绝对值增高，TNF-α、IL-6水平降低（P＜0.05），且人粒细胞刺激因子注射液使用率低。结论：参麦注射液通过多成分、多靶点、多通路机制抑制化疗后白细胞减少，并降低血清TNF-α和IL-6水平。

关键词：参麦注射液白细胞减少网络药理学分子对接临床验证白细胞介素-6 肿瘤坏死因子

功能性肛门直肠痛患者高分辨率肛门直肠测压特征研究

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中华消化杂志 2024年第4期44卷 250-256页

作者：郑鸿雁刘璠孙梦洋刘锦冯程静倪敏南京中医药大学附属南京中医院(南京市中医院)肛肠科南京210022

目的通过高分辨率肛门直肠测压(HR-ARM)探讨功能性肛门直肠痛(FAP)患者的肛门直肠动力和感觉特征。方法回顾性收集2020年1月1日至2022年1月31日南京中医药大学附属南京中医院收治的行HR-ARM检查的81例FAP患者(FAP组)的临床资料,同期招... 详细信息

目的通过高分辨率肛门直肠测压(HR-ARM)探讨功能性肛门直肠痛(FAP)患者的肛门直肠动力和感觉特征。方法回顾性收集2020年1月1日至2022年1月31日南京中医药大学附属南京中医院收治的行HR-ARM检查的81例FAP患者(FAP组)的临床资料,同期招募80名健康志愿者作为健康对照组。分析FAP组与健康对照组,FAP组内不同性别患者,以及FAP组内不同亚型(痉挛性肛门痛、肛提肌综合征、非特异性FAP)患者的HR-ARM特征,包括肛管静息压、肛管收缩压、模拟排便时直肠压力、模拟排便时肛管残余压、矛盾性收缩、初始感觉阈值、便意感阈值、排便窘迫感阈值、最大耐受感阈值。采用视觉模拟评分法(VAS)评估FAP组患者的疼痛程度,采用Spearman相关分析VAS与HR-ARM参数的相关性。统计学方法采用独立样本t检验、最小显著差异法、塔姆黑尼T2检验和Mann-WhitneyU检验。结果FAP组肛管静息压、肛管收缩压、模拟排便时肛管残余压、排便窘迫感阈值、最大耐受感阈值均低于健康对照组[(59.56±24.71)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)比(81.94±15.87)mmHg、(119.04±46.94)mmHg比(154.62±37.95)mmHg、59.00(40.75,80.95)mmHg比83.10(61.78,94.30)mmHg、70.00(55.00,90.00)mL比85.00(60.00,110.00)mL、105.00(87.50,150.00)mL比140.00(100.00,180.00)mL],差异均有统计学意义(t=-6.83、-5.29,Z=-4.12、-3.12、-2.82;均P<0.01)。FAP组男性患者模拟排便时直肠压力高于健康对照组男性,排便窘迫感阈值低于健康对照组男性[42.40(29.60,57.95)mmHg比31.10(25.85,36.80)mmHg、80.00(62.50,107.50)mL比92.00(81.00,140.00)mL],差异均有统计学意义(Z=-1.99、-2.53,均P<0.05)]。FAP组女性患者的肛管静息压、肛管收缩压、模拟排便时肛管残余压、排便窘迫感阈值、最大耐受感阈值均低于健康对照组女性[(55.67±21.61)mmHg比(87.04±15.54)mmHg、(102.70±37.09)mmHg比(155.98±31.44)mmHg、52.55(40.53,67.48)mmHg比83.10(61.10,94.50)mmHg、60.00(52.50,81.50)mL比80.00(60.00,100.00)mL、101.00(80.00,128.75)mL比120.00(94.00,155.00)mL],差异均有统计学意义(t=-8.77、-8.16,Z=-4.57、-2.24、-2.14;均P<0.05)。FAP组女性患者的肛管静息压、肛管收缩压、模拟排便时肛管残余压、矛盾性收缩发生率、便意感阈值、排便窘迫感阈值均低于FAP组男性患者[(55.67±21.61)mmHg比(68.28±29.16)mmHg、(102.70±37.09)mmHg比(155.62±46.66)mmHg、52.55(40.53,67.48)mmHg比79.00(59.55,99.25)mmHg、28.6%(16/56)比68.0%(17/25)、44.00(35.00,60.00)mL比60.00(45.00,70.00)mL、60.00(52.50,81.50)mL比80.00(62.50,107.50)mL],差异均有统计学意义(t=2.17、5.47,Z=-2.96,χ^(2)=11.10,Z=-2.93、-2.34;均P<0.05)。痉挛性肛门痛亚型FAP患者的肛管收缩压高于肛提肌综合征亚型患者[(140.19±56.51)mmHg比(80.56±30.79)mmHg],最大耐受感阈值低于非特异性FAP亚型患者[(87.86±17.80)mL比(125.14±48.31)mL],差异均有统计学意义(t=2.35、2.02,均P<0.05)。Spearman相关分析显示,FAP组患者的VAS与肛管静息压、肛管收缩压、排便窘迫感阈值均呈负相关(r=-0.28、-0.23、-0.24,均P<0.05)。结论FAP存在肛门直肠动力异常和感觉功能障碍,可能与盆底肌异常、排便时肌肉协调障碍、直肠高敏感性有关。

关键词：功能性肛门直肠痛高分辨率肛门直肠测压肛门直肠动力直肠感觉功能

基于倾向性评分匹配和亚群治疗效果模式图队列研究暴露与结局关联的异质性分析

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中华流行病学杂志 2024年第5期45卷 748-754页

作者：王威于茜胡馨茹王晓骁南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)GCP中心南京210029 南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)科技处南京210029 南京中医药大学医学院·整合医学学院公共卫生学系南京210046 南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)临床研究院南京210029

介绍亚群治疗效果模式图(STEPP)的基本原理、应用场景与主要步骤,梳理将其与倾向性评分匹配(PSM)联合应用在队列研究数据中的理论基础,旨在将STEPP应用到暴露与结局风险关联的异质性分析中。通过模拟案例“不同输液导管类型的肿瘤患者... 详细信息

介绍亚群治疗效果模式图(STEPP)的基本原理、应用场景与主要步骤,梳理将其与倾向性评分匹配(PSM)联合应用在队列研究数据中的理论基础,旨在将STEPP应用到暴露与结局风险关联的异质性分析中。通过模拟案例“不同输液导管类型的肿瘤患者发生静脉血栓栓塞(VTE)风险的队列研究”展示如何将PSM与STEPP在队列研究数据中联合应用,得出亚群中经外周置入中心静脉导管组和中心静脉导管组发生VTE的绝对风险值和相对风险值,以及亚群间的异质性分析结果,并对PSM与STEPP联合应用的局限性和研究前景进行讨论,为实际应用提供参考。

关键词：倾向性评分匹配亚群治疗效果模式图队列研究暴露关联

岩黄连总碱在抑郁模型大鼠体内的药代动力学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 175-183页

作者：杭华茜于美双叶峪黄茜王一然邵雪文陈佩瑶曹阳戴国梁居文政南京中医药大学附属医院南京210029

目的:探讨岩黄连总碱对脂多糖(LPS)诱导抑郁大鼠模型的影响,以及其中8种主要成分的药代动力学特征。方法:将雄性24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组(10 mg·kg^(-1))、岩黄连总碱组(210 mg·kg^(-1)),每组6只。除正常组外,其... 详细信息

目的:探讨岩黄连总碱对脂多糖(LPS)诱导抑郁大鼠模型的影响,以及其中8种主要成分的药代动力学特征。方法:将雄性24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组(10 mg·kg^(-1))、岩黄连总碱组(210 mg·kg^(-1)),每组6只。除正常组外,其他大鼠经腹腔注射LPS建立抑郁症炎症模型,造模1周后开始给药,各给药组按相应剂量灌胃药液,正常组及模型组灌胃等体积蒸馏水,边造模边给药。连续给药2周后,通过糖水偏好、强迫游泳及旷场试验测试岩黄连总碱对抑郁大鼠行为学的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马组织病理学变化。末次给药后,按设定时间经眼眶取血,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法(UPLC-QqQ-MS)检测其中脱氢卡维丁、延胡索乙素、黄连碱、巴马汀、药根碱、小檗碱、小檗红碱、表小檗碱的血药浓度,绘制药-时曲线,通过DAS 2.0软件对各成分药代动学参数进行分析。结果:与正常组比较,模型组糖水偏好率降低、旷场总路程减少、游泳不动时间延长,血清中炎症因子表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠糖水偏好率增加、旷场总路程增加,游泳不动时间缩短,岩黄连总碱组血清中炎症因子表达降低(P<0.05,P<0.01)。HE染色结果显示,模型组大鼠海马区神经元缺失、排列紊乱且有残留空泡,岩黄连总碱组大鼠海马区神经元增多且排列整齐、胞浆清楚。药代动力学结果显示,经连续灌胃岩黄连总碱后,8种活性成分的达峰时间(t_(max))为0.19~2.06 h,半衰期(t_(1/2))为3.71~8.70 h,其中延胡索乙素的药时曲线下面积(AUC_(0-∞))最高且t_(1/2)最短,黄连碱、巴马汀、药根碱、小檗碱、小檗红碱、表小檗碱的AUC_(0-∞)均较低。脱氢卡维丁、黄连碱、巴马汀、小檗碱和表小檗碱药时曲线出现明显的双峰现象。结论:岩黄连总碱能够改善大鼠抑郁样行为,抑制血清中炎症因子的表达,改善海马区病理损伤,具有抗抑郁作用;同时,该有效部位在抑郁模型大鼠体内吸收较快,消除较慢,药效维持时间长。

关键词：岩黄连总碱抑郁模型脂多糖(LPS) 药代动力学超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法(UPLC-QqQMS) 炎症因子

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半夏泻心汤对AOM/DSS致炎症相关性结直肠癌小鼠的保护作用

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中国现代应用药学 2024年第7期41卷 917-926页

作者：乐音子顾云慧秦媛媛苏联麟华晓东王雅慧李晓满王晓鹏颜帅南京中医药大学附属苏州市中医医院普外科江苏苏州215009 南京中医药大学附属苏州市中医医院药学部江苏苏州215009 南京中医药大学附属苏州市中医医院肛肠科江苏苏州215009 南京中医药大学药学院南京210023

目的探讨半夏泻心汤对结肠炎相关结直肠癌(colitis associated cancer,CAC)小鼠的影响及相关作用机制。方法将75只C57BL/6小鼠随机均分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和半夏泻心汤低、高剂量组。除正常组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射... 详细信息

目的探讨半夏泻心汤对结肠炎相关结直肠癌(colitis associated cancer,CAC)小鼠的影响及相关作用机制。方法将75只C57BL/6小鼠随机均分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和半夏泻心汤低、高剂量组。除正常组外,其余各组小鼠均采用腹腔注射氧化偶氮甲烷联合口服葡聚糖硫酸钠法构建CAC模型,分别给予半夏泻心汤和美沙拉嗪进行干预。观察并记录用药后全部小鼠一般情况,监测体质量、疾病活动指数变化情况;利用HE染色观察结肠组织病理学改变情况;免疫组化检测PCNA、NF-κB P65和IκB-α蛋白表达水平;qRT-PCR检测结肠组织IL-17A、N-cadherin和Bcl-2 mRNA水平;免疫荧光检测巨噬细胞标记物表达情况;Western blotting分析各组结肠组织中NF-κB、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果正常组无明显肿瘤发生,模型组小鼠体质量明显减轻,结肠瘤体数量增多,半夏泻心汤组结肠长度及肿瘤数量、炎性细胞浸润程度均较模型组明显改善。免疫组化结果显示,模型组小鼠结肠组织PCNA、NF-κB P65和IκB-α蛋白表达显著升高(P肿瘤相关蛋白PCNA和Bcl-2的表达,阻断EMT相关蛋白(E-cadherin和N-cadherin)进展,其机制可能与抑制NF-κB P65和IκB-α的活化调控NF-κB信号通路有关。

关键词：半夏泻心汤结直肠癌核转录因子kappa B 巨噬细胞上皮-间质转化

基于网络药理学和实验验证研究仙鹤草-黄连药对抗结直肠癌炎性微环境中血管生成活性

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中国中药杂志 2024年

作者：沈鑫玲彭海燕符黄杰何亚萍李智育侯敏艳张淑娟熊晗南京中医药大学南京中医药大学附属医院浙江中医药大学

基于网络药理学和斑马鱼体内实验，探讨结直肠癌炎性微环境中仙鹤草-黄连药对对血管生成的影响和潜在机制。通过网络药理学获得结直肠癌炎性微环境中仙鹤草-黄连药对抗血管生成的有效活性成分、潜在核心靶点和信号通路，预测结直肠癌炎... 详细信息

基于网络药理学和斑马鱼体内实验，探讨结直肠癌炎性微环境中仙鹤草-黄连药对对血管生成的影响和潜在机制。通过网络药理学获得结直肠癌炎性微环境中仙鹤草-黄连药对抗血管生成的有效活性成分、潜在核心靶点和信号通路，预测结直肠癌炎性微环境中仙鹤草-黄连药对抑制血管生成的作用机制；建立斑马鱼结直肠癌模型，并进行炎性微环境造模，观察不同浓度的仙鹤草-黄连药对对斑马鱼体节间血管(ISVs)面积、数量、长度的影响，蛋白免疫印迹法检测斑马鱼血管内皮生长因子A(VEGFA)、血管生长因子受体2(VEGFR2，又名kdrl、Flk1)、血管生长因子受体3(VEGFR3，又名Flt4)的蛋白表达水平，实时荧光定量聚合酶链式反应检测斑马鱼VEGFA、kdrl、Flt4 mRNA的表达水平。网络药理学筛选出仙鹤草-黄连药对中18个活性成分和488个潜在靶点，药物和疾病交集靶点108个。结合KEGG通路富集分析，选择VEGFA/VEGFR2信号通路中血管生成相关因子VEGFA、kdrl、Flt4进行验证。斑马鱼实验表明，与空白组比较，模型组斑马鱼ISVs面积、数量、长度均增加；与模型组比较，仙鹤草-黄连药对各剂量组斑马鱼ISVs面积、数量、长度均减少，且具有浓度依赖性。与空白组比较，模型组斑马鱼VEGFA、kdrl、Flt4蛋白和mRNA表达水平均上调；与模型组比较，仙鹤草-黄连药对各剂量组斑马鱼VEGFA、kdrl、Flt4蛋白和mRNA表达水平均下调，且具有浓度依赖性。结果表明，在结直肠癌炎性微环境中，仙鹤草-黄连药对能够通过多成分、多靶点、多通路抑制肿瘤血管生成，且结直肠癌炎性微环境下其抗血管生成作用可能与下调VEGFA/VEGFR2通路中血管生成相关因子VEGFA、kdrl、Flt4表达水平有关。

关键词：仙鹤草-黄连药对结直肠癌斑马鱼网络药理学炎性微环境血管生成血管生成相关因子作用机制

膝痹宁Ⅱ联合脂肪干细胞外泌体调控线粒体自噬改善膝骨关节炎的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 111-119页

作者：康俊峰揭立士伏厚宇廖太阳施蕾苏子珊于利凯魏义保刘德仁田地茆军王培民南京中医药大学附属医院南京210004 山西中医药大学附属医院太原030024 南京中医药大学第一临床医学院南京210023

目的:观察膝痹宁Ⅱ及脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用对软骨退变及线粒体自噬的影响,探讨其改善膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法:将40只SD大鼠分为假手术组、模型组、ADSC-Exos组(4×10^(8)个/周)、膝痹宁组(8 g·kg^(-1)·... 详细信息

目的:观察膝痹宁Ⅱ及脂肪干细胞外泌体(ADSC-Exos)单独及联合应用对软骨退变及线粒体自噬的影响,探讨其改善膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法:将40只SD大鼠分为假手术组、模型组、ADSC-Exos组(4×10^(8)个/周)、膝痹宁组(8 g·kg^(-1)·d^(-1))和ADSC-Exos(4×10^(8)个/周)+膝痹宁(8 g·kg^(-1)·d^(-1))组。采用用前交叉韧带切断术(ACLT)建立膝骨关节炎模型。评估大鼠痛敏状态、微计算机断层扫描技术(Micro-CT)及病理染色检测膝关节及软骨组织退变程度、免疫荧光观察p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)B表达情况、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-15水平、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、含血小板结合蛋白基序的解聚素金属5(ADAMTS5)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)、软骨蛋白聚糖抗体(ACAN)、PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)、p62、LC3A/B蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠冷刺激缩足阈值及机械痛敏阈值逐渐下降,软骨组织出现不同程度的磨损及缺失,软骨组织退变,血清IL-1β、IL-6、IL-15和TNF-α含量明显升高(P<0.01),软骨组织中MMP-3、MMP-13和ADAMTS5蛋白表达升高,ColⅡ、TIMP1和ACAN蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠冷刺激缩足阈值及机械痛敏阈值升高,软骨组织退变程度减轻,血清IL-1β、IL-6、IL-15和TNF-α含量降低(P<0.05,P<0.01),软骨组织中MMP-3、MMP-13和ADAMTS5蛋白表达降低,ColⅡ、TIMP1和ACAN蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);且以Exos+膝痹宁组改变最为明显。结论:ADSCs-Exos及膝痹宁Ⅱ均可以通过促进PINK1/Parkin信号通路表达,提高软骨细胞线粒体自噬水平,延缓软骨组织退变,且二者联用可以增强疗效。

关键词：脂肪干细胞外泌体膝痹宁Ⅱ 线粒体自噬软骨退变膝骨关节炎

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