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人源细胞色素C在大肠杆菌中的重组表达和分离纯化

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生物医学工程学杂志 2007年第3期24卷 620-625页

作者：蔡华伟万琳杨浩陈利弘卢晓风四川大学华西医院卫生部移植工程和移植免疫重点实验室成都610041

细胞色素C在电子传递、缺氧应激和细胞凋亡的过程中起重要作用。通过人源细胞色素C和酵母细胞色素C亚铁血红素裂解酶共表达,从大肠杆菌中获得了可溶性的重组人源细胞色素C蛋白。细菌经过超声破碎后,获得的上清经350g/L硫酸铵沉淀去除杂... 详细信息

细胞色素C在电子传递、缺氧应激和细胞凋亡的过程中起重要作用。通过人源细胞色素C和酵母细胞色素C亚铁血红素裂解酶共表达,从大肠杆菌中获得了可溶性的重组人源细胞色素C蛋白。细菌经过超声破碎后,获得的上清经350g/L硫酸铵沉淀去除杂蛋白,再经过两次SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析,获得了纯度大约为80%的人源细胞色素C。每升菌可产出10mg以上重组细胞色素C。人源细胞色素C的重组表达和纯化有助于细胞色素C功能的深入研究和应用。

关键词：细胞色素C 大肠杆菌基因重组和表达蛋白分离纯化

异基因骨髓间充质干细胞逆向嵌合体诱导小鼠皮肤移植耐受研究

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四川大学学报（医学版） 2013年第2期44卷 165-169页

作者：龙丹吴文桥卢俊冯莉李幼平李胜富四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导移植免疫耐受的可行性,建立小鼠异种逆向嵌合皮肤移植模型。方法以GFP-C57BL/10雄鼠为BMSCs供者,选择免疫缺陷型BALB/C-nu/nu雌鼠为BMSCs受者,移植BMSCs,建立... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)诱导移植免疫耐受的可行性,建立小鼠异种逆向嵌合皮肤移植模型。方法以GFP-C57BL/10雄鼠为BMSCs供者,选择免疫缺陷型BALB/C-nu/nu雌鼠为BMSCs受者,移植BMSCs,建立骨髓嵌合模型;通过RT-PCR检测Y染色体性别决定区基因(SRY)、免疫组化检测GFP蛋白表达量,确定嵌合产生的最佳时间。实验共分3组:将接受BMSCs移植一定时间后的BALB/C-nu/nu雌鼠的皮肤移植给C57BL/10雄鼠(实验组),将未接受BMSCs移植的BALB/C-nu/nu雌鼠的皮肤移植给C57BL/10雄鼠(排斥组),C57BL/10小鼠间进行同种异体皮肤移植(对照组)。观察移植皮肤存活情况,检测存活皮肤的血管形成情况,以此探讨逆向嵌合皮肤移植的可行性。结果成功建立骨髓嵌合模型,用1×106 BMSCs移植后4周,SRY基因和GFP蛋白的表达量最高,分别为1.22±0.10、458.0±3.4,与移植后1周、2周和6周比较差异均有统计学意义(P移植后4周。实验组小鼠供者来源皮肤移植物存活>14d,排斥组平均为5d。结论 BMSCs移植后可形成嵌合体,并可逆向嵌合移植诱导异种小鼠皮肤移植耐受。

关键词： GFP小鼠骨髓干细胞移植嵌合体皮肤移植耐受

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异种移植组织相容性及免疫动态变化测试模型

中国修复重建外科杂志 2002年第3期16卷 205-208页

作者：张海涛李幼平四川大学华西医院移植工程和移植免疫实验室成都610041

目的　综述异种移植物抗宿主反应 (GVHD)动物模型的研究现状、检测方法及进展情况。方法　采用文献回顾与综合分析方法。结果　免疫活性细胞植入异种受者体内后 ,有发生排斥 (HVGD)、移植物抗宿主反应(GVHD)和微嵌合的可能 ,异种 GVHD... 详细信息

目的　综述异种移植物抗宿主反应 (GVHD)动物模型的研究现状、检测方法及进展情况。方法　采用文献回顾与综合分析方法。结果　免疫活性细胞植入异种受者体内后 ,有发生排斥 (HVGD)、移植物抗宿主反应(GVHD)和微嵌合的可能 ,异种 GVHD已在小动物和大动物体内成功诱导 ,并可通过多种途径进行检测。结论　异种GVHD大动物模型 ,主导因素是嵌合细胞。

关键词：异种移植移植物抗宿主反应动物模型免疫动态变

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抗肺炎链球菌工程多肽抗菌活性研究

四川大学学报（医学版） 2007年第1期38卷 109-112页

作者：秦燕张杰戴萍孙亮丘小庆四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的检测制备纯化的抗肺炎链球菌工程多肽(Ph-SP)的体内外抗菌活性。方法将重组质粒转化入工程菌TG 1表达工程多肽(Ph-SP),经离子交换柱纯化后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示工程多肽(... 详细信息

目的检测制备纯化的抗肺炎链球菌工程多肽(Ph-SP)的体内外抗菌活性。方法将重组质粒转化入工程菌TG 1表达工程多肽(Ph-SP),经离子交换柱纯化后,通过体外抗菌试验和体内感染保护试验检测其抗菌活性。结果体内外抗菌实验结果显示工程多肽(Ph-SP)对肺炎链球菌有较强的杀菌效力。按标化相对分子质量换算,分别是青霉素及万古霉素抗菌效力的200倍和50倍。结论构建的Ph-SP在体外及体内都呈现出对肺炎链球菌的靶向杀伤活性,为临床治疗肺炎链球菌感染提供了新的思路和发展方向,具有临床应用潜力。

关键词：抗肺炎链球菌工程多肽抗菌活性

人颊黏膜鳞状细胞癌细胞系SCC117的建立及其生物学特性分析

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中华口腔医学杂志 2024年第9期59卷 942-949页

作者：孟超李盛林王衣祥傅嘉葛兮源北京大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心口腔生物材料和数字诊疗装备国家工程研究中心口腔数字医学北京市重点实验室北京100081 北京大学口腔医学院·口腔医院中心实验室国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心口腔生物材料和数字诊疗装备国家工程研究中心口腔数字医学北京市重点实验室北京100081 首都医科大学口腔医学院特诊特需科北京100050

目的建立中国人颊黏膜鳞状细胞癌(BMSCC)细胞系SCC117,分析并鉴定其基本生物学特性。方法纳入2011年1月就诊于北京大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科的1例BMSCC患者(59岁中国男性),采用改良组织块培养法对其原发灶手术标本进行体外... 详细信息

目的建立中国人颊黏膜鳞状细胞癌(BMSCC)细胞系SCC117,分析并鉴定其基本生物学特性。方法纳入2011年1月就诊于北京大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科的1例BMSCC患者(59岁中国男性),采用改良组织块培养法对其原发灶手术标本进行体外原代培养,连续传代稳定生长后建立人BMSCC细胞系SCC117。光学显微镜和电镜观察SCC117细胞形态特征,通过生长曲线、染色体核型、异种移植裸鼠成瘤实验等分析其基本生物学特征,免疫组化检测细胞角蛋白(CK14)、肿瘤相关蛋白视网膜母细胞瘤抑制蛋白(RB)、P53、上皮钙黏素(E-cadherin)、P21、同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)表达情况,PCR检测人乳头瘤病毒(HPV)携带情况。基因组DNA短串联重复序列(STR)分析鉴定细胞系身份。结果人BMSCC细胞系SCC117已在体外连续传代培养超过150代。SCC117细胞呈多角形镶嵌状生长,失去接触抑制,电镜观察可见典型的细胞桥粒结构及张力原纤维。免疫组化显示,SCC117细胞CK14阳性,倍增时间为40.16 h。染色体众数集中在67~69条之间,为亚三倍体。接种SCC117细胞的4只裸鼠均成瘤,SCC117细胞系具有异种致瘤能力,HE染色显示,裸鼠移植瘤与人原发肿瘤组织的病理组织学类型一致,均为鳞状细胞癌。免疫组化结果显示,人原发肿瘤及裸鼠移植瘤组织中RB、P53、E-cadherin均为阳性,P21弱阳性,PTEN阴性。PCR结果显示,SCC117细胞系的HPV检测为阴性。STR序列分析结果显示,SCC117细胞系来源于原发肿瘤组织,未被其他细胞系交叉污染。结论本研究成功建立中国人BMSCC细胞系SCC117,可为无HPV感染的口腔鳞状细胞癌尤其是BMSCC的研究提供新的实验模型。

关键词：癌,鳞状细胞头颈部鳞状细胞癌颊黏膜细胞系原代培养短串联重复序列人乳头瘤病毒阴性

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肾移植慢性失功机理及防治研究新进展

生物医学工程学杂志 2006年第1期23卷 220-224页

作者：冯莉李幼平四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

防治肾移植物慢失性功,进一步改善其长期存活是21世纪器官移植研究的一个焦点。针对慢性失功发生发展进程中不可忽视的免疫学因素及非免疫学因素,其机理研究和干预防治取得了系列进展。建立以近交系猪为例的大动物作为慢性失功动物模型... 详细信息

防治肾移植物慢失性功,进一步改善其长期存活是21世纪器官移植研究的一个焦点。针对慢性失功发生发展进程中不可忽视的免疫学因素及非免疫学因素,其机理研究和干预防治取得了系列进展。建立以近交系猪为例的大动物作为慢性失功动物模型,从我国现有天然药物中研发出高效、低毒、价廉,且能与现有免疫抑制剂相协同的新药,对慢性失功发生机制及防治进行更深入细致的研究,将是21世纪器官移植领域研究的重要方向。

关键词：肾脏移植慢性失功机理及防治

抗金黄色葡萄球菌工程多肽体内外抗菌活性研究

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四川大学学报（医学版） 2004年第6期35卷 749-752页

作者：黄艳张杰戴萍丘小庆四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的　评价我室制备的抗金黄色葡萄球菌工程多肽 (Ph- SA)对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的体内外抗菌活性。方法　采用琼脂二倍稀释法测定 Ph- SA对 6 9株临床分离病原菌的最小抑菌浓度(minim al inhibitory concentrat... 详细信息

目的　评价我室制备的抗金黄色葡萄球菌工程多肽 (Ph- SA)对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的体内外抗菌活性。方法　采用琼脂二倍稀释法测定 Ph- SA对 6 9株临床分离病原菌的最小抑菌浓度(minim al inhibitory concentration,MIC) ;采用腹腔感染后经尾静脉注射药物方法测定 Ph- SA及对照药物对小鼠的体内保护作用。结果　体外抗菌试验结果显示 Ph- SA对金黄色葡萄球菌呈现强抗菌作用 ,对金黄色葡萄球菌的甲氧西林 /苯唑西林耐药株和敏感株的 MIC50 分别为 8mg/L 和 0 .5 mg/L,按相对分子质量差异换算 ,强于万古霉素 12倍和 4 8倍 ;体内抗菌试验结果显示 :Ph- SA对 MRSA菌株 ATCC BAA- 4 2抗菌效力极强 ,按相对分子质量差异换算 ,至少强于万古霉素 5 9倍。结论　 Ph- SA对耐甲氧西林 /苯唑西林金黄色葡萄球菌体内外均呈现极强的抗菌活性 ,具有潜在的临床应用价值。

关键词：抗金黄色葡萄球菌工程多肽耐甲氧西林/苯唑西林金黄色葡萄球菌体内外杀菌活性

猪内源性逆转录病毒基因在版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的整合和表达研究

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四川大学学报（医学版） 2005年第6期36卷 770-772页

作者：于萍刘瑾张立李胜富步宏李幼平程惊秋陆燕蓉龙丹四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的检测猪内源性逆转录病毒(PERV)在猪细胞长期传代过程中的基因整合和表达。方法通过提取已建立的版纳微型猪近交系(BM I)骨髓间充质干细胞(M SC s)永生细胞系的DNA及细胞总RNA,用PCR、RT-PCR方法检测PERV前病毒gag、po l和env基因的... 详细信息

目的检测猪内源性逆转录病毒(PERV)在猪细胞长期传代过程中的基因整合和表达。方法通过提取已建立的版纳微型猪近交系(BM I)骨髓间充质干细胞(M SC s)永生细胞系的DNA及细胞总RNA,用PCR、RT-PCR方法检测PERV前病毒gag、po l和env基因的整合和表达,并对PERV的亚型进行鉴定。结果从原代BM I-M SC s至连续传代到150、180代的BM I-M SC s细胞基因组中都检测到了PERV前病毒DNA的整合及其mRNA的表达,PERV亚型为PERV-A、B型。结论PERV在BM I近交过程中及猪细胞体外长期传代过程中均未消失,PERV基因已经整合入其天然宿主的基因组内并能稳定表达。

关键词：猪内源性逆转录病毒版纳微型猪近交系永生细胞系异种器官移植人兽共患病

多肽dhvar4的抗细菌活性和细胞毒性研究

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四川大学学报（医学版） 2005年第3期36卷 308-311页

作者：高霞卢晓风李胜富高昆程惊秋四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的　研究多肽dhvar4的抗细菌活性及其细胞毒性。方法　人工合成多肽dhvar4 ,测定不同质量浓度dhvar4作用后的细菌生长曲线,检测dhvar4抗细菌活性;用MTT法检测不同质量浓度dhvar4对L- 0 2、ECV- 30 4、2 93和3T3细胞的细胞毒性;用溶血... 详细信息

目的　研究多肽dhvar4的抗细菌活性及其细胞毒性。方法　人工合成多肽dhvar4 ,测定不同质量浓度dhvar4作用后的细菌生长曲线,检测dhvar4抗细菌活性;用MTT法检测不同质量浓度dhvar4对L- 0 2、ECV- 30 4、2 93和3T3细胞的细胞毒性;用溶血性实验检测不同质量浓度dhvar4对血红细胞的溶血性。结果　dhvar4在4μg/m l质量浓度以上对金黄色葡萄球菌BAA4 2和肠球菌EF36 4 18的生长有明显的抑制作用。在15 0 μg/m l高质量浓度条件下,哺乳动物正常细胞存活率为6 8%～92 % ,其L D50 大于15 0 μg/m l。最大检测质量浓度(180 μg/ml)下,dhvar4对血红细胞几乎没有溶血作用。结论　dhvar4具有抗细菌作用,无明显细胞毒性和溶血性,具有开发成为安全高效抗细菌药物的潜在价值。

关键词：抗菌肽histatin5 dhvar4 抗菌活性细胞毒性