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锡兰钩虫ASP4基因的表达与免疫保护效果分析

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中国农业大学学报 2024年第11期 102-111页

作者：聂林冲袁浩杨子鹏何厚劲李文豪杨留禄金梦圆袁子国华南农业大学兽医学院

为克隆锡兰钩虫ASP4基因（Ace-ASP4），评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果，先扩增AceASP4基因序列，并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析，并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，然后利用CCK-8法和间接ELISA... 详细信息

为克隆锡兰钩虫ASP4基因（Ace-ASP4），评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果，先扩增AceASP4基因序列，并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析，并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，然后利用CCK-8法和间接ELISA方法分别检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力和血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。同时检测首免后小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10水平。最后，在三免后14 d经口感染500条L3幼虫，48h后检测肺、胃肠道和肌肉的虫体数量，计算减虫率，以评估其免疫保护效果。结果表明：1)Ace-ASP4基因的ORF全长为750 bp，编码249个氨基酸。生物信息学分析显示，Ace-ASP4编码蛋白为亲水性蛋白，具有信号肽序列且无跨膜结构，其三维结构模型质量良好（GMQE值为0.9）。2)Ace-ASP4蛋白分子大小为27 ku，在上清和沉淀中均有表达，但主要以包涵体形式富集于沉淀中，并具有良好的免疫反应性。3)Ace-ASP4重组蛋白可诱导免疫小鼠IgG、IgG1和IgG2a抗体显著上升，并极显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖（P<0.01）。与PBS对照组相比，在首免后第35天用Ace-ASP4重组蛋白免疫小鼠后其体内的IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10显著升高（P<0.05）。4）攻虫后，与PBS对照组小鼠相比，50μg/mL重组蛋白免疫小鼠在肺中获得了52%的减虫率，在胃肠道中获得了46%的减虫率，在肌肉中获得了61%的减虫率。综上，本研究成功克隆表达了Ace-ASP4蛋白，Ace-ASP4蛋白能使免疫小鼠产生抗体，促进其脾淋巴细胞增殖等，为进一步研究ASP4基因的生物学功能奠定基础，也为研制锡兰钩虫疫苗提供参考数据。

关键词：锡兰钩虫 ASP4基因原核表达免疫保护效果分析

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大黄酸衍生物的合成及其抗炎活性评价

华南农业大学学报 2024年

作者：李志鹏谭露露邓尧任昊廖晓萍孙坚韩璐华南农业大学兽医学院

【目的】大黄酸具有抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性，但其溶解性差、毒性作用强、生物利用度低，限制了临床应用；本研究选择羟基癸酸和癸醇作为修饰物对大黄酸进行结构修饰，以提高脂溶性、降低毒副作用、提高抗炎抗氧化活性，促进临... 详细信息

【目的】大黄酸具有抗癌、抗菌、抗炎等多种生物活性，但其溶解性差、毒性作用强、生物利用度低，限制了临床应用；本研究选择羟基癸酸和癸醇作为修饰物对大黄酸进行结构修饰，以提高脂溶性、降低毒副作用、提高抗炎抗氧化活性，促进临床应用。【方法】首先，基于大黄酸构效关系，选择大黄酸的羧基与十碳羟基癸酸和癸醇进行酯化反应，合成4种大黄酸衍生物——大黄酸-5-癸醇（R-5HD）、大黄酸-癸醇（R-DA）、大黄酸-10-羟基癸酸（R-10HA）、大黄酸-10-羟基-2-癸烯酸（R-10HDA），通过核磁共振氢谱(1H nuclear magnetic resonance，1H NMR)、傅里叶变换红外光谱（Fourier transfrom infrared spectroscopy，FTIR）确定大黄酸衍生物的化学结构特征。其次，采用CCK-8试剂盒法测定大黄酸及其衍生物对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7存活率的影响，确定大黄酸及其衍生物的适用浓度范围。最后，为了验证大黄酸衍生物的抗炎活性，构建脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的RAW 264.7细胞模型，测定其对活性氧（Reactive oxygen species，ROS）、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）表达量的影响。通过ROS荧光探针双氯荧光黄乙酸乙酯（2， 7-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA）分析大黄酸衍生物的抗氧化活性。【结果】通过1H NMR和FTIR方法证明4种大黄酸衍生物成功制备。与大黄酸相比，大黄酸衍生物显著提高了RAW 264.7细胞存活率。通过LPS诱导的RAW 264.7细胞模型发现，4种大黄酸衍生物均能显著降低NO的释放量，R-DA显著降低了TNF-α和IL-6以及IL-1β的表达量。与大黄酸相比，R-5HD和R-DA显著抑制ROS的产生。【结论】大黄酸与十碳羟基癸酸或者癸醇发生酯化反应，经过体外抗炎模型验证，大黄酸经修饰后能显著降低大黄酸的细胞毒性，在LPS处理的RAW 264.7细胞模型中更好地发挥抗炎抗氧化活性。本研究聚焦于十碳羟基癸酸或者癸醇对大黄酸进行结构修饰，通过体外实验证实，R-DA具有较强的抗炎、抗氧化活性，为后续大黄酸衍生物的研究和开发提供理论依据。

关键词：大黄酸羟基癸酸癸醇大黄酸衍生物抗炎抗氧化

结合主动光源和改进YOLOv5s模型的夜间柑橘检测方法

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华南农业大学学报 2024年第1期45卷 97-107页

作者：熊俊涛霍钊威黄启寅陈浩然杨振刚黄煜华苏颖苗华南农业大学数学与信息学院广东广州510642

【目的】解决夜间环境下遮挡和较小柑橘难以准确识别的问题,实现采摘机器人全天候智能化作业。【方法】提出一种结合主动光源的夜间柑橘识别方法。首先,通过分析主动光源下颜色特征不同的夜间柑橘图像,选择最佳的光源色并进行图像采集... 详细信息

【目的】解决夜间环境下遮挡和较小柑橘难以准确识别的问题,实现采摘机器人全天候智能化作业。【方法】提出一种结合主动光源的夜间柑橘识别方法。首先,通过分析主动光源下颜色特征不同的夜间柑橘图像,选择最佳的光源色并进行图像采集。然后,提出一种夜间柑橘检测模型BI-YOLOv5s,该模型采用双向特征金字塔网络(Bi-FPN)进行多尺度交叉连接和加权特征融合,提高对遮挡和较小果实的识别能力;引入Coordinate attention(CA)注意力机制模块,进一步加强对目标位置信息的提取;采用融入Transformer结构的C3TR模块,在减少计算量的同时更好地提取全局信息。【结果】本文提出的BI-YOLOv5s模型在测试集上的精准率、召回率、平均准确率分别为93.4%、92.2%和97.1%,相比YOLOv5s模型分别提升了3.2、1.5和2.3个百分点。在所采用的光源色环境下,模型对夜间柑橘识别的正确率为95.3%,相比白光环境下提高了10.4个百分点。【结论】本文提出的方法对夜间环境下遮挡和小目标柑橘的识别具有较高的准确性,可为夜间果蔬智能化采摘的视觉精准识别提供技术支持。

关键词：柑橘夜间检测主动光源双向特征金字塔网络 YOLOv5s HSV颜色空间

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IL-23、VEGFA和TGF-β对小鼠肿瘤免疫微环境的影响

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中国兽医科学 2024年

作者：苏伟谦刘泳琪刘思颖何婷全锦雯黄江利李玙萌刘忠华华南农业大学兽医学院华南农业大学实验动物中心

为探究白介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGFA）、转录生长因子β（TGF-β）过表达对于肿瘤生长以及肿瘤免疫微环境的影响，采用慢病毒转染构建稳定过表达IL-23、VEGFA、TGF-β的B16小鼠黑色素瘤和MC38小鼠结肠癌细胞株，建立小... 详细信息

为探究白介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGFA）、转录生长因子β（TGF-β）过表达对于肿瘤生长以及肿瘤免疫微环境的影响，采用慢病毒转染构建稳定过表达IL-23、VEGFA、TGF-β的B16小鼠黑色素瘤和MC38小鼠结肠癌细胞株，建立小鼠皮下移植瘤模型，定期记录肿瘤生长情况，流式细胞仪检测肿瘤中免疫细胞浸润水平；HE染色检测肿瘤组织结构及病理；RT-qPCR法检测肿瘤中相关炎症因子的表达。结果显示，与对照组相比，IL-23过表达后，B16和MC38肿瘤生长速度下降并且CD8+T细胞与DC细胞浸润比例均显著上升；VEGFA过表达后，B16肿瘤生长速度显著下降，部分抗肿瘤作用的免疫细胞比例显著上升，微血管数量显著多于对照组；TGF-β过表达后，MC38肿瘤生长速度显著下降，CD8+T细胞及DC细胞的浸润比例显著上升，TNF-α表达水平与对照组相比显著下降。以上结果表明，IL-23、VEGFA和TGF-β过表达对B16肿瘤和MC38肿瘤的抑制程度有差异，VEGFA可能通过改变微血管数量的方式改变B16肿瘤免疫微环境从而显著抑制肿瘤生长，TGF-β可能通过直接作用于肿瘤免疫细胞改变免疫微环境与抑制TNF-α表达显著抑制MC38肿瘤生长，IL-23可能通过增加免疫微环境中部分免疫细胞浸润从而一定程度抑制B16和MC38肿瘤的生长。本研究为细胞因子免疫治疗提供了新的实验依据，同时也为不同恶性程度的肿瘤提供免疫治疗参考。

关键词：肿瘤肿瘤免疫微环境细胞因子肿瘤模型基因过表达

基于不同分子结构的OSA淀粉构建Pickering乳液及其释放特性研究

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食品工业科技 2024年

作者：孙媛媛秦志良梁世濠黄霭珺司徒文贝华南农业大学食品学院

淀粉作为Pickering乳液的常用载体材料，在生物活性物质输送中有较广泛的应用。针对淀粉链结构对其Pickering乳液的影响，本研究以普通玉米淀粉（Corn）和蜡质玉米淀粉（Waxy）为原料，先经辛烯基琥珀酸（OSA）改性后，再分别经酸降解（... 详细信息

淀粉作为Pickering乳液的常用载体材料，在生物活性物质输送中有较广泛的应用。针对淀粉链结构对其Pickering乳液的影响，本研究以普通玉米淀粉（Corn）和蜡质玉米淀粉（Waxy）为原料，先经辛烯基琥珀酸（OSA）改性后，再分别经酸降解（acid degradation， AD）或酸热复合降解（acid-heat composite degradation， AH）获得4种具有不同分子结构的淀粉基材料，并制备相应的Pickering乳液。通过傅里叶红外光谱、X-射线衍射分析、排阻色谱法对材料结构进行表征，并对相应的Pickering乳液的粒径、电位及释放特性等进行研究。结果表明：酸降解得到的辛烯基琥珀酸玉米淀粉酯（OSA-AD-Corn）具有一定的有序结构，且短链分子数量约为90.7%±0.02%，链长分布更为均匀。受链结构影响，OSA-AD-Corn Pickering乳液具有较小的尺寸和较大的表面电位。在后续的模拟消化实验中，该乳液在模拟小肠部位释放的游离脂肪酸达42.86%±0.54%。在功能因子控释方面，OSA-AD-Corn Pickering乳液可稳定递送姜黄素，在模拟胃液和小肠液中的释放率分别为52.48%±0.42% 和 27.98%±0.22%，相较于其他淀粉基载体材料，能控制更多的功能因子递送在小肠部位。本研究结果为活性功能因子的生物高效利用提供合适的载体材料。

关键词：辛烯基琥珀酸淀粉酯淀粉基Pickering乳液功能因子控释

巨大口蘑和双孢蘑菇低温贮藏期间褐变差异机制研究

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食品科技 2024年第09期 19-26页

作者：刘欣芊倪焱吴结宜刘淑仪莫转林周伟坚莫美华华南农业大学食品学院华南农业大学基础实验和实践训练中心

以巨大口蘑和双孢蘑菇为试材，于4℃下贮藏，定期取样测定褐变相关指标，以探讨该贮藏期间2种食用菌褐变差异性。结果表明，贮藏至第10天，巨大口蘑和双孢蘑菇的褐变度分别为4.4%和18.31%，相对电导率分别为40.59%和75.35%，酪氨酸酶(Ty... 详细信息

以巨大口蘑和双孢蘑菇为试材，于4℃下贮藏，定期取样测定褐变相关指标，以探讨该贮藏期间2种食用菌褐变差异性。结果表明，贮藏至第10天，巨大口蘑和双孢蘑菇的褐变度分别为4.4%和18.31%，相对电导率分别为40.59%和75.35%，酪氨酸酶(Tyrosinase, TYR)、多酚氧化酶(Polyphenol oxidase, PPO)、苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase, PAL)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性分别是16.54、36.46 U/g FW,146.67、1014 U/g FW,172.13、298.29 U/g FW和380.42、413.75 U/g FW；除上述指标外，巨大口蘑的丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、总酚、类黄酮和类胡萝卜素含量均低于双孢蘑菇；过氧化物酶(Peroxidase, POD)活性整体也低于双孢蘑菇，尤其在贮藏后期，双孢蘑菇POD活性上升，对其伤害加剧；但巨大口蘑的超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性在整个贮藏期间均高于双孢蘑菇。相关性结果进一步发现巨大口蘑褐变度与TYR活性呈极显著相关(P<0.001)，而双孢蘑菇褐变度则是与许多因素呈极显著相关(P<0.01)，如TYR活性、PAL活性、POD活性。因此认为巨大口蘑耐贮藏可能与TYR活性低有关，双孢蘑菇易褐变则与TYR、POD和PAL活性较高有关。该结果可为食用菌褐变机制研究提供一定的理论依据。

关键词：巨大口蘑双孢蘑菇贮藏期褐变酶活性

维生素E对高精料诱导亚急性瘤胃酸中毒奶牛粪便微生物群落的影响

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微生物学报 2024年第1期64卷 238-253页

作者：吴柯冼振宇熊浩铭伍梓斌张家豪孙宝丽郭勇庆华南农业大学动物科学学院广东广州510642

【目的】研究高精料诱导亚急性瘤胃酸中毒(subacute rumen acidosis,SARA)和添加维生素E(vitamin E,VE)调控下,奶牛粪便中微生物群落的变化,评估其对奶牛机体代谢的潜在影响,以期为探索SARA的生理机制提供数据支撑。【方法】选取7头装... 详细信息

【目的】研究高精料诱导亚急性瘤胃酸中毒(subacute rumen acidosis,SARA)和添加维生素E(vitamin E,VE)调控下,奶牛粪便中微生物群落的变化,评估其对奶牛机体代谢的潜在影响,以期为探索SARA的生理机制提供数据支撑。【方法】选取7头装有瘤胃瘘管的经产荷斯坦奶牛,分为3期开展,每期18 d。第一期为对照期(CON期),日粮精粗比为50:50[干物质基础(dry matter basis,DM基础)];第二期为诱导期(HG期),用占日粮15%(DM基础)的细粉小麦替代日粮中粗饲料,以期诱导奶牛发生SARA;第三期为调控期(HGE期),在诱导期日粮基础上添加12000 IU/d/头的VE。每期第18天为采样期,采集粪便用来测定微生物群落。【结果】3个处理期的粪便中微生物群落结构存在差异,并且HG期的Shannon指数显著低于CON期(P环境和促进肠道健康。【结论】高精料诱导SARA导致奶牛肠道微生物多样性降低,使奶牛机体代谢紊乱;在VE调控下,能通过促进有益肠道微生物群增殖,调控奶牛肠道健康和维持肠道稳态。

关键词：奶牛亚急性瘤胃酸中毒维生素E 粪便微生物

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引起茶树叶斑病的病原菌种类鉴定

植物病理学报 2024年

作者：钟钰娴高涵清李敏曾贞黄亚辉晏嫦妤华南农业大学园艺学院

枝状枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)是自然界中广泛存在的真菌，寄生许多重要经济作物。目前已从芒果露水斑病[1]、大西洋红树莓果腐病[2]、藜麦穗腐病[3]、猕猴桃腐烂病[4]、杨桃腐烂病[5]、葡萄果腐病[6]等病害中分离出枝状枝...

枝状枝孢霉(Cladosporium cladosporioides)是自然界中广泛存在的真菌，寄生许多重要经济作物。目前已从芒果露水斑病[1]、大西洋红树莓果腐病[2]、藜麦穗腐病[3]、猕猴桃腐烂病[4]、杨桃腐烂病[5]、葡萄果腐病[6]等病害中分离出枝状枝孢霉。在广东省广州市华南农业大学教学科研基地的金萱茶树中发现了一种茶树叶斑病，并对病原菌进行了形态观察和多基因系统发育树分析。

关键词：

基于三维点云的采后香蕉表征褐变定量评估方法

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华南农业大学学报 2024年第3期45卷 390-396页

作者：熊俊涛王雨杰洪丹梁俊浩黄启寅华南农业大学数学与信息学院广东广州510642

【目的】研究采后香蕉的表征褐变并评估其衰老程度对香蕉保鲜管理至关重要,本研究致力于解决传统人工测量香蕉表征褐变存在的劳动强度大、效率低下的问题。【方法】提出一种基于三维点云的采后香蕉表征褐变过程定量评估方法。首先利用... 详细信息

【目的】研究采后香蕉的表征褐变并评估其衰老程度对香蕉保鲜管理至关重要,本研究致力于解决传统人工测量香蕉表征褐变存在的劳动强度大、效率低下的问题。【方法】提出一种基于三维点云的采后香蕉表征褐变过程定量评估方法。首先利用三维扫描仪获取香蕉的三维点云模型,重构出香蕉的几何模型;然后使用欧式聚类对香蕉几何模型进行点云滤波降噪处理;再结合图像阈值分割法与散点轮廓算法(Alpha Shapes)求出香蕉的体积、表面积和黑斑面积;最后利用傅里叶函数对香蕉表面黑斑变化过程进行模拟,确定香蕉表征褐变过程的评估模型。设计本算法与溢水法测量实际香蕉体积、手绘测量面积的对比试验。【结果】拟合香蕉的生长函数,回归直线对观测值的拟合程度R2=0.9816>0.75,验证了算法的有效性。对比试验结果表明,本算法与实际测量值的平均相对误差小于1%,验证了该算法的准确性和可行性。【结论】本研究可为香蕉的保鲜管理提供数据及技术支撑。

关键词：三维点云数据拟合香蕉褐变保鲜

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